Mae Echinacoside yn Gwella Anafiadau Diabetig i'r Afu
Mar 28, 2022
Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Luo Yang, Xiang Zhang, Min Liao, Yarong Hao *
ABSENOLDEB
Nodau:Mae Echinacoside (ECH) yn gyfansoddyn naturiol wedi'i dynnu o goesyn planhigyn Cistanche deserticola, mae ganddo briodweddau biolegol sylweddol, gan gynnwys eiddo gwrthocsidiol, gwrthlidiol, niwro-amddiffynnol, gwrth-tiwmor, hepatoprotective, ac imiwnofodwleiddio. Yn yr astudiaeth hon, ein nod oedd archwilio effeithiau a mecanweithiau amddiffynnol ECH ar anaf diabetig i'r afu mewn llygod DB/DB.
Prif ddulliau:Yn gyffredinol, dyrannwyd 6-llygod DB/DB wythnos oed (n=20) ar hap i 2 grŵp: grŵp model diabetig (grŵp DB/DB, gweinyddu hallt normal mewngastrig, n=10) ) a grŵp wedi'i drin ECH (DB/DB ac ECH grŵp, n=10). Yn ogystal, roedd y grŵp rheoli arferol yn cynnwys 6-llygod db/m wythnos oed (grŵp db/m, gweinyddiaeth fewngastrig halwynog arferol, n=10). Rhoddwyd ECH unwaith y dydd am 10 wythnos. Roedd pwysau a glwcos gwaed ymprydio (FBG) yn cael ei fesur bob pythefnos. Defnyddiwyd staen AU a staenio Olew O i werthuso newidiadau patholegol meinwe'r afu a chroniad lipid yn y drefn honno. Defnyddiwyd staenio imiwnofflworoleuedd, blot Gorllewinol, a dadansoddiad RT-PCR i ganfod mynegiant cydrannau echel signal AMPK/SIRT1.
Canfyddiadau allweddol:Dangosodd y canlyniadau y gallai rhoi echinacoside am 10 wythnos wella'n sylweddol anaf i'r afu ac ymwrthedd i inswlin mewn llygod DB/DB (p < 0.01).="" hefyd,="" helpodd="" triniaeth="" echinacoside="" i="" leihau="" lipidau="" gwaed="" a="" glwcos="" gwaed="" (p=""><0.01). ar="" ben="" hynny,="" signalau="" ampk/sirt1="" wedi'i="" actifadu="" gan="" ech,="" cyd-ysgogydd="" gama="" derbynnydd="" ymledol="" peroxisome="" wedi'i="" uwchreoleiddio="" 1="" alpha="" (pgc{="" {9}}="" ),="" derbynnydd="" a="" weithredir="" gan="" amlhau="" (ppar="" ),="" carnitin="" palmitoyltransferase-1a="" (cpt1a)="" mewn="" llygod="" db/db="" (p=""><>
Arwyddocâd:Gall effaith ECH gael ei hysgogi gan actifadu llwybr AMPK/SIRT1 yr afu a'i ffactorau i lawr yr afon i wella adiposity, ymwrthedd i inswlin, a dyslipidemia.
cistanche reddityn gwellaadiposity, ymwrthedd i inswlin, a dyslipidemia.
1. Rhagymadrodd
Mae diabetes mellitus math 2 (T2DM) yn glefyd metabolig cronig ac yn fygythiad difrifol i iechyd corfforol a meddyliol pobl. Gall achosi difrod organau lluosog, gan gynnwys anaf i'r afu. Clefyd yr afu brasterog di-alcohol (NAFLD) yw'r anaf mwyaf cyffredin i'r afu [1,2]. Mae cronni gormodol o lipidau mewn hepatocytes yn amharu ar y broses metabolig ac yn achosi llid, ffibrosis yr afu, a hyd yn oed canser yr afu [3,4]. Mae pathogenesis y clefyd yn parhau i fod yn aneglur. Er bod nifer fawr o achosion o gymhlethdodau iau sy'n arwyddocaol yn glinigol mewn cleifion â T2DM, maent yn aml yn cael eu hanwybyddu yn y lleoliad triniaeth. Mae'r cyfryngau a ddefnyddir ar hyn o bryd ar gyfer trin diabetes yn cynnwys atalyddion metformin, sulfonylureas, thiazolidinedione (TZDs), ac atalyddion dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4). Fodd bynnag, mae'r rhan fwyaf o'r asiantau hyn yn achosi camweithrediad yr afu ac nid ydynt yn cael eu hargymell mewn cleifion ag annigonolrwydd yr afu, gan awgrymu bod angen ymchwilio i asiantau ag effeithlonrwydd therapiwtig a phroffil digwyddiad andwyol isel. Mae astudiaethau wedi dangos priodweddau gwrthocsidiol, gwrthlidiol, gwrth-tiwmor, hepatoprotective, a immunomodulatory echinacoside (ECH), prif gydran Cistanche deserticola [5]. Ar ben hynny, mae'r llwybr kinase protein-activated AMP (AMPK) wedi'i gydnabod fel y prif switsh metaboledd ynni cellog sy'n gysylltiedig â rheoleiddio lipid yn yr afu a tharged therapiwtig ar gyfer NAFLD. Mae AMPK yn gwella gweithgaredd proteinau rheoleiddio tawelu mamaliaid-1(SIRT1) trwy gynyddu lefelau NAD plws cellog, gan arwain at ddadacetyledu a modiwleiddio gweithgaredd targedau SIRT1 i lawr yr afon sy'n cynnwys y cydweithredydd derbynnydd 1 sy'n cael ei ysgogi gan amlhau perocsisome (PGC{). {20}} ) [6]. Oherwydd llawer o swyddogaethau cadarnhaol mewn clefyd yr afu brasterog alcoholig (AFLD) a NAFLD, mae SIRT1 wedi'i astudio'n eang ymhlith y teulu SIRT. Mae'r protein yn rheolydd allweddol o metaboledd lipid a glwcos a gall wella sensitifrwydd inswlin yr afu a meinweoedd eraill a lleihau steatosis hepatig [7]. Mae PPAR- yn perthyn i'r PPARs, is-deulu o dderbynyddion hormonau niwclear, mae PPAR- yn gwella metaboledd lipid trwy beta-ocsidiad asid brasterog mitocondriaidd a peroxidase, wedi'i gyfryngu trwy CPT1A. Mae llygod Db/DB yn llygod diabetig math 2 gordew digymell. Wrth i'r llygod hyn dyfu'n hŷn, efallai y bydd amlygiad graddol o gyflyrau diabetig fel bwlimia, gordewdra, hyperglycemia amlwg, hyperlipidemia, ac ymwrthedd i inswlin [8]. Mae'r pathogenesis yn debyg i'r hyn a welwyd mewn cleifion â T2DM. Roedd yr astudiaeth hon yn rhagdybio effaith therapiwtig ECH ar anaf i'r afu a achosir gan T2DM a chyfryngu'r effaith hon trwy actifadu llwybr AMPK/SIRT1 a'i effeithiau i lawr yr afon. Defnyddiwyd y llygod DB/DB fel model anaf i'r afu T2DM, a gweinyddwyd ECH yn fewn-gastratig.
2. Deunyddiau a dulliau
2.1. Anifeiliaid arbrofol
Ystyriwyd iau llygod DB/DB diabetig math 2 fel y model ar gyfer anaf i'r afu T2DM yn ddigymell, defnyddiwyd llygod db/m fel y grŵp rheoli, a defnyddiwyd llygod db/db diabetig fel y grŵp model a grŵp a gafodd ei drin ag ECH (gwrywaidd). , 6 wythnos oed, gradd SPF) gyda 10 llygod ym mhob grŵp. Prynwyd pob llygod o Brifysgol Nanjing (Sefydliad Biofeddygaeth Nanjing, Tsieina; Rhif Tystysgrif Cynhyrchu anifeiliaid: SCKK (Su) 2015-0001). Cafodd yr anifeiliaid (n=5 y cawell) eu cartrefu yn Ystafell Anifeiliaid Labordy Canolog Ysbyty Renmin ym Mhrifysgol Wuhan (SPF) o dan amodau tymheredd safonol (22 ◦C ± 2 ◦C), lleithder cymharol (60 y cant) , a chylchred golau/tywyll (12 h/12 h), gyda mynediad ad libitum at ddŵr yfed a bwyd anifeiliaid yn ystod y cyfnod arbrofol o 10 wythnos. Perfformiwyd yr arbrofion yn unol â'r canllawiau moeseg anifeiliaid arbrofol a argymhellir gan Ysbyty Renmin ym Mhrifysgol Wuhan.
2.2. Prif offerynnau ac adweithyddion
Mesurydd glwcos gwaed OneTouch Ultra a stribedi prawf glwcos yn y gwaed (LifeScan Inc., Johnson & Johnson); gwrthgorff monoclonaidd gwrth-ddynol cwningen SIRT-1 (#9475; CST Company of the United States); AMPK (Ab80039), p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934), a GAPDH (Ab37168; i gyd gan Abcam Company); CPT1A (15184-1-AP; Wuhan Sanying Biotechnology Co., Ltd); Pecyn canfod crynodiad protein BCA (Biyuntian Biotechnology Co, Ltd.); Pecyn paratoi gel SDS-PAGE (Google Biotechnology Co, Ltd.); a defnyddiwyd pecyn trawsgrifio cefn RT-PCR (Takara, Japan) ar gyfer yr arbrofion.
2.3. Grwpio a gweinyddu anifeiliaid
Cyn dechrau'r arbrawf, {{0}}cafodd llygod wythnos oed eu rhoi mewn cwarantîn am 1 wythnos a'u bwydo'n addasol am 1 wythnos. Cafodd llygod Db/DB eu rhifo ar hap a'u dyrannu naill ai i'r grŵp model diabetig (grŵp db/db, n=10) neu grŵp wedi'i drin ag echinacoside (db/db ynghyd â grŵp ECH, n =10), a Dyrannwyd llygod 10 db/m i'r grŵp rheoli arferol (grŵp DB/ m, n=10). Yn 8 wythnos oed, gweinyddwyd hallt arferol y grŵp model rheoli a diabetig arferol (0.05 mL / 10 g), a rhoddwyd 300 mg/kg/d ECH yn fewngastr i'r llygod grŵp a gafodd eu trin gan ECH. Yn ystod y cyfnod hwn, cafodd y llygod fynediad ad libitum i fwyd a dŵr am 10 wythnos.
2.4. Cyflwr cyffredinol a glwcos gwaed ymprydio
Gwelwyd cyflyrau iechyd, cymeriant bwyd a dŵr yfed, a sgleinrwydd y gôt yn ystod yr arbrawf. Gan ddechrau o wythnos gyntaf yr arbrawf, roedd pwysau corff llygod yn cael ei fesur bob pythefnos. Cafwyd samplau gwaed i brofi am glwcos gwaed ymprydio o wythïen y gynffon. Ar ôl yr 10-wythnos o driniaeth ECH, cynhaliwyd y prawf goddefgarwch glwcos trwy'r geg (OGTT). Ar ôl ymprydio dros nos, rhoddwyd glwcos (pwysau corff 2 g/kg) i'r llygod, ac aseswyd crynodiadau glwcos yn y gwaed o'r blaen (0 mun.) a 15, 30, 60, a 120 munud ar ôl gweinyddu glwcos. Penderfynwyd ar yr ardal o dan y gromlin (AUC) gan ddefnyddio GraphPad Prism 7.0.
2.5. Casgliad sampl
Ar ôl 10 wythnos o ymyrraeth, ataliwyd bwyd ond nid dŵr am 12 h, anestheteiddiwyd yr anifeiliaid i gael samplau gwaed o'r plexws retro-orbital. Cafodd serwm o'r gwaed a gasglwyd ei wahanu'n gyflym a'i storio ar − 80 ◦C ar gyfer pennu'r mynegai biocemegol. Ar ôl cael samplau gwaed, lladdwyd llygod a'u darlifo â halwynog arferol. Roedd yr iau yn cael ei rannu a'i bwyso. Cyfrifwyd mynegai afu (LI) gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol: LI=[pwysau'r afu (g)/pwysau'r corff (g)] × 100 y cant . Cadwyd rhan o feinwe ffres yr afu ar gyfer dadansoddiad patholegol, a gosodwyd gweddill meinwe'r afu mewn nitrogen hylifol am 1 h ac yna'i storio ar -80 ◦C ar gyfer canfod protein dilynol ac adwaith cadwyn polymeras amser real meintiol ( PCR).
profiad cistanchedyfyniad
2.6. Archwiliad histopatholegol o'r afu
Gwahanwyd meinwe'r afu ffres yn gyflym, a gosodwyd adran mewn paraformaldehyd 4 y cant am 24 awr, ac yna dadhydradu ac ymgorffori mewn paraffin. Cafodd y darnau eu gwyro â sylene a'u hailhydradu trwy ethanol graddiant i ddŵr. Cafodd y cnewyllyn a'r cytoplasm eu staenio â hematocsilin ac eosin (AU) a'u selio â gwm niwtral ar ôl dadhydradu. Roedd rhan arall o'r meinwe yn defnyddio sleisys mewnosodedig cyfansawdd tymheredd torri gorau posibl (OTC) ar gyfer staenio Olew Red-O.
2.7. Canfod mynegeion biocemegol o serwm a meinwe'r afu
Anfonwyd samplau serwm i Adran Labordy Ysbyty Renmin ym Mhrifysgol Wuhan ar gyfer dadansoddiad biocemegol awtomataidd. Roedd y mynegeion lipid gwaed yn cynnwys triglyserid (TG), cyfanswm colesterol (TC), colesterol lipoprotein dwysedd uchel (HDL-C), colesterol lipoprotein dwysedd isel (LDL-C). Roedd mynegeion swyddogaeth yr afu yn cynnwys transaminase pyruvic glutamig (ALT) a transaminase ocsaloacetig glutamig (AST). Penderfynwyd ar lefelau inswlin ymprydio (FINS) gan ddefnyddio pecyn ELISA (Meimian Biological Inc. China). Adeiladwyd cromlin safonol yn seiliedig ar grynodiad a dwysedd optegol y sampl safonol (OD); yna cyfrifwyd crynodiad y sampl o'r gromlin safonol. Yn olaf, cyfrifwyd mynegai sensitifrwydd inswlin (ISI) a mynegai ymwrthedd inswlin (HOMA-IR) fel a ganlyn: ISI=1/(FPG × FINS); HOMA-IR=FPG × FINS/22.5.
2.8. Canfuwyd mynegiadau AMPK, p-AMPK, SIRT-1, PGC-1 , PPAR- , a CPT1A ym meinwe'r afu gan ddefnyddio blot gorllewinol
Cafodd meinwe'r iau wedi'i rewi ei dorri'n ddarnau. Ar gyfer echdynnu protein yn gyfan gwbl, ychwanegwyd 1 ml lysate RIPA at adran 50 g a'i gyflwyno i centrifugation ar 13,000 rpm ar 4 ◦C am 5 munud, wedi'i ddilyn gan gasgliad o supernatant. Penderfynwyd ar y crynodiad protein gan ddefnyddio pecyn pennu crynodiad protein BCA. Samplwyd tua 40 ug o brotein o bob grŵp a'i drosglwyddo i'r bilen fflworid polyvinylidene (PVDF). Cafodd pilenni eu labelu gyda'r gwrthgyrff eilaidd a nodwyd ar dymheredd ystafell am 1 h a'u datblygu. Dadansoddwyd gwerthoedd llwyd pob band protein, a defnyddiwyd GAPDH fel cyfeiriad mewnol ar gyfer dadansoddiad lled-feintiol.
2.9. Canfuwyd mynegiadau p-AMPK a SIRT1 ym meinwe'r afu gan staenio immunofluorescence
Roedd meinweoedd yr afu wedi'u gosod mewn paraformaldehyd 4 y cant, wedi'u hymgorffori mewn paraffin, ac yna'n cael eu rhannu'n 10-μm sleisys afu trwchus. Ychwanegu 3 y cant BSA am 30 munud. Deor sleidiau gyda gwrthgorff cynradd dros nos ar 4 ◦C. Gorchuddiwch feinwe gwrthrychol gyda gwrthgorff eilaidd, deorwch ar dymheredd ystafell am 50 munud mewn cyflwr tywyll. Yna deorwch gyda hydoddiant DAPI ar dymheredd ystafell am 10 munud, a'i gadw mewn lle tywyll. Ychwanegu adweithydd diffodd fflworoleuedd digymell i ddeor am 5 munud. Darganfod microsgopeg a chasglu delweddau trwy Ficrosgopeg Fflwroleuol.
2.10. Canfuwyd mynegiadau mRNA SIRT-1, PGC-1 , PPAR- , a CPT1A mRNA ym meinwe'r afu gan RT-PCR
Defnyddiwyd tua 100 mg o feinwe'r afu a storiwyd ar − 80 ◦C o bob grŵp. Echdynnwyd cyfanswm RNA gan ddefnyddio'r pecyn Trizol; defnyddiwyd y dull amsugno uwchfioled (UV) i bennu ansawdd yr RNA, ac yna cafodd yr RNA hwn ei drawsgrifio'n ôl yn cDNA. Cafodd qPCR gwyrdd SYBR ei redeg ar System Canfod PCR Amser Real Bio-Rad CFX96 Touch (Labordai Bio-Rad, Hercules, CA, UDA). Dyluniwyd y dilyniannau paent preimio SIRT-1, PGC-1 , PPAR- , a CPT1A gan feddalwedd Primer Premier5.0 a’u syntheseiddio gan Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., gyda’r genyn cadw tŷ GAPDH yn gwasanaethu fel y cyfeiriad mewnol. Roedd yr amodau chwyddo fel a ganlyn: cyn dadnatureiddio ar 95 ◦C, dadnatureiddio ar 95 ◦C, ac anelio ar 60 ◦C (30 s), gyda chyfanswm o 40 cylch. Ar ddiwedd yr adwaith, pennwyd penodoldeb ymhelaethiad PCR trwy ddadansoddiad cromlin diddymu, darllenwyd y gwerth Ct, a chyfrifwyd mynegiant cymharol y genyn targed mRNA gan y dull 2- ΔΔCt. Dangosir dilyniannau preimio yn Nhabl 1.
2.11. Dulliau ystadegol
Defnyddiwyd meddalwedd ystadegol SPSS22.0 ar gyfer prosesu data a dadansoddi ystadegol a GraphPad Prism7.0 ar gyfer lluniadu. Cyflwynir data a ddosberthir fel arfer fel gwyriad safonol cymedrig ± (amrywiad x ± s). Cynhaliwyd cymhariaeth pairwise rhwng grwpiau trwy ddadansoddiad un ffactor o amrywiant. Nodwyd arwyddocâd gwahaniaethau rhwng grwpiau naill ai gyda'r Prawf Gwahaniaethau Lleiaf Arwyddocaol (LSD) (homogeneity of Varances) neu brawf-t Dunnett (anhomogenaidd) ar gyfer cymariaethau lluosog. Os nad oedd data yn cydymffurfio â'r dosbarthiad arferol, defnyddiwyd y gwahaniaeth canolrif a chwartel, yn ogystal â'r prawf nonparametric (prawf Kruskal-Wallis). Gwerth AP o<0.05 was="" considered="" statistically="">
manteision gwrywaidd cistanchecanysaren
3. Canlyniadau
3.1. Mae ECH yn gwella cyflwr iechyd cyffredinol a LI llygod db/db
Drwy gydol yr arbrawf, roedd llygod y grŵp db/m yn iach ac yn egnïol ac yn dangos sgleinder cotiau. Dangosodd llygod y grŵp db/db ormodedd o ddŵr a phorthiant, gordewdra, syrthni a chwrcwd, a gwallt tywyll, garw. O gymharu â llygod y grŵp db/db, dangosodd y llygod grŵp db/db ac ECH amodau gwell ym mhob astudiaeth. Ar ben hynny, roedd eu mynegai pwysau corff ac iau yn is na llygod y grŵp model diabetig (P < 0.05)="" (tabl="">
Tabl 1 RT preimio meintiol PCR fflworoleuedd.
Tabl 2 Pwysau'r corff, pwysau gwlyb yr iau a'r mynegai iau yn llygod pob grŵp.
3.2. Mae ECH yn lleihau glwcos gwaed ymprydio ac ymwrthedd inswlin ac yn cynyddu goddefgarwch glwcos a sensitifrwydd inswlin mewn llygod db/db
Wrth i'r arbrawf fynd rhagddo, o'i gymharu â'r grŵp db/m, cynyddodd y glwcos gwaed ymprydio yn y grŵp db/db yn sylweddol (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">
3.3. Mae ECH yn lleddfu anhwylder adeileddol yr afu ac yn lleddfu newidiadau patholegol fel croniad lipid mewn llygod db/db
Datgelodd staen AU fod maint a morffoleg hepatocytes yn y grŵp db/m yn normal, a bod strwythurau llabedi hepatig a sinwsoidau yn glir. Roedd dirywiad hepatocyte helaeth yn y grŵp db/db, mwy o gyfaint hepatocyte, maint niwclear amrywiol, necrosis celloedd ffocal, ac ymdreiddiad celloedd llidiol yn ardal y porth. Yn db / db ynghyd â grŵp ECH, roedd gostyngiad sylweddol mewn defnynnau lipid a chelloedd llidiol, cafodd yr anaf celloedd necrotig ei leddfu (Ffig. 2 A). Datgelodd dadansoddiad microsgopig o feinwe'r afu olew staen O coch drefniant taclus o gelloedd, heb unrhyw ddefnynnau lipid na newidiadau patholegol, yn y grŵp db/m. Mewn grŵp db/db, roedd gan y celloedd drefniant afreolus, ac roedd nifer fawr o ronynnau braster o wahanol feintiau yn bresennol yn y cytoplasm. O'i gymharu â grŵp db / db, roedd nifer y defnynnau lipid yn y grŵp db / db ynghyd ag ECH yn sylweddol is, gan awgrymu effaith amddiffynnol bosibl ECH ar yr afu (Ffig. 2 B, C).
Ffig. 1. Gwellodd ECH goddefgarwch glwcos ac ymwrthedd gwanedig i inswlin llygod db/db.
3.4. Mae ECH yn gwella metaboledd lipid a swyddogaeth yr afu mewn llygod db/db
O'i gymharu â'r grŵp db/m, cynyddwyd lefelau lipid gwaed TC, TG, a LDL yn sylweddol, a gostyngwyd HDL yn sylweddol yn y grŵp db/db (P < {{{{}}}}.{4}="" }1).="" fodd="" bynnag,="" gostyngwyd="" lefelau="" tc,="" tg,="" a="" ldl,="" a="" chynyddwyd="" y="" lefel="" hdl="" yn="" y="" grŵp="" db/db="" ac="" ech="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" db/db="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (ffig.="" 3a).="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" db/m,="" cynyddwyd="" lefelau="" alt="" ac="" ast="" yn="" sylweddol="" yn="" y="" grŵp="" db/db="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01).="" roedd="" y="" lefelau="" ast="" ac="" alt="" yn="" sylweddol="" is="" yn="" y="" grŵp="" db/db="" ynghyd="" ag="" ech="" nag="" yn="" y="" grŵp="" db/db="" (p=""><0.05, p=""><0.01) (ffig.="" 3b,="">
Ffig. 2. Anhwylder adeileddol meinwe'r afu gwanedig ECH a chrynodiad lipid mewn llygod â NAFLD.
3.5. Effaith ECH ar actifadu llwybr AMPK/SIRT1 mewn gwahanol grwpiau o lygod
Yn ôl canlyniadau blot gorllewinol, o gymharu â'r grŵp db/m, roedd lefelau protein p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1 , PPAR- , a CPT1A ym meinwe'r afu yn sylweddol is yn y grŵp db/db ( P < 0.01).="" fodd="" bynnag,="" roedd="" y="" lefelau="" protein="" yn="" sylweddol="" uwch="" mewn="" db="" db="" ynghyd="" â="" grŵp="" ech="" nag="" mewn="" grŵp="" db="" db="" (p=""><0.01) (ffig.="" 4="" a,="" b).="" heblaw,="" dangosodd="" staenio="" immunofluorescence="" fod="" mynegiant="" p-ampk="" a="" sirt1="" i'w="" weld="" yn="" amlwg="" ym="" meinwe="" iau="" llygod="" a="" gafodd="" eu="" trin="" ag="" ech="" na="" grŵp="" db/db="" (ffig.="" 4="">
3.6. Effaith echinacoside ar fynegiant llwybr mRNA SIRT1 yn iau grwpiau gwahanol o lygod
Yn ôl canlyniadau RT-PCR, gostyngodd lefelau SIRT1, PGC-1 , PPAR- a CPT1A yn sylweddol mewn grŵp db/db o gymharu â grŵp db/m. Fodd bynnag, cynyddodd y lefelau hyn yn sylweddol yn y grŵp db/db ac ECH o gymharu â grŵp db/db (Ffig. 5).
Ffig. 3. Y mynegeion sy'n gysylltiedig â serwm yn llygod pob grŵp.
4. Trafodaeth
Mae diabetes yn bryder meddygol mawr yn y byd, a disgwylir i nifer y bobl â diabetes gynyddu i tua 592 miliwn erbyn 2035 [9]. Mae cyfradd mynychder diabetes, T2DM yn bennaf, yn Tsieina, yn dangos tuedd sy'n cynyddu'n sylweddol [10,11]. Mae perthynas gymhleth rhwng T2DM a chlefyd yr afu, a NAFLD, a nodweddir gan ddyddodiad braster gormodol yn yr afu, yw'r anaf afu mwyaf cyffredin a achosir gan T2DM a'r clefyd cronig yr afu mwyaf aml yn y byd [12,13]. Mae ymchwil profion genetig clinigol yn awgrymu bod y genyn sy'n gysylltiedig â T2DM yn gysylltiedig â BMI cynyddol, hypercholesterolemia, a HDL-C llai, sy'n rhoi risg uwch o NAFLD [14]. Mae cysylltiad agos rhwng NAFLD ac ymwrthedd i inswlin a dyslipidemia ac felly mae'n gyffredin iawn mewn cleifion â T2DM a/neu ordewdra. Er ei bod yn ymddangos bod nifer o ffactorau metabolaidd yn gysylltiedig â datblygiad NAFLD, mae ei pathogenesis yn parhau i fod yn aneglur ac yn gymhleth i raddau helaeth [15]. Planhigyn parasitig lluosflwydd yw Cistanche deserticola sy'n tyfu ar wreiddiau planhigion gosod tywod. Yn ôl Pharmacopoeia Tsieineaidd, defnyddir Cistanche deserticola fel meddyginiaeth draddodiadol i drin clefyd yr arennau ac anffrwythlondeb [16,17]. Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae astudiaethau wedi cadarnhau y gall Cistanche deserticola atal yn sylweddol y cynnydd mewn lefelau glwcos gwaed ymprydio ac ôl-prandial mewn llygod diabetig, gwella ymwrthedd inswlin a dyslipidemia, a chynorthwyo colli pwysau [18]. Fel prif gydran Cistanche deserticola, disgwylir i ECH gyfrannu ymhellach at wella anaf i'r afu sy'n gysylltiedig â DM. Datgelodd ein canlyniadau arbrofol y gallai gordewdra a diabetes achosi anaf i'r afu mewn llygod, a nodweddir gan gynnydd sylweddol mewn lefelau serwm ALT ac AST a newidiadau histopatholegol nodweddiadol. Gostyngodd ECH yr LI a glwcos yn y gwaed yn sylweddol, gostyngodd lefelau TC, TG, a LDL lefelau HDL a gwell sensitifrwydd inswlin. Datgelodd archwiliad histopatholegol lai o ddirywiad steatosis hepatocyte ac ymdreiddiad celloedd llidiol mewn llygod a gafodd eu trin ag ECH, gan gadarnhau y gall yr asiant wella anaf i'r afu mewn llygod gordew, diabetig.
Mae AMPK yn kinase protein sydd wedi'i gadw'n fawr ac sy'n cael ei ddosbarthu'n eang mewn organebau ac fe'i gelwir yn dderbynnydd metaboledd ynni. Mae'n chwarae rhan wrth liniaru straen ocsideiddiol, llid, amlhau, ac apoptosis [19]. Mae actifadu'r ensym gan ysgogwyr anuniongyrchol yn denu sylw gwyddonol i drin diabetes, gordewdra, canser, ac anhwylderau metabolaidd cysylltiedig eraill [20,21]. Gall reoleiddio metaboledd lipid trwy sawl dull, megis atal synthesis asid brasterog a thriglyserid, atal synthesis colesterol, a hyrwyddo ocsidiad a dadelfeniad asid brasterog [22]. Yn yr afu, mae AMPK yn rheoleiddio metaboledd lipid trwy ffosfforyleiddiad.
Pan fydd y gymhareb AMP-i-ATP mewngellol yn cynyddu, mae AMPK yn cael ei actifadu, gan gynyddu p-AMPK / AMPK ac uwch-reoleiddio mynegiant SIRT1 trwy gynyddu lefelau cellog NAD plus [23,24]. Yn ddiweddar dangoswyd bod SIRT1, deacetylase sy'n ddibynnol ar NAD, yn gysylltiedig â phathoffisioleg NAFLD [25]. Mae'r ensym yn cymryd rhan mewn amrywiol brosesau ffisiolegol cellog, megis homeostasis lipid a glwcos a sensitifrwydd inswlin, ac mae'n rheolydd allweddol metaboledd [26]. Mae gan gleifion gordew, yn enwedig y rhai ag ymwrthedd i inswlin, diabetes, a NAFLD, lefelau is o SIRT1 [27,28]. Price et al. wedi archwilio rôl SIRT1 wrth atal steatosis hepatig a chanfod bod mynegiant SIRT1 yn cael ei leihau mewn cleifion â NAFLD [29]. Mae astudiaethau eraill wedi dangos y gall taro hepatocyte-benodol o SIRT1 leihau ocsidiad asid brasterog a chymell steatosis a llid yn yr afu, tra gall gorfynegiant SIRT1 wella metaboledd lipid trwy'r llwybr PGC-1 [30]. Mae SIRT1 yn rheoleiddio gweithgaredd PGC-1 , ac mae'r ddau ohonynt yn hanfodol i gynnal homeostasis ynni cellog. Felly, gall SIRT1 a ffactorau i lawr yr afon PGC-1 fod yn darged allweddol anaf i'r afu. Mae coactivator PGC yn brotein a all rwymo i ffactorau trawsgrifio neu dderbynyddion niwclear i gynyddu gweithgaredd trawsgrifio [31]. Mae angen coactivators ar y rhan fwyaf o ffactorau trawsgrifio, yn enwedig PPAR-, yn bennaf mewn meinweoedd ocsidiedig fel yr afu, myocardiwm, a chyhyr ysgerbydol. Gall actifadu trawsgrifiad genynnau sy'n hyrwyddo trafnidiaeth asid brasterog ac ocsidiad, cynhyrchu ceton, a gluconeogenesis [32,33]. Mae CPT1A yn ensym sy'n cyfyngu ar gyfraddau allweddol mewn ocsidiad asid brasterog. Mae ei fynegiant yn cael ei reoleiddio gan fecanweithiau trawsgrifio cymhleth, sy'n cynnwys nifer o ffactorau trawsgrifio a chydweithredolwyr, gan gynnwys SIRT1, PGC-1 , a PPAR [34]. Yn yr astudiaeth hon, canfuom, o dan y crynodiad uchel o glwcos yn y gwaed yn y grŵp db/db, fod y croniad lipid mewn hepatocytes wedi cynyddu wrth i ffactorau i lawr yr afon o fynegiant llwybr signal AMPK/SIRT1 gael eu lleihau; yn y grŵp a driniwyd gan ECH, cynyddwyd mynegiadau p AMPK/AMPK, SIRT1 a PGC-1 yn sylweddol, a chynyddwyd mynegiadau ffactorau i lawr yr afon PPAR a CPT1A yn sylweddol, gan ddangos bod echel signal AMPK/SIRT1 a'i ffactorau i lawr yr afon chwarae rhan fuddiol wrth drin anaf diabetig i'r afu (Ffig. 6). Fodd bynnag, roedd y data a ddarparwyd yma yn seiliedig ar arbrofion in-vivo; felly, mae angen astudiaethau in-vitro ychwanegol i gadarnhau effaith ECH ar lwybrau signalau AMPK/SIRT1 a phroteinau effeithydd.
Yn gyffredinol, gall ECH reoleiddio glwcos yn y gwaed a metaboledd lipid trwy reoleiddio mynegiant AMPK / SIRT1 a'i ffactorau i lawr yr afon, gan wella anaf diabetig i'r afu.
ECH cistanchecanrheoleiddio glwcos yn y gwaedametaboledd lipid.
