Mae Cyfanswm Glycosidau Cistanche Deserticola yn Hyrwyddo Adferiad Gweithrediad Niwrolegol Trwy Gymell Adfywio Niwrofasgwlaidd
Mar 29, 2022
Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Fujiang Wang1, Ruiyan Li 2, Pengfei Tu1, Jianping Chen3, Kewu Zeng1* ac Yong Jiang1*
Cefndir:Adroddwyd bod y feddyginiaeth Tsieineaidd draddodiadol Cistanche deserticola yn ddilys ar gyfer clefydau cardiofasgwlaidd a serebro-fasgwlaidd. Fodd bynnag, nid yw ei gydrannau gweithredol ar gyfer amddiffyn strôc isgemig yn glir. Ein nod oedd archwilio cydrannau gweithredol C. deserticola yn erbyn strôc isgemig yn ogystal â'i fecanweithiau posibl.
Dulliau:Fe wnaethom ymchwilio i effeithiau amddiffyn yr ymennydd o ddarnau o C. deserticola, cyfanswm glycosidau (TGs), polysacaridau (PSs), ac oligosacaridau (OSs) mewn model llygod mawr o ail-lifiad-occlusion rhydweli yr ymennydd canol (MCAO/R). 2, 3, 5-Defnyddiwyd staenio triphenyl tetrazolium clorid (TTC) i asesu cyfaint cnawdnychiant yr ymennydd, a mabwysiadwyd assay Evansblue i asesu athreiddedd rhwystr gwaed-ymennydd (BBB). Yna, yr ymadroddion CD31, a-SMA, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, ZO-1, claudin-5, occludin, Keap-1, a Nrf{{13} }} eu dadansoddi gan ddefnyddio blotio gorllewinol neu imiwnofflworoleuedd, a dadansoddwyd y gweithgareddau MDA, SOD, CAT, a GSH-Px gan ddefnyddio citiau.
Canlyniadau:Gostyngodd triniaeth TGs sgoriau diffyg niwrolegol a chyfeintiau cnawdnychiant yn rhyfeddol, hyrwyddodd angiogenesis ac ailfodelu niwral, a chynhaliwyd uniondeb rhwystr gwaed-ymennydd yn effeithiol o'i gymharu â'r grŵp model. Ar ben hynny, gostyngodd TGs lefelau MDA yn sylweddol a mwy o weithgareddau gwrthocsidiol (SOD, CAT, a GSH-Px) yn yr ymennydd. Yn y cyfamser, roedd TGs wedi is-reoleiddio mynegiant Keep-1 yn rhyfeddol ac wedi hwyluso trawsleoli niwclear Nrf-2. I'r gwrthwyneb, ni welwyd unrhyw effeithiau amddiffynnol ar gyfer grwpiau PSs ac OSs.
Casgliad:TGs yw prif gydrannau gweithredol C. deserticola yn erbyn anaf i'r ymennydd a achosir gan MCAO/R, a cheir amddiffyniad yn bennaf drwy'r llwybr Nrf-2/Keap-1.
Geiriau allweddol:Cistanche deserticola,anaf yr ymennydd, cyfanswm glycosidau, polysacaridau, oligosacaridau, llwybr Nrf-2/Keap-1
cistanche amazon deserticola
RHAGARWEINIAD
Ystyrir bod strôc yn un o brif achosion marwolaeth ac anabledd yn y byd (Donnan et al., 2008). Mae bron i 87 y cant o'r holl achosion strôc yn cael eu sbarduno gan strôc isgemig (Ovbiagele a Nguyen-Huynh, 2011). Ar hyn o bryd, yr asiant mwyaf effeithiol a'r unig gyffur a gymeradwywyd gan FDA a ddefnyddir ar gyfer triniaeth strôc isgemig yw actifydd plasminogen meinwe ailgyfunol. Fodd bynnag, mae nifer fawr o gleifion strôc yn methu ag ymateb i'r cyffur hwn, oherwydd ei ffenestr amser therapiwtig gul a risg difrifol o gymhlethdodau hemorrhagic (Lee et al., 2012; Schellinger andKohrmann, 2014). Un o brif heriau triniaeth thrombolytig yw anaf isgemia/atlifiad (I/R), a ystyrir yn brif achos anaf i'r ymennydd a dinistrio swyddogaeth. Mae atgyfnerthiad ar ôl isgemia cerebral yn cynyddu'r risg o hemorrhage ar yr ymennydd tra'n arwain at anaf niwrofasgwlaidd a chynhyrchu rhywogaethau ocsigen gormodol adweithiol (ROS) sy'n niweidio'r rhwystr gwaed-ymennydd (Alluri et al., 2015). Mae nifer o astudiaethau wedi cadarnhau bod tarfu ar y BBB yn un o brif achosion y pathogenesis o strôc isgemig (Cao et al., 2016b).
Mae'r BBB yn cynnwys celloedd endothelaidd yn bennaf, pericytes, astrocytes, niwronau, a philenni islawr. Cydrannau craidd y BBB yw celloedd endothelaidd microfasgwlaidd yr ymennydd sy'n cael eu huno gan gyffyrdd tynn, gan gyfyngu ar foleciwlau alldarddol i'r ymennydd. Mae newidiadau patholegol cyffyrddau tynn - yn enwedig occludin, claudin-5, a zonulaoccludens-1 (ZO-1)—yn effeithio'n sylweddol ar weithrediad BBB yn ystod strôc isgemig, yn enwedig athreiddedd rhwystr (Liuet al., 2014 ; Hu et al., 2018; Liu et al., 2019). Yn ystod cyfnodau I/R, mae ROS gormodol yn un o'r prif ffactorau sy'n arwain at niwed uniongyrchol i niwronau'r ymennydd (Ding et al., 2014). Mae gorgynhyrchu ROS yn arwain at ddiraddio rhai cyffyrdd ac aflonyddwch BBB, sy'n arwain at moleciwlau alldarddol yn mynd i mewn i'r ymennydd trwy'r BBB, gan arwain at waethygu difrod ymennydd (Cheon et al., 2016; Zhang QY et al., 2017). Felly, mae amddiffyn y BBB gan wrth-ocsidyddion wedi'i ystyried yn ffordd bosibl o atal anaf atdlifiad.
Heblaw am ddadansoddiad y BBB, gall I/R arwain at anaf inneurofasgwlaidd a marwolaeth niwronaidd (Jung et al., 2010). Yn ystod strôc, gall mwy o farwolaethau celloedd niwronaidd ddeillio o straen ocsideiddiol (Chi et al., 2018), a nifer o astudiaethau wedi dangos bod ROS yn gwaethygu difrifoldeb strôc a niwed niwrolegol (Kondo et al., 1997; Crack et al., 2001; Crack et al., 2006). Er nad yw treialon clinigol wedi cael canlyniadau boddhaol, mae niwroamddiffyniad yn dal i fod yn strategaeth addawol ar gyfer trin strôc isgemig acíwt (Moretti et al., 2015). Felly, mae dod o hyd i gyffuriau niwroamddiffyn effeithiol i drin strôc o fudd i gleifion sy'n twyllo.
Mae meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol (TCM) yn cymryd camau i ymyrryd yn erbyn anghydbwysedd mewnol y corff (Gaire, 2018). Oherwydd pathogenesis cymhleth strôc isgemig, mae effaith aml-ffactoraidd TCM a'i gyfansoddion gweithredol yn chwarae rhan hanfodol wrth drin strôc. Mae Cistanche deserticola YC Ma, sy'n gyffredin mewn ardaloedd cras neu led-gras ledled Mongolia a Gogledd-orllewin Tsieina, wedi bod yn TCMherb a ddefnyddir yn eang ar gyfer trin afiechydon amrywiol megis anghofrwydd ac iselder ers dros 1,{3}} o flynyddoedd yn Tsieina. Dangosodd astudiaethau ffarmacolegol modern fod y darnau crai o C. dangosodd deserticola weithgareddau ffarmacolegol lluosog, megis gwella dysgu a swyddogaeth cof, niwroddiogelwch, gwella imiwnedd, gwrthocsidiol, gwrth-heneiddio, ac effeithiau antifatigue (Ko a Leung, 2007; Wang et al., 2012; Li et al., 2015). o C. deserticola yn dangos bod ei brif gyfansoddion yn cynnwys glycosidau ffenylethanoid, iridoidglycosidau, polysacaridau, ac oligosacaridau (Jiang a Tu, 2009). Fodd bynnag, nid yw cydrannau gweithredol C. deserticola ar gyfer amddiffyn yr ymennydd yn glir iawn.
Mae eiddo niwro-amddiffynnol C. deserticola yn awgrymu ei botensial therapiwtig mewn salwch sy'n gysylltiedig â gwybyddol megis strôc ac iselder, yn ogystal â chlefyd Alzheimer (Wang et al., 2017). Fodd bynnag, mae ymchwil ar effaith ymosodiadau C. deserticola, gan gynnwys ei gydrannau gweithredol a'i fecanweithiau gweithredu, yn gyfyngedig iawn. Yn y gwaith presennol, archwiliwyd effaith amddiffynnol tri detholiad o C. deserticola, cyfanswm glycosidau (TGs, glycosidau ffenylethanoid, a glycosidau eraill), polysacaridau (PSs), ac oligosacaridau (OSs) ar anafiadau cerebralI/R. Mae'n bosibl y bydd ein canfyddiadau'n cyfrannu at gymhwysiad clinigol cywir C. deserticola a darparu asiant ymgeisio therapi strôc fforisgemig.
Mae gan Cistanche tpotensial therapiwtigmewn salwch sy'n gysylltiedig â gwybyddol megis strôc ac iselder,yn ogystal â chlefyd Alzheimer.
DEUNYDDIAU A DULLIAU
Cemegau ac Adweithyddion
Prynwyd coesynnau Cistanche deserticola o Alashan, Inner Mongolia, a'u hadnabod gan un o'r awduron (P.-F. Tu). Paratowyd TGs, PSs, ac OSs yn unol â'n dull a adroddwyd yn flaenorol (Gao et al., 2015) . Perfformiwyd dadansoddiad meintiol o TGs gan gromatograffeg hylif perfformiad uchel (HPLC) fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Li et al, 2019), a dangosir eichromatogram yn Ffigur 1. Prif gydrannau TGs yw echinacoside, tubuloside A, acteoside, isoacteoside, a2'- asetylacteoside; eu cynnwys yw 163.05 mg / g, 4.125 mg / g, 41.66 mg / g, 22.655 mg / g, a 12.045 mg / g, yn y drefn honno. Mae cynnwys PSs ac OSs yn 69.42 y cant a 65.24 y cant, yn y drefn honno, wedi'u pennu gan HPLC a'r dadansoddiad ffenol-asid sylffwrig, yn y drefn honno (Zhang A. et al., 2018; Shi et al, 2019).
Prynwyd cyfeiriadau safonol echinacoside (A0282), tubulosideA (A0942), acteoside (A0280), isoacteoside (A0281), a 2'-acetylacteoside (A0943) gan Chengdu MustBiotechnology (Sichuan, Tsieina). Mae purdeb pob safon yn fwy na 98 y cant. Prynwyd citiau H&E staen Nissl gan Boster (Wuhan, China). Prynwyd Edaravone (T0407-1) o TargetMol (Shanghai, Tsieina). Prynwyd MAP gwrth-lygod mawr cwningen-2 (ab32454), Nrf-2(ab31163), PDGFRb (ab32570), Keap-1 (ab66620), a mouseanti-rat CD31 (ab24590) oddi wrth Abcam Inc (Caergrawnt, MA, UDA). Prynwyd cwningen gwrth-lygod mawr Claudin5 (BS1069), ZO-1 (BS9802M), ac Occludin (BS72035) gan Bioworld Technology (Nanjing, Tsieina). Cell SignalingTechnology Inc. (Boston, MA, UDA) oedd ffynhonnell y rabbitanti-rat Synapsin-1 (SYN,5297T), PSD95 (3450T), a-SmoothMuscle Actin (a-SMA,19245T). Prynwyd GAPDH (HRP-60004) oddi wrth Proteintech Group, Inc. (Chicago, UDA). Cyflenwyd gwrthgyrff eilaidd gan Zhongshan GoldenBridge Biotechnology (Beijing, Tsieina). Cafwyd Hoechst 33258 o Beyotime (Jiangsu, Tsieina).
FFIGUR 1|Cromatogramau HPLC y TGs (A) a chyfeiriadau safonol (B).
Anifeiliaid
Cafwyd llygod mawr Sprague-Dawley (gwryw, yn pwyso 250-300g) gan Vital River Laboratory Animal Technology (Beijing, Tsieina) a'u cadw mewn ystafell aerdymheru a gedwir ar gylchred golau / tywyll 12 h. Perfformiwyd yr holl arbrofion anifeiliaid yn unol â chanllawiau ymchwil anifeiliaid ARRIVE (Kilkenny et al., 2010; McGrath et al., 2010), a chymeradwywyd gan Bwyllgor Sefydliadol Gofal a Defnydd Anifeiliaid Canolfan Gwyddoniaeth Iechyd Prifysgol Peking (LA2019123).
Protocolau Arbrofol Anifeiliaid
Roedd y llygod mawr yn destun MCAO/R, fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Wang et al., 2018). Yn fyr, datgelwyd y rhydweli carotid cyffredin chwith (CCA), rhydweli carotid allanol (ECA), a charotidarteri mewnol (ICA), a mewnosodwyd monofilamentuture neilon 3-0 o'r ECA i'r ICA nes cyrraedd y rhydweli ymennydd canol. MCA). Ar ôl 1.5 h o achludiad MCA, efelychwyd atlifiad trwy dynnu'r ffilament. Yn ystod y llawdriniaeth, cadwyd tymheredd corff pob llygod mawr ar 37.0 gradd.
Gweinyddu Cyffuriau
Gwahanwyd y llygod mawr ar hap yn chwe grŵp gan ddefnyddio fersiwn SPSSsoftware 22.0 fel y disgrifiwyd (Jiang et al., 2014): normalgroup (NOR); grŵp model (MOD); grŵp edaavone (cyffur positif, 6 mL/kg, EDI); grŵp TG (280 mg/kg, TGs); Grŵp PSs (280 mg / kg, PSs), a grŵp OS (280 mg / kg, OSs). Gweinyddwyd TGs, PSs, ac OSs ig unwaith y dydd ar ôl MCAO/R am 14 diwrnod. Cafodd y grwpiau NOR a'r Weinyddiaeth Amddiffyn eu trin â salîn normal. Dangosir niferoedd yr anifeiliaid yn Nhabl 1.
TABL 1|Nifer yr anifeiliaid ar gyfer gwahanol grwpiau arbrofol a pharamedrau amrywiol yn 14 d ar ôl eu rhoi.
Mesur Pwysau a Sgoriau Diffyg Niwrolegol Addasedig (mNSS)
Cafodd pwysau corff ei fonitro ar y 14eg diwrnod gan ddefnyddio Graddfa Ddigidol anADVENTURE™ (OHAUS, New Jersey, UDA). Aseswyd yr ACF yn ôl y dull a ddisgrifiwyd gan FJ Wang (Wang et al., 2018), gyda mân ddiwygiadau.
2, 3, 5-Triphenyltetrasolium Clorid (TTC)Staining
Mesurwyd cyfaint cnawdnychiant fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Wanget al., 2015). Yn gryno, rhannwyd yr ymennydd yn saith bloc coronaidd â gofod cyfartal (2 mm). Cafodd yr adrannau hyn eu staenio â 2 y cant TTC (Coolaber, Beijing, Tsieina) ar 37 gradd am 15 munud. Infarctvolume ( y cant )=(cyfaint hemisffer isgemia ipsilateral - cyfaint hemisffer isgemia cyfochrog) / cyfaint hemisffer isgemia gwrthochrog × 100.
Nissl a H&E Staenio
Cafodd y llygod mawr eu hanestheteiddio'n ddwfn, ac yna tynnwyd yr ymennydd cyfan yn gyflym o'r benglog a'i osod gan ddefnyddio paraformaldehyd 4 y cant a'i fewnosod mewn cwyr paraffin, a'i dorri'n dafelli o drwch 7 µm. Roedd yr adrannau wedi'u staenio â Nissl a H&E. Yn yr astudiaeth hon, cafodd chwe maes 200 ×200 µm ar hap eu dal ym mhob sbesimen meinwe gyda microsgop golau. Cafodd nifer y cyrff Nissl ei gyfrif gyda fersiwn IPPsoftware 6.0 (Media Cybernetics, Bethesda, UDA).
Evans Assay Glas
Chwistrellwyd llygod mawr gyda 2 y cant EB (Coolaber Science & TechnologyCo., LTD) ar ôl MCAO/R. Ddwy awr yn ddiweddarach, cafodd y llygod mawr eu hanestheteiddio ac yna tynnwyd yr ymennydd cyfan yn gyflym a'i homogeneiddio mewn aseton. Dadansoddwyd y supernatants ar 620 nm gan ddarllenydd amsugnedd TS 800 (BioTek, UDA).
Mesur Gweithgareddau Catalase(CAT), Superoxide Dismutase (SOD), Malondialdehyde (MDA), a GlutathionePeroxidase (GSH-Px)
Cafodd yr holl samplau serwm eu centrifugio ar 4,000 × rpm am 15 munud at4 gradd ac yna eu dadansoddi i ganfod gweithgareddau MDA, CAT, SOD, a GSH-Px yn dilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr (Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd , Tsieina).
Dadansoddiad Blotio Gorllewinol
Cafodd meinweoedd yr ymennydd (100 mg) a gasglwyd o bob llygoden fawr eu homogeneiddio a'u gorchuddio mewn byffer lysis RIPA, ac yna eu dadansoddi i ganfod crynodiad yprotein gan ddefnyddio pecyn BCA (Beijing TransGenBiotech Co., Ltd.). Llwythwyd cyfanswm proteinau meinwe ar geliau SDS-PAGE 10 y cant a'u trosglwyddo i bilen nitrocellulose. Cafodd y bilen ei rwystro gan ddefnyddio llaeth sgim 5 y cant, yna deorwyd dros nos gyda gwrthgyrff cynradd ar 4 gradd . Yna cafodd y bilen ei deor â gwrthgorff eilaidd. Dadansoddwyd dadansoddiad blot gorllewinol gan ddefnyddio Kodak Digital Imaging System (5200 Multi, Tanon, China).
Dadansoddiad Immunofluorescent
Perfformiwyd staenio imiwnofflworoleuedd ar gyfer CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, Nrf-2, a Keap-1. Gwanhawyd gwrthgyrff cynradd yn erbyn Nrf-2, CD31, a-SMA, ZO-1, claudin5, occludin, PDGFRb, SYN, PSD95, MAP-2, a Keap{-1 i 1:200 ac 1:100, yn y drefn honno. Gwanhawyd gwrthgyrff eilaidd Alexa Flur 488 mouseanti-cwningen IgG ac IgG gafr gwrth-gwningen rhodamine (TRITC) i 1:200. Cafodd y cnewyllyn eu staenio gan Hoechst 33258. Cafodd delweddau eu dal gan ddefnyddio System Delweddu Patholeg Feintiol Awtomataidd Vectra® Polaris™ (PerkinElmer, UDA). Roedd y mynegiant protein yn cael ei ddadansoddi gan ddefnyddio fersiwn meddalwedd IPP 6.0.
Dadansoddiad Ystadegol
Disgrifiwyd yr holl ddata fel cymedrig ± SD. Fersiwn meddalwedd SPSS 22.0wedi'i berfformio ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Defnyddiwyd ANOVA un ffordd wrth gymharu gwahanol grwpiau. Ystyriwyd P < 0.05="" fel="" y="" gwahaniaeth="">
neuroprotection bodybuilding cistanche
CANLYNIADAU
TGs Cynyddu Pwysau Corff a Lleihau Niwed i'r Ymennydd mewn llygod mawr MCAO/R
Ar ôl 14 diwrnod o iachâd gyda TGs, PSs, Oss, ac EDI, gwerthuswyd pwysau'r corff, diffygion niwrolegol, a chyfeintiau cnawdnychiant llygod mawr I/R. Dangosodd y canlyniadau fod pwysau'r corff yn y MODgroup wedi gostwng yn sylweddol, tra bod y pwysau is mewn grwpiau TG, PS, ac EDI yn amlwg wedi cynyddu (Ffigur 2A). Gostyngwyd sgorau diffyg niwrolegol yn sylweddol gan EDIand TGs (Ffigur 2B). Roedd y sleisys ymennydd mewn llygod mawr grŵp NOR yn ddwfn goch ac nid oedd unrhyw gnawdnychiadau, tra bod llygod mawr y grŵp theMOD yn dangos cnawdnychiant ymennydd ipsilateral mawr. Ar ôl triniaeth TGs, gostyngwyd y cyfeintiau cnawdnychiant yn sylweddol (Ffigurau 2C, D). Ni ddangosodd y driniaeth PSs ac OS unrhyw effaith amlwg ar y mynegeion uchod. Dangosodd y data uchod y gallai TGsc liniaru'n sylweddol yr anaf i'r ymennydd a achosir gan I/R, ond ni allai PSsand OSs.
FFIGUR 2|Mae TGs yn lleihau'r niwed i'r ymennydd a achosir gan isgemia cerebral dros dro.
TGs Lleddfu Difrod Histopatholegol mewn Llygod Mawr MCAO/R
Er mwyn pennu rhai o effeithiau TGs, PSs, a thriniaeth OS ar iawndal histopatholegol, gwnaed staenio H&E i ddatgelu difrod patholegol. Trefnwyd strwythurau histomorffolegol yr ymennydd yn y grŵp NOR yn rheolaidd. Roedd y newidiadau morffoleg yn y grwpiau TG yn llai na'r rhai yn y grŵp MOD. Fodd bynnag, ni ddangosodd y grwpiau triniaeth PSs ac OSs unrhyw welliant sylweddol i'r newidiadau morffoleg (Ffigur 3).
Mae TG yn Gwanhau Anaf Niwronol ar ôl Llygod Mawr a Achosir gan I/R
Dangosodd staenio Nissl newidiadau histopatholegol niwronau ym mhenumbra'r ardal isgemig. Fel y dangosir yn Ffigur 4, roedd gan y niwronau normal niwclews clir a strwythur cyfan. Yn y MODgroup, roedd y niwronau wedi ehangu gofodau rhynggellog. Roedd y nisslbodies wedi diflannu, wedi crebachu ac wedi'u staenio'n ddwfn. Fodd bynnag, anaml y gwelwyd y newidiadau hyn yn y grwpiau EDI, TG, a PSs. Dangosodd y canlyniadau hyn y gallai TGs a PSs wanhau anaf niwronau a achosir gan isgemia/atlifiad yn sylweddol.
Mae TGs yn Gwanhau Amhariad BBB ar ôl Llygod Mawr wedi'u Trinio'n I/R
Mae assay glas Evans yn ddull clasurol ar gyfer ymchwilio i'r newid yn athreiddedd BBB. Roedd canlyniadau'r arbrawf yn dangos bod cynnydd mewn Evans blue i'w weld yn y grŵp MOD, tra bod Evans blue wedi gostwng yn sylweddol yn y TGs a'r llygod mawr a gafodd eu trin gan EDI. At hynny, nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol rhwng grwpiau therapi PSs ac OSs (Ffigur 5). Roedd y canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai TGs wanhau amhariad BBB yn sylweddol.
FFIGUR 3|Mae TGs yn lleddfu difrod histopatholegol mewn llygod mawr MCAO/R.
Mae TGs yn Hyrwyddo Angiogenesis mewn Llygod Mawr Anafedig I/R
Mae astudiaethau mwy diweddar yn dangos bod angiogenesis yn chwarae rhan hanfodol adferiad swyddogaethol niwrolegol a chanlyniad prognostig ar ôl strôc isgemig acíwt (Yuen et al., 2015). Er mwyn gwerthuso effeithiau TGs, PSs, ac OSs ar angiogenesis, defnyddiwyd y CD31 ac a-SMA i feintioli'r niferoedd capilari. Dangosodd cadw imiwnofflworoleuedd fod grŵp y Weinyddiaeth Amddiffyn wedi achosi gostyngiad rhyfeddol yn y mynegiadau CD31 (Ffigurau 6A, B) ac a-SMA (Ffigurau 6C, D) ym mhenumbra ardaloedd isgemig I/Rrats, o gymharu â llygod mawr arferol. Dangosodd y canlyniad hwn y gallai I/R achosi niwed fasgwlaidd yn hemisfferau isgemia penumbra cortecs. Fodd bynnag, cynyddodd y driniaeth TGs ac EDI ddwysedd capilari yn sylweddol, angiogenesis, ac arteriogenesis fel y nodir gan fynegiadau cynyddol o CD31 ac a-SMA. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai TGs hyrwyddo angiogenesis ym mhenumbra isgemig llygod mawr I/R, ond ni allai'r PSsand OSs.
TGs Cynyddu Mynegiant Proteinau Cyffyrdd Tyn mewn Llygod Mawr Anafedig I/R
Gall tarfu ar BBB gynyddu cynnwys dŵr yr ymennydd a chwyddo meinwe, gan arwain at anaf i'r ymennydd. Mae proteinau cyffordd dynn yn gydrannau strwythurol pwysig o'r BBB (Tenreiro et al., 2016; Jiang et al., 2018). Er mwyn profi a allai TGs, PSs, ac OSstreatment ar ôl strôc ddylanwadu ar gyfanrwydd BBB, perfformiwyd mynegiadau ZO-1, claudin-5, ac occludin trwy ddadansoddiad imiwnofflworoleuedd. Roedd y canlyniadau'n dangos bod y mynegiadau o claudin-5, occludin a ZO-1 wedi'u lleihau i'w gweld yn y grŵp MOD. Fodd bynnag, fe'u cynyddwyd yn sylweddol ar ôl 14 diwrnod o weinyddu TG. Ni ddangosodd PSs ac OSsgroups unrhyw newidiadau arwyddocaol yn y mynegiadau protein hyn (Ffigur 7). Roedd y data hyn yn dangos bod y TGs yn gallu rheoleiddio mynegiadau protein cyffordd tynn ac yn ôl pob tebyg yn cynnal cywirdeb BBB ar ôl anaf I/R.
TGs Cynyddu Cwmpas Pericyte ar Gapilarïau mewn Llygod Mawr Anafedig I/R
Mae sylw Pericyte ar gapilarïau yn chwarae rhan hanfodol wrth gynnal uniondeb BBB (Armulik et al., 2010; Daneman et al., 2010). Felly, gwnaethom brofi a ellid cynyddu cwmpas pericyte trwy driniaeth TGs, PSs, ac OSs. Dangosodd canlyniadau dadansoddi dwyster imiwnofflworoleuedd fod mynegiadau PDGFRb a CD31 wedi gostwng yn ddramatig yn y grŵp MOD. Fe wnaeth gweinyddu TGsto y llygod mawr I/R adfer yn sylweddol neu hyd yn oed gynyddu dwyster mynegiant y PDGFRb a CD31, ond gwelwyd gwahaniaeth nodi yn y grwpiau trin PSs ac OSs (Ffigur 8). Felly, gallai trin TGs gynyddu cwmpas pericyte yn sylweddol. Cadarnhaodd y canfyddiadau hyn ymhellach y gall TGs gynnal cyfanrwydd BBB ar ôl I/R.
Mae TGs yn Hyrwyddo Ailfodelu Niwral mewn Llygod Mawr wedi'u Anafu/Anafu
Yn ôl nifer o astudiaethau, gall niwrogenesis ar ôl strôc wella adferiad swyddogaethol yn sylweddol (Grefkes andWard, 2014; Zhang et al., 2019). Defnyddiwyd proteinau synaptophysin (SYN), dwysedd postsynaptig 95 (PSD-95), a phrotein sy'n gysylltiedig â microtiwbwl 2 (MAP-2) fel marcwyr i archwilio plastigrwydd niwronaidd ym mhenwmbra isgemig y cortecs. Er mwyn asesu effeithiau TGs, PSs, ac OSstreatment ar niwrogenesis mewn llygod mawr anafedig I/R, perfformiwyd yr immunofluorescence a blot gorllewinol ar gyfer mynegiadau SYN, PSD95, aMAP-2. Fel y dangosir yn Ffigurau 9 a 10, gostyngodd lefelau mynegiant SYN, PSD95, a MAP-2 yn I/Rrats ar ôl 14 diwrnod o atlifiad o gymharu â llygod mawr NOR, tra gallai gwellhad TGs a PSs reoleiddio eu lefelau mynegiant yn sylweddol . Nid oedd gan y grŵp OSs newid arwyddocaol o gymharu â grŵp y Weinyddiaeth Amddiffyn. Roedd y data'n nodi bod iachâd TGs a PSs yn gallu hyrwyddo ailfodelu niwral yn ddramatig ar ôl anaf I/R.
Mynegiadau TGs Alter Nrf-2 a Keap-1 yn I/R llygod mawr wedi'u hanafu
Mae straen ocsideiddiol yn brif fecanwaith pathogenig mewn anaf I/R (Ya et al., 2018; Yu et al., 2018). Cadarnhaodd yr astudiaethau fod Nrf-2 yn brif reoleiddiwr ymatebion gwrthocsidiol (Thompson et al., 2015). Er mwyn ymchwilio i ymatebion ocsideiddiol cyfryngol Nrf-2 a Keap-1 ar ôl anaf I/R, fe wnaethom werthuso mynegiant cytoplasmig yn ogystal â thrawsleoli niwclear Keap-1. Yn y cyfamser, mynegiant Nrf{{7 }} ym meinweoedd ymennydd llygod mawr a anafwyd gan I/R hefyd ei assay (Ffigurau 10 ac 11). Yn ôl y dadansoddiad immunofluorescence, canfuwyd bod Nrf-2 wedi'i leoli'n bennaf yn y cytoplasm yn y grŵp NOR. Yn y grŵp TGs, cafodd mynegiant Nrf-2 mewn lleoleiddio cytoplasmig ei is-reoleiddio, ond ei uwchreoleiddio yn y cnewyllyn, a gwelwyd mynegiant Keap-1 gostyngol hefyd. Dangosodd y data y gallai amddiffyniad ymennydd TGs fod yn gysylltiedig â modiwleiddio Nrf-2 a Keap-1.
FFIGUR 4|Mae TGs yn gwanhau anaf niwronaidd ar ôl llygod mawr a gafodd driniaeth I/R.
Mae TGs yn Gwanhau Straen Ocsidyddol Meinwe'r Ymennydd mewn Llygod Mawr wedi'u Anafu I/R
Er mwyn cadarnhau effeithiau gwrthocsidiol TGs, gwerthuswyd gweithgareddau SOD, CAT, GSH-Px, ac MDA mewn llygod mawr anafedig I / R. Yn Ffigur 12, cynyddwyd cynnwys MDA yn sylweddol yn y grŵp MOD, ac ar yr un pryd, gostyngwyd gweithgareddau SOD, CAT, a GSH-Px, o'u cymharu â'r llygod mawr arferol. I'r gwrthwyneb, arweiniodd triniaeth TG at ostyngiad sylweddol yng nghynnwys MDA a chynnydd yng ngweithgareddau SOD, CAT, a GSH-Px. Cadarnhaodd y canlyniadau hyn ymhellach weithgaredd gwrthocsidiol TGs.
TRAFODAETH
Mae llawer o astudiaethau'n awgrymu bod gan y TCM C. deserticola weithgareddau biolegol helaeth, ee gwella'r gallu i ddysgu, cof, ac imiwnedd (Dong et al., 2007; Jiang a Tu, 2009; Wanget al., 2017; Xia et al., 2018 ). Fodd bynnag, mae cydrannau gweithredol C. deserticola ar gyfer niwroamddiffyn yn parhau i fod yn aneglur. Nod y gwaith cyfredol yw sgrinio'r cydrannau gweithredol o C. deserticolaa yn erbyn strôc isgemig ar y model MCAO/R. Defnyddiwyd tri dyfyniad o C. deserticola (TGs, PSs, ac OSs) i werthuso eu heffeithiau ar lygod mawr MCAO/R, yn ogystal â mecanweithiau posibl.
Mae strôc yn glefyd serebro-fasgwlaidd acíwt cyffredin. Mae astudiaethau epidemiolegol yn dangos bod strôc yn fwy cyffredin mewn dynion nag mewn menywod (Sealy-Jefferson et al., 2012; Guzik a Bushnell, 2017). Felly, yn ein harbrawf, mabwysiadwyd llygod mawr gwrywaidd ar gyfer y profion. Profodd ein canlyniadau fod anwythiad I/R yn cyflymu straen ocsideiddiol a chyfaint cnawdnychiant, gan dorri'r BBB ac arwain at anafiadau i'r nerfau a serebro-fasgwlaidd. Ar ôl sgrinio, canfuwyd bod TGs yn lleihau cyfaint cnawdnychiant ac yn hyrwyddo ailfodelu niwral ac angiogenesis. Ar ben hynny, sylwyd bod TGs yn cynnal uniondeb BBB ar ôl anaf I/R. I'r gwrthwyneb, nid yw PSs acOSs yn lliniaru'n sylweddol anaf I/R. Felly, mae TGs yn ystyried y ffracsiwn gweithredol mawr o C. deserticola forneuroprotection, o bosibl trwy hyrwyddo ailfodelu niwral, angiogenesis, a chywirdeb BBB trwy actifadu'r llwybr Nrf-2/Keap{-1.
FFIGUR 5|Mae TGs yn lleihau aflonyddwch BBB ar ôl anaf I/R.
Mae tystiolaeth gynyddol yn dangos bod sefydlu cylchrediad cyfochrog effeithiol yn sylweddol bwysig er mwyn osgoi ffurfio cnawdnychiant ac isgemig penumbra, ac mae'n driniaeth hanfodol ar gam cynnar o strôc isgemig (ElAli, 2016; Iwasawa et al., 2016). Mae ymlediad celloedd endothelaidd fasgwlaidd a chelloedd cyhyrau llyfn cnawdnychiant ôl-isgemig yn pennu sefydlu cylchrediad cyfochrog. Fodd bynnag, mae gan y modelau isgemia ffenomen gyffredin - hynny yw, straen ocsideiddiol sy'n bodoli'n eang ym microfasgwlaidd yr ymennydd. Mae data astudiaeth wedi dangos y gall nifer fawr o wrthocsidyddion darfu ar swyddogaeth y BBB a phriodweddau angiogenesis (Mentor a Fisher, 2017). CD31 ac a-SMA yw marcwyr celloedd endothelaidd fasgwlaidd yn ogystal â chelloedd cyhyrau llyfn, yn y drefn honno (Saboor et al., 2016). Er mwyn ymchwilio i'r effaith ar yr ymlediad celloedd uchod o'r darnau o C.deserticola, archwiliwyd mynegiadau CD31 ac a-SMAin homogenad penumbra isgemia'r ymennydd. Dangosodd ein data fod TGs wedi gwella mynegiadau CD31 ac a-SMA yn drawiadol. Fodd bynnag, nid oedd unrhyw wahaniaethau arwyddocaol ar gyfer grwpiau PSs ac OSs. Felly, gwnaethom ddidynnu y gallai TGs leihau niwed i'r ymennydd trwy hyrwyddo angiogenesis trwy gynyddu ymadroddion CD31 ac a-SMA, tra nad oedd PSs ac OSs yn darparu unrhyw amddiffyniad o'r fath rhag niwed i'r ymennydd. Cadarnhaodd y canlyniadau hyn ymhellach mai dim ond TG a allai atal anaf I/R yr ymennydd.
Gellir meddwl am strôc isgemig fel canlyniad cerebralischemia a achosir gan nam ar blastigrwydd niwronaidd neu ailfodelu ardaloedd yr ymennydd. Mae mwyafrif y cleifion strôc yn dioddef o ddiffygion niwrolegol. Mae ysgogi niwrogenesis yn strategaeth addawol i gleifion strôc wella eu swyddogaethau niwrolegol (Cramer a Chopp, 2000). Mae niwrogenesis yn cymryd rhan yn uniongyrchol mewn adferiad swyddogaeth niwrolegol ar ôl I/Rinjury yr ymennydd (Zhang et al., 2019). Mae ymchwil flaenorol yn dangos y gall TGs wella cyfradd goroesi celloedd pyramidaidd hippocampal a chymell niwrogenesis (Lian et al., 2017). Mae straen ocsideiddiol yn achosi colli niwronau yn ystod llawer o afiechydon, fel Parkinson, strôc, ac yn y blaen (Duan a Si, 2019; Singh et al., 2019). Mae Nrf{5}}yn trawsgrifio llawer o enynnau sy'n gysylltiedig â niwro-amddiffyniad yn eu rhanbarth hyrwyddwr, yn bennaf gan gynnwys SOD, MDA, CAT, a g glutamyl cysteine ligases, ac ati (Satoh et al., 2006). Gellir ystyried proteinau SYN, PSD-95, a MAP-2, sydd â chysylltiad agos â ffurfiant synaptig a niwrodrosglwyddiad, fel marcwyr ymchwil plastigrwydd niwronaidd yn y rhanbarth penumbra isgemig. Ar ôl astudio, canfuom fod y gwellhad gyda Gallai TGs gynyddu mynegiadau PSD95, SYN, a MAP-2 yn sylweddol, gan ddangos bod amddiffyniad ymenyddol TG yn cydberthyn â'r plastigrwydd niwronaidd uwch yn ystod I/R. Fodd bynnag, mae'n drueni nad oes gwahaniaeth amlwg i PSsas hefyd fel grwpiau OS. Dangosodd y canlyniadau hyn y gallai TGs wella niwroplastigedd ar ôl anaf I/R yr ymennydd.
Dangosodd ymchwil delweddu i gleifion strôc y gellir ystyried diffyg gweithrediad BBB fel nodwedd drawiadol o'r ymennydd peri isgemia (Bang et al., 2007). Mae'r TJs, sy'n cynnwys proteinau cytoplasmig, proteinau trawsbilen, a moleciwlau adlyniad cyffordd rhwng celloedd endothelaidd capilari, yn bwysig iawn wrth gynnal cyfanrwydd BBB (Ye et al., 2019). Yn eu plith, ZO-1, claudin-5, ac occludin yw'r proteinau pwysicaf mewn TJs. Mae tystiolaeth gynyddol yn dangos bod athreiddedd cynyddol BBB a achosir gan isgemia yn gyffredinol yn cyfateb i newidiadau ZO-1, claudin-5, ac occludin (Cao et al.,2016a; Page et al., 2016; Yu et al. ., 2017; Liu et al., 2018). Yn y gwaith hwn, dangosodd y canlyniadau, er y gallai TGs gynyddu mynegiadau proteinau ZO{-1, claudin-5, andoccludin ym meinweoedd yr ymennydd a achosir gan MCAO yn sylweddol, na wnaeth PSsnor OSs ychwaith. Mae'r BBB yn cynnwys celloedd endothelaidd yr ymennydd ac mae ganddo gysylltiad agos â phericytau (Nyul-Toth et al., 2016). Mae pericytau yn hanfodol i gyfanrwydd BBB (Bell et al., 2010). Mae strôc isgemig yn sbarduno marwolaeth pericytes a datodiad o gelloedd ymennydd endothelaidd yn y cyfnod acíwt, gan ansefydlogi'r microfasgwleiddiad a newid priodweddau BBB (Zechariahet al., 2013). Dangosodd ein data y gallai TGs gynyddu cwmpas pericyte ar gapilarïau a chynyddu lefelau mynegiant ZO-1, claudin-5, ac occludin. Roedd y ffenomenau hyn yn profi y gallai TGs ddiogelu uniondeb BBB ar ôl anaf I/R yr ymennydd yn effeithiol. I grynhoi, gall TGs wanhau anaf i'r ymennydd mewn sawl ffordd, megis hyrwyddo angiogenesis, gwella plastigrwydd niwronaidd, a chynnal cyfanrwydd y BBB.
Yna fe wnaethom ymchwilio i'r llwybr signalau i archwilio'r themâu sy'n sail i amddiffyniad ymennydd TG. Mae'r broses o anaf I / R yn aml-ffactor, ac felly mae nifer o fecanweithiau yn gysylltiedig â'r pathogenesis. Mae straen ocsideiddiol yn ffactor risg sylfaenol sy'n cyfrannu at anaf i'r ymennydd a achosir gan I/R (Suda et al., 2013), megis difrod strwythur BBB, camweithrediad endothelaidd fasgwlaidd, a gwaethygu anaf niwronol isgemig (Xiong et al., 2015; Caglayan et al. al., 2019; Priestley et al., 2019). Felly, mae straen ocsideiddiol wedi dod yn darged therapiwtig deniadol mewn anaf i'r ymennydd a achosir gan I/R. cael ei ystyried yn ffordd bwysig i niwronau amddiffyn eu hunain rhag straen ocsideiddiol (Suzukiand Yamamoto, 2015; Ya et al., 2018). Mae tystiolaeth gynyddol yn dangos bod actifadu Nrf-2 yn ystod I/R yn darged therapiwtig posibl ar gyfer niwroamddiffyniad (Ding et al., 2015; Zhang R. et al., 2017). Mae Nrf-2, fel rheolydd amddiffyn gwrthocsidiol mewndarddol pwysig, yn cyfryngu lefel yr heme oxygenase 1 (HO{2013) ac ensymau gwrthocsidiol eraill, megis NAD(P)H quinone oxidoreductase1 (NQO1), SOD, CAT, GSH, ac MDA (Siow et al., 2007; Dinget al., 2014). Ar ben hynny, mae Nrf-2 yn chwarae rhan reoleiddio bwysig mewn angiogenesis. Mae'r astudiaeth bresennol yn dangos y gall Nrf-2 wella a gweithredu'n sylweddol yn y broses o ddatblygiad fasgwlaidd (Wei et al., 2013).
Fel y disgrifiwyd yn flaenorol (Jiang a Tu, 2009), mae TGs yn cynnwys llawer o gyfansoddion bioactif, er enghraifft, echinacoside, tubuloside A, acteoside, isoacteoside, a 2'-acetylacteoside, a dangosodd rhai ohonynt swyddogaethau niwro-amddiffynnol ar ôl anaf I/R cerebral (Penget al). ., 2016). Mae gan Echinacoside lawer o effeithiau ffarmacolegol, megis asantioxidation, gwrth-senescence, neuroprotection, gwrth-llid, hyrwyddo cicatrization, hepatoprotection, hyrwyddo ffurfiant esgyrn, a gweithgareddau gwrth-tiwmor (Yu et al., 2016; Li et al., 2018; Zhang Y. et al., 2018; Ji et al., 2019; Xu et al., 2019). Yn ddiweddar, mae echinacoside wedi'i nodi fel gwrthocsidydd cryf yn y system nerfol ganolog (Lu et al., 2016). Gall Echinacoside leihau cynnwys MDA a gwella gweithgareddau SOD a GSH Px mewn anaf i'r ymennydd isgemia, a dangosodd dadansoddiad tocio moleciwlaidd y gallai echinacoside rwymo i Keap-1, gan arwain at drawsleoli niwclear Nrf-2 (Li et al. , 2018). Dangosodd yr astudiaeth o Xia y gallai acteoside leihau cyfaint cnawdnychiant a chynnwys dŵr yr ymennydd i wella diffygion niwrolegol mewn llygod mawr MCAO/R trwy liniaru straen ocsideiddiol (Xia et al., 2018). Mae astudiaethau eraill wedi dangos y gallai isoacteoside gynyddu gweithgareddau ensymau gwrthocsidiol cellog, SOD, a CAT mewn celloedd H2O a driniwyd gan V{79-4 (Chae et al., 2005). Yn seiliedig ar yr adroddiadau uchod o'r cyfansoddion gweithredol sydd wedi'u cynnwys mewn TGs, mae'n bosibl canfod y gallai TGs amddiffyn rhag strôc isgemig trwy lwybrau gwrthocsidiad.
Adroddodd Li ar effeithiau niwro-amddiffynnol ffenylethanoidglycosidau (PhGs) ar apoptosis a achosir gan H2O ar gelloedd PC12 trwy lwybr theNrf2/ARE (Li et al., 2018). Cafodd y PhGs hyn eu hatal yn sylweddol gan sbarduno trawsleoli niwclear Nrf2 a mynegiadau cynyddol o HO-1, NQO1, is-uned catalytig glutamad-cysteine ligase (GCLC), ac is-uned addaswyr ligas glwtamad-cystein (GCLM) (Li et al., 2018; Gong et al., 2018; al., 2019). Felly, mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu bod y llwybr Nrf-2/ARE yn chwarae rhan hanfodol mewn effeithiau amddiffynnol wedi'u cyfryngu gan PhGs ar gelloedd niwronaidd. Yn yr un modd, yn yr astudiaeth hon, canfuwyd y gallai TGs ostwng lefel MDA a chynyddu lefelau SOD, CAT, a GSH-Px yn y llygod mawr I/R. Yn y cyfamser, gallai TGs ddadreoleiddio mynegiad Nrf2 yn y niwclews, is-reoleiddio'r mynegiad cyfatebol yn y cytoplasm, a lleihau'r mynegiant Keap-1 yn sylweddol. Byddai'r llwybr hwn yn cael ei ddilysu ymhellach yn y dyfodol mewn meithriniad celloedd in vitro gyda modelau anafu ocsigen-glwcos-amddifadedd/ailocsigeniad. Ar ben hynny, mae C. cafodd detholiadau deserticola eu gweinyddu yn ein hastudiaeth am 14 diwrnod yn barhaus. Gan y byddai niwrogenesis oedolion yn effeithio ar ddehongliad effeithiau niwro-amddiffynnol yn ystod 14 diwrnod o atlifiad, ni ellir eithrio niwrogenesis yn ein cynllun arbrofi cyfredol wrth archwilio effaith niwro-amddiffynnol CTs. Dyma gyfyngiad ein hymchwil.
I gloi, y TGs o C. deserticola all wella angiogenesis a niwrogenesis yn ogystal â chynnal cyfanrwydd y BBB mewn llygod mawr ag anafiadau I/R, ond nid y PSs a'r OSs. Gallai'r effeithiau gael eu cyfryngu trwy actifadu'r llwybr Nrf-2/Keap-1.
