Effeithiau Gwrth-heneiddio Ludwigia Octovalvis Ar Drosophila Melanogaster A Llygod SAMP8 Rhan 1

HaniaetholFe wnaethom ymchwilio i effeithiau gwrth-heneiddio Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae), sy'n cael ei yfed yn eang fel diod iach mewn sawl gwlad. Gan ddefnyddio'r pryf ffrwythau, Drosophila melanogaster, fel organeb enghreifftiol, gwnaethom ddangos bod detholiad L. octovalvis (LOE) yn ymestyn oes pryfed yn sylweddol ar ddeiet calorïau uchel, ond nid isel, gan nodi y gallai LOE reoleiddio hyd oes trwy gyfyngiad dietegol ( llwybr cysylltiedig â DR). Fe wnaeth LOE hefyd wanhau dirywiad gwybyddol cysylltiedig ag oedran yn y pryfed ac yn y llygoden 8 sy'n dueddol o heneiddio (SAMP8), heb achosi unrhyw gyfaddawdau negyddol canfyddadwy, gan gynnwys cymeriant dŵr, cymeriant bwyd, ffrwythlondeb, neu weithgaredd echddygol digymell. Roedd LOE yn cynnwys lefelau uchel o polyffenolau a flavonoidau, sy'n meddu ar weithgaredd sborion radical DPPH cryf a dangoswyd ei fod yn gwanhau difrod ocsideiddiol a achosir gan baraquat a marwoldeb mewn pryfed. Nododd dadansoddiadau cromatograffaeth nwy-sbectrometreg màs (GC-MS) 17 o foleciwlau hysbys, ac o'r rhain -sitosterol a squalene oedd y ddau fwyaf niferus. Fe wnaethom ddangos ymhellach y gallai -sitosterol ymestyn oes, yn debygol trwy actifadu protein kinase AMP-activated (AMPK) yng nghorff braster pryfed oedolion. Mae ein data yn awgrymu bod LOE yn ymyriad gwrth-heneiddio cryf gyda'r potensial i drin anhwylderau sy'n gysylltiedig ag oedran.

Gall glycoside cistanche hefyd gynyddu gweithgaredd SOD ym meinweoedd y galon a'r afu, a lleihau'n sylweddol y cynnwys lipofuscin a MDA ym mhob meinwe, gan ysbeilio radicalau ocsigen adweithiol amrywiol (OH-, H₂O₂, ac ati) yn effeithiol a diogelu rhag difrod DNA a achosir. gan OH-radicaliaid. Mae gan glycosidau ffenylethanoid Cistanche allu chwilota cryf o radicalau rhydd, gallu lleihau uwch na fitamin C, gwella gweithgaredd SOD mewn ataliad sberm, lleihau cynnwys MDA, a chael effaith amddiffynnol benodol ar swyddogaeth pilen sberm. Gall polysacaridau cistanche wella gweithgaredd SOD a GSH-Px mewn erythrocytes a meinweoedd yr ysgyfaint llygod senescent arbrofol a achosir gan D-galactos, yn ogystal â lleihau cynnwys MDA a cholagen yn yr ysgyfaint a phlasma, a chynyddu cynnwys elastin, wedi effaith sborion dda ar DPPH, ymestyn amser hypocsia mewn llygod senescent, gwella gweithgaredd SOD mewn serwm, ac oedi dirywiad ffisiolegol yr ysgyfaint mewn llygod senescent arbrofol Gyda dirywiad morffolegol cellog, mae arbrofion wedi dangos bod gan Cistanche y gallu gwrthocsidiol da ac mae ganddo'r potensial i fod yn gyffur i atal a thrin clefydau heneiddio'r croen. Ar yr un pryd, mae gan echinacoside yn Cistanche allu sylweddol i ysbeilio radicalau rhydd DPPH a gallant ysbeilio rhywogaethau ocsigen adweithiol, atal diraddio colagen a achosir gan radical rhad ac am ddim, ac mae hefyd yn cael effaith atgyweirio da ar ddifrod anion radical rhydd thymin.

Cliciwch ar cistanches herba

【Am ragor o wybodaeth:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Geiriau allweddolLudwigia octovalvis. Cyfyngiad dietegol. Oes. AMPK

Rhagymadrodd

Mae deall heneiddio yn her fawr i’n hoes, o ystyried tueddiadau demograffig a beichiau a ragwelir ar gyfer cymdeithas hŷn. Mae astudiaethau sy'n ymchwilio i glefydau sy'n gysylltiedig ag oedran fel clefyd niwroddirywiol, canserau, a chlefyd cardiofasgwlaidd eisoes wedi rhoi mewnwelediadau sylweddol i heneiddedd dynol. Mae'n hysbys mai cyfyngiad dietegol (DR), trwy leihau cymeriant calorïau heb ddiffyg maeth neu newid cydbwysedd y cydrannau dietegol, yw'r ymyriad mwyaf effeithiol ar gyfer ymestyn oes iach ar draws rhywogaethau, o furum i bryfed i famaliaid (Lin et al. 2000; Wood et al. 2004; Bonkowski et al. 2006; Wu et al. 2013). Mewn cnofilod, gall DR gynyddu hyd oes llygod arferol yn sylweddol a llygod byrhoedlog-cyflymu-dueddol 8 (SAMP8) (Weindruch a Walford 1982; Choi a Kim 2000; Simons et al. 2013). Mewn pryfed, gellir gweld estyniad oes trawiadol hefyd (Zheng et al. 2005; Soh et al. 2013). Er nad yw astudiaethau mewn primatiaid (mwnci rhesus) wedi cynhyrchu canlyniadau pendant eto ynghylch effaith DR ar farwolaethau, mae'n amlwg bod DR mewn mwncïod yn cynhyrchu effeithiau ffisiolegol buddiol tebyg i'r rhai a welwyd mewn cnofilod a phryfed (Colman et al. 2009; Mattison et al. al. 2012). Dangoswyd bod ymestyn oes gan DR yn debygol o gael ei gyfryngu trwy sawl llwybr genetig sy'n cynnwys synhwyro maetholion a metaboledd, megis inswlin / IGF, sirtuins (Syr), SKN-1, targed rapamycin, a kinase protein wedi'i actifadu gan AMP. (AMPK) llwybrau (Lin et al. 2000; Kaeberlein et al. 2005; Bishop a Guarente 2007; Alcedo a Kenyon 2004; Stenesen et al. 2013). Mae'n ymddangos y gall Sir2/Sirt1 (Lin et al. 2004) ac AMPK (Xiao et al. 2011) gael eu gweithredu gan gymarebau AMP/ATP, ADP/ATP, neu NAD/NADH uwch, sy'n adlewyrchu statws egni cellog is. Mae'r rhain, yn eu tro, yn ysgogi cyfres o ddigwyddiadau signalau i lawr yr afon sy'n trawsnewid cyflwr metabolaidd celloedd o'r defnydd o ynni i storio a chynhyrchu ynni.

O ystyried y cyfyngiadau ymarferol ar fodau dynol wrth ymarfer DR ym mywyd beunyddiol bob dydd, mae datblygiad mimeteg DR wedi dod i'r amlwg fel maes cyffrous ar gyfer ymchwil gwrth-heneiddio. Efallai y bydd atchwanegiadau dietegol sy'n cynnwys cyfansoddion maethlon neu echdynion planhigion yn gallu darparu ymyriadau diogel ac effeithiol ar gyfer ymestyn bywyd iach. Dangoswyd eisoes bod darnau ffrwythau o neithdarin ac afalau, yn ogystal â darnau llysieuol o Rhodiola rosea a Curcuma longa, yn ymestyn oes pryfed ffrwythau, trwy leihau difrod ocsideiddiol (Boyd et al. 2011; Peng et al. 2011; Schriner et al. 2009; Lee et al. 2010; Schriner et al. 2013). Y prif gydrannau a nodir yn y gweithfeydd hybu iechyd hyn fel ymgeiswyr tebygol ar gyfer effeithiau ymestyn oes yw polyffenolau, sydd â'r potensial i weithredu fel sborionwyr radical rhydd neu chelators metel rhydocs-weithredol (Galleano et al. 2010). Resveratrol, cyfansoddyn polyphenolic a geir yn bennaf yng nghroen grawnwin coch, yw'r enghraifft fwyaf adnabyddus o'r dosbarth hwn o foleciwlau a dangoswyd ei fod yn ymestyn oes rhywogaethau mor bell yn esblygiadol â Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster, a Nothobranchius furzeri (Howitz et al. 2003; Wood et al. 2004; Valenzano et al. 2006). Er bod priodweddau gwrthocsidiol resveratrol wedi'u dangos, mae tystiolaeth gronnus yn awgrymu y gallai'r cyfansoddyn hwn hefyd weithredu fel ysgogydd cryf ar gyfer sawl genyn sy'n gysylltiedig â hirhoedledd, gan gynnwys Sir2/Sirt1 a grybwyllwyd uchod (Hubbard et al. 2013).

Ludwigia octovalvis (Jacq.) Mae gan PH Raven (Onagraceae) ddosbarthiad eang mewn ardaloedd trofannol o lawer o wledydd ledled y byd. Er nad yw cyfansoddiad cemegol cyflawn L. octovalvis wedi'i ddisgrifio'n llawn, mae gan y planhigyn hwn hanes hir o ddefnydd fel meddyginiaeth lysieuol ar gyfer trin cyflyrau amrywiol, gan gynnwys oedema, neffritis, a hypotension. Mae poblogaethau mawr yn Asia yn bwyta detholiad L. octovalvis (LOE) fel diod iachus bob dydd. Mae gwerthusiad gwenwynegol mewn llygod wedi awgrymu y gall triniaeth LOE cronig ddarparu eiddo imiwn-reoleiddiol, hepatoprotective, a chardiofasgwlaidd, heb sgîl-effeithiau gweladwy (Kadum Yakob et al. 2012). Yn ogystal, adroddwyd bod gan LOE weithgareddau gwrth-bacteriol a gwrth-ganser (Chen et al. 1989; Chang et al. 2004). Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ymchwilio i effeithiau gwrth-heneiddio LOE, gan ddefnyddio pryfed ffrwythau a llygod SAMP8 fel organebau model. Mae ein canfyddiadau'n awgrymu y gall LOE ddatblygu fel ymyriad gwrth-heneiddio.

Dulliau

paratoi LOE

Fel arfer casglwyd planhigion cyfan o L. octovalvis yn ystod tymor yr haf, a chafwyd planhigion sych o'r Orsaf Gwella Amaethyddiaeth leol a Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. yn Taiwan. Cafodd rheolaeth ansawdd ar gyfer L. octovalvis ei fonitro gan Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. a chafodd sbesimen taleb (Rhif 034) ei adneuo yn llysieufa Hsiehyu Biotech Company Ltd. Ar gyfer paratoi LOE, socian 100 go bowdr L. octovalvis mewn 400 ml o 95 y cant ethanol dros nos ar 4 gradd ac yna ei dynnu ddwywaith ar 55 gradd am 30 munud. Cafodd y supernatant ei allgyrchu (ar 8,000×g am 5 munud) a'i hidlo (TOYO Rhif 1) i gael gwared ar falurion. Cafwyd LOE yn dilyn proses datgywasgu.

Cromatograffaeth nwy - sbectrometreg màs (GC-MS)

Perfformiwyd dadansoddiad GC-MS o LOE gan ddefnyddio cromatograff nwy HP- 6890 a synhwyrydd màs-ddewisol HP-5973 (MSD, Agilent Technologies), gyda cholofn cromatograffaeth nwy capilari HP-5MS (12.5 m ×0.2 mm ID, 0.33 μm trwch ffilm) (J&W Gwyddonol). Roedd cyfaint y pigiad yn 2 ul yn y modd hollt, a thymheredd y fewnfa yn 290 gradd . Defnyddiwyd heliwm fel y nwy cludo (cyfradd llif o 0.6 ml / min), a rhaglennwyd tymheredd y popty fel a ganlyn: tymheredd cychwynnol: 35 gradd, cynyddodd 5 gradd / mun i 90 gradd, yna 10 gradd / mun i 200 gradd , ac yn olaf erbyn 20 gradd / mun i 290 gradd, lle cafodd ei gynnal am 8 munud. Perfformiwyd y dadansoddiad yn y modd EI, gyda foltedd ionization yn sefydlog ar 70 eV. Cyflawnwyd caffael sgan (m/z 45-550) o MSD gyda meddalwedd HP Chemistation.

2, 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) gweithgarwch sborionu radical a chyfanswm cynnwys polyffenolau a flavonoidau

Mesurwyd gweithgaredd sborion radical DPPH gan ddefnyddio dull addasedig a ddisgrifiwyd eisoes (Brand-Williams et al. 1995). Yn gryno, ychwanegwyd 100 ul o wahanol grynodiadau o LOE, asid asgorbig, resveratrol, squalene, neu - sitosterol (Sigma) at 200 ul o 100 μM DPPH mewn 96-blatiau microwell i gyrraedd crynodiadau terfynol o 0, 1, 5, 10, a 50 ug/ml. Deorwyd cymysgedd yr adwaith yn y tywyllwch ar dymheredd yr ystafell am 30 munud. Mesurwyd gostyngiad mewn amsugnedd ar 520 nm mewn darllenydd microplate (AccuReader 965). Pennwyd cyfanswm cyfansoddion ffenolig LOE gyda'r adweithydd Folin-Ciocalteu, gan ddefnyddio asid galig fel safon (Slinkard a Singleton 1977). Mesurwyd y cynnwys flavonoid cyfan gyda assay lliwimetrig alwminiwm clorid, gyda rutin yn cael ei ddefnyddio fel safon (Shih et al. 2010).

Diwylliant celloedd a dadansoddiadau blot y Gorllewin

Tyfwyd celloedd Drosophila Schneider (S2) ar 25 gradd yng nghyfrwng Drosophila Schneider (Invitrogen), wedi'i ategu gan serwm buchol ffetws anweithredol 10 y cant (Gibco). Cafodd celloedd eu trin â chrynodiadau gwahanol o LOE a -sitosterol (Sigma) o dan amodau twf arferol (1 × canolig, fel uchod) neu o dan amodau DR (0.5 × canolig, gwanhad 1: 1 o'r cyfrwng 1 × mewn halwynog byffer ffosffad ( PBS)) am 12 h. Dadansoddwyd lefelau protein ffosffor-AMPK a -tubulin (gwrthgyrff o Dechnoleg Signalau Cell) yn ôl blot Gorllewinol fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Wang et al. 2005).

Pryfed a phrofion oes

Codwyd stociau Treganna-S (CS), w1118, gyrrwr corff braster GeneSwitch S106 (Canolfan Stoc Bloomington #8151), ac UASAMPK.RNAi (Canolfan Stoc Bloomington #32371) ar fwyd safonol swcros / burum / blawd corn . Croeswyd gwyryfon S106 gyda gwrywod UASAMPK.RNAi mewn arbrofion dymchwel AMPK. Ar gyfer profion hyd oes, trosglwyddwyd pryfed a oedd wedi cau o fewn 48 h (tua 100 o wrywod a 100 o fenywod) i 1-cawell poblogaeth a'u cynnal mewn deorydd llaith, wedi'i reoli gan dymheredd gyda 12-h on/ oddi ar y cylch golau ar 25 gradd (Wang et al. 2009). Darparwyd bwyd ffres bob yn ail ddiwrnod, a sgoriwyd nifer a rhyw y pryfed marw. Roedd bwydydd calorïau uchel a calorïau isel yn cynnwys 15 neu 5 y cant o ddecstros a burum, yn y drefn honno. Ychwanegwyd dau y cant agar a 0.23 y cant Tegosept (Apex) at yr holl fwydydd. Ychwanegwyd crynodiadau gwahanol o LOE, squalene, -sitosterol, RU486 (Mifepristone, Sigma), neu reolaeth cerbyd at y bwydydd a ddisgrifir ym mhob arbrawf.

Bwydo, ffrwythlondeb, a gweithgaredd modur digymell pryfed

Trosglwyddwyd pryfed deg diwrnod oed a oedd yn cael eu cadw ar fwyd calorïau uchel yn cynnwys gwahanol grynodiadau o LOE i ffiolau ffres o'r un bwyd, gan ychwanegu 0.5 y cant FD&C rhif. 1 lliw bwyd glas. Ar ôl 24 h, cafodd 10 pryfed eu homogeneiddio mewn un tiwb sy'n cynnwys PBS, a phenderfynwyd faint o liw a amlyncwyd gan sbectroffotomedr ar gyfer amsugnedd llifyn ar 625 nm. Pennwyd ffrwythlondeb benywaidd trwy gyfrif wyau a gynhyrchwyd gan dri phâr sy'n paru bob dydd. Roedd pryfed yn cael eu trosglwyddo'n ddyddiol i ffiolau newydd yn cynnwys bwyd priodol, ac roedd nifer yr wyau a osodwyd yn cael eu cyfrif a'u cofnodi am yr 20 diwrnod cyntaf o fywyd oedolyn. Ar gyfer monitro lefelau gweithgaredd, gosodwyd ffiolau gwydr yn cynnwys pryfyn gwryw sengl ar y ffynhonnell fwyd briodol mewn siambrau recordio locomotor sydd â chylchoedd crwn o ffynonellau golau isgoch; mae seibiannau pelydr yn cael eu cofnodi fel gweithgaredd (TriKinetics). Cofnodwyd y data bob 20 eiliad dros gyfnod o 72-h. Roedd monitorau gweithgaredd yn cael eu cadw yn y deorydd a ddisgrifir uchod.

Cof cysylltiadol tymor byr arogleuol Pavlovaidd o bryfed

Hyfforddwyd pryfed o wahanol oedrannau trwy ddod i gysylltiad ag electroshock (70 V) a gafodd ei baru ag un arogl am 60 s. Yn dilyn hynny, roedd pryfed yn agored i ail arogl heb electrosioc am 60 s. Caniatawyd i bryfed orffwys am 45 s ac yna cawsant brawf drysfa T am 2 funud, lle roedd yn ofynnol iddynt ddewis rhwng y ddau arogl. Yr arogleuon a ddefnyddiwyd oedd methyl cyclohexanol (1:1, 000 gwanhau olew mwynol) a neu octanol (1.5:1, 000 gwanhau olew mwynol). Ar gyfer pob arbrawf, perfformiwyd o leiaf bum sesiwn ar gyfer pob un o'r paru arogl-electrosioc. Cyfartalwyd yr holl ddata, ac fe'u dangosir fel canran o'r mynegai cof ar gyfer pob grŵp. Cyfrifwyd y mynegai perfformiad trwy dynnu nifer y pryfed sy'n mynd i mewn i'r fraich lle cafodd yr arogl ei baru â'r electroshock o'r nifer sy'n mynd i mewn i'r fraich gyferbyn, lle nad oedd yr arogl yn cael ei baru â'r electroshock, a'i rannu â chyfanswm nifer y pryfed.

straen ocsideiddiol a achosir gan paraquat a 4-hydroxy-2-penderfyniad enwol (HNE)

Trosglwyddwyd pryfed deg diwrnod oed sy'n cael eu cadw ar fwyd calorïau uchel yn cynnwys crynodiadau gwahanol o LOE i ffiolau gyda phapur hidlo wedi'i socian mewn hydoddiant o 0 neu 20 mM paraquat a 6 y cant dextrose. Roedd nifer y pryfed marw yn cael ei gyfrif bob 3 i 4 awr. Am 12 h, casglwyd rhai o'r pryfed a gafodd eu trin â pharaquat, a mesurwyd HNE gan y Pecyn ELISA Adduct OxiSelect™ HNE (Cell Biolabs), yn dilyn y protocol a ddarparwyd gan y gwneuthurwr.

Anifeiliaid

Roedd pob protocol arbrofol yn dilyn y rheoliadau moeseg anifeiliaid lleol. Cafodd llygod SAMP8 eu bridio a'u cynnal yn y System Modiwlar Caging Animal® (Cynllun Amgen), a chafodd eu bwyd ei sterileiddio gan arbelydru gama. Roedd gan yr ystafell gylchred golau 12-h ymlaen/i ffwrdd, gyda'r cyfnod tywyll yn dechrau am 8 pm Ar gyfer llygod, ychwanegwyd LOE at y dŵr yfed mewn crynodiadau terfynol o 0, 50, a 100 ug/ ml. Roedd cymeriant bwyd, defnydd o ddŵr, a newid ym mhwysau'r corff yn cael eu monitro'n rheolaidd.

Paratoi RNA, synthesis cDNA, ac adwaith cadwyn polymeras meintiol (qPCR)

Paratowyd cyfanswm RNA o o leiaf 30 o bryfed gan ddefnyddio'r RNeasy Mini Kit (Qiagen). Cafodd yr RNA ei drin â DNase a'i drawsnewid i cDNA gan ddefnyddio oligo-d(T)15 (Invitrogen) a SuperScript III transcriptase gwrthdro (Invitrogen) fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Chou et al. 2013). Perfformiwyd adweithiau qPCR gan ddefnyddio Systemau PCR Real-Time StepOnePlus (Biosystemau Cymhwysol), SYBR Green Master Mix (Cymhwysol Biosystems), a preimwyr genyn-benodol oedd CAAG AGCTATCTGCTCGACTTCAA a CACATTTCGA AAAACTCCATGGT ar gyfer AMPK- , a GACGAAAT CAAGGCTAAGGTCG ac AATGGGTCGCT ar gyfer AATGGAAGTCGCT. Cyflawnwyd adwaith PCR dau gam gyda dadnatureiddio ar 95 gradd am 15 s, anelio, ac estyniad wedi'i gyfuno ar 60 gradd am 1 munud mewn cyfanswm o 40 cylch. Mesurwyd lefel mynegiant mRNA pob genyn targed o'i gymharu â GAPDH trwy dynnu: Cttarget − CtGAPDH=ΔCt. Mae gwahaniaeth o un gylchred PCR yn cyfateb i newid deublyg yn lefel mynegiant mRNA. Cadarnhawyd unigrywiaeth amplicons gan ddefnyddio cromliniau daduniad.

Adnabod gwrthrychau newydd, drysfa T uchel, a phrofion maes agored

Ar gyfer y prawf adnabod gwrthrychau newydd, cafodd llygod eu symud i flwch agored am y tro cyntaf (50 cm × 25 cm × 50 cm) am 10 munud y dydd am ddau ddiwrnod yn olynol, heb unrhyw wrthrychau yn bresennol. Ar y trydydd diwrnod, rhoddwyd llygod yn y blwch am 2 funud, ac yna cyflwynwyd dau wrthrych tebyg i bob llygoden. Cofnodwyd yr amser a dreuliwyd yn archwilio pob gwrthrych yn ystod y 5-cyfnod dilynol (a ddiffinnir fel y sesiwn hyfforddi). Yna dychwelwyd y llygod i'w cawell cartref. Un, dwy, neu dair awr yn ddiweddarach, cafodd yr un anifeiliaid eu hail-brofi am 5 munud yn y blwch gyda gwrthrych cyfarwydd a newydd (a ddiffinnir fel y sesiwn prawf cof). Cyfrifwyd y mynegai gwahaniaethu gwrthrychau trwy dynnu'r amser a dreuliwyd yn archwilio gwrthrych cyfarwydd o'r amser a dreuliwyd yn archwilio gwrthrych newydd a'i rannu â chyfanswm yr amser a dreuliwyd yn archwilio'r ddau wrthrych.

Addaswyd y ddrysfa uchel-T o astudiaethau blaenorol (Cruz-Morales et al. 2008; De-Mello a Carobrez 2002; Maia et al. 2010; Santos et al. 2006; Takahashi et al. 2005). Roedd yn cynnwys un fraich wedi'i hamgáu gan waliau 15 cm o uchder, yn berpendicwlar i ddwy fraich agored gyferbyniol. Roedd gan y tair braich ddimensiynau cyfartal (30 cm × 5 cm), ac roedd y cyfarpar cyfan wedi'i godi 50 cm uwchben y llawr. Ar y diwrnod hyfforddi, gosodwyd pob llygoden ar ben pellaf y fraich gaeedig, gan wynebu croestoriad y breichiau, a chaniatawyd iddo archwilio'r fraich gaeedig. Daeth y treial i ben pan aeth y llygoden i mewn i'r breichiau agored (roedd y pedair pawen yn ardal agored y fraich) neu arhosodd yn y fraich gaeedig am 300 s. Defnyddiwyd nifer y treialon sydd eu hangen i gyrraedd y maen prawf osgoi i asesu gallu dysgu'r llygod yn ystod y sesiynau hyfforddi. Pedair awr ar hugain yn dilyn y sesiynau hyfforddi, ail-amlygwyd y llygod i'r fraich gaeedig, a chofnodwyd yr amser y buont yn y fraich gaeedig fel asesiad o gadw cof.

Perfformiwyd y prawf maes agored mewn blwch agored (50 cm × 25 cm × 50 cm). Gosodwyd pob llygoden yng nghanol y cae agored a chaniatawyd iddo archwilio'r offer yn rhydd am 1 h. Cofnodwyd cyfeiriad a chyflymder teithio pob llygoden trwy arsylwi awtomataidd (Offer Diagnostig ac Ymchwil).

Canlyniadau

Mae estyniad oes a achosir gan LOE yn gysylltiedig â DR

Er mwyn profi a oes gan LOE effaith gwrth-heneiddio in vivo, fe wnaethom archwilio'n gyntaf hyd oes pryfed CS a godwyd ar fwydydd sy'n cynnwys crynodiadau gwahanol o LOE. Roedd gan bryfed CS gwrywaidd ar fwyd calorïau uchel oes cymedrig o 41.5 diwrnod, ac roedd ychwanegu 50, 100, ac 1,{7}} ug/ml o LOE at y bwydydd plu yn ymestyn oes pryfed gwrywaidd o 8.9, 16.1 , a 9.6 y cant , yn y drefn honno ( Ffig. 1a a Thabl 1 ). Hyd oes cymedrig o 32.2 diwrnod yn unig oedd gan bryfed CS benywaidd ar fwyd calorïau uchel, sy'n fyr o'i gymharu â'u cymheiriaid gwrywaidd. Fodd bynnag, ysgogodd LOE estyniad hyd oes hyd yn oed yn fwy mewn pryfed CS benywaidd, lle cafodd 100 ug/ml o LOE yr effaith fwyaf (estyniad o 24.2 y cant; Ffig. 1b a Thabl 1), a 100 ug/ml roedd LOE hefyd yn ymestyn oes dynion a menywod. w1118 benywaidd yn hedfan, sy'n awgrymu nad yw hyd oes estynedig LOE wedi'i gyfyngu i gefndir genetig CS (Ffig. 1c, d a Thabl 1).

Gan fod DR yn ymyriad sydd wedi'i ddogfennu'n dda ar gyfer ymestyn oes, roeddem am brofi a fyddai DR yn newid effeithiau hirhoedledd LOE. Dangosodd pryfed CS gwrywaidd a benywaidd a godwyd ar fwydydd calorïau isel 17.8 a 49.4 y cant o gynnydd mewn hyd oes cymedrig, yn y drefn honno, o'i gymharu â phryfed CS a fagwyd ar fwydydd â llawer o galorïau (Ffig. 1e, f a Thabl 1). Fodd bynnag, ni chymhellodd LOE estyniad oes uwchlaw'r hyn a welwyd eisoes ar gyfer pryfed rheoli ar fwyd calorïau isel (Ffig. 1e, f a Thabl 1), sy'n awgrymu perthynas rhwng LOE ac estyniad oes a achosir gan DR, gan awgrymu y gallai'r ymyriadau hyn gweithredu, mewn rhan o leiaf, trwy yr un llwybrau.

Nid yw triniaeth LOE cronig yn achosi cyfaddawdau negyddol

Gan y gallai'r estyniad oes a achosir gan LOE fod yn gysylltiedig â'r llwybr DR, fe wnaethom archwilio a allai LOE leihau cymeriant bwyd pryfed ac arwain at statws tebyg i DR. Gwnaethom fonitro cymeriant bwyd pryfed gan ddefnyddio system safonol o ychwanegu lliw at eu bwyd (Wang et al. 2009). Ar gyfartaledd, roedd pryfed CS benywaidd yn amlyncu llawer mwy o fwyd o gymharu â gwrywod a oedd yn cyfateb i oedran, ond ni welwyd unrhyw wahaniaeth yn y bwyd a fwyteir rhwng pryfed rheoli a phryfed wedi'u trin â LOE ar gyfer y naill ryw na'r llall (Ffig. 2a).

Yn ogystal â lleihau cymeriant bwyd, gall ymyriadau sy'n ymestyn oes gynnwys cyfaddawdau negyddol, megis llai o ffrwythlondeb a gweithgaredd corfforol (Flatt et al. 2008; Wang et al. 2009; Sohal a Buchan 1981). Canfuom nad oedd pryfed CS wedi'u trin â LOE yn dangos unrhyw wahaniaeth mewn cynhyrchu wyau am yr 20 diwrnod cyntaf o fywyd oedolyn (Ffig. 2b). Roedd pryfed CS a gafodd eu trin gan LOE a'u rheoli hefyd yn dangos rhythm circadian arferol a gweithgaredd modur digymell (Ffig. 2c), fel y nodwyd yn flaenorol (Wang et al. 2009).

Mae LOE yn gwanhau diffygion cof sy'n gysylltiedig ag oedran mewn pryfed ffrwythau a llygod SAMP8

Mae dirywiad swyddogaethol niwronau yn nodwedd gyffredin o'r broses heneiddio. Gwnaethom archwilio cof swyddogaethol pryfed, gan ddefnyddio prawf cof tymor byr cysylltiadol arogleuol Pavlovaidd. Dangosodd pryfed CS ar fwyd uchel-calorïau ddirywiad gwybyddol graddol yn ystod 20 diwrnod cyntaf bywyd oedolyn (Ffig. 3a). Gwanhawyd y dirywiad cof hwn gan DR, a gwelwyd gwahaniaeth ystadegol arwyddocaol erbyn diwrnod 20 (Ffig. 3a, b). Gostyngodd LOE hefyd y dirywiad cof sy'n gysylltiedig ag oedran mewn modd sy'n dibynnu ar ddos, gyda phryfed ar LOE 100 ug/ml yn cyrraedd lefel llwyfandir tebyg i'r hyn a welwyd ar gyfer pryfed DR (Ffig. 3b).

Fe wnaethom ymchwilio ymhellach i effaith pro-wybyddol LOE mewn llygod SAMP8, y gwyddys eu bod yn datblygu diffygion dysgu a chof yn gynnar ac y dangoswyd eu bod yn fodel addas ar gyfer astudio mecanweithiau sylfaenol clefyd Alzheimer (Flood a Morley 1992, 1993). ; Chan et al. 2006; Takeda 2009). Yn y profion adnabod gwrthrych newydd, 3-dangosodd llygod SAMP8 mis oed gof adnabyddiaeth barhaus hyd at 3 h ar ôl y sesiwn hyfforddi, gan dreulio mwy o amser ar y gwrthrych newydd o'i gymharu â'r gwrthrych cyfarwydd (Ffig. 3c, d). Fodd bynnag, ni sylwyd ar y cadw cof hwn mewn 8-llygod SAMP8 mis oed (Ffig. 3c, d). Roedd ychwanegu LOE (100 ug/ml) at y dŵr yfed am 5 mis (yn dechrau o 3 mis oed) yn gwella'n sylweddol y gallu i gadw cof adnabod llygod SAMP8, hyd yn oed ar 3 h ar ôl y sesiwn hyfforddi (Ffig. 3d). Cafodd ychwanegiad dŵr o 50 ug/ml o LOE lai o effeithiau buddiol, ond llwyddodd i wella cadw cof am hyd at 2 h (Ffig. 3d).

Yn y profion drysfa T uchel, roedd angen niferoedd tebyg o dreialon hyfforddi ar bob grŵp o lygod er mwyn cyrraedd y maen prawf osgoi, gan awgrymu bod gan bob llygod alluoedd dysgu tebyg (Ffig. 3e). Yn y profion adalw cof 24-h, dim ond 8-llygod mis oed, ond nid 3-mis oed, dangosodd llygod SAMP8 ddiffyg sylweddol o ran cadw cof (Ffig. 3f). Gallai'r diffyg cof ofn hwn sy'n gysylltiedig ag oedran mewn llygod SAMP8 hefyd gael ei achub trwy 5-atchwanegiad LOE mis mewn dŵr yfed (Ffig. 3f). Ni ellir priodoli effeithiau pro-wybyddol LOE a welwyd uchod i unrhyw newid yng ngweithgaredd modur cyffredinol y llygod, gan na welwyd unrhyw wahaniaeth mewn cyflymder teithio na phellter yn y profion maes agored (Ffig. 3g a data heb ei ddangos). Ni ddangosodd llygod SAMP8 a dderbyniodd 5-mis o driniaeth LOE unrhyw effeithiau ar gymeriant bwyd neu ddefnydd dŵr a dim newid ym mhwysau'r corff (Ffig. 3h–j).

【Am ragor o wybodaeth:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】