Yr Astudiaeth Ar Fecanwaith Niwroamddiffynnol Cistanche A Fomitopsis Pinicola Ar Niwronau Dopaminergig Mesencephalon a Achosir gan MPP plus

Yr astudiaeth ar fecanwaith niwro-amddiffynnol Cistanche a Fomitopsis Pinicola ar niwronau dopaminergig mesencephala a achosir gan MPP plus

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Uchafbwyntiau

Nodweddir Fomitopsis Pinicola gan eiddo gwrth-ocsidydd, gwrth-llid ac imiwnostimulant. Yn yr astudiaeth bresennol, defnyddiwyd diwylliannau celloedd dopaminergig cynradd a baratowyd o fesencephala llygoden embryonig i bennu'rniwro-amddiffynnoleffeithiau a mecanweithiau posibl echdynnu dŵr o Fomitopsis Pinicola ar ddirywiad niwronau dopaminergig a achosir gan MPP plus. Roedd y canlyniadau'n dangos bod echdyniad dŵr o Fomitopsis Pinicola yn amddiffyn niwronau dopamin yn erbyn MPP a mwy. Dangosodd detholiad dŵr Fomitopsis Pinicola weithgareddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol. Mae mecanwaith yniwro-amddiffynnolgall effaith echdynnu dŵr o Fomitopsis Pinicola fod yn gysylltiedig ag ataliaeth ar straen ocsideiddiol mitocondriaidd. Mae astudiaethau diweddar wedi dangos bod yniwro-amddiffynnoleffaith oCistancheyn ei gwneud yn "ymgeisydd delfrydol" ar gyfer gwella clefydau niwrolegol.Cistancheyn gyfoethog mewn echinacosides. Mae detholiad ocistanchedangoswyd ei fod yn ysgogi synthesis ffactor twf nerfau mewn arbrofion vivo ac in vitro, yn hyrwyddo secretion ffactorau cysylltiedig yn yr ymennydd, ac yn gwella cyfres o swyddogaethau ymennydd sy'n gysylltiedig â'r cof.

Cistanchewediniwro-amddiffynnoleffeithiau

Haniaethol

Amcan: Arsylwi ar yniwro-amddiffynnolmecanwaith echdynnu dŵr o Fomitopsis Pinicola ar apoptosis a achosir gan MPP's o gelloedd dopaminergig mesencephalic in vitro.Methodau: Pennwyd gweithgaredd gwrthocsidiol ffyngau gan y dull FRAP. Canfuwyd gweithgaredd gwrthlidiol y ffyngau trwy ddull rhyddhau NO a achosir gan LPS. dopaminergig mesencephalicniwronaueu labelu gan TH staenio i arsylwi goroesiad THirniwronauCanlyniadau: Yn y assay gweithgaredd gwrth-ocsidydd, penderfynwyd bod cynhwysedd gwrthocsidiol cyfatebol Trolox (TEAC) o echdyniad dŵr o Fomitonsis Pinicola (165.80 ± 7.13) yn echdyniad umol Trolox/g Echdyniad dŵr o driniaeth Fomitopsis Pimicola (100,50,25 ,12.5ug/ml) gostwng DIM ffurfiant yn sylweddol. Arweiniodd MPP* anwedd cromatin sylweddol yng nghnewyllyn dopaminergig mesencephalicniwronaugyda lysis niwclear, gostyngodd potensial y bilen mitochondrial yn rhyfeddol, a chynyddodd cynhyrchiad ROS yn sylweddol. O'i gymharu â'r grŵp rheoli MPPt, cafodd newidiadau morffolegol niwclysau celloedd ar ôl apoptosis eu gwrthdroi gan echdyniad dŵr o Fomtitonsis Pinicola. Cynyddodd echdyniad dŵr o driniaeth Fomitopsis Pinicola (50,25,12.5ug/ml) botensial pilen mitocondriaidd cymharol yn ddramatig o gymharu â rheolaeth MPP yn y drefn honno. O'i gymharu â rheolaeth MPPt, gostyngodd echdyniad dŵr o driniaeth Fomitonsis Pimicola (50, 25ug/ml) ffurfiad cymharol ROS yn sylweddol yn y drefn honno, Casgliadau - Dangosodd detholiad dŵr o Fomitopsis Pinicola gryn dipyn.niwro-amddiffynnoleffaith ar gelloedd dopaminergig mesencephalic a achosir gan MPpt, Dangosodd detholiad dŵr Fomitopsis Pinicola weithgareddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol. Mae mecanwaith yniwro-amddiffynnolgall effaith echdynnu dŵr o Fomitopsis Pimicola fod yn gysylltiedig ag ataliaeth ar straen ocsideiddiol mitocondriaidd.Cistanchegall glycosidau wella lefel dysgu a chof cleifion â chlefyd Alzheimer, lleihau cynnwys malondialdehyde (MDA) ym meinwe'r ymennydd, a chynyddu glutathione peroxidase (GSH). -Px), gweithgaredd superoxide dismutase (superoxide dismutase, SOD), lleihau gweithgaredd acetylcholine esterase (acetylcholine esterase, TChE), cyfradd apoptosis celloedd yr ymennydd, a lleihau cronni calsiwm ym meinwe'r ymennydd.

Geiriau allweddol Fomitopsis Pimicola, dopaminergicniwronauapoptosis, gwrthocsidydd, potensial pilen mitocondriaidd, ffurfio ROS,Cistanche, Neuroprotective

Cefndir

clefyd Parkinsonyn glefyd niwroddirywiol mewn bodau dynol, sy'n effeithio'n ddifrifol ar iechyd mwy na 6.5 miliwn o bobl ledled y byd. Mae cyffredinrwydd yr henoed dros 65 oed tua 1 2 y cant [1, 2]. Er bod yr union etiology a pathogenesis oclefyd Parkinsonyn parhau i fod yn aneglur, profwyd bod straen ocsideiddiol yn ffactor allweddol yn nirywiad dethol dopaminergigniwronauyn y striatum nigrostriatal [3, 4]. Mae astudiaethau wedi dangos bod cynhyrchu gormodol o Rywogaethau Ocsigen Adweithiol (ROS) yn achosi camweithrediad mitocondriaidd, gan gynnwys llai o botensial pilen mitocondriaidd (△Ψm) a gweithgaredd ensymau cymhleth cadwyn anadlol Ⅰ, yn ogystal â DNA mitocondria annormal [5, 6]. Yn ogystal, gall sensitifrwydd a detholusrwydd y llwybr nigrostriatal i straen ocsideiddiol hefyd arwain at ddifrod DNA o dopaminergigniwronaumewn cleifion âclefyd Parkinson [7].

Phenylethanoid glycoside dyfyniad ynCistancheGall deserticola wella cyfansoddiad 1-methyl-4-ffenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)-model PD a achosir gan lygod C57 nodweddion ymddygiad llygod, cynyddu'r substantia nigra tyrosine hydroxylase (tyrosine hydroxylase, TH) hyd at a chynnwys DA yn striatwm cleifion âclefyd Parkinson.Yn ogystal, mae'rcistanchemae dyfyniad glycoside ffenyl ethanol yn cael effaith ataliol dda ar ddirywiad hyfywedd celloedd gronynnau cerebellar mewn cleifion âclefyd Parkinsonac yn atal y MPP ynghyd â apoptosis celloedd anwythol o ronynnog serebelarniwronautrwy atal actifadu caspase-3 a caspase-8. Marwolaeth, rhoi ei effaith gwrth-apoptotig.

Mae Fomitopsis Pinicola yn ffwng meddyginiaethol sy'n perthyn i'r Polyporaceae a'r Pseudomonas. Mae ganddo flas gwastad, ychydig yn chwerw ac mae ganddo effeithiau ffarmacolegol megis gwrth-ocsidiad, gwrth-bacteriol, gwrth-tiwmor, a gwella imiwnedd [8, 9]. Mae ein hastudiaethau blaenorol wedi cadarnhau bod echdynion dyfrllyd o Fomitopsis Pinicola yn cael effaith amddiffynnol ar apoptosis a achosir gan MPP ac o gelloedd dopaminergig canol yr ymennydd ffetws, a all gynyddu nifer y dopaminergig yn sylweddol.niwronaua hyd echelinol, a Chynyddu gweithgaredd ensym cymhleth cadwyn resbiradol mitocondriaidd I[10].

Yn yr astudiaeth hon, byddwn yn defnyddio'r dull pŵer gwrthocsidiol lleihau Ferric (FRAP) i arsylwi cynhwysedd gwrthocsidiol darnau dyfrllyd Fomitopsis Pinicola, ac arsylwi effaith gwrthlidiol DIM rhyddhau a achosir gan lipopolysaccharide (LPS) mewn microglia BV2. Effeithiau dopaminergic midbrain diwylliedigniwronauar forffoleg niwclear, arsylwyd potensial pilen mitocondriaidd, a chynhyrchu ROS in vitro, er mwyn datgelu mecanwaith amddiffynnol endomysetau ar dopaminergigniwronau.

Deunydd

Anifail

Arbrofodd y 14-llygod beichiogrwydd dydd, OF1/SPF, o Sefydliad Geneteg Anifeiliaid a Milfeddygol Labordy Awstria, ag anifeiliaid arbrofol yn unol â Chyfarwyddeb y Comisiwn Ewropeaidd 86/609/EU.

Prawf sampl

Cynhyrchwyd Fomitopsis Pinicola yn Awstria a chafodd ei adnabod gan yr Athro Wolf-Dieter Rausch fel Footmitopsis Pinicola. Ar ôl maluriad y Fomitopsis Pinicola, cafwyd y detholiad dŵr trwy echdynnu dŵr poeth, ac roedd y cynnwys polysacarid crai yn 8.95 y cant.

llinell gell

Llinell gell microglioma llygoden BV2, o'r Adran Biocemeg, Prifysgol Filfeddygol Fienna, mewn cyfrwng DMEM (Sigma) sy'n cynnwys 10 y cant o serwm buchol ffetws, 2 y cant B27(Gibco), 2 y cant glutamine, 37 gradd 5 y cant o ddiwylliant CO2.

cyfrwng diwylliant celloedd

Cyfrwng BM (cyfrwng sylfaenol) yr ategwyd cyfrwng DMEM ag ef â 10 y cant o serwm buchol ffetws, glwcos 30 mM, 2 mM glutamine, streptomycin 1 y cant, a 0.5 y cant amffotericin.

prif adweithyddion ac offerynnau

Mae MPP plus yn gynnyrch sigma, purdeb Yn fwy na neu'n hafal i 98 y cant ; gwrthgyrff gwrth-tyrosine hydroxylase (TH) cynradd ac eilaidd i gyd yn gynhyrchion o Vectastain Americanaidd.TPTZ(2.4.6-triazine terpyridine), FeCl3·6H2O, FeSO4·7H2O yn gynhyrchion o hydoddiant sychu Americanaidd sigma-Aldrich.DAPI. Mae toddiant lliwio JC-1 a hydoddiant lliwio C-DCDHF-DA i gyd yn gynnyrch Profion Moleciwlaidd Invitrogen. Crynodiad yr hydoddiant gwreiddiol oedd 1mg/ml, Img/ml ac 1M, yn y drefn honno. Microsgop fflworoleuedd, a wnaed gan gwmni Nikon yn Japan, model TS-100-F. Spectrophotometer ar gyfer yr Almaen Pharmacia Biotech cynhyrchion, modelau ar gyfer Novaspec ⅡI.

Cistancheyn gallu atalclefyd Parkinson

dull

Penderfynu cynhwysedd gwrthocsidiol echdynion trwy ddull FRAP

Ar ôl paratoi 30 ml o hylif gwaith FRAP (byffer asetad 300 mmol/L, hydoddiant TPTZ 10 mmol/L, toddiannau FeCly 20 mmol/L wedi'u cymysgu'n unffurf ar gymhareb cyfaint o 10:1:1), 450 mu L gwaith FRAP ychwanegwyd hylif gyda chrynodiadau gwahanol o 60 ul echdynnyn dyfrllyd o Fomitopsis Pinicola a 45 ul dŵr anweddiad dwbl. Mae cymysgu 37 gradd C yn osgoi adwaith ysgafn ar ôl 30 munud, yna'n pennu ei werthoedd amsugno ar 593 nm. Mesurwyd cyfanswm cynhwysedd gwrthocsidiol pob dyfyniad gan ddefnyddio Trolox fel y safon. Perfformiwyd tri asesiad cyfochrog ar gyfer pob sampl. Mynegwyd y canlyniadau fel cywerth Trolox (TEAC)(mol TEAC/g) fesul darn gram.

DIM assay rhyddhau ei ddefnyddio i ganfod effaith gwrthlidiol y dyfyniad

Cafodd celloedd cam logarithmig BV2 eu brechu mewn 48-blatiau ffynnon ar grynodiad o 1 x 10 celloedd gradd/ml. Ar ôl deori ar gyfer 37 gradd a 5 y cant CO2, ychwanegwyd y lipopolysaccharide (LPS) ar gyfer symbyliad, y crynodiad terfynol oedd 1lug/ml. Yna, ychwanegwyd crynodiadau gwahanol o'r dyfyniad, a diwylliwyd y celloedd ar 37 gradd o dan 5 y cant CO, am 48 h, ac ar ôl hynny mesurwyd y crynodiad o NO. Cyn y treial. Tynnwyd adweithyddion galar A a B o'r oergell ar 4 gradd C a'u caniatáu i gydbwyso tymheredd yr ystafell am 30 munud. Gwanhawyd y safonau nitraid yn gyfresol (20,10, 5,2.1, a 0.5uM) i gynhyrchu cromliniau safonol. Ychwanegu 50 μL o'r safon wanedig a supernatant y sampl i'w brofi (4 atgynhyrchiad ar gyfer pob crynodiad), ychwanegu at y 96-plât ffynnon, yna ychwanegu 50

uL o'r hydoddiant A, deorwch ar dymheredd ystafell am 10 munud yn y tywyllwch ac ychwanegwch 50 uL o'r hydoddiant B. Ar ôl deori am 10 munud ar dymheredd ystafell yn y tywyllwch, mesurwyd yr amsugnedd ar 550 nm gyda darllenydd microplate o fewn 30 munud, a chyfrifwyd rhyddhau NO yn y supernatant yn ôl y gromlin safonol [11]. Ar yr un pryd, ychwanegwyd 10 ul MTT (5 mg / ml mewn hydoddiant PBS) at bob ffynnon o'r plât cell, a'i feithrin ar 37 gradd am 5 y cant CO, am 4 awr. Ar ôl i'r supernatant gael ei daflu, ychwanegwyd 100 uL o DMSO at bob ffynnon, a mesurwyd yr amsugnedd ar 570 nm ar ôl ei ddiddymu'n llawn, i arsylwi cyfradd goroesi'r gell.

Diwylliant ac adnabod celloedd dopaminergig canol yr ymennydd a thriniaeth cyffuriau

Cafodd y llygod beichiog eu haberthu a'u trosglwyddo i ddysgl petri yn cynnwys byffer DPBS, cafodd yr embryonau llygoden eu rhannu, cafodd y midbrain ei ynysu, ei dorri'n ddarnau bach, a'i gasglu mewn byffer DPBS yn cynnwys 2ml o 0 1 y cant trypsin a 2ml {{ 3}}.02 y cant o DNase L Incubate am 7 munud mewn baddon dŵr 37 gradd, ac yna ychwanegu 2 ml o atalydd trypsin mewn crynodiad o 0.125 mg/ml, allgyrchol y hances bapur ar 100 xg am 4 munud, a thaflwch y supernatant. Yna, ychwanegwyd cyfrwng DMEM sy'n cynnwys 0.02 y cant DNase I, a chafodd y celloedd wedi'u gwahanu eu hailddarlledu mewn cyfrwng diwylliant celloedd BM, eu hadu mewn platiau celloedd wedi'u trin â polylysin, a'u meithrin ar 37 gradd ,5 y cant CO. Ar y 10fed diwrnod o ddiwylliant, 10 Ychwanegwyd μM MPP* at y celloedd niwron cynradd diwylliedig ar gyfer triniaeth, ac yna ychwanegwyd dyfyniad dyfrllyd 50.25.12.5 ug/ml o Fomitopsis Pinicola i'w drin ar 37 gradd ,5 y cant CO, wedi'i feithrin am 48 awr. Ar y 12fed diwrnod o ddiwylliant, defnyddiwyd rhai celloedd ar gyfer adnabod niwronau dopaminergig, a gosodwyd y celloedd gyda 4 y cant o baraformaldehyd ar 4 gradd am 30 munud, ac yna'n athraidd am 30 munud ar dymheredd ystafell gyda 0.4 y cant Triton X{{ 33}}. Ar ôl rinsio â byffer PBS am 3 gwaith, cafodd ei rwystro â datrysiad blocio serwm ceffyl am 90 munud, yna ychwanegwyd gwrthgorff cynradd gwrth-TH dros nos, yna ychwanegwyd gwrthgorff eilaidd biotinylated ar gyfer tymheredd yr ystafell am 90 munud, ac yn olaf, 3,3 Datblygwyd '-diaminobenzidine (DAB, 5 mg/ml). Arsylwyd y celloedd positif ar gyfer lliw TH o dan y microsgop fel niwronau dopaminergig.

Arsylwi morffoleg niwclear

Cafodd celloedd MPP a mwy a chelloedd wedi'u trin â chyffuriau eu gosod gyda 4 y cant o baraformaldehyd am 30 munud, yna rhwygwyd gyda 0.4 y cant Triton X-100 am 30 munud, ac yna ychwanegwyd gyda hydoddiant staen DAPI ar grynodiad terfynol o 1 ug/ml am 5 munud ar dymheredd ystafell. Arsylwyd morffoleg y cnewyllyn o dan ficrosgop fflworoleuedd. Y donfedd cyffro oedd 340 nm, a dewiswyd 4 maes ar hap ar gyfer pob ffynnon.

Canfod potensial pilen mitocondriaidd

Ychwanegwyd MPP plus a chelloedd wedi'u trin â chyffuriau at JC-1 dve ar grynodiad terfynol o 10 ug/ml a'u deor ar 37 gradd am 15 munud. Arsylwyd y newidiadau dwyster fflworoleuedd gan ficrosgopeg fflworoleuedd ar 488 nm a golau cyffroi 568 nm yn y drefn honno. Mesurwyd y newid mewn potensial pilen mitocondriaidd yn ôl cymhareb y dwyster fflworoleuedd ar 568 nm i'r dwyster fflworoleuedd ar 488 nm.

Prawf cynhyrchu ROS

Ychwanegwyd MPP plus a chelloedd wedi'u trin â chyffuriau at C-DCDHF-DA dve ar grynodiad terfynol o 10 mM ac ar ôl deori ar 37 gradd am 30 munud, cafodd yr ateb diwylliant ei daflu, a golchwyd y celloedd ddwywaith gyda chyfrwng DMEM di-liw. . Defnyddiwyd microsgopeg fflworoleuedd i arsylwi ar y newid mewn dwyster fflworoleuedd. Y donfedd cyffro oedd 488 nm, a dewiswyd 4 maes golygfa ar hap ar gyfer pob ffynnon. Nid oedd amser amlygiad y celloedd i'r golau cyffroi yn fwy na 5s.

Canlyniadau

Gallu gwrthocsidiol Fomitopsis Pinicola

Mae gan Fomitopsis Pinicola effaith gwrth-ocsidiad amlwg, ac mae gan ei echdyniad dŵr allu gwrthocsidiol o （165.80 ±7.13 ） μmol dyfyniad TEACHH.

Effaith gwrthlidiol Fomitopsis Pinicola

Ar ôl celloedd BV2 a ysgogwyd gan LPS, cynyddwyd rhyddhau NO yn sylweddol, a oedd yn sylweddol wahanol i un y grŵp rheoli arferol. Ar ôl echdyniad dyfrllyd Fomitopsis Pinicola, gostyngwyd rhyddhau NO yn sylweddol, ac ymhlith y rhain 100,50, 25, roedd gwahaniaeth sylweddol rhwng y grŵp dos 12.5 ug/ml a'r grŵp LPS (Ffig. 1). Ar ôl celloedd BV2 a ysgogwyd gan LPS, roedd y gyfradd goroesi celloedd yn sylweddol is na chyfradd y grŵp rheoli arferol. Ar ôl gweithrediad echdyniad dyfrllyd Fomitopsis Pimicola, roedd gan y grŵp dos 100ug/ml ostyngiad sylweddol mewn hyfywedd celloedd, ac roedd gwahaniaeth sylweddol o'i gymharu â'r grŵp LPS. Ni chafodd y grŵp dos 50,25,12.5 ug/ml unrhyw effaith sylweddol ar hyfywedd celloedd (Ffigur 1, Ffigur 2).

Nodi niwronau dopaminergig midbrain mewn llygod mawr ffetws

Ar ôl staenio TH penodol ar niwronau midbrain llygod mawr y ffetws diwylliedig, dangosodd y niwronau dopaminergig liw brown-melyn clir, ac roedd staenio'r cyrff celloedd a'r acsonau i'w gweld yn glir, a brofodd fod y niwronau dopaminergig wedi'u meithrin yn llwyddiannus (Ffigur 3) .

Ffigur 1 Effeithiau echdynion dŵr o Fomitopsis Pinicola ar ryddhau NO mewn celloedd BV2

wedi'i achosi gan LPS

Nodyn: o'i gymharu â'r grŵp rheoli arferol, **p <{{0}}.{4}}1; o'i="" gymharu="" â="" grŵp="" lps,="" ##p="">< 0.01,="" #p=""><>

Ffigur 2 dylanwad echdyniad dŵr Fomitopsis Pinicola ar gyfradd goroesi celloedd BV2

Nodyn: o'i gymharu â'r grŵp rheoli arferol, **p < 0.01;="" o'i="" gymharu="" â="" grŵp="" lps,=""><>

Ffigur 3 TH - staenio niwron DA mesencephalon wedi'i labelu

Effaith Fomitopsis Pinicola ar forffoleg niwclear Mae DAPI,4',6-diamidino-2-phenylindole, yn blymio fflwroleuol sy'n treiddio i'r gellbilen ac yn clymu'n rhyfedd i DNA. Dangosodd canlyniadau'r arbrawf hwn fod niwclysau niwronau dopaminergig yn y grŵp rheoli arferol bron yn gyfan a bod y cromatin yn unffurf. Dangosodd y grŵp rheoli MPP plus anwedd cromatin sylweddol, lysis pilen niwclear, a lysis niwclear. Ar ôl gweithredu dyfyniad dyfrllyd Fomitopsis Pinicola, roedd morffoleg y cnewyllyn yn gymharol gyfan, a gostyngwyd nodweddion apoptosis (Ffigur 4).

Effaith Fomitopsis Pinicola ar Botensial Pilenni Mitocondriaidd

Ar ôl MPP ac anwythiad, gostyngodd potensial pilen mitocondriaidd niwronau dopaminergig yn sylweddol, a oedd yn sylweddol wahanol i botensial y grŵp rheoli arferol (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" mitochondrial="" membrane="" potential="" decreased="" after="" mpp+="" induction.="" there="" was="" a="" significant="" increase="" in="" mitochondrial="" membrane="" potential="" in="" the="" 50,="" 25,="" and="" 12.5ug/ml="" dose="" groups="" compared="" with="" the="" mpp+="" control="" group=""><0.01,><0.05)(figure>

Effaith Pseudomonas Sinensis ar gynhyrchu ROS

Ar ôl MPP plus anwytho, cynyddwyd cynhyrchiad ROS o niwronau dopaminergig yn sylweddol. a oedd yn sylweddol wahanol i un y grŵp rheoli arferol (P<0.01). after="" the="" action="" of="" the="" aqueous="" extract="" of="" fomitopsis="" pinicola,="" the="" ros="" increased="" after="" mpp+induction.="" the="" reduction="" of="" ros="" production="" in="" the="" 50="" and="" 25="" ug/ml="" dose="" groups="" was="" significantly="" different="" from="" the="" mpp+control="" group=""><0.01)(figure 6,="" figure="">

Ffigur 4. Delweddu staenio fflworoleuedd DAPI o niwronau DA yn y mesencephalic

Ffigur 5 Effaith echdyniad dŵr o Fomitopsis Pinicola ar MPP ynghyd â mitocondriaidd wedi'i achosi

potensial pilen niwronau DA mesencephalic

Nodyn: O'i gymharu â'r grŵp rheoli arferol, **P < {{0}}.01;="" o'i="" gymharu="" â="" grŵp="" rheoli="" mpp="" a="" mwy,="" #="" #="" p="">< 0.01,="" #="">

0.05.

Ffigur 6. Staeniad fflworoleuedd C-DCDHF-DA o niwronau DA yn y mesencephalic

Ffigur 7 effeithiau echdynion dŵr o Fomitopsis Pinicola ar MPP ynghyd â DA mesencephalic a achosir

cynhyrchu niwron ROS

Nodyn: o'i gymharu â'r grŵp rheoli arferol, **P < {{0}}.01;="" o'i="" gymharu="" â="" grŵp="" rheoli="" mpp="" a="" mwy,="" #="" #="" p=""><>

Casgliad

Mae dirywiad niwronau dopaminergig (niwronau DA) yn y midbrain yn cael ei golli a'r corff Lewy yn cytoplasm niwronau gweddilliol yw prif nodweddclefyd Parkinson.Mae'r symptomau clinigol yn bennaf yn cynnwys cryndod statig, bradykinesia, hypermyotonia, ansefydlogrwydd ystum, et al. Ar hyn o bryd, mae triniaethclefyd Parkinsonyn dal i gael ei ddominyddu gan therapi amnewid dopamin. Er y gall wella symptomau cleifion, nid yw'n atal datblygiad y clefyd. Bydd y cais hirdymor yn achosi llawer o adweithiau niweidiol [12], felly mae'n hanfodol astudio dulliau therapiwtig newydd. Mae astudiaethau wedi dangos bod straen ocsideiddiol a lefelau dopamin ocsidiedig yn achosion pwysig o ddifrod detholus o niwronau dopaminrgig [13], ac mae rhai gwrthocsidyddion naturiol fel quercetin, curcumin, polyphenols te, et al wedi'u cadarnhau i fod yn dopamin a achosir gan gyfryngau nerfol. Mae gan niwed niwronaidd effeithiau amddiffynnol amlwg [14-16], felly mae'n addawol sgrinio cyffuriau ar gyfer trinclefyd Parkinsono feddyginiaethau Tsieineaidd traddodiadol gydag effeithiau ffarmacolegol gwrthocsidiol.

Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd FRAP i ganfod cynhwysedd gwrthocsidiol echdynion dyfrllyd Fomitopsis Trolox Pinicola, gan ddefnyddio (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman)2-). canfuwyd bod asid carbocsilig) yn cael effeithiau gwrthocsidiol sylweddol. Effaith gwrthlidiol echdynion dyfrllyd a ganfuwyd yw dull rhyddhau NO microglia BV2 a achosir gan lipopolysaccharide a achosir gan lipopolysaccharide NO, ac nid oedd unrhyw effaith sylweddol ar hyfywedd celloedd mewn crynodiadau o dan 100 ug/ml, gan nodi ei fod mewn celloedd glial wedi gwrth- sylweddol. effeithiau llidiol ac nid ydynt yn cael unrhyw effaith sylweddol ar oroesiad celloedd.

Mae straen ocsideiddiol yn cyfeirio at yr anghydbwysedd rhwng cynhyrchu a dileu radicalau rhydd o ocsigen yn y corff. Mae'n ddigwyddiad cynnar yn y broses o ddirywiad niwronaidd-apoptosis. Mae astudiaethau wedi dangos bod meinwe'r ymennydd yn gyfoethog mewn ffosffolipidau ac asidau brasterog annirlawn, y ddau ohonynt yn agored i straen ocsideiddiol. Mewn cleifion âclefyd Parkinson, Malondialdehyde, y mynegai perocsidiad lipid, yn y striatum yn cynyddu'n sylweddol, tra bod y crynodiad o aml-annirlawn. gostyngodd asidau brasterog yn sylweddol [17], gostyngodd cynnwys glutathione (GSH), a nam ar swyddogaeth ensym cymhleth cadwyn anadlol mitocondriaidd I [18,19]. Mae MPP plus yn metabolyn o'r asiant niwrowenwynig MPTP yn y corff, a all gynhyrchu radicalau rhydd yn y corff, atal swyddogaeth mitocondriaidd, dinistrio niwronau DA yn y substantia nigra, a datblygu symptomau oclefyd Parkinsonmewn modelau anifeiliaid. Mae NO hefyd yn ymwneud â mecanwaith difrod MPP plus. Mae NO gormodol yn tryledu i niwronau DA, a all nitroseiddio â safle sulfhydryl yr ensym ac atal gweithgaredd ensym I cymhleth cadwyn anadlol mitocondriaidd [20,21].

Dangosodd canlyniadau'r astudiaeth hon, ar ôl MPP ynghyd â niwronau DA diwylliedig cynradd ysgogedig, fod y cnewyllyn yn dangos apoptosis amlwg, gostyngodd potensial pilen mitocondriaidd, a chynyddodd cynhyrchiant ROS yn sylweddol, gan nodi y gall MPP plus achosi apoptosis o niwronau DA trwy atal straen ocsideiddiol mitocondriaidd. Gall detholiad dyfrllyd o Fomitopsis Pinicola a wella morffoleg niwronau dopaminergig ar ôl MPP ynghyd â anwythiad, cynyddu potensial pilen mitocondriaidd, a lleihau cynhyrchiad ROS, gan nodi bod echdyniad dŵr o Fomitopsis Pinicola yn atal difrod niwronau DA midbrain a ddifrodwyd gan gyfryngau nerfol, a allai fod yn ymwneud â'i wrth-ocsidiad ac ataliad o gynhyrchu NO, ac amddiffyn niwronau trwy atal straen ocsideiddiol mitocondriaidd.

Cyfeiriadau

1. Khan AU, Akram M, Daniyal M, et al. Ymwybyddiaeth a gwybodaeth gyfredol o glefyd Parkinson: Anhwylder Niwro-ddirywiol. Int J Neurosci 2018, 8: 1-64.

2. Klingelhoefer L, Reichmann H. clefyd Parkinson fel anhwylder aml-system. J Neural Transm (Fienna) 2017, 124: 709-713.

3. Choi DH, Cristóvão AC, Guhathakurta S, et al. Mae straen ocsideiddiol cyfryngol NADPH oxidase 1-yn arwain at farwolaeth niwronau dopamin mewn clefyd Parkinson. Antioxid Redox Signal 2012, 16: 1033-1045.

4. Asaithambi A, Ay M, Jin H, et al. Mae ffosfforyleiddiad protein kinase D1 (PKD1) yn hyrwyddo goroesiad niwronaidd dopaminergig yn ystod 6- straen ocsideiddiol a achosir gan OHDA. PLoS Un, 2014, 9: e96947.

5. Berndt N, Bulik S, Holzhütter HG. Modelu Cinetig o Fetabolaeth Egni Mitocondriaidd Celloedd Niwronaidd: Effaith Gweithgareddau Dehydrogenase Llai - Ketoglutarad ar Gynhyrchu ATP a Chynhyrchu Rhywogaethau Ocsigen Adweithiol. Int J Cell Biol 2012, 2012: 757594.

6. Yan MH, Wang X, Zhu X. Diffygion mitochondrial a straen ocsideiddiol mewn clefyd Alzheimer a chlefyd Parkinson. Radic Biol Med Am Ddim 2013, 62: 90-101.

7. Guo C, Sul L, Chen X, Zhang D. Straen ocsideiddiol, difrod mitocondriaidd, a chlefydau niwroddirywiol. Neural Regen Res 2013, 8: 2003-2014.

8. Hao L, Sheng Z, Lu J, et al. Nodweddu a gweithgareddau gwrthocsidiol polysacaridau allgellog ac mewngellol o Fomitopsis Pinicola. Carbohyd Polym, 2016, 141: 54-59.

9. Shah F, Mali T, Lundell TK. Rhywogaethau Pydredd Brown Polyporales Fomitopsis Pinicola: Proffiliau Gweithgaredd Ensym, Cynhyrchu Asid Oxalig, a Fe3 plus -Reducing Metabolite Secretion.Apple Environ Microbiol, 2018, 84: e02662-17.

10. Guo SS, Wolf D. Astudiaeth ar effeithiau niwro-amddiffynnol echdyniad dŵr o Fomitopsis Pinicola ar niwronau dopaminergig in vitro. Chin J Pharmacovigil 2018, 15: 582-586.

11. Khaled Radad, Rudolf Moldzio, Wolf-Dieter Rausch. Mae Minocycline Gwenwyndra yn Amddiffyn Niwronau Dopaminergig yn Erbyn Rotenone Hirdymor. Can J Neurol Sci 2010, 37: 81-85.

12. Rizek P, Kumar N, Jog MS. Diweddariad ar ddiagnosis a thriniaeth clefyd Parkinson. MAJ 2016, 188: 1157-1165.

13. Crotty GF, Ascherio A, Schwarzschild MA. Targedu wrate i leihau straen ocsideiddiol mewn clefyd Parkinson. Exp Neurol 2017, 298: 210-224.

14. Ay M, Luo J, Langley M, et al. Mecanweithiau moleciwlaidd sy'n sail i effeithiau amddiffynnol cwercetin yn erbyn camweithrediad mitocondriaidd a niwroddirywiad dopaminergig cynyddol mewn meithriniad celloedd a modelau llygoden trawsenynnol MitoPark o Glefyd Parkinson. J Neurochem 2017, 141: 766-782.

15. Wang MS, Boddapati S, Emadi S, et al. Mae Curcumin yn lleihau sytowenwyndra a achosir gan alffa-synuclein ym model celloedd clefyd Parkinson. BMC Neurosci 2010, 11:57 .

16. Weinreb O, Amit T, Mandel S, et al. Mecanweithiau moleciwlaidd niwro-amddiffynnol o (-)-epigallocatechin-3-gallate: canlyniad adlewyrchol o'i briodweddau gwrthocsidiol, chelating haearn a niwritogenig. Genes Nutr 2009, 4: 283-296.

17. Dawson TM, Ko HS, Dawson VL. Modelau anifeiliaid genetig o glefyd Parkinson. Neuron 2010, 66:646-61.

18. Bodis-Wollner. Retinopathi mewn Clefyd Parkinson. J Neural Transm (Fienna) 2009, 116: 1493-1501.

19. Hisahara S, Shimohama S. Modelau anifeiliaid genetig a achosir gan docsin o glefyd Parkinson.Parkinson's Dis. 2010, 2011: 951709.

20. Yang S, Liu T, Li S, et al. Dadansoddiad proteomig cymharol o ymennydd llygod sy'n heneiddio'n naturiol. Niwrowyddoniaeth 2008, 154: 1107-1120.

21. Gautier CA, Corti O, Brice A. Camweithrediadau mitochondrial mewn clefyd Parkinson. Parch Neurol (Paris) 2014, 170:339-343.