Sut mae calsiwm yn trin niwed i'r arennau a achosir gan luorid?

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

Geiriau allweddol: Calsiwm, Arennau, Apoptosis

ABSENOLDEB

Gall cymeriant gormodol hirdymor o fflworid (F) achosi difrod osseous a di-osseous. Mae'rarenyw prif organ ysgarthiad fflworid y corff. Nod yr astudiaeth hon oedd archwilio a yw dietcalsiwmgall ychwanegiad liniaruarendifrod a achosir gan fflworosis ac i ymchwilio ymhellach i effeithiauCalsiwmar y mecanwaith lliniaru oarencellapoptosiswedi'i sbarduno gan F. Gwerthuswyd y strwythur histopatholegol,arendangosyddion swyddogaeth, a lefelau mynegiant genynnau a phrotein marwolaeth wedi'i gyfryngu gan dderbynnyddapoptosisllwybrau mewn llygod mawr Sprague Dawley (SD) sy'n cael eu trin â fflworid sodiwm (NaF) a/neucalsiwmcarbonad (CaCO3) am 120 diwrnod. Dangosodd y canlyniadau fod 100 mg/L NaF wedi'i ysgogiarenanaf histopatholegol aapoptosis, cynyddu'r crynodiadau o Creatinin (CRE), asid wrig (UA), nitrogen wrea gwaed (BUN), potasiwm (K), ffosfforws (P), a F (p < {{{{}}}}.05)="" ,="" a="" gostwng="" lefel="" y="" magnesiwm="" serwm="" (mg)="" (p="">< 0.05).="" ar="" ben="" hynny,="" cynyddodd="" naf="" lefelau="" mrna="" a="" mynegiant="" protein="" derbynnydd="" marwolaeth="" arwyneb="" celloedd="" fas="" (fas),="" ffactor="" necrosis="" tiwmor="" (tnf),="" sy'n="" gysylltiedig="" â="">apoptosis-inducing ligand (TRAIL), Caspase 8, Caspase 3, a poly ADP-ribose polymerase (PARP) (p < 0.01),="" a="" ysgogodd="" y="" llwybr="" derbynnydd="" marwolaeth="" yn="" olaf.="" i'r="">Calsiwmroedd atchwanegiad yn gwrthdroi'r gostyngiad yn lefelau CRE, BUN, UA, F, a P a achosir gan F, wedi lleddfu difrod histopatholegol aapoptosis, a gostyngodd lefelau mynegiant genynnau a phrotein marcwyr cysylltiedig â llwybr derbynnydd marwolaeth. I gloi, 1 y cantCalsiwmyn lleddfu a achosir gan Farenapoptosistrwy lwybrau signalau FAS/FASL, TNFR/TNF, DR5/TRAIL.

Mae'rarenyw prif organ ysgarthiad fflworid y corff, ycistancheyn gallu amddiffyn yarena gwellaarenswyddogaeth.

Rhagymadrodd

Mae fflworin yn bresennol yn eang yn y pridd, dŵr a bwyd. Fodd bynnag, mae rhai ffactorau naturiol (hindreulio mwynau a chreigiau, ffurfiocalsiwma halwynau magnesiwm, ymdreiddiad dŵr daear, ac ati) a gweithgareddau dynol (dŵr gwastraff diwydiannol, agrocemegolion, cynhyrchion cartref, ac ati) yn achosi llygredd fflworin yn yr amgylchedd (Daiwile et al., 2019). Ar hyn o bryd, y ffactor mwyaf o ddod i gysylltiad â fflworid (F) yw dŵr yfed, ac mae’r crynodiad F a argymhellir mewn dŵr yfed gan Sefydliad Iechyd y Byd yn llai na 1.5 mg/L (Canllawiau ar gyfer Ansawdd Dŵr Yfed, 2017). Mae tystiolaeth epidemiolegol yn awgrymu bod uwch na’r crynodiad hwn yn cynyddu’r risg o fflworosis dannedd, a bydd y crynodiad cynyddol yn cynyddu’r risg o fflworosis ysgerbydol (Canllawiau ar gyfer Ansawdd Dŵr Yfed, 2017; Y Cyngor Ymchwil Cenedlaethol, 2006). Gall amlygiad hirdymor i grynodiadau uchel o fflworid gynyddu amsugniad fflworin y corff trwy'r anadlol

a llwybrau treulio. Gall cymeriant gormodol o F achosi niwed i organau esgyrnog a heb fod yn esgyrnog y corff. Yn gyffredinol, cyfeirir at ddifrod meinwe meddal y tu allan i'r asgwrn fel difrod nad yw'n esgyrnog. Ar hyn o bryd, canfuwyd bod difrod meinwe nad yw'n asgwrn a achosir gan F yn cynnwys y llwybr treulio, yr afu,aren, ymennydd, ac ati (Jha et al., 2011; Perumal et al., 2013).

Mae'raren, prif organ ysgarthol y corff, sy'n gyfrifol am fetaboledd sylweddau gwenwynig a thocsinau alldarddol yn y corff. Mae astudiaethau wedi nodi bod tua 50-80 y cant o'r fflworid a lyncwyd gan y corff yn cael ei hidlo a'i adamsugno gan y corff.arennau, ac mae'r fflworin sy'n weddill yn cael ei gronni mewn meinweoedd ac organau eraill (Chen et al., 2013; Dharmaratne, 2019). Mae llawer o fathau o lenyddiaeth wedi dangos y gall amlygiad 50 a 100 mg/LF arwain at ehangu ceudod capsiwl yr arennau, atroffi oarentiwbiau, trefniant afreolaidd o gelloedd papilari, culhau'r lwmen, gan arwain atapoptosisoarencelloedd a dirywiad mewn swyddogaethau biocemegol megis creatinin (CRE), asid wrig (UA),calsiwm(Ca), a ffosfforws (P) (Cân et al., 2014; HW Wang et al., 2020; Wei et al., 2018a).

Apoptosis, math o farwolaeth celloedd a reolir gan enynnau, sy'n cael ei rannu'n mewndarddolapoptosisac alldarddolapoptosis. Mae adroddiadau diweddar wedi nodi hynnyapoptosisa achosir gan F uchel yn bennaf yn cynnwys mitocondria-mediated, mae'r reticwlwm endoplasmig yn cael ei gyfryngu gan straen, a llwybrau marwolaeth derbynnydd-gyfryngol (Wei et al., 2018a). Tynnodd arbrofion blaenorol yn ein grŵp sylw at y ffaith bod NaF yn anwytho asgwrn ac afuapoptosistrwy'r llwybr reticwlwm endoplasmig mewngellol (ER) a'r llwybr mitocondriaidd (Li et al., 2021; J. Wang et al., 2020; Wang et al., 2019). Yn ogystal, mae astudiaethau hefyd wedi dangos bod y llwybr mitocondriaidd yn gysylltiedig â NaF a achosirapoptosiso lygodenarennau(Wei et al., 2018b). Fodd bynnag, nid oes astudiaeth systematig ar y llwybr cyfryngol derbynnydd marwolaeth yn achos Farenapoptosis. Mae llwybr derbynnydd marwolaeth yn dominyddu pob cam o alldarddolapoptosis, gan gynnwys llwybr derbynnydd marwolaeth arwyneb celloedd Fas (FAS), llwybr ffactor necrosis tiwmor (TNF), a llwybr cysylltiedig â TNFapoptosis-inducing ligand (TRAIL) llwybr (Grunert et al., 2012; Lu et al., 2017; Wang a Su, 2018). Llwybr FAS yw'r system trawsgludo signal cyntefig sy'n cyfrynguapoptosis. Mae gan FAS nodweddion derbynnydd pilen ac mae'n ffurfio trimiwr ar ôl ei rwymo â'r ligand FAS (FAS-L). Yna mae parth penodol y trimiwr yn clymu â pharth marwolaeth (DD) y moleciwl connexin cyfatebol protein parth marwolaeth sy'n gysylltiedig â FAS (FADD) i ffurfio cymhleth signal a achosir gan farwolaeth (DISC) (Wang a Su, 2018). Yn y broses trawsgludo signal biolegol ganlynol, gall FADD actifadu teulu Caspase 8 a Caspase ar yr un pryd, ac yn y pen draw arwain atapoptosistrwy gyfranogiad Caspase 3 ac effaith poly ADP-ribose polymerase (PARP) (Kischkel et al., 2000; Meynier a Rieux-Laucat, 2019). Mae astudiaethau diweddar wedi dangos bod llwybr FAS yn cyfrynguapoptosismewn celloedd T ac yn ystodarenmethiant a achosir gan cisplatin (Djiadeu et al., 2017; Linkermann et al., 2011). Yn ogystal, mae astudiaeth hefyd wedi nodi bod NaF yn anwythoapoptosismewn llygod trwy lwybr FAS (Sun et al., 2017). Mae TRAIL yn cytocin cydnabyddedig yn yr uwchdeulu TNF. Mae'n clymu i'w derbynyddion agonist homologaidd, sef derbynyddion marwolaeth (DR4 a DR5). Mae DD yn ei rhanbarth cellog. Mae'r DD yn angenrheidiol ar gyfer recriwtio protein addasol FADD. Mae FADD yn ei dro yn cymell rhyddhau Caspases i'r cytoplasm, actifadu Caspase 3 yn hollti PARP, ac yn atal ei botensial atgyweirio DNA, gan arwain atapoptosis(Bodmer et al., 2000; Micheau, 2018). Awgrymwyd bod y llwybr TRAIL/DR5 yn gysylltiedig â'r NaF a achosirapoptosismewn llygod (Song et al., 2021). Mae Osteoprotegerin (OPG) yn dderbynnydd hydawdd rhad ac am ddim sydd heb barth trawsbilen. Gall atal TRAIL-mediatedapoptosistrwy atal rhwymo TRAIL a derbynyddion marwolaeth eraill (Duiker et al., 2006; Kiraz et al., 2016; Micheau, 2018). Gall rhwymo derbynyddion TNF a TNF (TNF-R1) ysgogi recriwtio protein parth marwolaeth sy'n gysylltiedig â TNFR (TRADD) trwy ei DD. Wedi hynny, mae TRADD yn rhyngweithio â FADD, gan arwain at recriwtio pro-Caspase 8, sy'n cael ei hollti i Caspase 8 gweithredol gan ensymau proteolytig. Yna mae Caspase 8 yn actifadu Caspase 3, sy'n gyfrifol am gellapoptosis(Kiraz et al., 2016; Sedger a McDermott, 2014). Dywedir bod NaF yn anwytho hepatocyteapoptosismewn llygod trwy lwybr signal TNF-R1 (Lu et al., 2017)

Calsiwmyn chwarae rolau amrywiol yng nghyfansoddiad esgyrn a dannedd, a gall hefyd reoli trosglwyddiad nerf a rhyddhau deunydd (Cao et al., 2016), cymryd rhan mewn systemigcalsiwmhomeostasis (Carmeliet et al., 2003; Yang et al., 2016), newid athreiddedd pilen (Lappe et al., 2017), actifadu secretion amrywiaeth o ensymau a hormonau (Kim et al., 2012), ac ati. Mae llawer o astudiaethau blaenorol wedi canfod bod F a Ca yn cael effaith antagonistaidd mewn bioleg (Dure-Smith et al., 1996; Nobrega et al., 2019). Unwaith y bydd F yn cael ei amsugno gan y corff, bydd yn mynd i mewn i'r gwaed i ffurfio gwaddod CaF2 anhydawdd. Os nad yw cyflenwad dietegol Ca yn ddigonol ac nad yw'r gwaed Ca yn cyrraedd y lefel ddyledus, bydd newidiadau patholegol megis hypocalcemia ac osteolysis, felly mae atodiad dietegol Ca yn chwarae rhan bwysig wrth atal a gwella fflworosis (Dure-Smith et al., 1996; Li et al., 2021; Yang et al., 2021). Mae ein grŵp wedi cadarnhau bod dietegolcalsiwmyn gallu lleddfu'rapoptosiso asgwrn a'r afu trwy'r llwybr signal PI3K-AKT, llwybr ER, a llwybr mitocondriaidd (Li et al., 2021; J. Wang et al., 2020; Wang et al., 2019; Yang et al., 2021). Er mwyn profi ymhellach aCalsiwmyn gwanhau neffrowenwyndra F trwy'r derbynnydd marwolaeth a gyfryngirapoptosisllwybr, fe wnaethom sefydlu model llygod mawr o ddeiet fflworid uchelcalsiwma gwerthusodd yarenmynegai anafiadau, y radd oapoptosis, a'r newidiadau mewn genyn marcio a mynegiant protein yn y derbynnydd marwolaeth a gyfryngirapoptosisllwybr.

Defnyddiau a dulliau

Cemegau ac offerynnau

Paratowyd dŵr distyll gan System puro dŵr Heal Force (Shanghai, Tsieina). Darparwyd byffer lysis assay immunoprecipitation radio (RIPA) a fflworid Sodiwm (NaF) gan Sigma-Aldrich (Shanghai, Tsieina). Cafwyd 10 y cant fformalin, Glycine, sodiwm dodecyl sylffad (SDS), TRIS, fflworid Phenylmethylsulfonyl (PMSF), CaCO3, pilen nitrocellulose (NC), Pecyn Asid Bicinchoninic (BCA) a phecyn staenio hematoxylin-eosin (H&E) gan Solarbio Technology Co. ., Ltd (Beijing, Tsieina). Prynwyd adweithydd Trizol gan Gwmni Peirianneg Biolegol Takara (Dalian, Tsieina). Prynwyd citiau CRE, UA, nitrogen wrea gwaed (BUN), magnesiwm (Mg), P, a photasiwm (K) gan Sefydliad Biobeirianneg Nanjing Jiancheng (Nanjing, Tsieina). Yn y fan a'r lleapoptosisPrynwyd pecyn canfod, gwrthgorff Polyclonal Cwningen FAS (BA0484), a gwrthgorff Polyclonal Cwningen FAS-L (PB0042) gan Boster Biotechnology (Wuhan, Tsieina). -actin Gwrthgorff Polyclonal Cwningen (20536-1-AP), FADD Rabbit Polyclonal gwrthgorff (14906-1-AP), Caspase 8 Rabbit Gwrthgorff Polyclonal (13423-1-AP), Caspase 3 Rabbit Polyclonal gwrthgorff ({{9) }} AP), a chaffaelwyd Affinipure Goat Anti-Rabbit IgG (H plws L) (SA00001-2) â HRP gan Proteintech Group (Wuhan, Tsieina). Prynwyd Gwrthgorff Polyclonaidd Cwningen TRAL (bs{-1214R), gwrthgorff Polyclonal Cwningen alffa TNF (bs2081R), PARP Rabbit Polyclonal Antibody (bs{-55164R) gan Bioss (Beijing, Tsieina). Prynwyd goleuedd electrocemegol (ECL) a 3,3′-diaminobenzidine (DAB) gan KeyGen Biotech (Jiangsu, Tsieina). Darparwyd PrimeScript® RT Master Mix a SYBR® Premix Ex Taq™ II Kit gan Promega Biotechnology (Beijing, Tsieina).

Anifeiliaid a thriniaethau

Cafwyd deugain o lygod mawr gwrywaidd iach {{0} wythnos oed Sprague-Dawley (SD) (120 ± 20 g) o Ganolfan Anifeiliaid Arbrofol Prifysgol Feddygol Shanxi (Shanxi, Tsieina). Cafodd y llygod mawr eu cynefino am wythnos, wedi'u rhannu ar hap yn bedwar grŵp (10 llygod mawr y grŵp): Grŵp rheoli (C), grŵp NaF (F), NaF ynghyd â grŵp CaCO3 0.5 y cant (F ynghyd â 0.5 y cant Ca), NaF ynghyd ag 1 y cant Grŵp CaCO3 (F ynghyd ag 1 y cantCalsiwm) a'i drin fel Tabl 1. Roedd pob llygod mawr yn cael eu cadw mewn cewyll plastig ar 22-25 ◦C (lleithder 55 ± 5 y cant, 12 h cylch golau / tywyll), diet a dŵr yfed yn hygyrch.

Ar ôl 17 wythnos o fagu, roedd llygod mawr yn ymprydio am 24 awr, ac roedd dŵr yn rhydd i'w yfed. Yna anestheteiddiwyd y llygod mawr â sodiwm pentobarbital a'u haberthu trwy ddadleoliad ceg y groth ar ôl i'r gwaed gael ei gasglu o beli'r llygaid. Casglwyd peth gwaed gan y tiwbiau a oedd yn cynnwys sodiwm heparin gwrthgeulo ar gyfer y prawf BUN. Rhoddwyd rhan o'r gwaed mewn tiwbiau prawf cyffredin, ei osod ar dymheredd yr ystafell am 2 awr, ac yna ei allgyrchu ar 3000 rpm/munud am 10 munud i wahanu serwm. Gwahanwyd y serwm ar gyfer profion CRE, UA, Mg, P, K, ac F. Wyth sampl oarennauo bob grŵp eu dewis ar hap a'u rhewi'n gyflym mewn nitrogen hylifol, ac yna eu storio ar − 80 ◦C ar gyfer qRT-PCR ac arbrofion blotio gorllewinol. Mae'r samplau eraill oarennaueu gosod mewn fformalin 10 y cant ar gyfer archwiliad histopatholegol ac arbrofion labelu diwedd nick end deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP (TUNEL). Gweithredwyd yr holl weithrediadau arbrofol sy'n gysylltiedig ag anifeiliaid yn llym o dan reoliadau'r Sefydliad Gofal Anifeiliaid a Phwyllgor Defnydd Prifysgol Amaethyddol Shanxi, Shanxi, Tsieina.

Arennaucyfernod

Roedd y llygod mawr yn cael eu pwyso yn gyntaf; yna yarencafodd meinwe ei dynnu a'i bwyso. Mae'rarenCafwyd cyfernod gan y fformiwla ganlynol.

Arennaucyfernod=[arenpwysau gwlyb (g) / pwysau corff (g)] × 100 y cant .

Archwiliad histopatholegol

Arennauroedd sbesimenau wedi'u mewnblannu mewn paraffin. Adran (5 μm trwch) yarenwedi'i staenio gan H&E. Yna, arsylwyd y sleidiau gan ddefnyddio microsgop golau (Olympus, Tokyo, Japan). Mae difrifoldeb yarencafodd anaf ei farnu yn ôl sgôr histopatholegol.ArennauDiffinnir anaf tiwbaidd fel yarencorpwscles yn cael eu atrophied a'u dadffurfio, yarenceudod capsiwl ehangu, yarentiwbyn yn ffurfio cast, a chelloedd epithelial yn disgyn i ffwrdd. Ar y chwyddhad 200 gwaith, defnyddiwyd y meini prawf canlynol i werthuso graddau anaf i'r afu. difrod 1: 0–25 y cant; 2: difrod 25-50 y cant; 3: difrod 50-75 y cant; 4: difrod o 75-100 y cant (Baranova et al., 2016).

Penderfyniad oaren- dangosyddion cysylltiedig

Mesurwyd lefel F gan electrod ïon-benodol F (Quadri et al., 2018). Mesurwyd lefelau CRE, UA, BUN, Mg, P, a K trwy ddefnyddio citiau sydd ar gael yn fasnachol. Perfformiwyd yr holl weithdrefnau cysylltiedig yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

Canfodapoptosislefel gan TUNEL

Er mwyn meintioli'rapoptosismewnarencelloedd, cynhaliwyd dadansoddiad arbrofol trwy ddefnyddio situapoptosispecyn canfod. Mae'rarencafodd adrannau eu dadbaraffinio ac yna'u treulio gan ddefnyddio Proteinase K. Gall Terminal Deoxynucleotidyl Transferase farcio dUTP (DIG-dUTP) â label digoxin i'r pen 3′-OH, ac mae DIG-dUTP yn rhwymo i'r torbwynt DNA ar ôl adweithio â'r gwrth biomarciwr -dig-Biotin. Wedi'i gyfuno â DAB ychwanegwyd i'r arddangosfa. Ar gyfer delweddu

yr holl niwclysau, roedd yr adrannau wedi'u gwrth-staenio â hematocsilin. Mae signalau brown tywyll yn dynodi celloedd positif ac mae glas yn dynodi celloedd anymatebol. Mae'rapoptosiscyfrifwyd y mynegai yn ôl y fformiwla ganlynol.

Cyfran y celloedd apoptotig=(nifer y celloedd apoptotig fesul nod / cyfanswm nifer y celloedd fesul nod) ×100 y cant .

PCR meintiol amser real (qRT-PCR)

Cyfanswm RNA o'rarenei echdynnu trwy ddefnyddio adweithydd Trizol. Defnyddiwyd sbectroffotomedr ND{{{0}} (nano-drop, UDA) ac electrofforesis gel agarose i wirio ansawdd a maint yr RNA. Perfformiwyd trawsgrifio gwrthdro (RT) ar gyfanswm RNA 500 ng trwy ddefnyddio PrimeScript® RT Master Mix. Dyluniwyd paent preimio penodol ar gyfer -actin a FAS, TRAIL, TNF, a genynnau eraill gan feddalwedd Primer Premier 7.0 (Tabl 2) a'u syntheseiddio gan Sangon Biotech (Shanghai, Tsieina). Defnyddiwyd system PCR amser real Quantstudio 7 flex (thermo-fisher, UDA) a SYBR® Premix Ex Taq™ II Kit ar gyfer RT-PCR. Cyfaint adwaith PCR oedd 20 μL, a'r amodau RT-PCR oedd: 95 ◦C 10

min, 40 cylchoedd o 95 ◦C 15 s, 55 ◦C 30 s, 72 ◦C 30 s, ac yn olaf un cylch o 95 ◦C 15 s, 60 ◦C 15 s, 95 ◦C 15 s. Ailadroddwyd pob adwaith deirgwaith. Defnyddiwyd y dull cymharol 2-ΔΔCt i gyfrifo'r lefelau mynegiant mRNA cymharol, a defnyddiwyd -actin fel calibradwr. Yn y broses, mae'r gwahaniaeth effeithlonrwydd yn llai na 5 y cant.

Cyfanswm echdynnu protein a dadansoddiad blotio gorllewinol

Mae'rarengolchwyd meinwe gyda PBS, ei sychu â phapur hidlo, a'i ddadelfennu mewn RIPA lysis (yn cynnwys PMSF), am 12,000 rpm/min, 4^◦C am 10 mun. Pennwyd crynodiad protein trwy ddefnyddio'r Pecyn Asid Bicinchoninic (BCA) (Solarbio Science & Technology, Beijing, China). Echdynnwyd sampl protein 35 ng yn llwyddiannus a'i wahanu ar gel SDS-polyacrylamid 8 y cant gan electrofforesis. Trosglwyddwyd y protein targed i bilen NC, a rhwystrwyd y bilen NC gyda 5 y cant o laeth di-fraster ar dymheredd ystafell am 2 h. Ar ôl hynny, cafodd pilen y CC ei deor â gwrthgyrff sylfaenol o -actin (1:1000), TRAIL (1:500), FAS (1:500), FAS-L (1:100), TNF (1:500), FADD (1:500), Caspase 8 (1:500), Caspase 3 (1:500) a PARP (1:1000) ar 4 gradd dros nos. Ar ôl golchi 3 gwaith gyda PBST, deorwyd y bilen NC â gwrthgyrff IgG gwrth-gwningod gafr eilaidd cyd-gyfun HRP (1:2000) ar dymheredd ystafell am 2 h. Defnyddiwyd ECL i ddelweddu'r bandiau protein targed. Cyfrifwyd dwysedd optegol gan feddalwedd AlphaView (fersiwn: 3.2.2.0) ar system FluorChem Q (Alpha Innotech, CA, UDA).

Dadansoddiad ystadegol

Defnyddiwyd meddalwedd GraphPadPrim{{0}} i drefnu a dadansoddi’r data arbrofol, a chynrychiolwyd pob data gan gymedr ± SEM. Cafodd arwyddocâd y gwahaniaeth rhwng modd ei bennu gan ddadansoddiad o amrywiant (ANOVA) ac yna prawf Tukey gyda P < 0.05="" yn="" cael="" ei="" ystyried="" yn="">

Canlyniadau

Newidiadau i mewnarendangosyddion swyddogaeth cyfernod a biocemegol

Mae'rarencyfernod a dangoswyd lefelau F, CRE, BUN, UA, Mg, P, K yn Ffig. 1. Mewn cymhariaeth â'r grŵp C, mae'rarenroedd y cyfernod wedi gostwng yn sylweddol yn y grŵp F (p < 0.05).="" fodd="" bynnag,="" mae'r="" cyfernod="" arennau="" yn="" y="" f="" ynghyd="" ag="" 1="" y="">Calsiwmdangosodd y grŵp gynnydd sylweddol o gymharu â'r grŵp F (p <{{0}}.{5}}5). roedd="" y="" lefel="" f="" yn="" y="" grŵp="" f="" yn="" sylweddol="" uwch="" nag="" yn="" y="" grŵp="" c="" (p="">< 0.001).="" yn="" ddiddorol,="" o'i="" gymharu="" â'r="" grŵp="" f,="" bu="" gostyngiad="" sylweddol="" yn="" lefel="" f="" yn="" y="" grŵp="" f="" ynghyd="" â="" 1="" y="" cant="" ca="" (p=""><>

Gwerthuswyd CRE, BUN, ac AU i adlewyrchu graddauarendifrod a newid swyddogaethol. Cynyddwyd lefelau CRE, BUN, ac AU yn amlwg yn y grŵp F o gymharu â'r rhai yn y grŵp C (p < 0.05),="" fodd="" bynnag,="" o="" gymharu="" â="" grŵp="" f,="" roedd="" y="" tri="" dangosydd="" uchod="" yn="" nodedig.="" gostyngiad="" yn="" y="" f="" ynghyd="" ag="" 1="" y="">Calsiwmgrŵp (p < 0.05).="" mg,="" p="" a="" k="" oedd="" y="" dangosyddion="" electrolyte="" â="" chysylltiad="" agos="" â="">arenswyddogaeth. O'i gymharu â'r grŵp C, gostyngwyd lefel y serwm Mg yn sylweddol, cynyddwyd lefelau P a K yn ddramatig yn y grŵp F (p < 0.05).="" serch="" hynny,="" gan="" ychwanegu="" 1="" y="">calsiwmi'r diet cynyddodd y lefelau serwm Mg 15.3 y cant (p < 0.05)="" a="" gostyngodd="" lefelau="" serwm="" p="" yn="" sylweddol="" 16.9="" y="" cant="" (p="">< 0.05).="" mae="" cynnwys="" serwm="" k="" wedi="" dangos="" tuedd="" ar="" i="" lawr="" heb="" unrhyw="" arwyddocâd="" ar="" ôl="" triniaeth="" atodol="" 1="" y="" cant="">

Newidiadau mewnarenmorffoleg

Mae newidiadau morffolegolarenarchwiliwyd meinwe gan H&E (Ffig. 2I-Ⅳ, ⅰ-ⅳ). Yn y grŵp C,arenroedd celloedd tiwbaidd wedi'u trefnu'n gryno, roedd y morffoleg yn rheolaidd, ac roedd morffoleg glomeruli yn gyfan. Fodd bynnag, roedd y ffiniau rhwng celloedd yn aneglur, yarenatroffied ac anffurfiwyd corpuscles, yarenceudod capsiwl ehangu, yarenffurfiodd tiwbyn gast, a daeth celloedd epithelial yn ddatgysylltiedig yn y grŵp F. Mewn cymhariaeth â'r grŵp F, gyda'r cynnydd oCalsiwmcrynhoad, y trefniant oarendaeth celloedd yn raddol yn fwy trefnus, morffolegarenadferodd corpuscles yn raddol, a lleihawyd gradd yr anaf yn raddol. Yn ogystal, gwnaethom werthuso'r difrod trwy ddefnyddio'rarensgôr (Ffig. 2Ⅴ). Roedd sgôr y grŵp F yn arwyddocaol uwch na sgôr y grŵp C (p < 0.01);="" serch="" hynny,="" mae'r="" sgôr="" yn="" f="" plws="" 1="" y="">Calsiwmgostyngodd y grŵp yn sylweddol o'i gymharu â'r grŵp F (p < 0.05).

TUNEL canfodarencellapoptosis

Gwnaethom gyflawni'r assay TUNEL i ganfod a dadansoddi a oeddarencelloedd wedi myndapoptosisyn yr astudiaeth hon (Ffig. 3I-Ⅳ, ⅰ-ⅳ).Arennautrefnwyd meinweoedd yn y grŵp C yn daclus, gyda llai o gelloedd apoptotig (4.67 ± 1.15 y cant). Dangosodd y grŵp F nifer fawr o TUNEL-positifarencelloedd epithelial tiwbaidd (48.17 ± 3.94 y cant). Mewn cyferbyniad, mae'r F ynghyd ag 1 y cantCalsiwmgrŵp yn dangos gostyngiad dramatig yn nifer y celloedd TUNEL-positif (28.83 ± 4.81 y cant ) ( Ffig. 3 Ⅴ ).

EffeithiauCalsiwmar newidiadau a achosir gan F mewn genynnau sy'n gysylltiedig â llwybr derbynnydd marwolaeth

Lefelau mynegiant mRNA cymharol ffactorau i fyny'r afon yn ymwneud â'r derbynnydd marwolaeth a gyfryngirapoptosisDatgelwyd llwybr (TRAIL, DR5, TNF, TNFR1, TNF-R2, FAS, FAS-L, OPG) yn Ffig. 4a. O'u cymharu â'r grŵp C, roedd lefelau mynegiant mRNA TRAIL, DR5, TNF, TNF-R1, TNFR2, FAS, a FAS-L wedi'u gwella'n sylweddol mewn llygod mawr a gafodd driniaeth F (p < 0.01).="" mewn="" cyferbyniad,="" gostyngwyd="" mynegiadau="" mrna="" cymharol="" trail,="" tnf,="" tnf-r2,="" fas,="" a="" fas-l="" yn="" sylweddol="" yn="" y="" f="" ynghyd="" â="" 1="" y="">Calsiwmgrŵp o'i gymharu â'r grŵp F (p <{{0}}.05). o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" c,="" gwelwyd="" gostyngiad="" amlwg="" yn="" lefelau="" mynegiant="" mrna="" opg="" yn="" y="" grŵp="" f="" (p="">< 0.01).="" fodd="" bynnag,="" o'i="" gymharu="" â'r="" grŵp="" f,="" mae="" opg="" yn="" yr="" f="">Calsiwmcynyddwyd grwpiau. Ffactorau i lawr yr afon Dangoswyd lefelau mynegiant mRNA cymharol FADD, TRADD, Caspase 8, Caspase 3, a PARP yn Ffig. 4b. Roedd mynegiadau protein FADD, TRADD, Caspase 8, Caspase 3, a PARP yn amlwg wedi'u gwella yn y grŵp F o'u cymharu â'r grŵp C (p <0.01), ond="" fe'u="" gostyngwyd="" yn="" amlwg="" yn="" y="" f="">Calsiwmgrwpiau, o gymharu â'r grŵp F (p < 0.05).

EffeithiauCalsiwmar newidiadau a achosir gan F ynapoptosis- proteinau cysylltiedig

Canfuwyd mynegiant protein TRAIL, FAS, FAS-L, TNF, FADD, Caspase 8, Caspase 3, a PARP gan blotio Gorllewinol (Ffig. 5a, b). O'i gymharu â'r grŵp C, roedd mynegiadau protein TRAIL, FAS, FAS-L, TNF, FADD, Caspase 8, Caspase 3, a PARP yn y grŵp F wedi'u dyrchafu'n sylweddol (p < 0.01).="" gostyngodd="" mynegiadau="" protein="" yr="" holl="" ffactorau="" uchod="" yn="" sylweddol="" yn="" yr="" f="" ynghyd="" ag="" 1="" y="">Calsiwmgrŵp o'i gymharu â'r grŵp F (p < 0.05).

Trafodaeth

Profodd y dystiolaeth ddiweddaraf y gall F achosi briwiau i feinweoedd meddal, ac mae maint y difrod F yn dibynnu ar grynodiad F, amser datguddio, a math o organ (Wei et al., 2019). Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd 100 mg/L NaF am 17 wythnos i sefydlu model anifeiliaid datguddiad NaF is-aciwt dŵr yfed. Dewisir dos NaF yn ôl gradd llygredd F yn yr amgylchedd a ffactorau ansicr gwahanol rywogaethau. O ystyried bod y crynodiad F- naturiol a fesurir mewn dŵr daear lleol tua 4.5 mg/L, cyfrifwyd y dŵr distyll gyda 100 mg/L NaF a ddefnyddiwyd yn yr astudiaeth hon (crynodiad F tua 45 mg/L) yn ôl ffactor ansicr ar gyfer allosod anifail-i-ddyn yn 10 (Canllawiau ar gyfer Ansawdd Yfed-Dŵr, 2017; Mukherjee a Singh, 2021; Wen et al., 2013; Zhang et al., 2020). Mae astudiaethau cynnar wedi canfod bod dietegolcalsiwmGall effeithio ar amsugno fflworin, hyrwyddo ysgarthiad fflworin yn y corff, lleihau cyfradd amsugno fflworin, a thrwy hynny leihau gwenwyndra F (Harrison et al., 1984; Larsen et al., 1981). Mae ein hastudiaethau arbrofol diweddar wedi dangos bod Ca yn lleddfu anafiadau i'r esgyrn a'r afu a achosir gan F trwy atal llwybr cynhenidapoptosis(Li et al., 2021; J. Wang et al., 2020; Wang et al., 2019). Fodd bynnag, hyd yn hyn, mae'r ymchwil ar effaith amddiffynnol Ca ar nephrotoxicity a achosir gan F a'i fecanwaith cysylltiedig yn ddigynsail. Yma, rydym yn adrodd bod Ca yn lleddfu a achosir gan Farendifrod. Yn ogystal, canfuom hefyd fod Ca yn gwrthdroi a achosir gan Farencellapoptosisdrwy'r derbynnydd marwolaeth-gyfryngolapoptosisllwybr (FAS/FASL, TNFR/TNF, DR5/llwybrau TAITH). Mae cronni hirdymor F yn yarengall arwain at strwythur meinwe a difrod swyddogaethol. Yn yr astudiaeth hon, canfuom fod amlygiad NaF yn achosiarencellapoptosismewn llygod mawr, ynghyd ag atroffi glomerwlaidd ac anffurfiad,arenehangu ceudod capsiwl,arentiwbyn yn ffurfio castiau, a chelloedd epithelial yn disgyn i ffwrdd. Fodd bynnag,arencafodd difrod ei liniaru'n sylweddol ar ôl ychwanegu 1 y cant Ca. Roedd y canlyniadau hyn yn debyg i'r canlyniadau a gafwyd mewn adroddiadau blaenorol (Cao et al., 2015; HW Wang et al., 2020).

CRE yw metabolit cyhyrau, UA yw cynnyrch terfynol metaboledd purin, a BUN yw prif gynnyrch terfynol metaboledd protein y corff, sy'n cael ei ysgarthu gan hidlo glomerwlaidd ac a ddefnyddir fel arfer i ganfodarenswyddogaeth (Myers et al., 2006; HW Wang et al., 2020). Dangosodd yr arolwg biocemegol o'r rhanbarth F uchel fod y cyfraddau hidlo glomerwlaidd wedi'u lleihau'n sylweddol, a newidiodd F, UA, a BUN yn sylweddol (Malin et al., 2019). Dangosodd y profion anifeiliaid fod serwm CRE,Calsiwm, a gostyngwyd crynodiadau P yn sylweddol mewn llygod a oedd yn agored i 100 mg/L NaF, sy'n awgrymu bod F wedi tarfuarenswyddogaeth yn ogystal â metaboledd Ca a P (HW Wang et al., 2020). Mae nephrotoxicity a achosir gan F yn gysylltiedig âarencamweithrediad. Prydarenswyddogaeth yn dirywio, mae ysgarthiad F yn y corff yn cael ei leihau, gan arwain at groniad gormodol o fflworin yn yarena gwaethygu gwenwyndra F (Kido et al., 2017). Pan yarennauâ nam difrifol, y

mae ysgarthiad F yn yr wrin yn lleihau, ac mae crynodiad serwm F yn cynyddu ymhellach (Dharmaratne, 2019). Yn yr astudiaeth hon, gwelsom fod lefelau BUN a serwm CRE, UA, P, K mewn llygod mawr a gafodd eu trin â 100 mg/L NaF wedi cynyddu'n sylweddol, gan awgrymu bod amlygiad uchel o F wedi achosi newidiadau mewn llygod mawr.arendangosyddion biocemegol mewn llygod mawr ac arweiniodd atarenannigonolrwydd. Ymhellach, fe wnaethom hefyd dynnu sylw at y ffaith bod amrywiol ddangosyddion yarentueddu i fod yn normal ar ôlCalsiwmatodiad. Mae'n dangos bod Ca (yn enwedig 1 y cantCalsiwm) yn cael effaith liniaru sylweddol ar achosion a achosir gan Farendifrod mewn llygod mawr.

Cistanchegallu helpu gydaarendifrod.

Apoptosisyn farwolaeth celloedd ymreolaethol a threfnus a reolir gan enynnau, a nodweddir gan ddiraddiad DNA heb lysis celloedd amlwg. Sylwodd yr astudiaeth hon mai fflworosis a achosoddarencellapoptosismewn llygod mawr. Mae FAS yn chwarae rhan fawr yn yr achosion oapoptosisac amryw glefydau. Datgelodd llenyddiaeth ddiweddar fod FAS yn cyfrynguapoptosisyn yarena achosir gan isgemia-atlifiad a leukocytes dynolapoptosiswedi'i achosi gan N-nitrosodimethylamine (Iwaniuk et al., 2019; Xu

et al., 2019). Pan fydd FAS a FAS-L yn cyfuno i ffurfio trimiwr, mae'r signal pro-apoptotig yn cael ei sbarduno. Mae astudiaeth ddiweddar wedi dangos bod F yn anwytho cellapoptosistrwy'r llwybr FAS/FAS-L (Xu et al., 2011). Yn yr astudiaeth hon, cynyddodd F yn sylweddol fynegiant mRNA a phrotein FAS a FAS-L yn yaren. Mae uwch-reoleiddio lefelau FAS a FAS-L yn awgrymu y gallai llwybrau apoptotig sy’n gysylltiedig â FAS/FAS-L fod yn rhan o’r llwybrau a achosir gan F.apoptosis. Mae recriwtio trimiwr FAS / FAS-L o FADD yn arwain at holltiad Pro-Caspase 8 i gynhyrchu Caspase 8 gweithredol, sydd yn ei dro yn actifadu Caspase 3 ac yna'n arwain atapoptosis(Li et al., 2011; Xu et al., 2011). Cadarnhaodd yr astudiaeth hon fod 100 mg/L NaF wedi'i ysgogiapoptosismewn llygod mawrarennautrwy'r llwybr FAS/FAS-L. Y canlyniad pwysicaf yw bod atodiad Ca dietegol yn gwanhau'rapoptosis- effaith ysgogi F, a briodolir i is-reoleiddio actifadu FAS/FAS-L ac actifadu eilaidd Caspases.

Mae TNF yn cytocin pleiotropig sy'n cymryd rhan mewn ystod eang o ymatebion cellog, gan gynnwys gwahaniaethu, amlhau, llid, a marwolaeth celloedd. Mae'r signal TNF yn sbarduno'r ddauapoptosisa llwybrau gwrth-apoptotig. Mae sawl math o lenyddiaeth wedi nodi bod TNF yn dominyddu a achosir gan lipopolysacaridarendifrod ac aciwt a achosir gan cisplatinarenanaf (Lee et al., 2016; Li et al., 2018). Mae TNF yn rhwymo TNF-R1, mae ei DD yn recriwtio TRADD, ac yna mae TRADD yn rhyngweithio â FADD, gan arwain at ffurfio'r DISC (Kiraz et al., 2016; Sun et al., 2003). Mae astudiaethau wedi datgelu y gall F gymell yr afu, niwron, aarenleukocyteapoptosistrwy lwybr signalau TNF (Lu et al., 2017; Singh et al., 2017; Yan et al., 2016). Yn debyg i ganlyniadau'r adroddiadau hyn, cynyddwyd mynegiadau cymharol TNF, TNF-R1, TNF-R2, a TRADD yn y grŵp F yn sylweddol yn yr arbrawf hwn. Mewn cyferbyniad, gostyngodd mynegiant y genynnau hyn yn sylweddol ar ôl yr 1 y cantCalsiwmatodiad, yn awgrymu ymyrraeth oCalsiwmyn y llwybr TNF.

Mae TRAIL yn ymwneud â rheoleiddioapoptosis, amlhau, ymateb imiwn-llidiol, ac ati. Ar hyn o bryd, credir bod TRAIL yn perthyn yn agos i ddigwyddiad a phrognosisarenclefyd (Candido, 2014). Mae mwy a mwy o lenyddiaeth wedi cadarnhau bod TRAIL yn rheoleiddio'rapoptosisoarencelloedd epithelial tiwbaidd mewn glomerulonephritis sy'n gysylltiedig â HBV aarenapoptosismewn Uromodulin-gysylltiedigarenclefyd (Johnson et al., 2017; Yang et al., 2018). Ymhellach, nododd astudiaeth fod mynegiant TRAIL wedi'i newid yn gyffredinol yn ystod y homeostasis ac amrywiolarenanafiadau (Devarapu et al., 2017). Mae TRAIL yn cysylltu â'r derbynnydd marwolaeth DR5 ac yn recriwtio FADD trwy ryngweithio'r DD, ac yna'n rhwymo i pro-Caspas 8 trwy'r parth effaith marwolaeth sy'n bodoli yn FADD i ffurfio DISC (Yuan et al., 2018). Dangosodd yr astudiaeth hon fod mynegiant TRAIL a DR5 wedi cynyddu'n sylweddol yn y grŵp F. Ar ôl ychwanegu atCalsiwm, roedd mynegiant TRAIL a DR5 yn cael ei atal. Awgrymir bodCalsiwmyn atal y llwybr TRAIL i leihau'r rhai a achosir gan Fapoptosis.

Casgliad

100 mg/L datguddiad NaF marwolaeth wedi'i ysgogi gan dderbynnyddapoptosisllwybr (FAS/FASL, TNFR/TNF, DR5/llwybrau TAITH) ac yna wedi'i ysgogiarencellapoptosismewn llygod mawr, gan achosiarenanhwylderau metabolaidd aarenannigonolrwydd, gan arwain at yarenatroffied ac anffurfiwyd corpuscles, yarenceudod capsiwl ehangu, yarentubules ffurfio cast. Fodd bynnag, mae ychwanegu 1 y cantCalsiwmi'r diet gostwng y cynnwys fflworid gwaed, lleddfu ymhellach yarenanhwylder metabolig aarenannigonolrwydd trwy'r llwybr marwolaeth derbynnydd-gyfryngol, a lleihau'n sylweddol yarenanaf (cydran Ffig. 6).

Cyfeiriadau

Daw'r ffynhonnell gan Haojie Li, Coleg Meddygaeth Filfeddygol, Prifysgol Amaethyddol Shanxi, Taigu 030801, Shanxi, PR Tsieina ac ati.