Mae Heneiddio'r Croen yn Ffenomenon Biolegol Cymhleth Oherwydd Y Lleihad Ffisiolegol
Oct 13, 2022
Cysylltwchoscar.xiao@wecistanche.comam fwy o wybodaeth
Crynodeb:Nod yr astudiaeth hon oedd profi effaith ataliol darnau ffrwythau o Washingtonia filifera ar ensymau sy'n gysylltiedig â heneiddio croen. Nid oedd y darnau mwydion yn achosi ataliad ensymau sylweddol tra bod darnau hadau o W.filifera yn arddangos gweithgareddau gwrth-elastase, gwrth-colagenas a gwrth-tyrosinase. Cafodd Tyrosinase ei atal ychydig tra gwelwyd effaith gryfach mewn perthynas ag ataliad elastase ac colagenas. Darparodd echdynion alcohol well canlyniadau na darnau dyfrllyd. Yn eu plith, dangosodd echdynion methanol fod y gweithgareddau ataliol ensym amlwg yn werth IC5o ar gyfer elastase a cholagenase y gellir eu cymharu a hyd yn oed yn well na'r cyfansoddyn cyfeirio. Ymchwiliwyd i ddull atal y darnau mwyaf gweithredol gan ddadansoddiad plot Lineweaver-Burk. Ymchwiliwyd i echdynion hadau o W.filifera hefyd am eu heffaith ffoto-amddiffynnol gan yr hafaliad Mansur a gwerthuswyd gweithgaredd gwrthocsidiol dyfyniad W.filifera mewn celloedd dan straen ocsideiddiol. Er mwyn gwerthuso diogelwch y dyfyniad, dadansoddwyd yr effaith ar hyfywedd celloedd celloedd keratinocytes dynol.cistanche ymerodraeth gollCyflwynodd detholiad methanol yr effaith ffoto-amddiffynnol orau a gwnaeth weithgaredd gwrthocsidiol mewn system gellog heb unrhyw effaith sytotocsig. Mae'r canlyniadau cyffredinol yn dangos bod echdynion W.filifera yn ffynonellau addawol o gyfansoddion bioactif y gellid eu defnyddio mewn paratoadau cosmetig a fferyllol.
Geiriau allweddol:ataliad ensymau; collagenase; elastase; tyrosinase; echdynion planhigion; hadau; heneiddio croen; Washingtonia ffilifera
1. Rhagymadrodd
Mae heneiddio croen yn ffenomen fiolegol gymhleth oherwydd y gostyngiad ffisiolegol mewn swyddogaethau croen a nifer o ffactorau amgylcheddol anghynhenid, megis ymbelydredd UV, cemegau, a rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS). Croen yw rhan fwyaf a mwyaf agored y corff ac mae amlygiad i ymbelydredd UV solar yn cynrychioli un o'r ffactorau allanol mwyaf arwyddocaol sy'n achosi straen: heneiddio croen a achosir gan ffoto sy'n gysylltiedig â straen ocsideiddiol. Gall ROS a achosir gan arbelydru UV gychwyn llwybrau moleciwlaidd cymhleth, gan gynnwys actifadu ensymau sy'n diraddio proteinau matrics allgellog (ECM) yn y dermis, gan newid cyfanrwydd croen [1]. Un o brif nodweddion heneiddio croen yn wir yw Colli strwythur yr ECM, sy'n cynnwys nifer o broteinau, gan gynnwys colagen ac elastin, y mae pob un ohonynt yn chwarae rhan fawr wrth gadw elastigedd croen [2]. Mae diraddio ECM yn bennaf oherwydd y gweithgaredd uwch o ensymau proteolytig, megis collagenase ac elastase. Gallai atal y gweithgareddau ensymatig hyn gan gyfansoddion planhigion naturiol fod yn ddull addawol o atal heneiddio croen [3]. Mae colagenase (EC 3.4.24.3) yn perthyn i'r teulu o feteloproteinasau matrics a gall ddiraddio rhanbarth helical triphlyg colagen o dan amodau ffisiolegol.ffracsiwn flavonoid puro micronedig 1000 mg yn defnyddioCollagen yw cydran ffibrog yr ECM a'r prif brotein strwythurol mewn croen dynol, gan ddarparu cefnogaeth strwythurol ar gyfer esgyrn, tendonau, gewynnau a phibellau gwaed. Mae Elastase (EC3.4.21.36) yn ensym proteolytig sy'n ymwneud â diraddio ffisiolegol elastin, y protein ECM sy'n gyfrifol am elastigedd croen. Mae cynnydd mewn gweithgaredd elastase wedi'i ganfod mewn sawl afiechyd, er enghraifft, soriasis, dermatitis, prosesau llidiol, a heneiddio croen cynamserol, sydd â chysylltiad agos â ffurfio crychau[4].
Gall Cistanche gwrth-heneiddio
Ar ben hynny, un o'r newidiadau mawr sy'n gysylltiedig â wrinkling yn yr henoed yw ymddangosiad smotiau hyperpigmented, a elwir hefyd yn lentigo henaint neu smotiau oedran. Maent yn uniongyrchol gysylltiedig â phigmentiad anwastad oherwydd gweithgaredd ensym arall sy'n gysylltiedig â heneiddio o'r enw tyrosinase. Tyrosinase (EC 1.14.18.1) yw'r ensym sy'n cyfyngu ar gyfraddau ym metabolaeth melanin. Mae'n cataleiddio hydroxylation L-tyrosine i 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), ac yna ocsidiad L-DOPA i dopaquinone. Mae polymerization ocsideiddiol o ddeilliadau dopaquinone yn achosi melanin [5]. Mae synthesis pigmentau melanin yn broses ffisiolegol sy'n chwarae rhan hanfodol wrth atal niwed i'r croen a achosir gan UV trwy amsugno golau haul UV. Er gwaethaf ei fanteision, mae cynhyrchu gormodol neu groniad annormal o melanin yn achosi problemau croen fel y mannau oedran nodweddiadol. Gan mai'r croen yw organ fwyaf gweladwy'r corff, gall ymddangosiad cynamserol crychau a hyperpigmentation hefyd achosi trallod emosiynol i rai pobl.
Felly, gall atalyddion yr holl ensymau a ddisgrifir uchod gynrychioli cynhwysion cynyddol bwysig mewn colur a meddyginiaethau i atal heneiddio croen [6]. Gallai cynhyrchion planhigion naturiol fod yn ffynhonnell addawol o gyfansoddion bioactif. O ddiddordeb arbennig ar gyfer cymwysiadau gwrth-heneiddio, mae gan y darnau swyddogaethau buddiol lluosog, megis atal ensymau sy'n gysylltiedig â heneiddio a gallu chwilota radicalau rhydd.
Yn ein gwaith blaenorol, disgrifiasom y gallu gwrthocsidiol a nifer o weithgareddau biolegol o ddarnau hadau W.filifera [7]. Mae Washington filifera (Lindl.) H. Wendl., a elwir yn gyffredin yn palmwydd ffan California neu palmwydd gwyntyll yr anialwch, yn goeden palmwydd bytholwyrdd sy'n frodorol i De California, Arizona, Mecsico, a pharthau anialwch.oteflavonoidNid yw'r palmwydd hwn, sydd ag uchder o 15-20 m, yn cynhyrchu dyddiadau ond mae'n meddu ar ffrwythau bwytadwy melys a blasus. Mae gan yr aeron hyn hedyn brown mawr iawn wedi'i amgylchynu gan fwydion tenau (Ffigur 1). Astudiwyd W.filifera ynghylch, er enghraifft, ei ddefnydd fel ffynhonnell bosibl o ffibrau cellwlosig newydd [8] a gwerth maethol ei ffrwythau [9]; mae cyfansoddiad ffenolig a gweithgaredd gwrthocsidiol y rhannau o'r awyr wedi'u hadrodd hefyd [10]. Yn ein hastudiaeth flaenorol, fe wnaethom adrodd ar weithgaredd gwrthocsidiol da W.fitamin piwritaniaid cdarnau hadau filifera, a oedd yn ymddangos yn ffynhonnell moleciwlau ffenolig a flavonoid[7]. Cafodd yr un darnau effaith ataliol ar ensymau xanthine oxidase a cholinesterase, sy'n cynrychioli ensymau allweddol wrth drin gowt a chlefyd Alzheimer, yn y drefn honno.
Nod y gwaith hwn oedd ehangu nodweddion y planhigyn hwn a gwerthuso'r defnydd posibl o'i echdynion fel cyfrwng gwrth-heneiddio. Felly, archwiliwyd echdynion mwydion a hadau ar gyfer eu gweithgareddau ataliol tuag at weithgaredd elastase, colagnase, a thyrosinase, gan eu bod yn cynrychioli'r ensymau targed allweddol ar gyfer atal a thrin ffoto-luniau croen; At hynny, dadansoddwyd y darnau W.filifera sy'n dangos y gweithgareddau addawol gorau am eu sytowenwyndra in vitro, gweithgaredd gwrthocsidiol cellog, ac effeithiau ffoto-amddiffynnol.
2.Canlyniadau a Thrafodaeth
2.1.Ataliad Ensym
Profwyd echdynion mwydion a hadau W. filifera am y tro cyntaf mewn crynodiad o 50 ug/mL.sistancheNid oedd yr holl echdynion mwydion yn achosi ataliad ensymau sylweddol (data heb ei ddangos). Cyfrifwyd gweithgareddau ataliol ensym echdynion hadau a'u mynegi fel y crynodiad ataliol hanner-uchaf (hefyd). Mae Tabl 1 yn dangos y gwerthoedd ICso a gafwyd o'r echdynion hadau o'u cymharu â rhai'r atalyddion safonol, er mwyn gwerthuso cryfder ataliol y samplau. Fel y gellir ei arsylwi, mae'r holl echdynion yn atal gweithgaredd tyrosinase yn wan, gyda gwerthoedd ICso yn uwch na gwerthoedd yr asid kojic safonol. Gwelwyd gwell ataliad yn erbyn gweithgareddau elastase a cholagenase, a darnau ethanolig (EEG ac EES) a methanolig (MEG a MES) a gafodd yr effeithiau gorau. Roedd gweithgaredd ataliol y samplau hyn yn erbyn elastase yn debyg; roedd y gwerthoedd ICso yn amrywio o 10.75 i 19.75 ug/mL ac roeddent yn debyg i'r rheolaeth bositif (asid oleanolic; ICso=11.75 ug/mL).
Yn lle hynny, roedd gweithgaredd colagenase wedi'i atal yn gryf gan y darnau, a ddangosodd nerth uwch na'r gallate epigallocatechin safonol, gyda'r ICso hyd at dair gwaith yn is na'r rheolaeth gadarnhaol. O ystyried bod y darnau yn gymysgedd o sawl cyfansoddyn, roedd crynodiad y moleciwlau gweithredol sengl hyd yn oed yn is na'r gwerth IC50, gan wneud y darnau hyd yn oed yn ffynonellau mwy addawol o gyfansoddion ataliol.
2.2.Dadansoddiad Cinetig fesul Llain Gwehydd Llinell-Burk
Canolbwyntiwyd ein sylw ar echdynion ethanol a methanol er mwyn ymchwilio i'r modd o atal yr ensymau hyn gan eu bod yn cael effaith well yn erbyn gweithgareddau elastase a cholagenase. Pennwyd y cinetig o ataliad gan y plot dwyochrog Lineweaver-Burk. Perfformiwyd y profion trwy gynyddu crynodiad y swbstrad priodol yn absenoldeb a phresenoldeb y darnau mewn crynodiadau gwahanol.
Mae Tabl 2 yn dangos bod EEG ac EES wedi gweithredu fel atalyddion anghystadleuol yn erbyn elastase. Mewn gwirionedd, cynhyrchodd dadansoddiad cinetig y darnau hyn deulu o linellau cyfochrog ar gyfer cynyddu crynodiadau echdynion (Ffigur 2A, B). Mae'r dadansoddiad ciretig hwn yn dangos y gall y darnau hyn glymu â'r cymhlyg ensymau-swbstrad. Cyfrifwyd y cysonyn ecwilibriwm (Krs) o ail-blotio'r rhyng-gipiadau (1/Vmax) yn erbyn crynodiad yr atalydd, gan arwain at werth o 3.91 a 8.89 ug/mL ar gyfer EEG ac EES, yn y drefn honno. Datgelodd y modd o atal y darnau methanolig yn wir fod y darnau hyn yn gweithredu fel atalydd anghystadleuol. Mewn gwirionedd, trwy gynyddu crynodiad y darnau, darganfuwyd teulu o linellau syth gyda gwahanol lethrau, i gyd yn croestorri ar yr abscissa (Ffigur 2C, D). Mae'r dadansoddiad hwn yn dangos y gall yr echdynion rwymo nid yn unig i'r cymhlyg ensymau-swbstrad ond hefyd i'r ensym rhydd. Cafwyd y cysonion ecwilibriwm ar gyfer rhwymo gyda'r ensym rhydd (Kj) a chyda'r cymhlyg ensym-swbstrad (Kis) naill ai o'r goledd (Km/Vmax) neu'r gwerthoedd 1/Vmax (y-intercepts) a blotio yn erbyn crynodiad yr atalydd, yn y drefn honno.Yn olaf, dangosir ymddygiad cinetig collagenase mewn gwahanol grynodiadau o echdynion yn Ffigur 3A-D. Roedd yr holl ddetholiadau'n gweithredu fel atalyddion anghystadleuol gyda gwerthoedd Krs yn yr ystod o 7.58-13.04 ug/mL (Tabl 2）).
Yn ein gwaith blaenorol, dadansoddwyd yr echdynion alcoholig o hadau W. filifera, gan ddefnyddio HPLC-DAD-ESI/MS. Rydym wedi amlygu bod prif gyfansoddion ffenolig y darnau hyn yn cynnwys flafan-3-ol [7]. Yn eu plith, procyanidins math-B oedd y prif gyfansoddion yn y darnau o hadau W.filifera. Gwelwyd perthynas gadarnhaol rhwng gradd polymerization procyanidin a gallu'r procyanidins i atal elastase mewn papur blaenorol [11,12]. Ar ben hynny, adroddwyd am weithgaredd ataliol yn erbyn elastase a cholagenase gan rai cyfansoddion procyanidin [13,14]. Gallai gweithredu synergaidd y cyfansoddion hyn gyfrannu at esbonio ataliad sylweddol echdyniad methanolig W.filifera yn erbyn y ddau ensym.
2.3.Ffactor Diogelu Haul
Mae gweithgaredd ffotoprotectant yn bwysig iawn ar gyfer cyfansoddion y gellir eu defnyddio ar y croen, felly fe wnaethom bennu ffactor amddiffyn rhag yr haul (SP) ein darnau. Mae'r SPF yn nodi gallu sylwedd i amsugno pelydrau UV, gan amddiffyn y croen rhag yr effeithiau gwenwynig a gynhyrchir gan ymbelydredd o'r fath. Mae gan gosmetigau sy'n seiliedig ar blanhigion botensial mawr i amsugno ymbelydredd UV oherwydd bod echdynion planhigion yn cynnwys polyffenolau, fel flavonoidau neu garotenoidau. Gall y cyfansoddion hyn, sydd â modrwyau aromatig, amsugno pelydrau UV ac, felly, gallant weithredu fel hidlydd haul. Gan fod darnau hadau alcoholig W.filifera yn cynnwys cyfansoddion ffenolig a flavonoid [7], gwerthuswyd effeithiau ffoto-amddiffynnol y darnau hyn. Fel y dangosir yn Nhabl 3, roedd yr holl ddarnau a ddadansoddwyd, ar y crynodiad o 100 ug/mL, yn dangos gwerthoedd SPF yn amrywio o 1.52 i 3.35. Datgelwyd bod darnau methanol yn meddu ar yr effeithiau ffoto-amddiffynnol gorau. Mae pelydrau UV yn gyfrifol am glefydau croen ac maen nhw'n sbarduno'r prosesau sy'n arwain at heneiddio'r croen, straen ocsideiddiol, a ffurfio crychau. Felly, mae lleihau amsugno'r ymbelydredd hwn yn gwella, mewn ffordd anuniongyrchol, y gweithgareddau gwrthocsidiol ac atal ensymau sy'n gysylltiedig â heneiddio.
2.4. Hyfywedd Celloedd a Lefel ROS Mewngellol
Gan fod straen ocsideiddiol yn ffactor allweddol wrth achosi heneiddio a difrod sy'n gysylltiedig ag oedran, fe wnaethom hefyd archwilio a oedd echdynion W. filifera yn atal cynhyrchu ROS a achosir gan HO mewn system gellog. Mewn papur blaenorol, fe wnaethom ddisgrifio gweithgareddau gwrthocsidiol echdynion hadau gan ddefnyddio dull sbectroffotometrig (assay ABTS)[7]. Datgelwyd bod y samplau yn ffynhonnell dda o gyfansoddion ffenolig gyda phriodweddau gwrthocsidiol, gyda MEG yn dangos y gweithgaredd gorau. Gan fod gan y darn hwn y gweithgaredd gwrthocsidiol gorau a hefyd botensial mawr, o ystyried y gweithgareddau ataliol yn erbyn yr ensym a brofwyd (cholinesterase, xanthine oxidase, a'r ensymau heneiddio a gyflwynir yma), penderfynwyd cadarnhau cynhwysedd gwrthocsidiol MEG mewn model cellog.
Yn gyntaf, ymchwiliwyd i effeithiau dyfyniad W.filifera ar hyfywedd celloedd mewn celloedd HaCaT. Mae llinell gell HaCaT keratinocytes dynol anfarwol wedi'i defnyddio'n helaeth fel model i astudio homeostasis epidermaidd [15]. Er mwyn pennu diogelwch y darn hwn, cafodd y celloedd eu trin â chrynodiadau amrywiol o'r sampl am 24 h a'u harchwilio gan ddefnyddio prawf MTT. Mae'r canlyniadau'n dangos nad oedd y dyfyniad yn sytotocsig mewn celloedd HaCaT a dim ond gostyngiad bach (hyfywedd o 80 y cant) a welwyd ar 100 ug/mL (Ffigur 4). Gan na effeithiwyd ar y hyfywedd tan 50 ug / mL (hyfywedd 96 y cant) ）, penderfynom berfformio arbrofi cellog pellach gan ddefnyddio hyd at y crynodiad dyfyniad hwn. Fe wnaethom werthuso lefelau ROS yn y celloedd cyn ac ar ôl straen ocsideiddiol, ac ar ôl triniaeth gyda MEG. Cynhaliwyd yr astudiaeth gan ddefnyddio diacetate 21,7'-dichlorofluorescein (DCFH-DA), sy'n tryledu'n hawdd trwy'r gellbilen ac yn cael ei hydrolysu gan yr esterasau mewndarddol i DCFH. Mae cynnydd cyflym yn DCF yn dangos ocsidiad DCFH gan ROS mewngellol, megis H2O2.Fel y dangosir yn Ffigur 5, cynyddodd deori H2O2 ffurfiant ROS yn sylweddol mewn celloedd HaCaT, ond llwyddodd triniaeth â'r echdyniad i atal cynhyrchu ROS a ysgogwyd gan H2O mewn modd ymateb dos. Felly, mae'r canlyniadau hyn yn cadarnhau'r profion gwrthocsidiol ac yn awgrymu y gallai MEG hefyd leihau ffurfio ROS mewn celloedd.
Dangosodd y dyfyniad methanolig a ddadansoddwyd yn y papur hwn briodweddau gwrthocsidiol uchel. Roedd cyfansoddiad ffenolig y darn hwn yn cynnwys flavan-3-ol, a'r procyanidins math-B oedd y prif gyfansoddion ffenolig [7]. Adroddwyd bod Procyanidins, grŵp o fioflavonoidau polyphenolig, yn arddangos ystod eang o briodweddau biolegol, ffarmacolegol a chemoprotective yn erbyn radicalau rhydd o ocsigen[16,17]. Mae astudiaeth flaenorol wedi dangos bod gweithgaredd gwrth-radical procyanidins yn gryf mewn crynodiadau uchel[18]. Ar ben hynny, mae darnau proanthocyanidin yn sborionwyr radical superoxide yn fwy effeithiol na gwrthocsidyddion fitamin C a Trolox [19].
3. Defnyddiau a Dulliau
3.1.Cemegol
Cafwyd yr holl adweithyddion cemegol fel cynhyrchion masnachol pur gan Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, UDA) oni nodir yn wahanol, a'u defnyddio heb eu puro ymhellach.
3.2.Paratoi Sampl Planhigion
Casglwyd ffrwythau W.filifera yn Nhiwnisia yn ardaloedd Gabes (G) a Sousse (S), a pharatowyd y deunyddiau planhigion yn unol â'r weithdrefn a ddisgrifiwyd yn flaenorol [7]. Cafodd mwydion a hadau eu lyoffileiddio ar wahân ac yna echdynnwyd deunyddiau planhigion (25 g) mewn 100 mL o ddŵr (AE, dyfyniad dyfrllyd), ethanol (E, dyfyniad ethanol), neu fethanol (ME, dyfyniad methanol) am 72 h, yn yr ystafell tymheredd, mewn troi parhaus. Ar ôl hidlo a centrifugio ar 10,000 rpm, cafodd echdynion dyfrllyd eu lyoffileiddio wedyn, tra bod y darnau ethanol a methanol a gafwyd wedi'u crynhoi o dan wactod, gan ddefnyddio anweddydd cylchdro i'w ddadansoddi ymhellach. Diddymwyd pwerau sych (1 mg/mL) yn DMSO cyn eu defnyddio.
3.3.Ataliad Ensymatig
Mynegwyd canlyniadau'r holl brofion a ddisgrifir isod fel canran o'r rheolaeth wag. Pennwyd crynodiadau o echdynion a arweiniodd at ataliad o 50 y cant o weithgaredd ensymau (ICso) trwy ryngosod cromliniau ymateb dos. Penderfynwyd ar y model ataliad trwy gynnal profion ar wahanol grynodiadau o swbstrad ac absenoldeb a phresenoldeb y darnau ar wahanol grynodiadau. Dadansoddwyd data cineteg gan ddefnyddio plot Lineweaver-Burk. Cofnodwyd data o'r profion gweithgaredd gyda sbectroffotomedr Ultrospec 2100 (Biochrom Ltd., Caergrawnt, DU).
3.3.1. Assay Atal Tyrosinase
Pennwyd ataliad gweithgaredd tyrosinase gan echdynion W.filifera trwy ddefnyddio 3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) fel swbstrad [20]. Roedd cymysgedd yr adwaith yn cynnwys byffer ffosffad 25 mM (pH 6.8), tyrosinase madarch (100 U / mL, crynodiad terfynol), gyda hydoddiant echdynnu planhigion neu hebddo. Yna, ychwanegwyd L-DOPA (0.5 mM) i'r gymysgedd a phenderfynwyd y gweithgaredd trwy ddilyn y cynnydd mewn amsugnedd yn 492 nm, sy'n deillio o ffurfio'r cynnyrch dopachrome. Yr ystod crynodiad o echdyniad a ddefnyddiwyd ar gyfer y assay ataliad tyrosinase madarch oedd 0-0.3 mg/mL. Yn y profion a gyflawnwyd heb echdynion planhigion, ychwanegwyd DMSO at y cymysgedd adwaith fel rheolaeth wag. Defnyddiwyd asid Kojic fel rheolaeth gadarnhaol.
3.3.2.Assay Ataliad Elastase
Assayed ataliad elastase trwy fonitro rhyddhau p-nitroaniline yn ystod holltiad y swbstrad N-succ-(Ala) 3-nitroanilide (SANA) gan weithrediad yr ensym gan y dull a ddisgrifir [21], gyda mân addasiadau. Perfformiwyd yr assay yn 0.1 M byffer Tris-HCl (pH8.0). Deorwyd elastase pancreatig mochyn (3.3 ug/mL) gyda'r echdyniad neu hebddo am 20 munud ac, ar ôl ei fewnosod, ychwanegwyd y swbstrad (1.6mM), a chafodd gweithgaredd yr ensymau ei fonitro ar 410 nm. Perfformiwyd y rheolaeth gyda DMSO, tra defnyddiwyd asid oleanolic fel rheolaeth gadarnhaol.
3.3.3.Assay Atal Collagenase
Paratowyd collagenase o Clostridium histolyticum mewn byffer Tricine {{0}}.05 M, pH 7.5, yn cynnwys 0.4 M NaCl a 0.01 M CaClz,a'i ddeor (1 U /mL) gyda samplau prawf mewn crynodiadau gwahanol am 15 munud. Yna ychwanegwyd y swbstrad synthetig N-(3-[2-Fury]]-acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), a baratowyd yn yr un toddiant byffer, i gychwyn yr adwaith ( gyda chrynodiad terfynol o 0.8 mM). Monitrwyd amsugno ar 340 nm [21]. Perfformiwyd y rheolaeth gyda DMSO, tra defnyddiwyd epigallocatechin gallate fel rheolaeth gadarnhaol.
3.4. Pennu'r Ffactor Amddiffyn rhag Haul In Vitro
Penderfynwyd ar ffactor amddiffyn rhag yr haul o echdynion W. filifera gan ddefnyddio'r dull amsugno UV, yn ôl y fethodoleg a ddisgrifiwyd gan Mansur et al. (1986) [22]. Mesurwyd amsugnedd y darnau (0.1 mg/mL) yn yr ystod o 290-320 nm, gyda chynyddrannau 5 nm, a gwnaed tri phenderfyniad ar bob pwynt. Cyfrifwyd yr SPF drwy gymhwyso'r Hafaliad Mansur: lle CF=ffactor cywiro(10); EE(A)= effaith erythemogenig ymbelydredd gyda hyd tonfedd λ;I (）{11}} sbectrwm arddwysedd solar; Abs（λ= gwerthoedd amsugnedd sbectrophotometrig ar donfedd λ. Mae gwerthoedd EE (A） × I (A) yn gyson. Fe'u penderfynwyd gan Sayre et al. (1979)[23] ac fe'u dangosir yn Nhabl 4.
3.5.Diwylliant Celloedd a Lefelau ROS Mewngellol
Roedd llinell gell keratinocyte croen dynol HaCaT wedi'i meithrin yng Nghyfrwng Eryr Addasedig Dulbecco (DMEM) yn cynnwys 10 y cant o serwm buchol ffetws (FBS, Gibco, NY, UDA) ac 1 y cant peni-cilin / streptomycin ar 37 gradd, mewn awyrgylch llaith, gyda 5 y cant CO2.Cafodd hyfywedd celloedd ei ganfod gan y assay colorimetrig 3-(4)5-dimethylthiazol-2-yl)-2.5-bromid diphenyltetrazolium (MTT), fel a ddisgrifiwyd yn flaenorol, gyda mân addasiad [24]. Ar ôl deoriad 24 awr gyda MEG mewn crynodiadau gwahanol (0-100 ug/mL), labelwyd y celloedd â hydoddiant MTT am 3 h ar 37 gradd . Diddymwyd y gwaddodion formazan fioled canlyniadol mewn DMSO a phennwyd amsugnedd pob ffynnon ar 560 nm gan ddefnyddio darllenydd microplate gyda chyfeirnod 630 nm.
Penderfynwyd ar y lefelau ROS cellog gyda'r dull DCFH-DA [25]. Cafodd celloedd HaCaT eu trin â chrynodiadau amrywiol o MEG (0-50 ug/mL) am 24 awr. Yna, deorwyd y celloedd â DCFH-DA (10 uM) ar 37 gradd am 30 munud. Ar ôl deori, ychwanegwyd 1 mM HzO2 at y ffynhonnau, a mesurwyd dwyster fflworoleuedd DCF ar unwaith gan ddefnyddio darllenydd plât fflwroleuol ar donfedd cyffro o 485 nm a thonfedd allyriadau o 530 nm, gan gymryd darlleniadau ar gyfnodau o 5 munud am 50 min.
3.6.Dadansoddi Data
Perfformiwyd yr holl arbrofion mewn triphlyg a mynegwyd y data fel gwyriad safonol cymedrig （SD）. Gwerthuswyd gwahaniaethau ystadegol gan ddefnyddio fersiwn meddalwedd GraphPad Prism 8 (San Diego, CA, UDA). Cynhaliwyd cymhariaeth rhwng grwpiau gan ddadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) ac yna Prawf Cymariaethau Lluosog Tukey. Ystyriwyd bod gwerth ap o lai na 0.05 yn ystadegol arwyddocaol.
4. Casgliadau
I gloi, rydym yn adrodd, am y tro cyntaf, bod echdynion hadau o W.filifera yn effeithiol wrth atal yr ensymau allweddol sy'n gysylltiedig â heneiddio croen. Mae heneiddio naturiol neu "gynhenid" yn ffenomen ffisiolegol sy'n digwydd ym mhob meinwe ddynol o ganlyniad i dreigl amser. Fodd bynnag, mae croen hefyd yn agored i ffactorau allanol sy'n achosi straen sy'n cynrychioli prif achos heneiddio croen cynamserol. Mae heneiddio "anhanfodol" yn ymwneud yn bennaf â niwed a achosir gan UV i feinwe gyswllt y croen. Mae pelydrau UV yn achosi straen ocsideiddiol, sy'n gyfrifol am actifadu'r ensymau sy'n diraddio'r ECM, ac ymddangosiad crychau a smotiau oedran. Mae'r llawysgrif hon yn adrodd am bwysigrwydd hadau W.filifera yn y cyd-destun hwn. Fel y dangosir yn Ffigur 6, gallai detholiadau weithredu i atal heneiddio cynamserol, gan weithredu ar yr un pryd ar sawl cyfeiriad.
Yn gyntaf, gall y darnau weithredu ar ddechrau'r broses trwy eu heffeithiau ffotoprotective ac, felly, lleihau amsugno pelydrau UV. Yna, dangosasant effaith gwrthocsidiol da gyda detholiad methanol, gan atal ROS rhag ffurfio mewn system gellog, heb wenwyndra celloedd. Yn olaf, gallai'r holl ddarnau, yn enwedig y samplau methanolig, atal collagenase, elastase, a tyrosinase (yr olaf i raddau bach). Yn gyffredinol, mae'r canlyniadau a gafwyd yn dangos y gallai W.filifera fod yn ffynhonnell moleciwlau bioactif ac annog arbrofion pellach er mwyn ynysu'r cydrannau actif unigol sy'n gyfrifol am y gweithgareddau a arsylwyd.
Daw'r erthygl hon o Plants 2021, 10, 151. https://doi.org/10.3390/plants10010151 https://www.mdpi.com/journal/plants
