Effeithiau Gwrth-hyperglycemig A Hypolipidemig Cistanche Tubulosa

Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com

Effeithiau gwrth-hyperglycemig a hypolipidemig llygod db/db diabetig math 2 Cistanche tubulosain

Wen-Ting Xiong, et al

Haniaethol

Perthnasedd ethnopharmacolegol:Mae coesyn suddlon sych oCistanchetubulosa (Schenk) Mae R. Wight yn un elfen o bresgripsiynau meddygaeth Tsieineaidd traddodiadol ar gyfer diabetes. Fodd bynnag, bu adroddiadau gwyddonol anfodern i gadarnhau'r honiad traddodiadol hwn am y rhywogaeth Cistanche hyd yn hyn. Felly, fe wnaethom ymchwilio i effeithiauCistanchetubulosaar homeostasis glwcos a lipidau serwm mewn llygod BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J (db/db) gwrywaidd, model o ddiabetes math 2.

Deunyddiau a dulliau:Mae cynnwys verbascoside ac echinacoside oCistanchetubulosagwerthuswyd powdr gan ddefnyddio HPLC. Cyfanswm y cynnwys ffenolig, cynnwys polysacarid, a gweithgaredd gwrthocsidiolCistanchetubulosagwerthuswyd powdr hefyd. Yna, dosau gwahanol oCistanche tubulosa(cyfwerth â 120.9, 72.6, neu 24.2 mg verbascoside/kg) yn cael eu rhoi ar lafar unwaith y dydd am 45 diwrnod i db/dbmice gwrywaidd. Defnyddiwyd llygod db/þ sy'n cyfateb i oedran fel rheolyddion arferol. Yn ystod yr arbrawf mesurwyd pwysau corff, glwcos gwaed ymprydio, glwcos gwaed ôl-frandio, a phrofion goddefgarwch inswlin. Ar adeg yr aberth, casglwyd gwaed ar gyfer mesur lefel inswlin, asesiad model homeostatig ymwrthedd inswlin (HOMA-IR), a chyfanswm lefelau colesterol, triglyserid, HDL-c, LDL-c, a VLDL-c; cynaeafwyd cyhyr afu ar gyfer mesur lefelau glycogen.

Canlyniadau: Cistanchetubulosaatal yn sylweddol y lefelau uwch o glwcos yn y gwaed ymprydio a glwcos gwaed ôl-prandial, gwell ymwrthedd inswlin a dyslipidemia, ac atal colli pwysau corff llygod indb/db. Fodd bynnag,Cistanchetubulosanid oedd yn effeithio'n sylweddol ar lefelau inswlin serwm na lefelau glycogen hepatig a chyhyr.

Casgliad:Mae'r astudiaeth hon yn darparu tystiolaeth wyddonol ar gyfer y defnydd traddodiadol oCistanchetubulosai drin diabetes, sy'n awgrymu hynnyCistanchetubulosaâ'r potensial i ddatblygu'n gynhwysyn bwyd swyddogaethol neu'n gyffur i atal hyperglycemia a thrin hyperlipidemia.

Geiriau allweddol:Cistanchetubulosa, diabetes math 2,Effaith gwrth-hyperglycemig, effaith Hypolipidemig

1. Rhagymadrodd

Mae diabetes mellitus (DM) yn anhwylder metabolig cynyddol a chymhleth a nodweddir yn bennaf gan lefelau glwcos gwaed annormal o uchel (hyperglycemia) (Tiwari a Rao, 2002; Stumvollet al., 2005; Nathan et al., 2009). Mae gan tua 90 y cant o'r 347 miliwn o gleifion â diabetes ledled y byd DM math 2 (nad yw'n ddibynnol ar inswlin) (Danaei et al., 2011). Mae tri diffyg metabolaidd mawr yn cyfrannu'n gyson at hyperglycemia mewn cleifion â DM math2: secretiad inswlin diffygiol, allbwn glwcos hepatig uchel, ac ymwrthedd i inswlin (Bavenholm et al., 2001). Gall DM Math 2 fyrhau disgwyliad oes ac mae’n cynrychioli baich meddygol ac economaidd sylweddol (Gakidou et al., 2011)

Mae pathogenesis math 2 DM yn aml-ffactor ac mae wedi'i gysylltu â ffactorau genetig a ffordd o fyw (Stumvoll et al., 2005). Ymyriadau ffordd o fyw wedi'u cyfuno â rhai llafargwrth-hyperglycemigcyffuriau yw'r dull arferol o reoli DM math 2. Cyffuriau llafar yfer agwrth-hyperglycemigeffaith trwy naill ai wella'r tri phrif ddiffyg metabolaidd sy'n achosi hyperglycemia neu trwy leihau'r cynnydd ôl-frandio mewn lefelau glycemig trwy rwystro treuliad carbohydradau ac amsugno yn y perfedd.

Er bod dosbarthiadau lluosog o gyffuriau effeithiol wedi dod yn ddewisiadau cydnabyddedig ar gyfer therapi meddygol yn y rhan fwyaf o gleifion DM math 2, mae gan nifer o'r cyffuriau synthetig hyn sgîl-effeithiau difrifol.Er enghraifft, mae rosiglitazone a pioglitazone yn cynyddu nifer yr achosion o gnawdnychiant myocardaidd, methiant gorlenwad y galon, ac oedema ymylol, ac maent yn gysylltiedig â risg uwch o garcinogenesis a hyd yn oed farwolaeth ar ôl defnydd hirdymor (Nissen a Wolski, 2007; Zhang et al., 2007; Home et al., 2009). Felly, mae angen hanfodol ar gyfer darganfod asiantau amgen a fyddai'n gwneud gweithgaredd gwrthhyperglycemig ond yn cael llai o sgîl-effeithiau. O'i gymharu â chemegau tosynthetig, yn deillio'n naturiolgwrth-hyperglycemigmae gan asiantau, fel perlysiau a meddyginiaethau traddodiadol, hanes hir o ddefnydd a gallant gynrychioli ffynonellau posibl diogel o newydd yn gyffredinol.gwrth-hyperglycemigcyffuriau (Yeh et al., 2003).

Mae Cistanche, genws o blanhigion parasitig sy'n perthyn i'r teulu Orobanchaceae, yn cael ei ddefnyddio'n gyffredin fel meddyginiaeth draddodiadol ar gyfer anhwylderau iachâd ac anffrwythlondeb, yn ôl y Pharmacopeia Tsieineaidd (Comisiwn Pharmacopoeia Tsieineaidd, 2010). Fel y'i cofnodwyd mewn llyfrau meddygaeth Tsieineaidd fel BenCao TuJing a Nature ofDrug, mae'r genws Cistanche hefyd wedi'i ferwi â chig dafad, tatws, neu reis i gynhyrchu bwyd tonic i drin nam a achosir gan or-sain ers cannoedd o flynyddoedd, sy'n awgrymu bod y genws Cistanche yn ddiogel i cymryd ar lafar.

Mewn meddygaeth Tsieineaidd draddodiadol, cyfeirir at DM fel thesymptom "Xiao Ke", ac mae wedi cael ei drin ers canrifoedd gan ddefnyddio perlysiau Tsieineaidd. Mae coesyn suddlon sych y rhywogaeth Cistanche yn cael ei ddefnyddio'n draddodiadol fel cydran o naw presgripsiwn gwrth-ddiabetes ("Xiao Ke Fang") yn y llyfr meddygaeth Tsieineaidd traddodiadol Sengji Zonglu. Fodd bynnag, hyd yn hyn, ni chafwyd unrhyw adroddiadau gwyddonol modern i gadarnhau'r honiad traddodiadol hwn am y rhywogaeth Cistanches.

Cistanchetubulosa(Schenk) Yn ddiweddar, defnyddiwyd R. Wight, rhywogaeth Cistanche sy'n parasiteiddio gwreiddiau'r planhigyn Tamarix - sy'n cael ei drin yn bennaf o amgylch anialwch Taklamakan - i gynhyrchu te ar unwaith i'w ddefnyddio fel bwyd swyddogaethol (DaZhongWeiShengBao, 2010; Baidu Pedia, 2011) .

Cistanchetubulosayn cynnwys symiau sylweddol o glycosidau ffenylethanoid (PhGs), iridoids, lignans, alditols, oligosacaridau, polysacaridau, a chyfansoddion anweddol fel palmiticacid ac asid linoleig (Song et al., 2000; Jiang a Tu, 2009). Credir mai PhGs yw prif gydrannau gweithredol y rhywogaeth Cistanche (Xie et al., 2006; Jiang a Tu, 2009).Cistanchetubulosaac adroddwyd bod ei gydrannau, megis PhGs, polysacaridau, a polyphenolau, yn arddangos gwrthocsidiol da (Denget al., 2004; Pellati et al., 2004; Frum et al., 2007; Sui et al., 2011; Wang et al., 2011), effeithiau gwrth-gorbwysedd (Ahmad et al., 1995) a cholesterol hypo (Shimoda et al., 2009). Mae nifer o adroddiadau wedi nodi bod PhGs, polysacaridau, a polyffenolau yn cyflawnigwrth-hyperglycemigeffeithiau neu gael dylanwad buddiol intype 2 DM trwy chwilota radical rhydd a modiwleiddio straen ocsideiddiol a achosir gan glwcos (Pinto et al., 2010; Saltiel, 2001; Gulati et al., 2012). Mae'r cydrannau a'r bioweithgareddau hyn oCistanchetubulosaawgrymu y gellir ei ddefnyddio o bosibl ar gyfer trin DM math 2. Oherwydd absenoldeb adroddiadau yn disgrifio effeithiauCistanchetubulosawrth drin DM, roeddem yn meddwl ei bod yn werth ymchwilio i weithgarwch gwrth-diabetig sy'n gysylltiedig â diabetes.Cistanchetubulosa. Felly, archwiliwyd effeithiauCistanchetubulosaar hyperglycemia a dyslipidemia mewn llygod BKSdb/db (BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J, rhif stoc Labordy Jackson 00642), model o DM math 2 sy'n dangos llawer o nodweddion DM dynol gan gynnwys hyperglycemia cynyddol, ymwrthedd i inswlin a gordewdra (Hummel et al., 1966; Nishina et al., 1994; Uchida et al., 2005; Srinivasan a Ramarao, 2007).

2. Deunyddiau a dulliau

2.1. Cemegau

Prynwyd Verbascoside ( purdeb 493 y cant ) ac echinacoside ( purdeb 493 y cant ) gan y Sefydliadau Cenedlaethol ar gyfer Rheoli Bwyd a Chyffuriau (Beijing, Tsieina). Prynwyd methanol gradd HPLC o Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, UDA). Prynwyd Acarbose o Bayer (West Haven, CT, UDA). Cynhyrchwyd dŵr wedi'i buro gan ddefnyddio System Integral 3 aMillipore Milli-Q a System Milli-Q Q-POD (Bedford, MA, UDA).

2.2. Paratoi powdr Cistanche tubulosa

Mae'r coesynnau suddlon sych oCistanchetubulosa(Cod Sampl 109092, sy'n cael ei drin yn Hetian, Xinjiang, Tsieina) eu prynu oddi wrth Xinjiang Guru Biology Co. Ltd. (Hetian, Xinjiang, Tsieina). Cafodd y gwreiddiau sych eu malu'n bowdr, eu hidlo trwy ridyll rhwyll, cymysg yn drylwyr, wedi'i selio mewn pecynnau bach i ynysu'r powdr rhag golau a lleithder, a'i storio ar 4 1C.

2.3. Adnabod Cistanche tubulosa

Nodwyd coesyn suddlon sych sampl 109092 o'u nodwedd forffolegol gan yr Athro DeXiang Gu a'r Athro Xin Liu, sy'n arbenigwyr ar rywogaethau Cistanche. Canfuwyd y samplau ymhellach trwy ddilyniannu DNA. Cafodd cyfanswm DNA genomig ei ynysu o sampl 109,092 gan ddefnyddio Pecyn DNA AmlffynhonnellGenomig AxyPrep™ (Axygen, CA, UDA). Mwyhawyd y rhanbarth ITS sy'n cynnwys y darn rDNA5.8S gan ddefnyddio dilyniannau preimio o ITS1/ITS2 5′ CGT AAC AAG GTT TCC GTA GAA 3′ a 5′ TTA TTG ATA TGCTTA AAC TCA GCG GG 3′ (Genomeg BGI, Shenzhen, Tsieina), gyda dull a ddisgrifiwyd gan Schneeweiss et al. (Schneeweiss et al., 2004). Cafodd y DNA chwyddedig ei ddilyniannu gan BGI (BGI Genomeg, Shenzhen, Tsieina), a chymharwyd y canlyniad â'rCistanchetubulosaDilyniant rDNA 5.8s ar GenBank.

2.4. Dadansoddiad HPLC

Defnyddiwyd dau PhG, echinacoside a verbascoside, fel safonau ansawdd ar gyferCistanchetubulosa, yn ôl y Pharmacopeia Tsieineaidd (Comisiwn Pharmacopoeia Tsieineaidd, 2010). HPLC yw'r un a ddefnyddir amlaf ar gyfer ansoddol a meintiol PhGs. Felly, mae cynnwys verbascoside ac echinacoside oCistanchetubulosapenderfynwyd ar ein dull HPLC a gyhoeddwyd yn flaenorol (Zhao et al., 2011). Yn fyr, 0.1 gCistanchetubulosaychwanegwyd powdr at 1{{10}} ml o ddŵr wedi'i buro a'i droi'n vortex yn ddwys ar ysgydwr orbital (Vortex-Genie 2, Scientific Industries, Bohemia, Efrog Newydd, UDA) am 10 min ar dymheredd ystafell. Cafodd y solid ei ail-echdynnu ddwywaith o dan yr un amodau. Cyfunwyd y detholiadau, eu haddasu i 50 ml, a'u centrifugio ar 12,000g am 5 munud. Cafodd y supernatant ei hidlo trwy hidlydd chwistrell polytetrafluoroethylene mandwll 0.45 μm (PTFE) (Pall, Ann Arbor, MI, UDA). Yna, chwistrellwyd 20 ul o'r supernatant i'r System HPLC (Pwmp HPLC Deuaidd 1525, Synhwyrydd RefractiveIndex 2414, Synhwyrydd Array Photodiode 2996; Waters, Milford, MA, UDA) a oedd yn cynnwys colofn Cymesuredd C18 (4.6 mm 250 mm, 5 μm; Dyfroedd) a cholofn Guard (3.9 mm 20 mm, 5 mm; Dyfroedd); rheolwyd y system gan ddefnyddio meddalwedd EmpowerPros (Waters, Milford, MA, UDA) gyda chyfradd llif o 1 ml/munud ar 30 1C. Gwnaethpwyd y cam symudol trwy gymysgu hydoddiant dyfrllyd asid asetig A (0.5 y cant (V / V)) a hydoddydd B (methanol) i ffurfio graddiant llinol o 25-40 y cant B mewn 0-10 munud. Yr amseroedd cadw ar gyfer echinacoside a verbascoside oedd 10.4 munud a 13.6 munud, ar uchafswm amsugnedd UV o 330 nm.

2.5. Dadansoddiad o gyfanswm y cynnwys ffenolig, cynnwys polysacarid, a gweithgaredd gwrthocsidiol Cistanche tubulosa

2.5.1. Paratoi sampl

Cistanchetubulosaparatowyd dyfyniad â dŵr wedi'i buro gan ddefnyddio ein dull a gyhoeddwyd yn flaenorol (Zhao et al., 2011) gyda mân addasiadau, ar gyfer pennu cyfanswm cynnwys ffenolig, cynnwys polysacarid, a gweithgaredd gwrthocsidiol (Ffig. 1). Yn fyr, 1 gCistanchetubulosaychwanegwyd powdr i 15 ml o ddŵr wedi'i buro ar dymheredd yr ystafell, wedi'i droi'n vortex yn ddwys gan ddefnyddio siglwr orbital am 5 munud, ac adenillwyd y supernatant trwy allgyrchu ar 3000g am 15 munud. Cafodd y dyodiad ei ail-echdynnu ddwywaith o dan yr un amod. Addaswyd y supernatant cyfun i 50 ml gyda dŵr wedi'i buro a'i basio trwy hidlydd chwistrell PTFE 0.45 μm-mandwll (Pall) cyn ei ddadansoddi.

2.5.2. Dadansoddiad o gyfanswm y cynnwys ffenolig

Pennwyd cyfanswm y cynnwys ffenolig gan ddefnyddio Folin-Ciocalteureagent ac asid galig fel cyfansoddyn cyfeirio, fel y disgrifiwyd ganSingleton a Rossi (Dubois et al., 1956; Singleton a Rossi, 1965) gyda mân addasiadau. Yn gryno, 0.1 mL oCistanchetubulosacymysgwyd yr echdyniad gyda {{{0}}.9 mL dŵr wedi'i buro ac adweithydd Folin-Ciocalteu 5 mL ({3}}plygiad â dŵr distyll yn flaenorol), wedi'i ganiatáu i sefyll ar 25 1C am 3.5 mun, yna ychwanegwyd 4 mL o hydoddiant sodiwmbicarbonad (7.5 y cant w/v) at y cymysgedd a'i ddeor ar {{10}}C am 60 munud. Mesurwyd amsugnedd ar 765 nm gan ddefnyddio sbectroffotomedr (Perkin Elmer λ 25 UV-gweladwy, Waltham, MA, UDA). Pennwyd cyfanswm y cynnwys ffenolig gan ddefnyddio cromlin safonol a grëwyd gydag asid galig (0-0.6 mg / mL) fel safon. Cyfrifwyd y canlyniadau fel cyfwerthoedd miligram asid galig (GAE)/1 gCistanchetubulosapowdr crai. Cafodd yr holl brofion eu hailadrodd bedair gwaith.

2.5.3. Dadansoddiad o gynnwys polysacarid

Mae cynnwys polysacarid oCistanchetubulosaei fesur gan ddefnyddio'r dull ffenol-asid sylffwrig (Dubois et al., 1951; Duboiset al., 1956). Yn gryno, gosodwyd 1 ml o echdynnyn Cistanchetubulosa wedi'i wanhau'n briodol a 0.5 mL hydoddiant ffenol mewn tiwbiau cap sgriw, a gafodd eu capio a'u troi'n fortecs. Yna, ychwanegwyd 2.5 ml o asid sylffwrig crynodedig yn uniongyrchol at yr wyneb hylif o fewn 5 s. Yna cafodd y tiwbiau eu cau, eu troi'n fortecs am 5 s, eu deor am 2 funud ar 100 1C, a'u gadael i oeri i dymheredd ystafell cyn dadansoddi. Mesurwyd amsugnedd ar 490 nm gan ddefnyddio sbectrophotometer (Perkin Elmer λ25 UV-gweladwy) yn erbyn gwag methanol 70 y cant. Penderfynwyd ar y cynnwys polysacarid gan ddefnyddio cromlin safonol a grëwyd gyda glwcos (0-100 mg / mL) fel safon. Cyfrifwyd y canlyniadau fel canran polysacarid/Cistanchetubulosapowdr crai. Cafodd yr holl brofion eu hailadrodd deirgwaith.

2.5.4. Dadansoddiad o gyfanswm gweithgaredd gwrthocsidiol

Mae gweithgaredd gwrthocsidiol oCistanchetubulosaechdyniad, acarbose, a rosiglitazone yn cael ei bennu gan y 2,2′-amino-di (2-asid sulfonic ethyl benzothiazoline{5}}) halen amoniwm (ABTS) assay andferric ïon (Fe3þ) lleihau gwrthocsidiol assay pŵer ( FRAP) gan ddefnyddio citiau masnachol (Beyotime, Haimen, Tsieina). Gyda'r ocsidyddion priodol, gellir ocsideiddio ABTS yn ABTS gwyrdd þ; Gall gwrthocsidyddion atal y broses hon. Gellir adlewyrchu cyfanswm y gweithgaredd gwrthocsidiol o gwrthocsidyddion gan amsugnedd ABTS þ yn 734 nm.Absorbance ei fesur yn 734 nm (ABTS) gan ddefnyddio microplatereader (Epoch, Bio-Tek, Richmond, VT, UDA), gyda Trolox (ABTS) safon gwrthocsidiol asan. Cyfrifwyd canlyniadau assay ABTS fel powdr mM Trolox Cyfwerth Gwrthocsidydd (TEAC)/1 g.

O dan amodau asidig, gall gwrthocsidyddion adfer ferrictripyridyltriazine (Fe3þ-TPTZ) yn Fe2þ-TPTZ glas. Gall cyfanswm gweithgaredd gwrthocsidiol gwrthocsidyddion gael ei adlewyrchu gan amsugnedd Fe2þ-TPTZ ar 593 nm. Mesurwyd amsugnedd ar 593 nm (FRAP) gan ddefnyddio darllenydd microplate (Epoch), gyda FeSO4 (FRAP) fel y safon gwrthocsidiol. Cafodd canlyniadau'r assay FRAP eu cyfrifo fel powdr mM FeSO4 Cynhwysedd Gwrthocsidiol Cyfwerth (FEAC)/1g. Cafodd yr holl brofion eu hailadrodd bedair gwaith.

2.6. Effeithiau Cistanche tubulosa ar hyperglycemia mewn llygod db/db

2.6.1. Anifeiliaid a grwpiau triniaeth

Cafodd llygod BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J (db/db) gwrywaidd a’u sbwriel heterosygotes nad yw’n cyfateb i’w hoedran (db/þ) eu darparu’n garedig yn 5–6 wythnos oed gan y Ganolfan Adnoddau Genedlaethol ar gyfer Model Llygod Mutant Canolfan Ymchwil Anifeiliaid Prifysgol Nanjing (Nanjing, Tsieina). Cymeradwywyd y gofal anifeiliaid a'r gweithdrefnau arbrofol gan Bwyllgor Moeseg Anifeiliaid Labordy yr Ysgol Gwyddorau Bywyd, Prifysgol Sun Yat-sen (cod cymeradwyo 0046500), ac fe'u perfformiwyd yn unol â Rheoliadau Arbrofion Anifeiliaid Tsieina. Cafodd yr anifeiliaid eu cartrefu mewn ystafell gradd 2272 1C-benodol heb bathogen (SPF) ar 6075 y cant o leithder o dan gylchred golau-tywyll o 12 h, ac yn bwydo diet wedi'i buro AIN{-93G (Trophic Animal Feed High- tech Co., Ltd., Nantong, Tsieina) a darparodd ddŵr wedi'i buro ad libitum.

Saith diwrnod ar ôl cyrraedd, rhoddwyd dŵr pur (cerbyd) i’r llygod db/þ di-diabetig fel grŵp rheoli arferol ar gyfer y grwpiau diabetig (n¼7), tra bod y llygod db/db diabetig yn cael eu pwyso a’u rhannu ar hap yn 6 grŵp (n¼8) i ymchwilio. effeithiauCistanchetubulosamewn llygod db/db diabetig math 2 (Tabl 1). Rhoddwyd y cerbyd ar lafar i'r llygod Thedb/þ, a rhoddwyd y cerbyd ar lafar i lygod db/db, rosiglitazone (0.52 mg/kg/day), acarbose (19.5 mg/kg/day), neu dri dos oCistanchetubulosa(sy'n cyfateb i 120.9, 72.6 neu 24.2 mg verbascoside/kg/day a chyfeirir atynt fel CT120.9, CT72.6 neu CT24.2, yn y drefn honno) ar gyfer aditionedd o 45 diwrnod. Mae dosau oCistanchetubulosaeu gosod yn ôl y dos powdr crai a argymhellwyd gan Pharmacopeia Gweriniaeth Pobl Tsieina (PPRC);Cistanchetubulosadosau o 120.9, 72.6, a 24.2 mg verbascoside/kg/day sy'n cyfateb i 5-plyg, 3-plyg, a 1-gwanedu plyg o'r dogn powdr crai a argymhellir gan y PPRC. Cafodd yr holl samplau prawf ar gyfer gweinyddiaeth lafar eu hydoddi mewn dŵr wedi'i buro ar grynodiadau addas er mwyn rhoi cyfeintiau tebyg o samplau prawf i lygod â'r un pwysau corff. Cyfanswm y cyfeintiau a weinyddwyd oedd o1 mL, a rhoddwyd y samplau prawf ar lafar i bob grŵp o lygod bob dydd rhwng 16:30 a 17:30 am 45 diwrnod. Cafodd lefelau pwysau corff a glwcos yn y gwaed eu monitro trwy gydol y cyfnod arbrofol. Ar ddiwedd yr arbrawf (diwrnod 50), ymprydiodd y llygod am 14 h, a chasglwyd samplau gwaed o'r wythïen offthalmig, eu deor ar dymheredd yr ystafell am 30 munud, eu hallgyrchu a chafodd y samplau serwm eu storio ar 70 1C ar gyfer assay pellach. Wedi hynny, ewthaneiddiwyd y llygod. Cafodd yr iau a'r cyhyrau ysgerbydol eu cynaeafu, eu golchi mewn salin iâ i dynnu'r gwaed, eu rhewi mewn nitrogen hylifol, a'u storio ar 70 1C ar gyfer assay pellach.

2.6.2. Asesiad o lefel glwcos gwaed ymprydio (FBG), prawf goddefgarwch rhyng-peritonealinswlin (ITT), a lefel inswlin serwm ymprydio (FINS)

Mesurwyd lefelau glwcos gwaed ymprydio ar ôl ymprydio 14 h cyn dechrau'r arbrawf anifeiliaid (0 diwrnod), ar ddiwrnod 1{{1{0}} a phob 5 diwrnod yn ystod dyddiau 20–45 o'r arbrawf defnyddio system monitro glwcos yn y gwaed (ACCU-CHEK Active, Roche DiagnosticsGmbH, Mannheim, yr Almaen). Cyfrifwyd y cynnydd canrannol yng ngwerthoedd FBG (gwerthoedd cynnydd canrannol FBG: cynnydd y cant FBG) ar ddiwrnod x (diwrnod 20–45) gan ddefnyddio (BGday x BGday 0)/BG0 day 100, i gynrychioli’r cynnydd yng ngwerthoedd FBG ar gyfer pob un. grŵp o'i gymharu â'u gwerthoedd FBG cychwynnol. Penderfynwyd ar y lefelau glwcos gwaed ôl-frandio 120 munud ar ôl rhoi glwcos yn y geg (2 g / kg BW) ar ddiwrnod 40.

Cynhaliwyd yr HCA ar ddiwrnod 45 o'r arbrawf, yn dilyn ympryd dros nos (14 h). Mesurwyd lefelau glwcos yn y gwaed yn y gwythiennau cynffon cyn pigiad inswlin (0 mun) ac ar 30 mun,60 munud ar ôl pigiad rhyng-beritoneol o inswlin (0.1 IU/kg BW). Ymatebion glwcos yn ystod mynegwyd yr HCA fel ardaloedd integredig o dan gromliniau ar gyfer inswlin (AUCinsulin), a gyfrifwyd gan ddefnyddio'r trapezoidrule (Vishwakarma et al., 2003). Ar ddiwedd yr arbrawf, dadansoddwyd lefelau inswlin serwm ymprydio gan ddefnyddio pecyn ELISA llygod mawr/llygoden o Millipore (Bedford, MA, UDA); paratowyd y serumsamplau gan ddilyn cyfarwyddiadau'r cit. Cyfrifwyd y mynegai Asesiad Model Cartrefostatig o Ymwrthedd i Inswlin (HOMA-IR) gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol: inswlin ymprydio HOMA-IR¼ (ng/ml) glwcos gwaed ymprydio (mmol/L)/22.5(Matthews et al., 1985).

2.6.3. Assay o lefelau lipid serwm

Pennwyd crynodiadau cyfanswm colesterol serwm (TC), colesterol lipoprotein dwysedd uchel (HDL-c), a thriglyserid (TG) gan ddefnyddio citiau ensymatig masnachol (Biosino Biotechnology & Science Inc., Beijing, China). Cyfrifwyd lefelau colesterol lipoprotein dwysedd isel (LDL-c) fel TC-TG/5 – HDL-c, tra cyfrifwyd lefelau colesterol lipoprotein dwysedd isel iawn (VLDL-c) fel TG/5, yn ôl hafaliad Friedewald (Friedewald et al., 1972). Cyfrifwyd y mynegai atherogenig fel (TC HDL-c)/HDL-c.

2.6.4. Assay o lefelau glycogen cyhyr ysgerbydol a'r afu

Cafodd cyhyrau iau a sgerbydol wedi'u rhewi eu prosesu ar gyfer glycogenanalysis yn syth ar ôl eu tynnu o'r rhewgelloedd 70 1C. Mesurwyd cynnwys glycogen yr iau a chyhyrau ysgerbydol gan ddefnyddio pecyn glycogen masnachol (Jiancheng, Nanjing, Tsieina) yn seiliedig ar ddull Keppler a Decker (Keppler a Decker, 1974). Mesurwyd amsugnedd y samplau ar 505 nm ar ôl oeri'r tiwbiau i dymheredd ystafell. Mynegwyd faint o glycogen yn y sampl meinweoedd fel mg glwcos fesul g o feinwe.

2.7. Dadansoddiad ystadegol

Mynegir yr holl ganlyniadau fel y cymedr7SEM a chawsant eu dadansoddi gydag ANOVA o becynnau ystadegol Meddalwedd Gwyddor Gymdeithasol (SPSS 16.0, Chicago, IL, UDA) neu GraphPad Prism 5 (La Jolla, CA, UDA). Aseswyd y mynegeion HOMA-IR hefyd gan ddefnyddio'r prawf-t annibynnol dau sampl ar ôl trawsnewid logarithmig. Cyfrifwyd gwerthoedd TheAUC gan ddefnyddio GraphPad Prism 5. Ystyriwyd bod gwerthoedd P o lai na 0.05 yn dynodi gwahaniaethau ystadegol arwyddocaol.

3. Canlyniadau

3.1. Adnabod sampl Cistanche

Mae'r canlyniadau aliniad dilyniant yn dangos bod y dilyniant chwyddedig yr un peth âCistanche tubulosagenynnau ar gyfer dilyniant rhannol a chyflawn 5.8S rDNA (614 niwcleotidau; rhif derbyn Gen-Banc AB217871). Ar sail ei nodweddion morffolegol a dilyniant genynnau rDNA5.8S, nodir sampl 109,092 felCistanchetubulosa.

3.2. Penderfyniad meintiol ar gynnwys verbascoside a chynnwys echinacoside Cistanche tubulosa

Mae cynnwys verbascoside ac echinacoside ynCistanchetubulosaeu mesur trwy ddefnyddio'r safonau priodol. Theverbascoside ac echinacoside cynnwys oCistanchetubulosaoedd 2.66 y cant ac 11.59 y cant , yn y drefn honno. Mae cromatogram HPLC oCistanchetubulosadangosir dyfyniad yn Ffig. 2.

3.3. Cyfanswm cynnwys ffenolig, cynnwys polysacarid, a gweithgaredd gwrthocsidiol Cistanche tubulosa

Cyfanswm cynnwys ffenoligCistanchetubulosaoedd 66.2970.44 mg GA/g. Mae cynnwys polysacarid oRoedd Cistanche tubules10.1570.26 y cant . Nododd profion ABTS a FRAP fod y gweithgareddau gwrthocsidiol yn 1.3970.06 mM TEAC/g a 1.6170.04 mM FEAC/g ar gyferCistanchetubulosa, {{0}}.1570.01 mM TEAC/gand 0.1270.01 mM FEAC/g ar gyfer acarbose, a 0.1670.01 mMTEAC/g a 0.1370.01 mM FEAC/g ar gyfer rosiglitazone, yn y drefn honno.

3.4. Effeithiau gwrth-hyperglycemig Cistanche tubulosa mewn llygod db/db

Dangosodd ein canlyniadau hynnyCistanche tubulosayn gallu atal y lefelau glwcos gwaed ymprydio uchel a lefelau uwch o glwcos yn y gwaed ar ôl cymryd rhan, cynyddu sensitifrwydd inswlin, a gwanhau'r golled ym mhwysau corff (BW) llygod db/db diabetig. Yn gyffredinol,Cistanchetubulosayn fwy effeithiol wrth leihau hyperglycemiathan acarbose yn ystod yr arbrawf, ac ar ben hynny, roedd Cistanche tubulosa yn well nag acarbose ar gyfer gwella ymwrthedd inswlin (nodir y gwerthoedd p isod).

3.4.1. Effeithiau Cistanche tubulosa ar bwysau'r corff a'r afu

Yn y grŵp rheoli diabetig, cynyddodd BW yn gyson o fewn y 25 diwrnod cyntaf. Fodd bynnag, gyda dilyniant diabetes, gostyngodd BW llygod rheoli diabetig ychydig erbyn diwrnod 30 (Tabl Atodol 1). Yn yCistanchetubulosagrwpiau, pob tri dos oCistanchetubulosalleihau cyfradd colli pwysau o'i gymharu â llygod rheoli diabetig (heb arwyddocâd, Tabl Atodol 1). Yn y grŵp rheoli positif, arweiniodd rosiglitazone at gynnydd sylweddol ym mhwysau'r corff o'r ail ddiwrnod 0 o'i gymharu â'r grŵp rheoli diabetig (po0.05). Mewn cyferbyniad, arafodd acarbose gyfradd colli pwysau o'i gymharu â'r grŵp rheoli diabetig. Yn y grŵp rheoli arferol, cynyddodd pwysau'r corff yn gyson yn ystod yr arbrawf ac roedd yn sylweddol is na'r grŵp rheoli diabetig (po0.001).

Ar ddiwedd yr arbrawf, dim ond yn y rosiglitazonegroup (po0.001) y cynyddwyd pwysau'r afu a'r gymhareb pwysau afu/iau/corff yn sylweddol o gymharu â'r grŵp rheoli diabetig.

3.4.2. Effaith Cistanche tubulosa ar lefelau glwcos yn y gwaed

Cistanchetubulosaarddangosgwrth-hyperglycemigyn effeithio ar lygod indb/db ar ôl 20 o ddiwrnodau o weinyddiaeth lafar a gallai reoli lefel FBG a gwerth y cant FBG am gyfnod hir o amser ar db/dbmice mewn modd sy'n dibynnu ar ddos, fel y dangosir gan ymprydio gostyngol ac ôl-prandio lefelau glwcos yn y gwaed (Ffig. 3, Tabl 2). Yn y grŵp rheoli diabetig, cynyddodd y lefel FBG yn gyson yn ystod yr arbrawf ac roedd tua 6 gwaith yn uwch na'r grŵp rheoli arferol ar ddiwrnod 45 (28.3071.027 mmol/L vs.4.6670.350 mmol/L; po0.001). Pob un o'r tri dos oCistanchetubulosallesteirio'n sylweddol duedd FBG i gynyddu mewn db/db meiceduring yr arbrawf cyfan, gyda CT120.9 yn dangos yr effaith cryfesthypoglycemic (diwrnod 20, 35, a 45: po{{1{{{). 16}}}}.001; diwrnod 40: po0.05vs. rheoli diabetig). Yn y grwpiau rheoli cadarnhaol, roedd rosiglitazone (0.52 mg/kg) ac acarbose (19.5 mg/kg) hefyd yn atal yn sylweddol duedd FBG i gynyddu llygod db/db yn ystod yr arbrawf cyfan (diwrnod 2{{{41}) } i 45: po0.001, diwrnod 10: po0.05, rosiglitazonevs. rheoli diabetig; diwrnod 35: po0.001, diwrnod 40: po0.01, diwrnod 20 a 45: po0. 05, acarbose vs rheolaeth diabetig). Fodd bynnag, roedd acarbose (19.5 mg/kg) yn llai effeithiol na rosiglitazone (diwrnod 20: po0.05; diwrnod 30: po0.01; diwrnod 35-45: po0.001) a CT120.9 (diwrnod 45: po0.001) . Yn y grŵp rheoli arferol, arhosodd lefel FBG yn gyson yn ystod yr arbrawf cyfan ac roedd yn sylweddol is na lefel y grŵp rheoli diabetig (po0.001).

Ar ôl gweinyddu am 20 diwrnod,Cistanche tubulosallesteirio'n sylweddol y cynnydd mewn lefelau glwcos yn y gwaed mewn llygod db/db (Ffig. 3). Cynyddodd gwerthoedd canran cynnydd FBG y grŵp rheoli diabetig a grŵp acarbose (19.5 mg / kg BW) yn ystod yr arbrawf. Mae'r FBG - cynyddu gwerthoedd canrannol y triCistanchetubulosacynyddodd grwpiau ychydig ar ddiwrnod 30 yn unig. Arhosodd gwerthoedd canrannol cynnydd FBG y grŵp CT120.9 yn gyson rhwng diwrnod 30 a diwrnod 45, tra cynyddodd CT72.6 a CT24.2 yn ddi-nod (t40.05) erbyn dydd 45. Erbyn diwedd y dydd yr arbrawf, y tri dos oCistanchetubulosa(CT120.9, CT72.6, a CT24.2) atal yn sylweddol y cynnydd yn y gwerthoedd y cant FBG-cynnydd o 181.5 y cant , 151.72 y cant , a 123.58 y cant o'i gymharu â'r grŵp rheoli diabetig (PO {{ {{{{{}). 24}}.001), yn y drefn honno. O ddiwrnod 20 i ddiwrnod 40, roedd gwerthoedd canrannol cynnydd FBG y tri grŵp Cistanche tubulosa yn is neu'n debyg i'r grŵp acarbose (t40.05). Ar ddiwrnod 45, roedd canran y cynnydd FBG o'r grŵp CT120.9 yn sylweddol is na'r grŵp acarbose (po0.01).

Cistanchetubulosadangos effeithiau hypoglycemice dos-ddibynnol (Tabl 2). Ar ddiwedd yr arbrawf, roedd lefelau FBG y grŵp CT120.9 yn sylweddol is na'r rheolaeth ddiabetig, carbos, a dau arall.Cistanchetubulosagrwpiau (CT120.9 vs.acarbose, CT72.6, a CT24.2, po0.01; CT120.9 vs. rheoli diabetig,po0.001; Tabl 2). Erbyn diwedd yr arbrawf, mae lefelau FBG o'r triCistanchetubulosaRoedd grwpiau (CT120.9, CT72.6, a CT24.2) wedi cynyddu 53.41 y cant, 83.19 y cant, a 111.33 y cant, yn y drefn honno, o gymharu â'u lefelau FBG cychwynnol, tra bod lefelau FBG y grŵp rheoli diabetig a'r grŵp acarbose wedi cynyddu 234.91 y cant a 150.76 y cant. O'r tri dos o Cistanche tubulosa a brofwyd, dim ond CT120.9 a arweiniodd at lefelau FBG a oedd yn gyson is yn ystod yr arbrawf cyfan. Roedd CT72.6 a CT24.2 yn llai effeithiol o ran lleihau lefel FBG na CT120.9 (Tabl 2, Ffig Atodol 1). Dim ond o ddiwrnod 30 y cynyddodd lefelau FBG y grŵp CT120.9, tra bod lefelau FBG y ddau arallCistanchetubulosacynyddodd grwpiau a'r grŵp acarbose yn gyflymach. O ddiwrnod 10 i 40, lefelau FBG o driCistanchetubulosaroedd grwpiau'n is neu'n debyg i'r grŵp theacarbose (19.5 mg/kg BW); nid oedd y gwahaniaethau hyn yn ystadegol arwyddocaol (t40.05).

Ar ddiwrnod 40, rhwystrodd CT120.9 y drychiad yn lefel y glwcos yn y gwaed ôl-prandol yn sylweddol (po0.05, Tabl 2) 2 awr ar ôl dogn llafar unigol o glwcos (2 g/kg). Roedd effaith CT120.9 ar lefel y glwcos yn y gwaed ôl-frandio mewn llygod db/db yn debyg i 19.5 mg/kg acarbose (t40.05). Roedd effaith CT72.9 aCT24.2 yn llai effeithiol na rosiglitazone (po0.001).

3.4.3. Effaith Cistanche tubulosa ar lefel inswlin serwm ymprydio a goddefgarwch inswlin rhyng-beritoneol

Dangosodd canlyniadau'r FINS, ar ôl rhoi trwy'r geg am 45 diwrnod, fod CT120.9 wedi codi lefel inswlin serwm (p40.05) mewn llygod db/db 40.73 y cant yn sylweddol, tra bod rosiglitazone wedi codi lefel inswlin serwm yn sylweddol 58.90 y cant (po0.05 vs.diabetig rheoli; Tabl 3).

Cyfrifwyd mynegai HOMA-IR i asesu'n feintiol gyfraniadau ymwrthedd inswlin a swyddogaeth celloedd diffygiol i'r hyperglycemia ymprydio. O'i gymharu â'r grŵp rheoli diabetig, fe wnaeth CT120.9 wella'n sylweddol fynegai sensitifrwydd systemicinswlin HOMA-IR 15.30 y cant (p40.05), tra bod rosiglitazone wedi gwella'n sylweddol fynegai HOMA-IR 35.30 y cant (PO0.001 vs. rheoli diabetig; Tabl 3). Defnyddiwyd yr HCA i werthuso effaithCistanchetubulosaar sensitifrwydd inswlin ar ôl pigiad inswlin alldarddol. Dangosodd y canlyniadau fod CT120.9 wedi gwella ymateb yrinswlin mewn llygod db/db diabetig. Roedd effaith CT120.9 yn debyg i rosiglitazone ac roedd yn well nag acarbose. CT12{{10}}.9 a rosiglitazone wedi lleihau lefelau glwcos yn y gwaed yn sylweddol ar 0 mun (cyn inswlin pigiad,po0.001 vs. diabeticcontrol) a 30 mun (po0.01 ar gyfer CT120.9,po0.001 ar gyfer rosiglitazone) ar ôl y pigiad o inswlin (Ffig. 4). Gostyngodd CT120.9 a rosiglitazone yr AUCinsulin 27.92 y cant a 43.89 y cant o'i gymharu â rheolaeth ddiabetig. Nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol rhwng lefelau glwcos yn y gwaed yn y grwpiau CT120.9 a rosiglitazone ar unrhyw adeg yn ystod yr HCA. Roedd lefelau glwcos gwaed y grŵp CT120.9 yn sylweddol is nag acarbose ar 0 munud (cyn pigiad inswlin, po0.01: CT120.9 vs acarbose), 30 munud (po0.01: CT120.9 vs acarbose), a 60 min (po0.05: CT120.9 vs. acarbose)ar ôl y pigiad o inswlin (Ffig. 4). Gostyngodd CT120.9 yr AUCinsulin 28.79 y cant o'i gymharu ag acarbose. Ni chafodd Acarbose, CT72.6, a CT24.2 unrhyw effeithiau sylweddol ar y lefelau AUCinsulin na glwcos yn y gwaed ar unrhyw adeg o'r HCA. Roedd FIN ac ITTresults y grŵp rheoli arferol yn sylweddol is na rhai'r grŵp rheoli diabetig (po0.05: FIN; po0.001: ITT).

3.4.4. Effaith Cistanche tubulosa ar lefelau cyhyrglycogen yr afu a'r ysgerbydol

Mae'r lefelau glycogen mewn meinweoedd amrywiol yn adlewyrchiad uniongyrchol o sensitifrwydd inswlin, gan fod inswlin yn hyrwyddo dyddodiad glycogen mewngellol. Gostyngodd Rosiglitazone lefel glycogen yr iau yn sylweddol 59.61 y cant (po0.001), a chynyddodd lefel glycogen y cyhyrau 33.93 y cant (po0.05 vs. rheolaeth diabetig). Gostyngodd CT24.2 lefel glycogen yr afu 30.41 y cant (po0.05 vs. rheolaeth diabetig). Ni chafodd y dosau is o Cistanche tubulosa unrhyw effaith sylweddol ar lefelau glycogen yr iau na'r cyhyrau ysgerbydol.

3.5. Effeithiau hypolipidemig Cistanche tubulosa mewn llygod db/db

I werthuso effeithiauCistanchetubulosaar ddyslipidemia, fe wnaethom bennu lefelau cyfanswm y colesterol, TG, HDL-c, LDL-c, aVLDL-c mewn llygod db/db. Mae ein canlyniadau yn dangos hynnyCistanchetubulosayn gallu gwella dyslipidemia trwy gynyddu lefelau HDL-c, lleihau lefelau TG, LDL-c, a VLDL-c yn ogystal â lleihau lefelau colesterol mewn llygod db / db. Gostyngodd CT120.9 (po0.05) a CT24.2(po0.001) y lefel TC mewn db/dbmice diabetig yn sylweddol (Tabl 3 ) o'i gymharu â rheolaeth diabetig. O'r holl grwpiau arbrofol, dim ond CT24.2 a leihaodd lefelau TG(po0.05) a VLDL-c (po0.05) yn sylweddol o gymharu â rheolaeth ddiabetig. Tri dos i gyd oCistanchetubulosagostwng lefel lefel LDL yn sylweddol (po0.01 ar gyfer CT120.9, po0.05 ar gyfer CT72.6, po0.001 ar gyferCT24.2, yn erbyn rheoli diabetig) . Pob un o'r tri dos oCistanchetubulosa(CT120.9, CT72.6, a CT24.2) yn ansylweddol dyrchafedig y HDL-clevel gan 9.78 y cant , 7.32 y cant , a 7.78 y cant (p40.05 vs. rheoli diabetig).

O'r paramedrau lipid hyn, lefel HDL-c/TC isel yw'r ffactor risg annibynnol mwyaf arwyddocaol ar gyfer clefyd rhydwelïau coronaidd.CT120.9 (po0.05) a CT24.2 (po0.001 vs. rheolaeth diabetig) yn sylweddol uwch na lefel HDL-c/TC. Gostyngwyd y mynegai atherogenig, sy'n ffactor risg ar gyfer clefyd rhydwelïau coronaidd, gan bob tri dos oCistanchetubulosa(po{{{0}}.001 ar gyfer CT120.9 aCT24.2, po0.01 ar gyfer CT72.6 vs. rheoli diabetig).

Yn y grŵp rheoli positif, cododd rosiglitazone yn sylweddol lefelau TC (po{{{{}}}}.001) a LDL-c (po0.01) o gymharu â rheolaeth ddiabetig. Fe wnaeth Rosiglitazone hefyd godi lefel HDL c yn sylweddol 57.32 y cant (po0.001) ond ni chafodd unrhyw effaith fuddiol ar lefel theHDL-c/TC na mynegai atherogenig. Ni chafodd Acarbose unrhyw effaith arwyddocaol ar y mynegeion lipid serwm mewn llygod db/db.

4. Trafodaeth

Cynlluniwyd yr astudiaeth bresennol i ymchwilio i weithgaredd gwrthhyperglycemig a hypolipidemig posiblCistanchetubulosa.

Roedd canlyniadau'r asesiad in vitro yn nodi hynnyCistanchetubulosayn cynnwys swm gwerthfawr o ffenolig a polysacaridau, ac yn arddangos gweithgaredd gwrth-ocsidydd da. Cyfanswm y cynnwys ffenolig oCistanche tubulosayn is na chyfanswm ffenoliccontent te (Ankolekar et al., 2011) a choffi (Chu et al., 2011), ac yn uwch na llawer o rai eraillhyperglycemigperlysiau fel llugaeron (Pinto et al., 2010), gwymon (Nwosu et al., 2011), gwygbys (Sreerama et al., 2012) a rhai o'r planhigion meddyginiaethol traddodiadol a ddefnyddir i reoli math 2 DM (Gulatiet al., 2012). Mae cynnwys polysacarid Cistanche tubulosa yn is na chynnwys polysacarid Panax ginseng (Wanget al., 2011) a the (Chu et al., 2011), ac yn uwch na llawer o rai eraillgwrth-hyperglycemigperlysiau fel Aloe vera L. (Hu et al., 2003), jujuba (Sun et al., 2011), Polyporus umbellatus (Tian et al., 2007), Rheum palmatum (Ni et al., 2007) a rhai o y planhigion meddyginiaethol traddodiadol a ddefnyddir i reoli DM math 2 (Gulatiet al., 2012). Mae planhigion sydd â chynnwys uchel o wrthocsidyddion, fel polyphenols a glycosidau ffenylethanoid (PhGs), yn cael eu nodi'n aml i feddu ar weithgaredd gwrth-ddiabetes, sydd o leiaf yn rhannol oherwydd eu gallu i leihau straen ocsideiddiol (Pinto et al., 2010; Saltiel, 2001; Gulati et al., 2012). Mae ein canlyniad prawf gwrthocsidiol yn gyson ag adroddiadau blaenorol (Arthur et al., 2011;gwrth-Baoet al., 2010; Funes et al., 2009) a nododd hynnyCistanchetubulosayn meddu ar briodweddau gwrthocsidiol sylweddol. Roedd gwerth TEAC a gwerth FRAP Cistanche tubulosa yn uwch na gwyrddlas, moron, ciwcymbr, letys gwyrdd, seleri (Pellegrini et al., 2003), a rhai planhigion eraill gyda'r effeithiau gwrthocsidiol da a ddefnyddir i drin diabetes (Rahimi et al. , 2005), ac roedd yn llawer uwch na acarbose a rosiglitazone. Mae treialon clinigol blaenorol wedi dangos y gallai asid -lipoic (Konrad et al., 1999) neu wrthocsidyddion eraill (Paolisso et al., 1992) wella sensitifrwydd inswlin mewn cleifion sy'n gwrthsefyll inswlin a / neu gleifion diabetig. Felly, mae Cistanchetubulosa yn ffynhonnell gwrthocsidyddion a all gael effeithiau amddiffynnol yn erbyn diabetes a chymhlethdodau diabetes hirdymor.

Mae rhywogaethau cistanche wedi cael eu defnyddio fel bwyd tonig neu feddyginiaeth am gannoedd o flynyddoedd, sy'n awgrymu eu bod yn ddiogel i'w cymryd ar lafar. Dangosodd adroddiad blaenorol o 14 diwrnod prawf gwenwyndra acíwtCistanchetubulosadyfyniad yn perthyn i nontoxic gwirioneddol: y Dos Uchaf a Goddefir (MTD) o'rCistanchetubulosacanfuwyd bod echdyniad yn 410 g/kg mewn llygod. Ni chofnodwyd unrhyw farwolaethau trwy gydol 14 diwrnod o fonitro, ac ni ddangosodd llygod a brofwyd o bob grŵp unrhyw arwyddion o wenwyndra yn ystod arsylwi 24 awr a 14 diwrnod (Zhang et al., 2012). Mae'r dos uchaf yn ein harbrawf, 5.084 g CTAE /kg BW/day, sy'n cyfateb i 9.10 g o bowdr crai / kg mewn llygod, yn llawer is na'r MTD. Felly, mae'r dos yn ddiogel yn ein harbrawf.

Math 2 DM yw un o'r clefydau metabolaidd mwyaf cyffredin a difrifol yn y byd ac fe'i nodweddir yn bennaf gan hyperglycemia. Yn yr astudiaeth hon, mabwysiadwyd llygod BKS.Cg-Dock7m þ/þ Leprdb/J(db/db) fel model o DM math 2 i ymchwilio i effeithiauCistanchetubulosaar metaboledd glwcos a lipid in vivo. Mae db/dbmice yn fodel cnofilod genetig a dderbynnir yn dda o glefydau metabolaidd sy'n gysylltiedig â ffordd o fyw, sy'n arbennig o ddefnyddiol ar gyfer gwerthuso asiantau gwrth-diabetig a gwrth-ordewdra. Mae'r straen hwn o lygod yn cario amwtasiwn yn y genyn derbynnydd leptin, yn arddangos hyperglycemia, hyperlipidemia, ymwrthedd i inswlin, a gordewdra erbyn 6-7 wythnos oed (Hummel et al., 1966; Nishina et al., 1994; Uchida et al., 2005; Srinivasan a Ramarao, 2007).

Gyda datblygiad diabetes, gallai'r gostyngiad bach ym mhwysau corff y grŵp rheoli diabetig (Tabl Atodol 1) arwain at y gostyngiad yn lefel inswlin plasma sy'n digwydd mewn llygod diabeticdb/db 10-12 wythnos oed (Hummel et al., 1966) a mwy o effeithlonrwydd metabolig mewn llygod db/db diabetig (Trayhurn, 1979). Cynyddodd cyfradd colli pwysau ym mhob un o'r tri dos oTiwbiau Cistancheefallai oherwydd y ffaith bodCistanchetubulosahefyd yn codi'r lefelau inswlin hynwm (Tabl 3), sy'n fuddiol ar gyfer DM. Arweiniodd Rosiglitazone at gynnydd sylweddol ym mhwysau'r corff, sy'n sgîl-effaith hysbys o rosiglitazone. Nododd y cynnydd sylweddol mewn pwysau afu a'r gymhareb pwysau afu/corff yn y grŵp rosiglitazone (po0.001) y gallai rosiglitazone achosi croniad lipid a newidiadau swyddogaethol yn yr afu.

Roedd canlyniadau'r assay in vivo yn dangos hynnyGallai tiwbyn Cistancheatal y lefelau uwch o glwcos yn y gwaed ymprydio a lefelau uwch o glwcos yn y gwaed ôl-frandio, a mwy o sensitifrwydd i inswlin llygod db/db. Yn gyffredinol,Cistanchetubulosayn fwy effeithiol o ran lleihau hyperglycemia a dyslipidemia a gwella ymwrthedd i inswlin nag acarbose yn ystod yr arbrawf.

Ar ôl 20 diwrnod o weinyddiaeth lafar,Cistanchetubulosallesteirio'n sylweddol y tueddiadau cynyddol o lefel FBG a FBG - cynyddu gwerth canrannol ar lygod db/db yn gyson. Ar ddiwedd yr arbrawf,Cistanchetubulosadangosodd eigwrth-hyperglycemigeffaith mewn modd sy'n dibynnu ar ddos. Mae'r canlyniadau hyn yn dangos hynnyCistanchetubulosayn gallu gweithredu fel cyfrwng gostwng glwcos gwaed posibl pan gaiff ei roi ar y dos priodol. Mae'r rhan fwyaf o waredu glwcos yn digwydd mewn cyhyr ysgerbydol ar ôl pryd o fwyd, tra bod lefelau FBG yn cael eu pennu'n bennaf gan allbwn glwcos yr afu. Roedd canlyniadau FBG yn dangos hynnyCistanchetubulosagwella allbwn glwcos hepatig llygod db/db yn sylweddol; allbwn glwcos gwaelhepatig yw un o'r tri diffyg metabolaidd mawr mewn DM math 2 sy'n cyfrannu at hyperglycemia (Bavenholm et al.,2001). Ar ddiwrnod 30, roedd gwerthoedd canran cynnydd FBG y grŵp rheoli diabetig yn is na'r lefelau disgwyliedig, a allai esbonio'r ffaith mai dim ond CT72.6 (po0.01), acarbose (po0.05), androsiglitazone ( po0.001) wedi gostwng yn sylweddol y cynnydd mewn FBG o'i gymharu â'r grŵp rheoli diabetig.

Gyda'i gilydd, mae'r canlyniadau yn Nhabl 2 yn dangos hynnyCistanchetubulosawedi rheoli lefel y glwcos yn y gwaed ôl-frandio uchel yn effeithiol ar ôl llwytho glwcos, gan awgrymu bod Cistanche tubulosa yn asiant ymgeisiol ar gyfer lleddfu hyperglycemia ôl-frandio. Mae lefel glwcos gwaed ôl-prandial uchel yn ffactor risg annibynnol ar gyfer cymhlethdodau cardiofasgwlaidd sy'n gysylltiedig â math 2 DM (Ceriello, 2005; Blaak et al., 2012). Ataliodd CT120.9 y codiad yn y lefel glwcos yn y gwaed ôl-frandio yn sylweddol, gan awgrymu bod CT120.9 wedi gwella goddefgarwch diffygiol glwcos o db/dbmice diabetig, ac roedd yr effaith yn debyg i 19.5 mg/kg acarbose. Fodd bynnag, roedd effaith gwrth-hyperglycemig CT120. Roedd 9 yn llai dwys na rosiglitazone.

Mae secretiad inswlin diffygiol ac ymwrthedd i inswlin yn ddau o’r tri diffyg metabolaidd mawr mewn DM math 2 sy’n cyfrannu at hyperglycemia (Bavenholm et al., 2001). Dangosodd ein canlyniad dadansoddiad o theFINS fod dos uchel oCistanchetubulosaadfer secretiad inswlin diffygiol mewn llygod db/db i ryw raddau. Felly, llwyddodd Cistanchetubulosa i atal y lefelau uwch o ymprydio a glwcos gwaed ôl-prandial (Tabl 2) yn rhannol trwy ysgogi secretiad inswlin. Mae hyperglycemia a hyperlipidemia yn rhoi straen ocsideiddiol ychwanegol ar gelloedd beta a mitocondria ar wahân i'r pathogenesis diabetes sylfaenol. Mae tystiolaeth in vitro ac in vivo bod amlygiad cronig i lefelau uchel o glwcos yn y gwaed a lipidau yn gelloedd tobeta niweidiol, gan achosi secretiad inswlin diffygiol, diffyg mynegiant inswlin â nam, ac ysgogi marwolaeth celloedd trwy apoptosis (Pitocco et al., 2010). Gan y gallai gwrthocsidyddion amddiffyn llinellau beta-gelloedd ac ynysoedd ynysig yn erbyn effeithiau andwyol rhag dod i gysylltiad â chrynodiadau glwcos uchel (Kaneto et al., 1996, Tajiri et al., 1997), gall Cistanche tubulosa wella secretiad inswlin trwy ei effaith gwrth-ocsidiol.

Cadarnhaodd goddefgarwch inswlin difrifol y grŵp rheoli diabetig fod y llygod db/db yn gwrthsefyll inswlin. Dangosodd canlyniadau TheITT fod y dos uchel oCistanchetubulosagwell ymwrthedd inswlin mewn llygod db/db, a oedd yn debyg i rosiglitazone ac yn well nag acarbose, gan awgrymuCistanchetubulosayn meddu ar briodweddau cryf sy'n sensitif i inswlin.

Mae homeostasis glwcos yn cael ei reoleiddio'n bennaf gan yr afu a'r cyhyrau ysgerbydol. Mae'r rhan fwyaf o waredu glwcos yn digwydd yn yr afu a'r cyhyrau ysgerbydol, gyda glycogen yn brif ffurf mewngellol o glwcos y gellir ei storio (Saltiel, 2001). Mae'r lefelau glycogen mewn meinweoedd amrywiol yn adlewyrchiad uniongyrchol o sensitifrwydd inswlin, gan fod inswlin yn hyrwyddo dyddodiad glycogen mewngellol. Mae'r cynnwys glycogen wedi'i ysgogi gan inswlin wedi'i leihau'n sylweddol mewn anifeiliaid sydd ag ymwrthedd i inswlin, yn gymesur â graddau diffyg inswlin (Chandramohan et al., 2008).Cistanchetubulosanid oedd ganddo unrhyw effeithiau buddiol ar glycogenstorage yn yr afu neu gyhyr ysgerbydol.

Mae proffil metabolaidd math 2 DM yn cael ei nodweddu gan metaboledd glwcos â nam ac ymwrthedd i inswlin, yn aml wedi'i gyfuno â dyslipidemia (Cha et al., 2005). Dyslipidemia yw un o'r ffactorau risg mwyaf ar gyfer clefyd cardiofasgwlaidd mewn DM. Nodweddion nodweddiadol dyslipidemia diabetig yw crynodiad triglyserid plasma uchel (TG), crynodiad colesterol lipoprotein dwysedd uchel isel (HDL-c), mwy o grynodiad colesterol lipoprotein dwysedd isel (LDL-c), a chynnydd mewn lipoprotein dwysedd isel iawn. crynodiad colesterol (VLDL-c) (Mooradian, 2009). Ar ôl cael ei drin gydaCistanchetubulosaam 45 diwrnod, gostyngwyd lefelau cyfanswm colesterol, TG, LDL-c, a VLDL-c mewn llygod db/db tra bod lefelau HDL-c wedi cynyddu, gan nodiCistanchetubulosawedi cael effaith fuddiol ar ddyslipidemia, a gallai leihau'r risg o atherosglerosis, clefyd coronaidd y galon a chymhlethdodau diabetig yn sylweddol (Tabl 3). Gostyngodd Cistanche tubulosa lefel TC yn sylweddol, sy'n gyson ag adroddiad blaenorol (Shimoda et al., 2009). Mae'n bosibl y bydd y mecanwaith y mae Cistanche tubulosa yn gwella dyslipidemia yn ei ddefnyddio yn gysylltiedig â chyfryngu mynegiant mRNA hepatig sy'n ymwneud â chludo colesterol a metaboledd (Shimoda et al ., 2009). Er nad yw nifer yr achosion o hypercholesterolemia yn cynyddu mewnDM, gall gostwng lefelau colesterol leihau'r risg gymharol o glefyd cardiofasgwlaidd mewn cleifion â DM (Mooradian, 2009). mynegai, sy'n ffactorau risg ar gyfer clefyd rhydweli coronaidd, sy'n nodi bod Cistanche tubulosa yn fuddiol ar gyfer rheoli diabetes a chlefyd cardiofasgwlaidd. Cododd y cyffur rheoli positif rosiglitazone y lefel TC yn sylweddol, sy'n berthnasol i risg gynyddol o ddatblygiad diabetes a chlefyd cardiofasgwlaidd.

5. Casgliad

I gloi, rydym yn darparu'r arddangosiad cyntaf o'r gwrthhyperglycemig ahypolipidemigeffeithiauoCistanchetubulosallygod db/db diabetig intype 2.Cistanchetubulosahyperglycemia normaleiddio adfer sensitifrwydd inswlin a lleihau dyslipidemia. I ryw raddau,Cistanchetubulosagwella pob un o'r tri phrif ddiffyg metabolaidd sy'n cyfrannu at hyperglycemia yn DM math 2.Cistanchetubulosadangos potensial uchel ar gyfer atal dilyniant DM math 2 a lleihau'r risg o atherosglerosis, clefyd coronaidd y galon, a chymhlethdodau diabetig. dyfodol. Fodd bynnag, mae angen ymchwil pellach i nodi'r gydran bioactif ac egluro'r mecanweithiau sy'n gyfrifol am y gwrth-hyperglycemicandhypolipidemigeffeithiauoCistanchetubulosa.

Diolchiadau

Cefnogwyd y gwaith hwn gan Grantiau o'r Rhaglen Ymchwil a Datblygu Technoleg Allweddol Genedlaethol yn 11eg Cynllun Pum Mlynedd Tsieina (2007BAI32B06) a Swyddfa Lliniaru a Datblygu Tlodi Grŵp Arwain y Cyngor Gwladol (2008-3A).

Atodiad A. Deunydd atodol

Gellir dod o hyd i ddata atodol sy'n gysylltiedig â'r erthygl hon yn y fersiwn ar-lein yn http://dx.doi.org/10.1016/j.jep.2013.09.027.

O: 'Effeithiau gwrth-hyperglycemig a hypolipidemig Cistanche tubulosa' ganWen-Ting Xiong, et al

---W.-T. Roedd Xiong et al. / Journal of Ethnopharmacology 150 (2013) 935–945