Effaith Tropisetron ar Straen Ocsidiol, SIRT1, FOXO3a, A Claudin-1 ym Meinwe Arennol Llygod Mawr Diabetig a achosir gan STZ

edmund.chen@wecistanche.com

Haniaethol

Mae Tropisetron yn wrthwynebydd derbynnydd HT3 5- sy'n cael effaith amddiffynnol yn erbyn DN. Nod yr astudiaeth hon oedd ymchwilio i'r mecanweithiau moleciwlaidd posibl sy'n gysylltiedig ag effeithiau ad-amddiffynnol tropisetron mewn llygod mawr diabetig a achosir gan STZ. Rhannwyd anifeiliaid yn 5 grŵp cyfartal; rheoli, tropisetron, diabetes, tropisetron plws diabetes, a glibenclamid plws diabetes (n=7). Ar gyfer sefydlu diabetes math 1, rhoddwyd un pigiad o STZ (55 mg/kg, ip) i'r anifeiliaid. Cafodd llygod mawr diabetig eu trin â tropisetron (3 mg/kg) a glibenclamid (1 mg/kg) am bythefnos. Yn ôl y dadansoddiad a gynhaliwyd, arweiniodd diabetes atarennol camweithrediad (gostyngiad mewn cyfradd hidlo glomerwlaidd ac wrea wrin a creatinin yn ogystal â drychiad mewn wrea plasma a creatinin) ac annormaleddau yn y system amddiffyn gwrthocsidiol (gostyngiad mewn TAC a drychiad yn MDA), o'i gymharu â'r grŵp rheoli, a gafodd ei atal gan tropisetron triniaeth. Dangosodd adwaith cadwyn polymeras meintiol trawsgrifio gwrthdro a dadansoddiad blotio gorllewinol fod mynegiant genynnau SIRT1 wedi gostwng tra bod mynegiant genynnau FOXO3a a NF-κB yn ogystal â chymarebau protein FOXO3a/cyfanswm FOXO3a ffosfforyleiddiad a lefel protein claudin-1 wedi cynyddu yn yarenllygod mawr diabetig o gymharu â'r grŵp rheoli. Yma, dangosodd canlyniadau'r ymchwil hwn fod triniaeth tropisetron yn gwrthdroi'r newidiadau hyn. Yn ogystal, cymharwyd yr holl newidiadau hyn â'r rhai a gynhyrchwyd gan glibenclamid fel rheolaeth gadarnhaol. Felly, gwellodd tropisetrondifrod arennoloherwydd neffropathi diabetig o bosibl drwy atal straen ocsideiddiol a newid lefelau SIRT1, FOXO3a, a claudin-1.

Geiriau allweddol:difrod arennol; swyddogaeth arennol; clefyd arennol; aren; meinweoedd yr arennau

BYDD CISTANCHE YN GWELLA METHIANT YR AREN/ARENAU

Rhagymadrodd

Mae neffropathi diabetig (DN) yn glefyd microfasgwlaidd a nodweddir gan broteinwria gormodol gydag afiachusrwydd o 25-40 y cant (Chen et al. 2011; Ritz et al. 2010). Newidiadau morffolegol a swyddogaethol gan gynnwys hypertroffedd glomerwlaidd, croniad gormodol o fatrics allgellog a glomerwlosclerosis, ac, yn y pen draw, colliswyddogaeth arennolyn yarenyn gysylltiedig â hyperglycemia ac, wedi hynny, anhwylder metaboledd glwcos (Kanwar et al. 2008; Vikram et al. 2014). Felly, mae sylw arbennig wedi'i roi i reolaeth neu driniaeth effeithiol a all fod yn angenrheidiol i frwydro yn erbyn y clefyd yn y cyfnod cynnar. Mae tystiolaeth gronnus yn dangos bod cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) fel mater uniongyrchol o hyperglycemia ac wedi hynny, mae cynhyrchu cytocinau llidiol yn fecanweithiau mawr yn natblygiad cymhlethdodau diabetig (Beckman ac Ames 1998; Giacco a Brownlee 2010; Jaimes et al. 2010 ; Kiritoshi et al. 2003). Mae'n amlwg bod anghydbwysedd rhwng gallu amddiffyn pro-oxidant a gwrthocsidiol yn arwain at groniad radical rhydd a allai niweidio macromoleciwlau cellog gan gynnwys DNA yn ogystal ag addasu protein a pherocsidiad lipid (Peluso a Raguzzini 2016).

Mae'r sirtuins mamalaidd yn deulu o NAD plus-dibynnol deacetylases, gan gynnwys saith aelod (SIRT1-7). Yn eu plith, mae SIRT1, yr aelod cyntaf o'r teulu, wedi'i astudio'n helaethaf (Dong et al. 2014). Mae astudiaethau diweddar wedi datgelu bod SIRT1 yn chwarae rhan bwysig wrth reoleiddio marwolaeth celloedd / hirhoedledd yn ogystal ag ymateb straen acíwt a chronig mewn mamaliaid trwy wanhau difrod DNA, llid ac apoptosis (Hasegawa et al. 2013; Yun et al. 2012 ). Mae sawl astudiaeth yn nodi lefelau uwch o is-reoleiddio gweithgaredd SIRT1 yn y diabetig a achosir gan ROSarennau,in vivo ac in vitro (Akhtar a Siragy 2019; Du et al. 2016; Kumar et al. 2014; Papadimitriou et al. 2015; Park et al. 2016; Shi and Huang 2018).

Gall SIRT1 weithredu trwy reoleiddio sawl protein, megis ffactorau trawsgrifio ffactor niwclear-kappaB (NF-κB) a theulu FOXO (Brunet et al. 2004; Langley et al. 2002; Motta et al. 2004; Yeung et al. .2004). Yn ddiweddar, fe'i hysbyswyd bod SIRT1 yn rheoleiddio metaboledd glwcos trwy gyfrannu at FOXO (Kobayashi et al. 2005). Mae FOXO3a yn is-grŵp o deulu FOXO o ffactorau trawsgrifio sydd â rôl bwysig yn ystod straen ocsideiddiol (Accili ac Arden 2004). Mae addasiadau i FOXO3a yn digwydd trwy ffosfforyleiddiad ac asetyleiddiad a all ymddangos ar yr un pryd o dan amodau amrywiol. Yn ôl y llenyddiaeth, gall SIRT1 ddadacetyla FOXO3a, gan gynyddu ei lefel hollbresennol a diogelu rhag straenwyr (Wang et al. 2017a). Ychydig o wybodaeth sydd am fecanwaith y rhyngweithiadau rhwng SIRT1 a FOXO yn ystod cyflyrau hyperglycemig (Yun et al. 2012). Fodd bynnag, awgrymwyd bod SIRT1 yn modiwleiddio gweithgaredd y FOXO yn ôl pob tebyg trwy eu trawsleoli niwclear (Brunet et al. 2004) a hefyd yn rheoli'r trawsgrifiad genyn-benodol (Kobayashi et al. 2005). Felly, mae trawsleoli FOXO3a o'r cytoplasm i'r cnewyllyn yn cael ei achosi'n bennaf gan weithgaredd deacetylation SIRT1, yn enwedig mewn statws straen ocsideiddiol (Yun et al. 2012).

Mae Wang et al. adrodd bod triniaeth glwcos uchel yn modiwleiddio mynegiant protein SIRT1 a FOXO3a mewn dynolarencelloedd epithelial (Wang et al. 2017b). At hynny, mae FOXO3a yn gweithredu fel rheolydd cadarnhaol signalau NF-κB, lle gellid ei ddefnyddio i effeithio ar strategaethau goroesi celloedd o dan amodau straen (Li et al. 2012). Mae Claudin-1 yn farciwr tybiedig cell epithelial parietal (PEC)-benodol (Huby et al. 2009; Ohse et al. 2009; Rincon-Choles et al. 2006), sydd â chysylltiad negyddol â mynegiant SIRT1 yn y ddau brocsimol tiwbyn a rhanbarth glomerwlaidd. Dangoswyd bod is-reoleiddio SIRT1 mewn diabetes yn cael ei gadarnhau gan ddadreoleiddiad y protein claudin cyffordd dynn-1 mewn podocytau sy'n cyfrannu at albwminwria (Gong et al. 2017; Hasegawa et al. 2013). Gan fod straen ocsideiddiol, cytocin llidiol, a'u cyfryngwyr moleciwlaidd yn bynciau mawr yn effaith niweidiol diabetes, gallai asiantau gwrthocsidiol a gwrthlidiol ddarparu therapïau newydd yn erbyn DN (Elmarakby a Sullivan 2012).

Mae Tropisetron yn wrthwynebydd derbynnydd 5-HT3 sy'n dod i'r amlwg yn ddiweddar ac sydd wedi'i nodi fel cyffur gwrth-emetic yn ystod cemotherapi (Barzegar-Fallah et al. 2015). Mae sawl adroddiad wedi dangos y gall tropisetron gynnig effeithiau antiapoptotig, antidiabetig, gwrthganser, gwrth-lipidemig, niwro-amddiffynnol, a cardioprotective sydd yn ôl pob tebyg yn cael eu cyfryngu trwy fecanweithiau gwrthocsidiol a gwrthlidiol (Aminzadeh 2017; Asadi et al. 2016; Barzegar-Fallah et al. 2015; Barzegar-Fallah et al. 2014; Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019; Rashidi a Bazi 2020). Mae rhai astudiaethau sy'n profi effaith gwrth-ocsidiol tropisetron, in vitro ac in vivo, megis effaith amddiffynnol tropisetron ar aflonyddwch ocsideiddiol a achosir gan hyperglycemia mewn celloedd PC12 (Aminzadeh 2017), yn lleddfu'r anaf mitocondriaidd trwy ostwng nitrergig. gweithgaredd system yn yr ymennydd (Haj Mirzaian et al. 2016), neu wanhau straen ocsideiddiol yn erbyn heneiddio ymennydd llygod (Mirshafa et al. 2020).

Yn ddiweddar, mae Barzegar Fallah et al. datgelu bod tropisetron yn lleddfu glwcos yn y gwaed a hefydswyddogaeth arennolfel y dangosir gan ostyngiad mewn nitrogen urea gwaed serwm (BUN), lefelau creatinin serwm, ac ysgarthu albwmin wrinol. gwella mewn anifeiliaid diabetig sy'n cael eu trin â tropisetron (Barzegar-Fallah et al. 2015). Fodd bynnag, nid oes unrhyw dystiolaeth gref arall am fodiwleiddio DN gan dropisetron a'i fecanwaith moleciwlaidd. Nod yr astudiaeth hon, felly, yw gwerthuso, yn gyntaf: effeithiau tropisetron ar gyfryngwyr moleciwlaidd gan gynnwys SIRT1, NF-κB, a FOXO3a, yn ogystal â claudin-1, sef protein sy'n ymwneud â chyffyrdd epithelial tynn ac sy'n chwarae a rôl fawr ynarennolneffropathi diabetig; yn ail, i gymharu effaith tropisetron â'r cyffur gwrth-diabetig safonol wedi'i farchnata, glibenclamid, er mwyn dod o hyd i asiant mwy buddiol a diogel fel cyffur antidiabetig safonol aur.

BYDD CISTANCHE YN GWELLA CLEFYD YR ARREN/ARENAU

Defnyddiau a dulliauCynhaliwyd yr astudiaeth hon yn unol ag Egwyddorion Gofal Anifeiliaid Labordy ym Mhrifysgol Gwyddorau Meddygol Urmia. Cafwyd cymeradwyaeth foesegol gan Gyfarwyddeb yr UE 2010/63/EU ar gyfer arbrofion anifeiliaid yn unol â chanllawiau'r Pwyllgor Moeseg Feddygol, y Weinyddiaeth Iechyd, Iran (IR.UMSU.REC.1397.291). Dyrannwyd tri deg pump o lygod mawr Wistar gwrywaidd (230-270 g pwysau, 3-4 mis oed) yn 5 grŵp (saith llygod mawr ym mhob grŵp): 1. Grŵp rheoli: Derbyniodd llygod mawr halwynog arferol yn fewnperitoneol am 2 wythnos. 2. Grŵp Tropisetron: Derbyniodd llygod mawr tropisetron yn fewnberitoneol am 2 wythnos. 3. Grŵp diabetes: Cafodd diabetes ei ysgogi gan chwistrelliad streptozotocin (STZ) mewn llygod mawr. 4. Grŵp diabetes Tropisetron plws: Derbyniodd y llygod mawr 3 mg/kg o tropisetron (Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019) yn fewnberitoneol am bythefnos ar ôl sefydlu diabetes. 5. Grŵp diabetes glibenclamide a mwy: Derbyniodd y llygod mawr 1 mg/kg glibenclamid (Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019) yn fewnberitoneol am bythefnos ar ôl sefydlu diabetes.

Sefydlu diabetesCafodd Streptozotocin (50 mg/kg) ei chwistrellu'n fewnperitoneol mewn un dos i gymell diabetes mewn llygod mawr. Yn seiliedig ar y dull hwn, ysgogwyd diabetes math I yn y llygod mawr 72 h ar ôl y pigiad. Cafodd diabetes ei ddiagnosio a'i gadarnhau trwy greu mân anaf gan ddefnyddio lancet yng nghynffon llygod mawr a oedd yn ymprydio, ac yna rhoddwyd diferyn o waed ar stribed glucometer. Yna, fe'i mesurwyd gan glucometer (Boehringer Mannheim Indianapolis, IN), ac ystyriwyd lefelau glwcos yn y gwaed uwchlaw 300 mg / dl yn ddangosydd sefydlu diabetes. Ar ôl 2 wythnos a 24 h cyn anesthetizing, gosodwyd llygod mawr mewn cewyll metabolaidd fesul un, a chasglwyd wrin. Yna, cafodd samplau wrin eu hallgyrchu ar unwaith gydag arwyneb tryloyw samplau a storiwyd ar − 20 gradd ar gyfer dadansoddi wrea a creatinin. Wedi hynny, cafodd y llygod mawr eu pwyso a'u hanestheteiddio trwy chwistrelliad mewnperitoneol o gymysgedd cetamin (60 mg / kg) a xylazine (4 mg / kg). Yna, agorwyd ceudod yr abdomen; cafwyd y gwaed o'r galon trwy chwistrell gul a'i gymysgu ag asid ethylenediaminetetraacetig (EDTA) a'i allgyrchu ar 4000 × g am 20 munud. Yna, storiwyd y plasma a gynhyrchwyd ar − 80 gradd ar gyfer mesur wrea, creatinin, a chyfanswm gallu gwrthocsidiol (TAC) yn ddiweddarach. Y ddauarennauo'r anifeiliaid yn cael eu excised, golchi â serum ffisiolegol oer, a phwys. Y chwitharenhomogeneiddiwyd meinweoedd gan Ultra Turrax (T10B, IKA, a'r Almaen) mewn datrysiad sy'n cynnwys RNAase i brofi lefelau mynegiant SIRT1, NF-κB, a FOXO3a gan ddefnyddio'r dull PCR amser real. Iawnarenwedi'i rewi ar − 80 gradd ar gyfer mesur MDA a dadansoddi blotiau gorllewinol (cyfanswm a ffosfforyleiddiad FOXO3a a claudin-1).

Glwcos gwaed ymprydioAr ddiwedd y protocol, ar ôl ymprydio dros nos (14-18 h), cafwyd samplau gwaed o flaen y gynffon, ac yna mesurwyd lefelau glwcos trwy ddefnyddio glucometer digidol (Elegance, CT-X10, Frankenberg, yr Almaen).Wrea wrinol a phlasma a creatininAt y diben hwn, bydd y lefelau wrinol a phlasma wrea a creatinin yn cael eu mesur gan gitiau economaidd penodol ar gyfer mesur wrea a creatinin (Biotechnegol; Varginha, Minas Gerais, Brasil).Cyfradd hidlo glomerwlaiddCyfradd hidlo glomerwlaidd (GFR) yw'r mynegai cyffredinol gorau oswyddogaethau arennau, a werthuswyd trwy gyfrifo cliriad creatinin (GFR=[UCr × V]/SCr) a defnyddio crynodiadau creatinin plasma ac wrin a chyfradd neu gyfaint llif wrin.

Malondialdehyde a chyfanswm gallu gwrthocsidiolAseswyd MDA fel cynnyrch terfynol perocsidiad lipid trwy adwaith ag asid thiobarbitwrig (Sigma-Aldrich; UDA) yn yarensamplau yn unol â phrotocol y gwneuthurwr (Esterbauer a Cheeseman 1990). Yn gryno, 0.3–0.4 g ymeinwe arennauwedi'i homogeneiddio mewn KCl oer iâ (150 mM) ac yna wedi'i allgyrchu ar 3000 × g am 10 munud. Yna, cyfunwyd 0.5 ml o'r supernatant ag asid ffosfforig 3 ml (1 y cant , v/v), ac yn dilyn cymysgu fortecs, cafodd 2 ml o 6.7 g/l TBA ei ddarostwng i'r samplau. Cynheswyd y sbesimenau ar 100 gradd am 45 munud. Ar ôl oeri ar rew, cyfunwyd n-butanol (3 ml) a chafodd y cynhyrchion eu centrifugio ymhellach ar 3000 × g am 10 munud arall. Yna, ystyriwyd bod amsugnedd y cynhyrchion yn 532 nm trwy sbectrophotometreg. Cymharwyd y lefel amsugnedd â'r gromlin safonol. Mesurwyd TAC gan becyn statws gwrthocsidiol cyfanswm Randox, lle mae ABTS 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sylffonad) yn cael ei ddeor â peroxidase a H2O2 gan arwain at gynhyrchu catation radical ABTS plus . Mae gan hwn liw glas-wyrdd sefydlog, sy'n cael ei werthuso gan ddefnyddio dadansoddwr awtomatig 600-nm (Amini et al. 2020).

BYDD CISTANCHE YN GWELLA POEN YN YR AREN/ARENIAD

Dyluniad cysefin a PCR amser realEchdynnwyd yr RNA yn gyntaf gan y pecyn perthnasol (GENALL), ac aseswyd yr RNA cyddwys yn ansoddol (electrofforesis) ac yn feintiol (nano-drop) er mwyn sicrhau echdynnu RNA a'i gymhwyso mewn technegau moleciwlaidd dilynol. Yna, cafodd y cDNA perthnasol ei syntheseiddio o'r holl samplau RNA a echdynnwyd. Archwiliwyd paent preimio'r genynnau targed a'r genyn glyceraldehyde dehydrogenase (GAPDH) fel genyn cadw tŷ ar wefan yr NCBI gan ddefnyddio meddalwedd Generunner (Tabl Atodol). Yna, dadansoddwyd mynegiant genynnau gan ddefnyddio'r paent preimio wedi'i syntheseiddio gan becyn PCR, ac yna dadansoddiad ystadegol o ddata.

Blot gorllewinolDefnyddiwyd dull blot gorllewinol i bennu lefelau protein FOXO3a (cyfanswm a ffosfforyleiddiad) a claudin-1 yn yaren.Defnyddir dau gel datrys a stacio i wneud y gel electrofforesis. Ar ôl paratoi'r gel datrys a'i arllwys i'r mowld, ychwanegwyd gel pentyrru ar ôl awr ac ar ôl ei bentyrru. Llwythwyd y samplau i ffynhonnau a wnaed gan grib arbennig. Yna cawsant eu gwahanu gan SDS-TUDALEN. O fewn awr, trosglwyddwyd yr holl sbesimenau wedi'u llwytho i'r bilen PVDF. Yn dilyn hynny, rhwystrwyd y sbesimenau gyda byffer llaeth sgim o 5 y cant gan gynnwys 0.1 y cant Tween 20 ac yna cawsant eu deor â gwrthgyrff cynradd dros nos ar 4 gradd mewn deorydd ysgydwr. Yna cafodd y pilenni eu deor â gwrthgorff eilaidd wedi'i gyfuno â rhuddygl poeth perocsidas. Yn olaf, defnyddiwyd beta-actin fel safon fewnol ar gyfer y dadansoddiad blotiau gorllewinol. Ar y diwedd, gwerthuswyd effeithiau samplau blotiedig, yn dibynnu ar lefel y protein targed, ar y ffilm radiograffeg mewn ystafell dywyll. Er mwyn mesur y proteinau targed, cyfrifwyd canlyniadau'r sgan ffilm gan densitomedr o'i gymharu â lefel yr actin. Dangosir y gwrthgyrff a ddefnyddir mewn profion blotio Gorllewinol yn y Tabl Atodol (rhifau catalog a chwmnïau).

Dadansoddiad ystadegolCyflwynwyd canlyniadau fel cymedr ± SEM. Cynhaliwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio SPSS 16.0. Amcangyfrifwyd cymhariaeth rhwng grwpiau gan brawf ANOVA ac yna prawf post hoc Tukey. Tybiwyd bod y gwahaniaethau yn ystadegol arwyddocaol yn P <>

Canlyniadau

Gostyngodd Tropisetron glwcos gwaed ymprydio (mg / dl), pwysau arennau (g), a mynegai arennau (mg / g), tra bod pwysau corff cynyddol (g) yn y llygod mawr diabetig a achosir gan STZYn yr un modd ag astudiaethau blaenorol yn y gwaith hwn, dangosodd grwpiau diabetig hyperglycemia difrifol (P < {{{{}}}}.="" 001)="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" rheoli.="" roedd="" y="" defnydd="" o="" tropisetron="" (p="">< {0}.01)="" a="" glibenclamid="" (p="">< 0.05)="" am="" 2="" wythnos="" yn="" lleihau="" glwcos="" yn="" y="" gwaed="" yn="" sylweddol="" mewn="" grwpiau="" diabetig="" a="" achosir="" gan="" stz,="" ond="" roedd="" yn="" dal="" yn="" sylweddol="" uwch="" na'r="" hyn="" yn="" y="" grŵp="" rheoli="" (p="">< 0.001="" ).="" nid="" oedd="" unrhyw="" wahaniaeth="" arwyddocaol="" ym="" mhwysau'r="" corff="" (bw)="" ymhlith="" y="" grwpiau="" ar="" ddechrau'r="" astudiaeth="" hon="" (data="" heb="" ei="" ddangos).="" gostyngodd="" ymsefydlu="" diabetes="" gan="" stz="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.001)="" yn="" olaf="" (bw)="" mewn="" llygod="" mawr="">Arennaunid oedd pwysau (KW) yn arwyddocaol ymhlith y grwpiau ar y dechrau; fodd bynnag, fe'i cynyddwyd yn y grŵp diabetig a'i ostwng ar ôl ymyriadau.Arennaucynyddwyd mynegai (KW/BW) yn sylweddol (P < {{{0}}.001)="" yn="" t1dm="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" rheoli.="" yn="" ddiddorol,="" ar="" ôl="" pythefnos="" o="" roi="" tropisetron="" a="" glibenclamid,="" kw/bw="" wedi'i="" fodiwleiddio="" (p="">< 0.05)="" (tabl="">

Gwellodd Tropisetron ddadansoddiad biocemegol yn y llygod mawr diabetig a achosir gan STZFel mewn astudiaethau blaenorol, roedd lefelau wrea ym mhlasma ac wrin y grŵp diabetig yn sylweddol uwch na'r rhai yn y grŵp rheoli (P < {{0}}.001)="" .="" yn="" y="" grŵp="" diabetes="" tropisetron="" plws,="" plasma="" (p="">< 0.{{10}}01)="" ac="" wrin="" (p="">< 0.0="" 5)="" gostyngodd="" lefelau="" wrea="" yn="" sylweddol="" o="" gymharu="" â'r="" rhai="" yn="" y="" grwpiau="" diabetes.="" fodd="" bynnag,="" roedd="" wrea="" wrin="" yn="" dal="" yn="" sylweddol="" is="" na'r="" hyn="" yn="" y="" grŵp="" rheoli="" (p="">< 0.01).="" nid="" oes="" gwahaniaeth="" arwyddocaol="" yn="" lefel="" wrea="" plasma="" rhwng="" tropisetron="" a="" diabetes="" a="" grwpiau="" rheoli.="" dangosodd="" lefel="" creatinin="" plasma="" (p="">< 0.001)="" ac="" wrin="" (p="">< 0.05)="" gynnydd="" sylweddol="" yn="" y="" llygod="" mawr="" diabetig="" o'i="" gymharu="" â'r="" hyn="" yn="" y="" grŵp="" rheoli.="" gostyngodd="" gweinyddu="" tropisetron="" y="" lefelau="" creatinin="" wrin="" a="" phlasma="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.001)="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" diabetig.="" mewn="" anifeiliaid="" diabetig,="" roedd="" y="" cliriad="" creatinin,="" fel="" dangosydd="" o="" gyfradd="" hidlo="" glomerwlaidd,="" yn="" sylweddol="" is="" na'r="" hyn="" yn="" y="" grŵp="" rheoli="" (p=""><0.05). cynyddodd="" triniaeth="" tropisetron="" y="" cliriad="" creatinin="" yn="" sylweddol="" o'i="" gymharu="" â'r="" un="" yn="" y="" grŵp="" diabetes="" (p=""><0.001). cafwyd="" yr="" un="" canlyniadau="" yn="" y="" grŵp="" a="" driniwyd="" gan="" glibenclamid.="" fodd="" bynnag,="" mae'r="" wrea="" plasma="" yn="" llawer="" is="" yn="" y="" grŵp="" sy'n="" cael="" ei="" drin="" â="" tropisetron="" o'i="" gymharu="" â'r="" grŵp="" diabetes="" glibenclamid="" plws="" (p=""><0.01) (tabl="">

Cynyddodd Tropisetron gynnwys TAC plasma a lefel MDA wedi'i wanhau yn y llygod mawr diabetig a achoswyd gan STZLefel MDA mewn rheolaeth, tropisetron, diabetes mellitus, tropisetron plus diabetes, a glibenclamid plus grwpiau diabetes oedd 8.65 ± 1.01, 10.89 ± 1.6 35.54 ± 7.1, 18.76 ± 3.6, a 16.89 ± 4.1 nmol/mg o brotein, yn y drefn honno. Mae ein hastudiaeth, ynghyd ag astudiaethau eraill, wedi dangos y lefel uchaf o MDA yn y grŵp diabetes, a ddangosodd gynnydd sylweddol o gymharu â'r grŵp rheoli (P < {1.00="" 1).="" roedd="" lefel="" mda="" yn="" y="" grwpiau="" diabetes="" tropisetron="" plws="" a="" glibenclamid="" a="" diabetes="" yn="" dangos="" gostyngiad="" sylweddol="" (p="">< {{30}}.01)="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" diabetes="" (ffig.="" 1a).="" roedd="" lefelau="" tac="" yn="" y="" grwpiau="" rheoli,="" tropisetron,="" diabetes,="" tropisetron="" a="" diabetes,="" a="" glibenclamid="" a="" diabetes="" yn="" 0.65="" ±="" 0.{{40}}3,="" {{44}="" }.76="" ±="" 0.06,="" 0.26="" ±="" 0.08,="" 0.45="" ±="" 0.06,="" a="" 0.57="" ±="" 0.08="" nmol/ml,="" yn="" y="" drefn="" honno.="" gostyngodd="" lefelau="" tac="" yn="" y="" grŵp="" diabetes="" o="" gymharu="" â="" rhai'r="" grŵp="" rheoli="" (p="">< 0.001),="" fel="" y="" dangoswyd="" yn="" flaenorol.="" cynyddodd="" gweinyddiaeth="" tropisetron="" a="" glibenclamid="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.01)="" lefelau="" tac="" plasma="" mewn="" anifeiliaid="" diabetig="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" diabetig="" (ffig.="">

Cynyddodd Tropisetron SIRT1 a gostyngodd ymadroddion genynnau FOXO3a a NF-κB Gwerthuswyd mynegiadau genynnau gan PCR amser real a roddodd dystiolaeth bwysig ar gyfer gwahaniaeth rhwng grwpiau. Yn unol â hynny, roedd diabetes yn gysylltiedig â gostyngiad sylweddol (0.65 ± 0.08) mewn mynegiant genynnau SIRT1 (P < {3.01="" )="" a="" chynnydd="" sylweddol="" (p="">< -.001)="" yn="" foxo3a="" (1.98="" ±="" 0.08)="" a="" nf-κb="" (1.71="" ±="" 0.14)="" mynegiant="" genynnau="" o'i="" gymharu="" â'r="" grŵp="" rheoli.="" cynyddodd="" triniaeth="" tropisetron="" sirt1="" (0.88="" ±="" 0.3)="" a="" gostyngodd="" foxo3a="" (1.53="" ±="" 0.08)="" (p=""><0.05) a="" nf-κb="" (1.27="" ±="" 0.03)="" (p="">< 0.01)="" lefelau="" mrna="" yn="" sylweddol="" mewn="" ratig="" diabetig="" .2a–c).="" cafwyd="" canlyniadau="" tebyg="" yn="" yr="" anifeiliaid="" a="" gafodd="" eu="" trin="" â'r="" cyffur="" safonol,="">

Gostyngodd Tropisetron ymadroddion protein FOXO3a a claudin-1I werthuso mynegiant protein FOXO3a (cyfanswm a ffosfforyleiddiad) a claudin- 1 yn dilyn triniaeth tropisetron a glibenclamid, defnyddiwyd blotio gorllewinol yn yareno wahanol grwpiau. Mae'r dadansoddiad data yn dangos cynnydd sylweddol mewn cymarebau protein FOXO3a/cyfanswm ffosfforyleiddiad FOXO3a (4.6 ± 0.17) a claudin-1 (3.02 ± 0.16 ) lefelau protein yn y grŵp diabetig o'u cymharu â'r rheolydd (P < 0.001).="" gostyngodd="" gweinyddu="" tropisetron="" yn="" sylweddol="" foxo3a/cyfanswm="" cymarebau="" protein="" ffosfforyleiddiad="" foxo3a="" (2.14="" ±="" 0.31)="" a="" lefelau="" claudin-1="" (2.4="" ±="" 0.12)="" yn="" y="">areno lygod mawr diabetig (P <{{0}}.01). gwnaeth="" triniaeth="" glibenclamid="" wanhau'n="" sylweddol="" gymarebau="" protein="" foxo3a/cyfanswm="" ffosfforyleiddiad="" foxo3a="" (2.57="" ±="" 0.5)="" (p="">< 0.001)="" a="" claudin-1="" (2.2="" ±="" 0.11)="" (p="">< 0.05)="" )="" lefelau="" protein="" yn="" y="" llygod="" mawr="" diabetig="" a="" achosir="" gan="" stz="" (ffig.="">

Trafodaeth Rhoddir canfyddiadau'r astudiaeth gyfredol yn yr adrannau canlynol: roedd pigiad sengl o T1DM a achosir gan STZ yn gysylltiedig â hyperglycemia difrifol, colli pwysau, aarencamweithrediad, sy'n cael ei amlygu gan gynnydd amlwg mewn creatinin plasma ac wrea a gostyngiad amlwg mewn cliriad creatinin fel mynegai GFR o'i gymharu â'r hyn yn y grŵp rheoli. STZ tarfu ar y cydbwysedd oxidative yn yarenmeinwe a brofwyd trwy gynyddu MDA a lleihau'r cynnwys TAC. Dangosodd dadansoddiad moleciwlaidd pellach fod diabetes wedi gostwng SIRT1 mRNA a chynyddu mRNA NF-κB yn ogystal â chymarebau protein FOXO3a/cyfanswm ffosfforyleiddiad FOXO3a a lefel protein claudin-1 yn yareno lygod mawr gwrywaidd. Gwellhad sylweddol o wrea, creatinin, creatinin

arsylwyd clirio, yn ogystal â SIRT1 mRNA, NF-κB mRNA, cymarebau protein FOXO3a/cyfanswm FOXO3a ffosfforyleiddio, a phrotein claudin, tebyg i rai'r anifeiliaid rheoli, yn y grŵp tropisetron plus diabetes. DN sy'n cael ei nodweddu gan nifer o nodweddion megis aflonyddwch ynarennolcyfanrwydd strwythurol a swyddogaethol, cynnydd mewnarenmaint, yn ogystal â hypertroffedd glomerwlaidd a thiwbaidd, yw un o brif achosion y cam olafclefyd arennol(Singh et al. 2018; Yaribeygi et al. 2018). Albinwria cynyddol, gostyngiad mewn GFR, a chodiad pwysedd gwaed rhydwelïol yw'r symptomau swyddogaethol mwyaf amlwg a welwyd mewn cleifion diabetig (Alzahrani et al. 2020). Y marciwr cynharaf o DN yw albwminwria sy'n cael ei achosi oherwydd difrod glomerwlaidd cynyddol fel nodwedd ganolog wrth gychwynanaf i'r arennau(Elsherbiny et al. 2018). Yn gyson â’n canfyddiadau, amlygodd astudiaethau blaenorol fod cynyddiadau mewn creatinin serwm ac wrea yn cyd-fynd â DN sy’n awgrymu camweithrediad ymeinwe arennol(Sharma et al. 2006; Tang et al. 2018).

Mae tystiolaeth gronnus yn dangos bod cynhyrchu radicalau rhydd oherwydd hyperglycemia yn ddigwyddiad allweddol yn natblygiad a dilyniant cymhlethdodau microfasgwlaidd diabetig gan gynnwys DN. Mae cynhyrchu ROS gormodol yn cyfrannu at ddifrod ocsideiddiol trwy effeithio ar macromoleciwlau, celloedd, a meinweoedd ac yn arwain at sarhad di-droi'n-ôl neu aflonyddwch swyddogaethol (Kiritoshi et al. 2003).

Mae MDA fel marciwr perocsidiad lipid yn cael ei sbarduno gan ymosodiad radicalau rhydd ar asidau brasterog annirlawn y bilen, sydd wedi cyfrannu at gymhlethdodau diabetig (Pieme et al. 2017). Amcangyfrifwyd cyfanswm statws gwrthocsidiol gan TAC, sef biomarcwr i bennu straen ocsideiddiol mewn llawer o gyflyrau patholegol. Felly, mae namau MDA a TAC mewn cleifion diabetig yn adlewyrchu cynhyrchu radicalau rhydd sy'n achosi statws straen ocsideiddiol (Peluso a Raguzzini 2016). Yn gyson, dangosodd canlyniadau'r astudiaeth hon gynnydd mewn MDA a gostyngiad mewn lefelau TAC mewn llygod mawr diabetigaren. O ystyried y ffaith hon, fe wnaeth gwanhau straen ocsideiddiol leddfu cymhlethdodau diabetig gan gynnwysanaf arennol(Alzahrani et al. 2020; Barzegar-Fallah et al. 2015).

Mae Tropisetron, fel antagonist 5-HT3 gyda gweithgareddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol, yn dangos effeithiau amddiffynnol mewn sawl cyflwr patholegol megis diabetes (Barzegar-Fallah et al. 2015; Rashidi a Bazi 2020). Disgrifiwyd effaith nephroprotective tropisetron yn flaenorol mewn arbrofion anifeiliaid. O fewn y farn hon, fe wnaeth tropisetron leddfu DN mewn modd annibynnol ar dderbynnydd HT3 5- trwy atal cynnydd mewn glwcos yn y gwaed,arennollefelau MDA, CAT, SOD, Gpx, a TNF- a gostyngodd ysgarthiad cytocin wrinol ac albwminwria (Barzegar-Fallah et al. 2015).

Yn unol â'r mater hwn, yn yr ymchwiliad presennol, darperir tystiolaeth i ddangos bod hyperglycemia modiwleiddiedig tropisetron, colli pwysau, a statws straen ocsideiddiol sy'n cael ei arddangos gan ostyngiad yn MDA a chynyddu'r cynnwys TAC a gwella.arencamweithrediad (dirywiad sylweddol mewn wrea plasma a creatinin). Defnyddiwyd glibenclamid fel cyffur safonol yn ôl astudiaethau blaenorol (Amini et al. 2020). Yn ddiddorol, ni welwyd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol yn y paramedrau a grybwyllwyd mewn grwpiau a weinyddir gan glibenclamid a grwpiau a weinyddir gan dropisetron yn yareno lygod mawr diabetig. Fodd bynnag, nid yw'r union fecanweithiau y tu ôl i effaith amddiffynnol tropisetron yn DN yn hysbys o hyd. Hyd eithaf ein gwybodaeth, dyma'r astudiaeth gyntaf i ddangos bod tropisetron wedi cynyddu mynegiant genynnau SIRT1 a gostwng cymarebau protein FOXO3a/cyfanswm FOXO3a ffosfforyleiddiad, NF-κB, a lefelau protein claudin yn yareno anifeiliaid diabetig.

Mae SIRT1 yn deacetylase protein dosbarth III sy'n ymwneud â goroesiad y celloedd o dan amodau straen trwy actifadu sawl protein allweddol. Mae'n ffactor hanfodol ar gyfer modiwleiddio mynegiant genynnau mewn ymateb i gynhyrchu ROS megis NF-κB a ffactorau trawsgrifio foxo (Brunet et al. 2004; Sengupta et al. 2011). Ymhlith teulu foxo, tybir bod gan FOXO3a rôl bwysig yn ystod straen ocsideiddiol trwy ddadreoleiddio sawl gwrthocsidydd, gan gynnwys SOD a CAT

(Hasegawa et al. 2008; Kops et al. 2002). Yn benodol, mae anactifadu FOXO3a wedi bod yn gysylltiedig â is-reoleiddio straen ocsideiddiol a achosir gan CAT yn ystod amodau hyperglycemia (Wang et al. 2017b). Mae SIRT1 yn rheoli actifadu FOXO3a trwy ddadacetyliad ac yn modiwleiddio ymateb y gell i straen ocsideiddiol yn uniongyrchol neu'n anuniongyrchol (Hori et al. 2013). Datganwyd bod cysylltiad swyddogaethol rhwng rheoleiddio SIRT1 a FOXO3 o'r system amddiffyn gwrthocsidiol MnSODmediated (Tanaka et al. 2009; Zhang et al. 2015). Yn unol â hynny, Zhang et al. (2015) bod icariin yn amddiffyn anaf acíwt i'r ysgyfaint a achoswyd gan isgemia berfeddol / llwybr signalau SIRT1/FOXO3 wedi'i gyfryngu gan atlifiad trwy uwchreoleiddio'r mynegiant MnSOD. Mae adroddiadau blaenorol hefyd wedi awgrymu bod uwch-reoleiddio SIRT1 yn lleddfu neffropathi a achosir gan cisplatin,arennolanaf isgemig/ atlifiad, a neffropathi diabetig (Funk a Schnellmann 2013; Gu et al. 2016; Kim et al. 2011). Yn nodedig, mae is-reoleiddio SIRT1 a achosir gan ddiabetes sy'n gyrru'r newidiadau pathoffisiolegol yn arwain atarennolgwenwyndra (Wang et al. 2017b). Mae Hasegawa et al. (2013) bod gostyngiad SIRT1 mewn tiwbiau procsimol wedi sbarduno cychwyn DN ac wedi arwain at albwminwria. Yn unol â hynny, gostyngodd canlyniadau'r ymchwil hwn a nodwydarennolMynegiant genyn SIRT1 yn y grŵp diabetig. Felly, achosodd activation SIRT1 ymwrtheddarennolcelloedd tiwbaidd i straen cellog (Kume et al. 2013). Ar y cyfan, mae actifyddion SIRT1 wedi cael sylw rhyfeddol fel ymgeiswyr diddorol ar gyfer therapi diabetes (Song et al. 2018)

Ar ben hynny, roedd yr ymchwil bresennol hefyd yn dangos ymateb llidiol amlwg mewn diabetigarennaufel y dangosir gan ddrychiad NF-κB. Mae'n ffactor rheoleiddio hanfodol sy'n gysylltiedig ag ymateb imiwn a llid (Hayden a Ghosh 2012). Yn gyson â chanfyddiadau'r ymchwil hwn, mae sawl astudiaeth wedi nodi bod actifadu NF-κB a'i drawsleoli niwclear yn cynyddu mewn DN arbrofol a dynol (Alzahrani et al. 2020; Kuhad a Chopra 2009). Yn ogystal, mae drychiad SIRT1 yn cyfrannu at anactifadu NF-κB i achub podocytau rhag anaf yn y diabetig.aren(Liu et al. 2014). Yn ddiddorol, mae gorfynegiant SIRT1 yn gwanhau mynegiant protein mewn cyffyrdd epithelial tynn, sef, claudin-1, mewn llygod mawr hyperglycemig, sydd mewn cydberthynas â lefel proteinwria. Mae claudin wedi'i actifadu-1 mewn podocytes yn dirywio'r swyddogaeth rhwystr glomerwlaidd trwy leihau mynegiant synaptopodin neu podocin gan arwain at albwminwria (Hasegawa et al. 2013). Cymeradwywyd y canfyddiadau hyn hefyd yn arennau'r llygod mawr diabetig.

Yma, dangoswyd am y tro cyntaf, o dan amodau diabetig, bod gweinyddu tropisetron wedi arwain at fynegiant genynnau SIRT1 gwell a gostwng ar yr un pryd cymarebau protein FOXO3a/cyfanswm ffosfforyleiddiad FOXO3a, NF-κB, a lefelau protein claudin-1. Felly, mae'n rhesymegol iawn y gallai gweithrediad o'r fath yn SIRT1 a'r gostyngiad dilynol yn y cymarebau protein FOXO3a/cyfanswm ffosfforyleiddiad FOXO3a, NF-κB, a claudin-1 fod, yn rhannol, fod yn gyfrifol am y gwelliant yn y diabetigswyddogaeth yr arennau. Adroddodd ymchwilwyr ei bod yn ymddangos bod effeithiau amddiffynnol tropisetron mewn DN yn 5-HT3-annibynnol ar dderbynnydd oherwydd bod granisetron, atalydd derbynnydd 5-HT3 dewisol arall, wedi methu ag amddiffyn DN. Datganwyd y gallai fod gan fecanweithiau gwrthocsidiol a gwrthlidiol tropisetron rôl hollbwysig ynmeinwe arennolamddiffyniad mewn diabetes (Barzegar-Fallah et al. 2015). Yn ddiweddar, gwelodd ein labordy fod triniaeth tropisetron wedi cynyddu secretiad inswlin a gostwng lefel glwcos yn y gwaed trwy godi mynegiant genynnau GLUT2 yn ogystal â llwybr UCP2/ZnT8 (Naderi et al. 2020). Roedd Tropisetron fel atalydd 5-derbynnydd HT3 wedi cynyddu rhyddhau inswlin o'r llinell beta-gell pancreatig sy'n cynhyrchu inswlin, a arweiniodd at hypoglycemia (Heimes et al. 2009). Felly, mae'n ymddangos y gallai modiwleiddio rhyddhau inswlin ac yna homeostasis glwcos gynnwys ymatebion gwrthocsidiol a gwrthlidiol sy'n cyfrannu atarenamddiffyn.

Yn unol â'r canfyddiadau presennol, mae tropisetron wedi gwrthdroi'r difrod ocsideiddiol trwy gynyddu mynegiant genynnau SIRT1 mewn henebrwydd mewn llygod (Mirshafa et al. 2020). Yn ogystal, arsylwyd gwanhad anaf i'r afu, TNF- , ac IL-6 lefelau protein yn iau llygod mawr diabetig yn dilyn cyd-driniaeth tropisetron (Amini et al. 2020; Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019). Hefyd, yn yr ymchwil presennol, dangosodd tropisetron ymateb tebyg i gyffur safonol, glibenclamid. Yn unol â hynny, cynyddodd amlygiad glibenclamid SIRT1 a gostyngodd cymarebau protein FOXO3a/cyfanswm ffosfforyleiddiad FOXO3a, NF-κB, a lefelau claudin yn y diabetigarennauyn yr astudiaeth gyfredol. Mae glibenclamid yn gyffur sefydledig sydd wedi'i ddefnyddio'n helaeth wrth drin cleifion diabetig trwy atal sianeli K plus sy'n sensitif i ATP. Gan fod rhai canlyniadau gwrthgyferbyniol wedi bod ynghylch yr effaith glibenclamid yn DN (Akbar et al. 2013; Elmalí et al. 2004; Nakamura et al. 2000), mae'n debyg oherwydd y dos neu hyd y driniaeth, roedd y digwyddiad hwn yn gymhelliant ar gyfer cyflwyno a cyffur newydd ar gyfer cleifion diabetig fel asiant diogel ac effeithiol gyda llai o sgîl-effeithiau

At ei gilydd, mae tropisetron yn gwella'n effeithiolswyddogaeth arennolyn DN mae'n debyg trwy newid mynegiant SIRT1, cymarebau protein FOXO3a/cyfanswm FOXO3a ffosfforyleiddiad, NF-κB, a claudin-1. Roedd gan yr astudiaeth hon rai cyfyngiadau o ran cefnogi'r pwnc hwn. Er enghraifft, dylai astudiaethau morffolegol geisio darparu tystiolaeth bellach i ddilysu'r ymchwiliad presennol. Hefyd, ni chyflogodd yr ymchwilwyr atalyddion moleciwl i ddilysu'r union fecanwaith llwybr signalau.

Casgliad

I gloi, dangosodd canfyddiadau'r astudiaeth hon effaith nephroprotective tropisetron mewn T1DM a achosir gan STZ. Roedd canfyddiadau nodedig yr ymchwiliad hwn yn dangos bod effaith neffroprotective tropisetron o bosibl yn cynnwys newidiadau yn y mynegiant o SIRT1, FOXO3a, NF-κB, a claudin-1. Gallai'r data hyn fod yn ysgogol ar gyfer ymchwil pellach yn y maes hwn.