Effaith pigmentiad gwrth-groen synergaidd glycosidau ffenylethanoid cistanche a glabridin

Haniaethol i ymchwilio i'r synergaiddEffaith CistancheOchr ethyl ethyl (PHGs) a glabridin (GLA) yn erbyn pigmentiad croen, sgriniwyd cymhareb màs PHGs a GLA gan arbrawf ataliad tyrosinase in vitro, 1, {1- diphenyl {-2- trinitrophenylhydrazine (dpph) 2, {2- diazo-bis ({3- ethyl-benzothiazole -6- cation diamoniwm asid sulfonig (ABTS+) arbrofion ysbeidiol radical rhydd. Roedd y cynhyrchiad a oedd yn cael ei gynhyrchu gan UVB a Model o Melanin a Melanin yn cael cynnwys fel mynegeion.

YllidiolSefydlwyd model o gelloedd HACAT a achoswyd gan lipopolysacarid (LPS), a gwerthuswyd effaith gwrthlidiol y cyffur trwy atal rhyddhau interleukin -6 (il {-6) a ffactor necrosis tiwmor- (TNF-). Sefydlwyd model straen ocsideiddiol celloedd HACAT a achoswyd gan hydroclorid azodiisobuamidine (AAPH) ymhellach, a defnyddiwyd gweithgaredd gwell dismutase superoxide (SOD) a catalase (CAT) fel mynegeion i werthuso effaith gwrthocsidiol y cyffur. Penderfynwyd ar y gymhareb màs orau o PHGs a GLA gan y tri model celloedd uchod. Dangosodd y canlyniadau fod toddiannau dyfrllyd o PHGs/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1), a PHGS/GLA (10∶1) wedi'u paratoi gyda M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 yn arddangos effeithiau da ac wrth -gysylltiad da. Cyfraddau atal PHGs/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) a PHGS/GLA (1 0 ∶1) Datrysiadau dyfrllyd gyda chrynodiad màs o 0.4 g/L oedd 94.37%, 92.93%ac 88.06%, yn y drefn honno. Y cyfraddau scavenging o radicalau rhydd DPPH oedd 89.44%, 88.72,%ac 88.10%, yn y drefn honno.
Y cyfraddau scavenging o ABTS+ radicalau rhydd oedd 1 0 0.13%, 100.0,1%, a 99.87%, yn y drefn honno. Pan oedd crynodiad màs PHGS/GLA yn 25 ug/mL, phGs/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1), a PHGS/GLA (10∶1) ni ddangosodd toddiannau dyfrllyd unrhyw cytotoxicity i gelloedd B16F10 a HACAT. Roedd gwaharddiad gweithgaredd tyrosinase mewn toddiant dyfrllyd PHGS/GLA (1 ∶1) yn gryfach (gweithgaredd tyrosinase 23.80%), a gostyngwyd y cynnwys melanin (30.90%) yn sylweddol. PHGS/GLA (1∶1) Dangosodd hydoddiant dyfrllyd yr effaith atal orau ar ryddhau IL -6 a TNF, a'r gallu i wella gweithgaredd SOD a CAT. Dangosodd y cyfuniad o PHGs a GLA berfformiad synergaidd da, cyffur uwch -A i sengl ac uwch na PHGS/ GLA (5∶1) a PHGS/ GLA (10∶1) hydoddiant dyfrllyd. Chwaraeodd y cyfuniad o PHGs a GLA ran synergaidd wrth wella pigmentiad croen trwy atal cynhyrchu melanin, ac effeithiau gwrthlidiol a gwrthocsidiol.

 

Geiriau allweddol Cistanche phenylethanoid glycosidau; Glabridin; effeithiau synergaidd; pigmentiad gwrth-groen; gwrth-ocsidiad; gwrth -fflamwrol; Deunyddiau Cyffuriau

 

 

 

Ochr ethyl cistanche ffenyl ar gyfer gwynnu

Cysylltwch â ni nawr

Gwasanaeth cefnogol Wecistanche-yr allforiwr Cistanche mwyaf yn y Tsieina:
E -bost: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

I gael mwy o wybodaeth am ostyngiadau posib, peidiwch ag oedi cyn cysylltu â'n tîm gwasanaeth cwsmeriaid. Byddant yn hapus i'ch cynorthwyo!

 

Mae pigmentiad croen yn glefyd croen a achosir gan ffactorau fel anaf, llid y croen, ac ymbelydredd uwchfioled [1-2]. Gall y ffactorau hyn arwain at gynnydd annormal mewn melanin, sydd yn ei dro yn achosi problemau fel cloasma, brychni haul, a hyperpigmentation ôl-lidiol (PIH) [3-4], gan effeithio ar gyflwr meddwl pobl ac ansawdd bywyd. Ar hyn o bryd, mae trin pigmentiad croen yn canolbwyntio'n bennaf ar atal tyrosinase, ensym allweddol wrth ffurfio melanin [5-6].
Mae'r ymchwil ddiweddaraf [7-8] yn dangos bod pigmentiad croen yn dibynnu ar y cysylltiad agos rhwng ceratinocytes a melanocytes yn yr epidermis. Unwaith y bydd y radicalau rhydd a'r ffactorau llidiol a ryddhawyd gan keratinocytes yn dod i gysylltiad â melanocytes, byddant yn cymell cynnydd mewn gweithgaredd tyrosinase, gan arwain at gynnydd yng nghynnwys melanin. Byddant hefyd yn cyflymu cludiant melanin ac yn achosi i Melanin adneuo ar wyneb y croen. Felly, mae trin pigmentiad croen yn gofyn am amrywiaeth o fesurau megis atal cynhyrchu melanin, gwrthlidiol a gwrth-ocsidiad.

Ar hyn o bryd, er bod paratoadau cyffuriau traddodiadol, fel hydroquinone a hydroquinone, yn cael effeithiau penodol wrth drin pigmentiad croen, mae eu dulliau gweithredu yn gymharol sengl a gallant gynhyrchu adweithiau niweidiol [9-10]. Mewn cymhariaeth, mae meddyginiaethau naturiol yn naturiol ac yn ysgafn i bob pwrpas ac yn cael eu cydnabod a'u canmol fwyfwy gan ddefnyddwyr [11-12]. Yn benodol, gall y cyfuniad o ddarnau planhigion lluosog [13-14] nid yn unig atal cynhyrchu melanin ond hefyd yn cael effeithiau lluosog fel effeithiau gwrthlidiol a gwrthocsidiol, gan ddarparu syniadau a dulliau newydd ar gyfer trin pigmentiad croen.
Mae gan Cistanche Deserticola Ma werth meddyginiaethol unigryw ac fe'i gelwir yn "anialwch ginseng". Mae astudiaethau wedi canfod bod y cynhwysyn nodweddiadol ffenylethanoid glycoside sydd wedi'i gynnwys yn Cistanche yn cael gweithgaredd gwrthocsidiol da [15] ac effeithiau gwrthlidiol [16], ac mae hefyd yn cael effaith ataliol tyrosinase benodol [17]. Mae glycyrrhizin yn gydran flavonoid yn glycyrrhiza glabra L., sy'n cael effaith gwynnu bwerus ac a elwir yn "aur gwynnu" [18]. Mae triniaeth feddyginiaeth Tsieineaidd draddodiadol o bigmentiad croen fel arfer yn dechrau fbystrenging y ddueg a'r aren, gan glirio gwres a dadwenwyno, ac ailgyflenwi Qi a gwaed [19].
Gall glycosidau phenylethanolig Cistanche deserticola ailgyflenwi aren yang a bod o fudd i hanfod a gwaed, tra gall glycyrrhiza glabra ailgyflenwi'r ddueg a qi, clirio gwres, a dadwenwyno. Gall y ddau weithio gyda'i gilydd i wrthsefyll pigmentiad. Gall y cyfuniad o glycosidau phenylethanoidc o cistanche deserticola a glabridin wrthsefyll pigmentiad croen o ddimensiynau a thargedau lluosog, amddiffyn rhag pelydrau uwchfioled yn y band cyfan, atal gweithgaredd tyrosinase yn synergaidd a lleihau cynhyrchiant melanin, a gallant leihau ffaith a ffaith bod yn llidio a bod yn llidio, ac yn lleihau ffaith bod ffaith, yn lleihau ffeithiau a chroen. Fodd bynnag, prin yw'r adroddiadau yn y llenyddiaeth ar ataliad synergaidd pigmentiad croen gan glycosidau phenylethanoid Cistanche Deserticola a Glabridin.
Mae'r papur hwn yn bwriadu archwilio a oes effaith synergaidd rhwng pphenylethanoidglycosidau o cistanche deserticola (PHGs) a glabridin (GLA) trwy arbrofion biocemegol in vitro a sefydlu 3 model celloedd, a chael y cymhareb màs cyfansawdd gorau posibl ar gyfer effaith synergaidd. Disgwylir iddo ddarparu cefnogaeth ddamcaniaethol ac arweiniad ymarferol ar gyfer datblygu cynhyrchion gofal croen planhigion naturiol ac i helpu i hyrwyddo'r diwydiant gofal croen i ddatblygu mewn cyfeiriad mwy naturiol, iach ac effeithlon.

 

 

Ble: Adwaith yw amsugnedd toddiant sampl, toddiant L-tyrosine, PBS, a hydoddiant tyrosinase; Rheoli adwaith yw amsugnedd toddiant sampl, toddiant L-tyrosine, toddiant N a PBS; Gwag yw amsugnedd toddiant L-tyrosine, toddiant PBS a hydoddiant tyrosinase; Rheolaeth wag yw amsugnedd datrysiadau L-tyrosine a PBS.

'

1.3.2 Penderfynu ar allu scavenging radical rhydd DPPH

Yn gyntaf, pwyswch yn gywir {{{0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) o dpph a'i doddi yn 25 0 ml o}}. mmol/l. Yna, paratowyd PHGs a GLA i doddiant ethanol PHGs a hydoddiant ethanol GLA gyda chrynodiadau màs o 0. 0 01, 0.01, 0.1, 0.4, 0.8, 1.2, 1.6, 2.0 mg/ml yn y drefn honno gan ddefnyddio 50% ethanol. Yna, cymysgwyd toddiant ethanol PHGS a hydoddiant ethanol GLA yn gyfartal yn M (datrysiad PHGS) ∶ M (datrysiad GLA)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶10, 1∶20, 1∶40 i gael 9 math o bHGs/GLE GLAS (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Datrysiadau ethanol. Yn olaf, ychwanegwch 100 μl o wahanol ddatrysiadau sampl a 100 μl o doddiant gweithio DPPH i'r plât 96- yn dda, cymysgu'n dda, a chadwch draw o olau ar dymheredd yr ystafell am 30 munud. Mesurwch yr amsugnedd ar 517 nm gyda marciwr ensym. Defnyddiwyd VC fel y rheolaeth gadarnhaol, ac ailadroddwyd pob arbrawf 3 gwaith. Cyfrifwch gyfradd scavenging radical rhydd DPPH (%) yn ôl Fformiwla (2).
Cyfradd scavenging radical rhydd dpph/%=(1 −𝐴1−𝐴3𝐴2) × 100 (2) lle: A1 yw amsugnedd datrysiad sampl + datrysiad gweithio DPPH; A2 yw amsugnedd ethanol 50% yn ôl datrysiad gweithio cyfaint + DPPH; A3 yw amsugnedd datrysiad sampl + 50% ethanol yn ôl cyfaint.

1.3.3 Penderfynu ar ABTs+ gallu scavenging radical am ddim

Yn gyntaf, pwyswch 1 g (1.82 mmol) o ABTs a'i doddi mewn dŵr wedi'i ddad -ddyneiddio i baratoi toddiant gweithio ABTS gyda chrynodiad terfynol o 7.4 mmol/L; pwyso 0. 5 g o potasiwm persulfate a'i doddi mewn dŵr wedi'i ddad -ddyneiddio i baratoi toddiant gweithio persulfate potasiwm gyda chrynodiad terfynol o 2.6 mmol/L; Cymysgwch yr ABTS Working Solution a'r toddiant gweithio persulfate potasiwm mewn cyfeintiau cyfartal, ac ymateb am 12 h yn y tywyllwch i baratoi'r toddiant gweithio ABTS+. Yna, yn ôl y dull yn Adran 1.3.2, paratowch doddiant ethanol PHGS, toddiant ethanol GLA, toddiant ethanol N a VC, yn ogystal â PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) hydoddiant ethanol.
Yn olaf, ychwanegwch 40 μl o wahanol doddiannau sampl a 160 μl o doddiant gweithio ABTS+ i'r plât 96- yn dda, cymysgu'n dda, ymateb ar dymheredd yr ystafell yn y tywyllwch am 6 munud, a mesur amsugnedd yr hydoddiant ar 734 nm gan ddefnyddio darllenydd ELISA. Cyfrifwch y gyfradd scavenging radical ABTS+ am ddim (%) yn ôl Fformiwla (3).

 

Ble: A1 yw amsugnedd datrysiad sampl + ABTS + datrysiad gweithio; A2 yw amsugnedd dŵr wedi'i ddad -ddyneiddio + ABTS + datrysiad gweithio; A3 yw amsugnedd toddiant sampl + dŵr wedi'i ddad -ddyneiddio.

 

1.4 Arbrawf Cell

1.4.1 Diwylliant Cell

After B16F10 and HaCaT cells are revived, they are inoculated into DMEM high-glucose medium (containing a mixture of 10% fetal bovine serum and 1% penicillin-streptomycin by a mass fraction) and cultured in an incubator at 37 degree , 5% CO2 volume fraction, and 70% humidity for 24 h. Gwelir statws twf celloedd o dan ficrosgop, ac mae'r cyfrwng yn cael ei ddisodli neu ei isddiwylliant yn ôl statws twf y gell.

 

1.4.2 Grwpio Arbrofol

Mae celloedd B16F10 a HACAT yn y cyfnod twf logarithmig wedi'u brechu mewn platiau 96- yn dda gyda rhifau celloedd priodol ac wedi'u diwyllio am 24 h i ganiatáu i'r celloedd lynu wrth y wal. Mae datrysiadau sampl o wahanol grynodiadau màs yn cael eu paratoi gan ddefnyddio cyfrwng diwylliant DMEM. Y grŵp arferol, grŵp model, grŵp PHGS dos isel (125 ug/ml), grŵp PHGs dos canolig (250 ug/ml), grŵp PHGs dos uchel (500 ug/ml), grŵp GLA dos isel (6.25 ug/ml) grŵp, grŵp dos canolig (12.5 ml) GLA (12.5 mL) Sefydlwyd grŵp, grŵp PHGS/GLA (5∶1), a grŵp canolig diwylliant PHGS/GLA (10∶1).

Yn y model pigmentiad B16F10 a ysgogwyd gan UVB, ychwanegwyd celloedd y grŵp model gyda 30 μl o PBS (pH =7. 4) a'u gosod 3 cm yn union o dan yr arbelydru UVB ar gyfer 110 s; Cafodd y grŵp arbrofol ei ragflaenu â 100 μl o doddiannau sampl o wahanol grynodiadau màs am 1 h, yna eu hychwanegu gyda 30 μl o PBS a gosod 3 cm yn union o dan yr arbelydrwr UVB ar gyfer 110 s; Roedd y grŵp arferol bob amser yn defnyddio cyfrwng diwylliant DMEM glwcos uchel; Ni chafodd y grŵp gwag ei ​​brechu â chelloedd, ond gyda nifer yr un mor gyfrwng diwylliant yn lle.

Yn y model llid celloedd HACAT a ysgogwyd gan LPS, diwylliwyd y grŵp model gyda hydoddiant PBS o LPS ar grynodiad o 20 ug/mL am 24 h; Cafodd y grŵp arbrofol ei ragflaenu â datrysiadau sampl 100 μl o wahanol grynodiadau màs am 24 h ac yna eu hychwanegu gyda hydoddiant 20 ug/ml LPS am 24 h; Roedd y grŵp arferol bob amser yn defnyddio cyfrwng DMEM glwcos uchel; Ni chafodd y grŵp gwag ei ​​brechu â chelloedd, ond gyda nifer yr un mor gyfrwng diwylliant.

Yn y model straen ocsideiddiol celloedd HACAT a ysgogwyd gan AAPH, diwylliwyd y grŵp model gyda hydoddiant 100 ml AAPH (2.5 mmol) ar grynodiad o 25 mmol/L am 24 h; Cafodd y grŵp arbrofol ei ragflaenu â thoddiannau sampl 100 μl o wahanol grynodiadau màs am 24 h ac yna ei ychwanegu gyda hydoddiant AAPH ar grynodiad o 25mmol/L am 24 h; Roedd y grŵp arferol bob amser yn defnyddio cyfrwng DMEM glwcos uchel; Ni chafodd y grŵp gwag ei ​​brechu â chelloedd, ond gyda nifer yr un mor gyfrwng diwylliant.

Sefydlwyd pob grŵp gyda 3 ffynnon ddyblyg a'i ddiwyllio mewn deorydd ar 37 gradd, ffracsiwn cyfaint CO2 5%, a lleithder 70%.

1.4.3 assay cytotoxicity

Defnyddiwyd y dull CCK8 i bennu cytotoxicity. Treuliwyd celloedd B16F1 0 a HACAT yn y cyfnod twf logarithmig gyda 0.25% trypsin am 3 munud. Ar ôl i'r treuliad gael ei derfynu, chwythwyd y cyfrwng diwylliant dro ar ôl tro i atal celloedd gyda dwysedd o 1 × 104 o gelloedd/mL. Cafodd y celloedd eu brechu'n gyfartal mewn plât 96- yn dda, 100 μl y ffynnon, ac ychwanegwyd PBS at y ffynhonnau o amgylch y celloedd. Ar ôl i'r celloedd lynu wrth y wal, ychwanegwyd crynodiadau màs gwahanol o doddiant sampl, 3 ffynhonnau dyblygu fesul grŵp, a'u diwyllio mewn deorydd ar 37 gradd, ffracsiwn cyfaint CO2 5%, a lleithder 70% ar gyfer 24, 48, a 72 h, ac yna taflwyd yr hydoddiant. Ychwanegwyd pob grŵp gyda 100 μl o gyfrwng diwylliant cyflawn yn cynnwys ffracsiwn cyfaint 10% CCK8 a'i ddeor am 60 munud. Mesurwyd amsugnedd yr hydoddiant ar 450 nm gan ddefnyddio darllenydd ELISA. Cyfrifwyd hyfywedd celloedd (%) yn ôl Fformiwla (4).

 

 

Ble: Grŵp Arbrofol yw amsugnedd y ffynhonnau sy'n cynnwys celloedd a datrysiad sampl o dan arbelydru UVB; Grŵp arferol yw amsugnedd y ffynhonnau sy'n cynnwys celloedd a datrysiad sampl heb arbelydru UVB; Grŵp gwag yw amsugnedd y ffynhonnau sy'n cynnwys diwylliant cyfrwng ond dim celloedd.

 

1.4.5 Penderfynu Cynnwys Melanin

Penderfynwyd ar y cynnwys melanin gan y dull Naoh lysis. Ar ôl trin y celloedd am 72 h yn ôl y dull yn Adran 1.4.2, cafodd yr uwchnatur ei daflu, a'i olchi ddwywaith gyda PBS, ac ychwanegwyd 100 μl o doddiant dyfrllyd NaOH sy'n cynnwys 10% DMSO yn ôl cyfaint (crynodiad o 1 mol/L). Ar ôl cael ei roi mewn popty 90 gradd am 1 h, pennwyd amsugnedd yr hydoddiant ar 490 nm gan farciwr ensymau. Ailadroddwyd yr arbrawf 3 gwaith. Cyfrifwyd y cynnwys melanin (%) yn ôl Fformiwla (5).

 

1.5 Penderfynu ar gynnwys ffactor llidiol a mynegai straen ocsideiddiol

Ar ôl trin y celloedd am 48 h yn ôl y dull yn Adran 1.4.2, casglwyd y celloedd HACAT ym mhob grŵp gyda sgrafell celloedd, eu centrifugio, a chasglwyd yr uwchnatur. Penderfynwyd ar gynnwys il -6 a TNF- yn unol â chyfarwyddiadau pecyn ELISA.
Ar ôl trin y celloedd am 48 h yn ôl y dull yn Adran 1.4.2, casglwyd y celloedd HACAT ym mhob grŵp gyda sgrafell celloedd, a thorrwyd y celloedd trwy rewi a dadmer dro ar ôl tro. Cafodd y celloedd eu canoli ar 12000 r/min ar 4 gradd am 10 munud, a chasglwyd yr uwchnatur. Penderfynwyd ar y gweithgaredd SOD a chynnwys CAT yn unol â chyfarwyddiadau pecyn ELISA.

1.6 Penderfynu ar y mynegai cyfun
Defnyddiwyd y dull mynegai cyfun (CI) [20] i benderfynu a gafodd PHGs a GLA mewn gwahanol gymarebau màs effaith synergaidd wrth atal gweithgaredd tyrosinase a gwrth-ocsidiad. Cyfrifwyd y mynegai cyfuniad yn ôl Fformiwla (6):

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>Mae 1 yn dynodi effaith antagonistaidd, mae ci =1 yn dynodi effaith ychwanegyn, a CI<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 Dadansoddiad Data

Mynegir yr holl ddata fel "gwyriad cymedrol ± safonol ± safonol (𝑥̅ ± 𝑠)". Graff Prism 9.5. 0 Defnyddiwyd meddalwedd ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Defnyddiwyd dadansoddiad unffordd o amrywiant i'w gymharu ymhlith grwpiau lluosog. P<0.05 was considered statistically significant.