Sut mae'r sylwedd llysieuol Acteoside yn atal celloedd tiwmor?

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

HANIAETHOL

Nodweddir cynhyrchion naturiol gan amrywiaeth strwythurol eithafol ac felly maent yn cynnig ffynhonnell unigryw ar gyfer adnabod asiantau gwrth-tiwmor newydd. Yma, rydym yn adrodd bod y sylwedd llysieuolacteosidedangosodd cael eu hynysu gan ddulliau ffistocemegol uwch o ddail lippia citriodora well cytotocsid yn erbyn celloedd tiwmor metastatig; gweithredu mewn synergedd â gwahanol asiantau cytotocig a chelloedd canser chemoresistant synhwyro.Acteosideo herba cistanchcenad oedd yn wenwynig mewn cyd-destunau cellog ffisiolegol, tra'i fod yn cynyddu llwyth ocsideiddio, yn effeithio ar weithgarwch modiwlau proteostatig, ac yn atal matrics metalloproteinases mewn llinellau celloedd tiwmor. Gweinyddu mewnffordd neu lafar (drwy ddŵr yfed) ocistancheacteoside mewn model llygoden melanoma wedi'i reoleiddio ymatebion gwrthocsidiol yn y tiwmorau; eto, dim ond darpariaeth fewnblyg a oedd yn atal twf tiwmor ac yn ysgogi ymatebion imiwnedd gwrth-adweithiol. Datgelodd dadansoddiadau adnabod/meintioli sbectrometreg torfol fod cyflwyno'n fewnblyg oacteosidewedi arwain at gryn dipyn yn uwch, vs. gweinyddiaeth lafar, mae'r crynodiad o'r cyfansoddyn yn y plasma a'r tiwmorau o llygod a driniwyd, sy'n awgrymu ei fod yn vivo effaith gwrth-tiwmor yn dibynnu ar y llwybr gweinyddu a'r crynodiad a gyflawnwyd yn y tiwmor. Yn olaf, dangosodd astudiaethau modelu moleciwlaidd ac ymosodiadau gweithgaredd enszymatig fod acteoside yn atal cinase protein C. Yn bendant, mae acteoside yn dal addewid fel sgaffaldiau cemegol ar gyfer datblygu asiantau gwrth-tiwmor newydd.

Allweddeiriau:Acteoside, Canser, Cyfansoddyn naturiol, Straen ocsideiddiol, Proteostasis, Imiwneiddio

Gwrth-tiwmor Cistanche, cliciwch yma i gael y sampl

1. Cyflwyniad

Nodweddir Carsinogesis gan ddadreoleiddio sawl llwybr signalau celloedd ac mae'n gysylltiedig â mwy o ocsid cellog, dyblygu, metabolig, genotocsiig, a straen proteotocsiig [1]. Er mwyn addasu a goresgyn y ffenoteipiau straen hyn, mae celloedd malaen yn uwchraddio (ar wahân i oncogenes) nifer o lwybrau nad ydynt yn rhai oncogenig sy'n anelu at naill ai atal neu (o leiaf) leddfu straen parhaus. Ymhlith y gwahanol lwybrau nad ydynt yn rhai oncogenig y canfuwyd eu bod yn cael eu rheoleiddio'n aml yn ystod tumorigenesis mae modiwlau'r rhwydwaith proteostasis (PN) ynghyd ag ymatebion gwrthocsidiol cellog [2,3].

Elfennau allweddol y PN yw'r ddau brif beiriant diraddio, sef y llwybr Autophagy- Lysosome (ALP) a'r Llwybr Ubiquitin-Proteasome (UPP), ynghyd â'r rhwydwaith o'r capel moleciwlaidd cellog. Mae ALP yn ymwneud yn bennaf â diraddio agregau protein ac organelles wedi'u difrodi [4], tra bod UPP yn diraddio proteinau byrhoedlog arferol a phroteinau heb eu hatgyweirio neu heb eu datblygu [5–8]. Mae'r proteasome 26Seukaryotig wedi'i gyfansoddi o ronynnau rheoleiddio 19S (RP) a'r gronynnau 20 Sgôr (CP); mae'r olaf yn cynnwys pedwar cylch heptameric wedi'u pentyrru (dau o'r math α o amgylch dau o'r math β) sy'n ffurfio strwythur tebyg i gasgen. Mae'r chymotrypsin-fel (CT-L), trypsin-fel (T-L), a gweithgareddau peptidau proteasome tebyg (C-L) wedi'u lleoli yn yr is-unedau proteasomal β5, β2, a β1, yn y drefn honno [6]. Effeithiolrwydd clinigol y swildod proteasome Bortezomib (Felcade®; hefyd wedi enwi PS-341) a Carfifilzomib yn erbyn gwahanol faleisus cywarch [9] wedi darparu'r "prawf o gysyniad" o dargedu UPP fel strategaeth addawol ar gyfer trin canser. Mae'r rhwydwaith cymhleth o lwybrau trechu gwrthocsidiol cellog sy'n aml yn cael eu rheoleiddio yn ystod carsinogesis [3,10] yn cynnwys ensau gwrthocsidiol, yn ogystal â nifer o ffactorau trawsgrifio sy'n ysgogi ymatebion genomeg cytoprotective; mae'r rhain yn cynnwys blwch fforch O (Foxo) a'r ffactor niwclear sy'n gysylltiedig â'r ffactor sy'n gysylltiedig â 2 (Nrf-2). Mae Nrf-2 yn ganolog i ddiogelu celloedd yn erbyn difrod ocsideiddio a/neu senoffobiotig gan ei fod yn ysgogi mynegiant o genynnau gwrthocsidiol a cham II [11-13].

Rydym ni ac eraill wedi cynnig yn ddiweddar y dylid targedu'r dibyniaethau tiwmor hyn (h.y. , modiwlau proteostatig a/neu lwybrau ymateb gwrthocsidiol) neu lefelau cellog cynyddol o ROS yng nghyd-destun genoteip wedi'i drawsnewid yn cynnig ffenestr therapiwtig bosibl ar gyfer lladd celloedd tiwmor yn ddetholus [3,14]; i gefnogi, mae lladd celloedd canser yn ddetholus gan moleciwl bach sy'n rheoleiddio lefelau ROS cellog wedi'i gofnodi [2]. Disgwylir y bydd dulliau cyfunol gan gynnwys hefyd ysgogi ymatebion imiwnedd gwrth-tiwmor-adweithiol [15] yn debygol o gynyddu'r ffenestr therapiwtig a gynigir drwy atal ymatebion PN a gwrthocsidiol a/neu drwy godi lefelau ROS cellog.

Caiff cynhyrchion naturiol (dyfyniadau neu gyfansoddion pur) (NPs) o wahanol ffynonellau (planhigion, organebau morol, microorganebau, ac ati) eu sgrinio am eu gallu i weithredu fel asiantau gwrth-tiwmor oherwydd eu hamrywiaeth strwythurol eithafol a chymhlethdod cemegol, yn ogystal ag am eu bod yn gweithredu'n pleiotropig yn modiwleiddio sawl llwybr signalau cellog [16]. Yn ôl y sôn, mae'r NPs yn ysgogi ymatebion gwrth-chwyddedig, gwrth-tiwmor a/neu wrth-fetastatig [16,17] a hefyd yn osgoi ymwrthedd amlddrug [18,19]. Ymhlith y rhain, mae cyfansoddion ffenolig (gan gynnwys glycosidau ffenylethanoid) wedi denu diddordeb sylweddol oherwydd eu rôl a gofnodwyd wrth atal a/neu drin gwahanol glefydau dynol.

Mae Acteoside, a elwir hefyd yn kusagin neu ferffacoside [20], yn glycoside ffenylethanoid wedi'i ynysu o lawer o dicotyledons. Yn ôl y sôn, mae acteoside yn rhoi rhai gweithgareddau biolegol diddorol, gan gynnwys gwrthocsidydd, gwrthlidiol, a apoptosis celloedd sy'n rheoleiddio eiddo [21,22]. Serch hynny, nid aethpwyd i'r afael â'i weithgarwch gwrth-tiwmor posibl. Rydym yn adrodd yma, bod acteoside yn dangos mwy o cytotocsid yn erbyn celloedd canser mamalaidd heb unrhyw effeithiau gwenwynig ymddangosiadol mewn cyd-destunau cellog ffisiolegol. At hynny, mae acteoside yn atal twf tiwmor melanoma mewn model llygoden vivo, gan (ymhlith eraill) ysgogi ymatebion imiwnedd gwrth-adweithiol.

detholiad cistanche gwrth-tiwmor

2. Deunyddiau a dulliau

2.1. Deunydd planhigion ac echdynnu

Prynwyd dail Lippia wedi'u Sychu (Lamiaceae) (4.5 kg) o'r farchnad leol yn Athen, Gwlad Groeg. Cafodd y dail eu mwydion a'u tynnu drwy droi mecanyddol am 12 h gyda methanol (2 × 20 L). Cafodd y dyfyniad methanol ei anweddu i sychu a'i olchi gyda chymysgedd o CH2Cl2/MeOH 98/2 (15 L). Cafodd y gweddillion anhydawdd eu gwahanu a'u sychu, gan gynhyrchu powdr melyn gwyrdd (450 g).

2.2. Puro dadansoddiad acteoside ac UPLC-HRMS

Roedd cyfran (10 g) o'r gweddillion a grybwyllwyd uchod yn destun cromatograffeg gwrthgyferbyniol gan ddefnyddio cyfarpar cromatograffeg rhaniad canrifoedd cyflym (FCPC) (Kromaton, Ffrainc); defnyddiwyd cymysgedd o EtOAc/EtOH/H2O ar gymhareb 5/0.5/4.5 fel system toddyddion deuffasig. Roedd ffracsiynau a gasglwyd yn destun Cromatograffeg Haen Thin; yna gwelwyd y cromatogramau o dan lamp UV (254 a 365 nm) a'u delweddu drwy chwistrellu gyda methanol fanillin sylffad ac yna gwres am ddau funud. Cafodd cyfanswm o 2.1 g o acteoside (purdeb ≥ 90%) ei ynysu gan y broses uchod. Perfformiwyd y broses o nodi acteoside gan gyseiniant magnetig niwclear (NMR) a sbectol sbectrometreg torfol (MS), tra bod ei purdeb wedi'i sefydlu gan ddadansoddiad UPLC-MS ac NMR; am fanylion gweler Swper. Deunyddiau a Dulliau.

2.3. Llinellau celloedd

Ffibrosis embryonig yr ysgyfaint dynol (celloedd IMR90) ynghyd â'r B16. F1, B16. Cafwyd F10, YAC-1, a llinellau celloedd llygoden WEHI-164 o Gasgliad Diwylliant Meinweoedd America (ATCC). Rhoddwyd llinellau celloedd osteosarcoma dynol U2 OS a Sa OS yn garedig gan yr Athro V. Gorgoulis (Ysgol Feddygaeth, Prifysgol Genedlaethol a Kapodistrian Athen, Gwlad Groeg), tra bod celloedd osteosarcoma KH OSteosarcoma a llinellau celloedd osteosarcoma chemoresistant [23] yn rhodd o Dr. E. Gonos (Sefydliad Ymchwil Hellenic Cenedlaethol, Gwlad Groeg). Mae llinellau celloedd canser y llygoden C5N ac A5 yn perthyn i fodel carsinogesis croen y llygoden aml-lwyfan [24,25] ac fe'u rhoddwyd gan yr Athro A. Balmain (Canolfan Ganser Gyfun, Prifysgol California, UDA). Adroddir ar amodau'r llinellau celloedd a ddefnyddir yn Cefnogi. Deunyddiau a Dulliau.

budd o echdynnu cistanche: gwrth-ganser

2.4. Model llygoden Melanoma

Gwryw C57BL/6 llygod (25–30 g o bwysau, 6–8 wythnos oed) o'r Sefydliad Pasteur Hellenic a'i letya o dan dymheredd rheoledig (22 o C) a ffotograff (12 h golau:12 h tywyllwch) gyda mynediad am ddim i ddŵr a bwyd. Roedd mice wedi'u brechu'n isdorri gyda 105 B16. F1 celloedd melanoma (mewn 100 μL PBS) ac fe'u hased ar hap i 3 grŵp (n = 5/grŵp). Pan ddaeth tiwmorau'n amlwg (diwrnod 11) derbyniodd llygod acteoside drwy ddau lwybr; naill ai'n fewnblyg (IP) (1 mg/llygoden wedi'i wanhau yn 200 μL PBS; cyfanswm o 6 dos a weinyddir bob yn ail ddiwrnod) neu ar lafar gan ddŵr yfed (NEU)(2. 5 mg/llygoden; cyfanswm o 13 dos am 13 diwrnod yn olynol). Gweinyddwyd PBS i reoli llygod. Cofnodwyd twf tiwmor bob 2 ddiwrnod drwy fesur echelau mawr a mân echelau'r tiwmorau a ffurfiwyd gyda caliper digidol. Trawsnewidiwyd mesuriadau yn gyfaint tiwmor gan ddefnyddio'r fformiwla: cyfaint tiwmor (cm3) = echel fawr × mân echel 2 × 0.5. Ar ddiwrnod 28, roedd anifeiliaid yn cael eu ewthaneiddio gan ddadleoli serfigol, a chafodd spleens eu tynnu'n aseptig. Ailadroddwyd yr arbrawf dair gwaith gyda chanfyddiadau tebyg.

Roedd Splenocytes wedi'u hynysu oddi wrth spleens homogenaidd unigol a'u profi ar unwaith am eu cytotocsid vs. B16. Targedau celloedd F1, YAC-1, a WEHI-164. Gwerthuswyd cytotocsid yn seiliedig ar ganfod amlygiad CD107 ar wyneb y gell, o ganlyniad i ddiraddio celloedd. Roedd Splenocytes (105 celloedd/da) wedi'u cyd-ddiwylliant â thargedau mewn microblatiau gwaelod 96-da ar y gymhareb i dargedu (E: T) o 100:1, sef 37 o C mewn 5% CO2. Ychwanegwyd gwrth-CD107a a gwrth-CD107a a gwrth-CD107 b gwrthgyrff monoclonol (25 μL/mL) a monensin (6 μL/mL; i gyd o BD Biowyddorau) ym mhob un yn dda. Cynaeafwyd celloedd 6 h yn ddiweddarach a'u dadansoddi gan ddefnyddio cytomedr fflasg FACSCanto II. Ar yr un pryd, roedd tiwmorau'n cael eu cyfnewid a'u prosesu ar gyfer ymosodiadau i lawr yr afon fel y disgrifir yn Cefnogi. Deunyddiau a Dulliau.

effeithiau echdynnu cistanche: gwrth-tiwmor a chanser