Effeithiau Gwrthocsidiol A Gwrthgeulo Glycosidau Phenylpropanoid

am ragor o wybodaeth:ali.ma@wecistanche.com

Bartosz Skalski, et al

Haniaethol

Mae planhigion holoparasitig yr Orobanchaceae, gan gynnwys Cistanche, Orobanche, a Phelipanche spp, yn adnabyddus am eu cyfoeth offenylpropanoidglycosidau(PPGs). Canfuwyd bod gan lawer o gyfansoddion PPG sbectrwm eang o weithgareddau, megis gwrthficrobaidd, gwrthlidiol, gwrthocsidiol, a gwella cof. Er mwyn archwilio’n well botensial bioactifedd ysgubau Ewropeaidd (O. Caryophyllaceae – OC, P. Arenaria – PA, P. ramosa – PR) a deg o gyfansoddion ffenylpropanoid ynysig sengl, gwnaethom ymchwilio i’w gweithredu gwrthradical, effaith amddiffynnol yn erbyn ocsidiad mewn system plasma in vitro , a dylanwad ar baramedrau ceulo. Dangosodd y darnau a brofwyd weithgaredd sborion o 50-70 y cant o bŵer Trolox. Roedd gan y detholiad OC, sy'n gyfoethog mewn acteoside, dros 20 y cant yn well potensial gwrth-radical na dyfyniad PR, sef yr unig un yn cynnwys PPGs heb moiety catechol B-ring yn yr uned acyl. Ar ben hynny, canfuwyd mai dim ond wyth PPG a brofwyd(phenylpropanoidglycosidau)dangos potensial gwrthocsidiol mewn plasma dynol wedi'i drin â H2O2/Fe; fodd bynnag, profodd y tri PPGs(phenylpropanoidglycosidau)yn meddu ar botensial gwrthgeulo yn ogystal â phriodweddau gwrthocsidiol. Mae'n ymddangos bod strwythur PPGs, yn enwedig presenoldeb moieties acyl a catechol, yn ymwneud yn bennaf â'u priodweddau gwrthocsidiol. Mae potensial gwrthgeulydd y cyfansoddion hyn hefyd yn gysylltiedig â'u strwythur cemegol. Mae PPGs dethol yn dangos y potensial ar gyfer trin clefydau cardiofasgwlaidd sy'n gysylltiedig âocsidiolstraen.

Geiriau allweddol:Broomrape, glycosidau ffenylpropanoid, straen ocsideiddiol, Hemostasis Plasma

CistanchewediFfenylpropanoidglycosidau

Cliciwch i Cistanche cynhyrchion

1. Rhagymadrodd

Oocsidiolstraenyn adnabyddus am ei effaith negyddol ar iechyd organebau byw, gan gynnwys heneiddio carlam a rhai canserau. Mae digwyddiad oocsidiolstraenyn gysylltiedig â chydbwysedd cynhyrfus rhwng y mecanweithiau ocsideiddiol a gwrthocsidiol (gan gynnwys enzymatic (catalase, glutathione peroxidase) ac amddiffyniad nad yw'n ensymatig (glutathione)) yng nghelloedd y corff [1]. Mae gorgynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS), gan gynnwys radicalau ocsideiddiol a rhywogaethau cregyn caeedig, yn un o'r prif fecanweithiau y tu ôl i ffurfio straen ocsideiddiol. Fodd bynnag, mae'r effaith fiolegol a achosir gan ROS yn dibynnu i raddau helaeth ar y crynodiad, amser amlygiad, a lleoliad. O dan amodau arferol (crynodiad isel), gall radicalau ocsigen / nitrogen chwarae rôl negeswyr eilaidd, ond ar y lefel uwch, gallant ddechrau adweithio â strwythurau biolegol, fel cellbilenni [2]. Ymhlith yr holl rywogaethau ROS, mae radical hydroxyl (HO.) yn achosiOocsidiolyn pwysleisiogwyddys ei fod yn chwarae rhan bwysig mewn amrywiaeth o glefydau, gan gynnwys rhai cardiofasgwlaidd. Mae anhwylderau'r system waed wedi'u cydberthyn a / neu wedi'u rhagflaenu gan newidiadau mewn paramedrau amrywiol hemostasis a biomarcwyr plasma [1,3].

Ar y llaw arall, mae llawer o sylweddau naturiol, megis polyffenolau ac asidau brasterog aml-annirlawn, wedi'u nodi fel gwrthocsidyddion cryf sy'n gallu atal ffurfio a / neu leihau rhywogaethau ocsigen adweithiol. Mae cyfansoddion â phriodweddau o'r fath i'w cael mewn llawer o gynhyrchion bwyd a pharatoadau fferyllol o darddiad planhigion. Felly mae diet wedi'i gyfoethogi â llysiau a ffrwythau ffres, a therapïau gwrthocsidiol yn seiliedig ar gwrthocsidyddion naturiol, yn cael eu hargymell yn eang gan y gallant leihau lefel yocsidiolstraenac atal prosesau pathoffisiolegol amrywiol [4,5]. Mae polyphenolau planhigion yn grŵp amrywiol o fetabolion eilaidd, ymhlith y mae asidau ffenolig yn meddiannu lle pwysig, gan eu bod yn cael eu dosbarthu'n eang ac yn arddangos amrywiaeth o effeithiau biolegol, megis gwrthficrobaidd, gwrthocsidiol a gwrthlidiol.Ffenylpropanoidglycosidau(PPGs) yn ddeilliadau ester o asid hydroxycinnamic a dyma'r prif/unig ddosbarth o fetabolion eilaidd sy'n bresennol mewn planhigion holoparasitig Orobanchaceae, gan gynnwys Cistanche, Orobanche, a Phelipanche spp. Mae sawl rhywogaeth o'r teulu hwn yn bla difrifol o gnydau y mae ffermwyr am gael gwared arnynt yn y caeau (enghraifft o Phelipanche ramosa), ychydig sy'n cael eu defnyddio mewn ffarmacoleg, tra nad yw'r mwyafrif o fawr o bwys i fodau dynol. Defnyddir Herba Cistanche yn helaeth mewn meddygaeth draddodiadol Asiaidd wrth drin diffyg arennau ac fel asiant imiwnedd a gwella cof, gwrth-heneiddio ac antifatigue [6]. Mae dadansoddiadau ffytocemegol o wahanol grwpiau ymchwil wedi dangos hynnyffenylpropanoidglycosidau, fel acteoside, echinacoside, ac ochr podium, yn un o brif gynhwysion gweithredol Herba Cistanche [7]. Mae astudiaeth ddiweddar o sawl rhywogaeth o frêp banadl a ddarganfuwyd yng Ngwlad Pwyl gan Jedrejek et al. [8] wedi dangos bod gan y deunydd planhigyn hwn gyfansoddiad ansoddol tebyg (dominyddu PPGs)(phenylpropanoidglycosidau), ar ben hynny, mae'n hafal i neu hyd yn oed yn rhagori ar y Cistanche spp. o ran cynnwys sylweddau actif [8]

Nod yr astudiaeth bresennol oedd gwerthuso'r potensial gwrth-radical a gwrthocsidiol, yn ogystal â'r dylanwad ar baramedrau hemostasis y tri echdyniad broomrape (Orobanche caryophyllacea - OC, Phelipanche Arenaria - PA, a P. ramosa - PR) sy'n gyfoethog mewn ffenylpropanoidau amrywiol, fel yn ogystal â'u hetholwyr PPG unigol. Mesurwyd y cynhwysedd gwrthradical gan ddefnyddio 2,2′-azinobis-3-ethylbenzthiazoline-6-asid sylffonig/Cyfwerth â Trolox (ABTS/TE) a 2,2-diffenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) ) profion. Mae'rocsidiolstraenyn y system prawf plasma yn cael ei ysgogi gan ddefnyddio radical hydroxyl (H2O2 / Fe), yna perocsidiad lipid (assay rhywogaethau adweithiol asid thiobarbitwrig (TBARS)), a mesurwyd lefel y grwpiau protein carbonyl a thiol. Ymhlith paramedrau pennu hemostasis roedd: amser thromboplastin rhannol actifedig (APTT), amser prothrombin (PT), ac amser thrombin (TT).

CistanchewediFfenylpropanoidglycosidau

2. Deunyddiau a dulliau

2.1. Cemegau

2,2-diffenyl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH), 2,2′-asinobis-3-ethylbenzthiazoline-6-asid sylffonig (ABTS), persylffad potasiwm, 6- hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-asid carbocsilig (Trolox), dimethylsulfoxide (DMSO), asid thiobarbitwrig (TBA), asid fformig (gradd LC-MS), a H2O2 eu prynu oddi wrth Sigma-Aldrich (St. Louis, MO., UDA). Caffaelwyd methanol (graddiant HPLC) ac acetonitrile (gradd LC-MS) gan Merck (Darmstadt, yr Almaen). Profwyd deg cyfansoddyn ffenylpropanoid yn y gwaith hwn, gan gynnwys 2′-O-acetylacteoside (97 y cant), 2′-O-acetylpoliumoside (98 y cant), 3-O-methylpoliumoside (96 y cant), acteoside (99 y cant ), Roedd arena y tu mewn (97 y cant ), crenatoside (98 y cant ), teniposide (99 y cant ), poliumoside (99 y cant ), tubuloside A (96 y cant ), a wiede mannioside D (96 y cant ) wedi'u hynysu gennym ni o'r planhigyn islaw'r swm a roddir deunydd [8]. Aseswyd purdeb cyfansoddion gan ddefnyddio dadansoddiad UHPLC-PDA-MS. Paratowyd dŵr ultrapure yn fewnol gan ddefnyddio system puro dŵr Milli-Q (Millipore Co.). Roedd adweithyddion eraill o radd ddadansoddol ac fe'u darparwyd gan gyflenwyr masnachol domestig.

2.2. Deunydd planhigion

Planhigion blodeuol o dair rhywogaeth banadl, gan gynnwys Orobanche Caryophyllaceae Sm., Phelipanche Arenaria Pomel, a P. ramosa (L.) Pomel Nodwyd gan prof. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski Uni versity, Kielce, Gwlad Pwyl) a gasglwyd o ffynhonnell naturiol yng Ngwlad Pwyl. Sbesimenau talebau (O. Caryophyllaceae – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), glaswelltir xerothermig, parasitize Galium boreale, Mai 2014; P. Arenaria – Zwierzyniec (50.3652◦N, 22.3652◦N, parasite, 22.3652◦N, 22.3652◦N, 22.3652◦N, 22.3652◦N, 22.3652◦N, 22.3652◦N, 22.5m, 22.3m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.5m, 22.3m. Artemisia campestris, Mehefin 2014; P. ramosa – Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), maes, parasitize Solanum Lycopersicum, Medi 2014) yn cael eu hadneuo yn Herbariwm Prifysgol Jan Kochanowski yn Kielce (KTC). Cafodd y deunydd planhigion ei lyoffileiddio a'i falu'n fân cyn ei echdynnu.

2.3. Paratoi echdynion ysgubau

Echdynnwyd deunydd planhigion powdr (O. Caryophyllaceae (OC) - 2 g, P. Arenaria (PA) - 3 g a P. ramosa (PR) - 3 g)) gyda 80 y cant MeOH ar 40 ◦C a 1500 psi (pwysedd toddyddion ) gan ddefnyddio echdynnwr toddyddion carlam ASE 200 (Dionex, Sunnyvale, CA, UDA). Cafodd y darnau eu hanweddu a'u rhewi-sychu (sychwr rhewi Gamma 2–16 LSC, Crist, yr Almaen). Yr effeithlonrwydd echdynnu ar gyfer OC, PA, a chysylltiadau cyhoeddus oedd 55 y cant, 37 y cant, a 43 y cant yn ôl pwysau'r deunydd planhigion, yn y drefn honno. Oherwydd cynnwys uchel carbohydradau (data heb ei ddangos), cafodd y darnau crai eu puro ymhellach trwy echdynnu cyfnod solet (SPE) ar ficro-golofn Oasis HLB (500 mg; Waters, Milford, MA, UDA). Tynnwyd y siwgrau gydag 1 y cant MeOH, yna cafodd cyfansoddion o ddiddordeb eu hanwybyddu gyda 80 y cant MeOH. Ar ôl tynnu'r toddydd, cafodd y darnau OC, PA, a PR eu lyoffileiddio (sychwr rhewi Gamma 2-16 LSC), ac roedd cynnyrch puro SPE yn 53 y cant (OC), 67 y cant (PA), a 51 y cant (PR) .

2.4. Nodweddion ffytocemegol echdynion ysgubau

Perfformiwyd dadansoddiadau ansoddol a meintiol o echdynion rêp ysgub gan ddefnyddio system ACQUITY UPLC (Waters) wedi'i chysylltu â chanfodydd arae ffotodiod (PDA) a sbectromedr màs pedwarpôl tandem (TQD-MS/MS). Diddymwyd detholiadau OC, PA, a PR wedi'u rhewi-sych mewn methanol 50 y cant ar grynodiad o 0.50 mg/mL ac yna eu cromatograffu ar golofn BEH C18 (1{ {21}}0 × 2.1 mm, 1.7 µm, Dyfroedd). Roedd amodau cromatograffig fel a ganlyn: tymheredd popty - 25 ◦C, graddiant llinol 10→25 y cant o gyfnod symudol B (0.1 y cant o asid fformig mewn acetonitrile) yng nghyfnod symudol A (0.1 y cant o asid ffurfig yn H2O) dros 12 munud, cyfradd llif - 0.4 mL/munud, cyfaint pigiad - 2 μL, amrediad UV - 190-490 nm (cydraniad 3.6 nm). Perfformiwyd y dadansoddiad MS mewn modd ïon negyddol gydag ïoneiddiad electrochwistrellu (ESI), gan ddefnyddio'r gosodiadau canlynol: ystod sgan 100-1200 m/z; foltedd capilari 2.8 kV; foltedd côn 35 V; tymheredd ffynhonnell 150 ◦C; tymheredd desolvation 450 ◦C; llif nwy diddymu 900 L/h, a llif nwy côn 100 L/h. Perfformiwyd caffael a phrosesu data gan ddefnyddio meddalwedd Waters MassLynx 4.1.

Nodwyd copaon glycoside ffenylpropanoid (PPG) trwy gymharu'r data LC-MS a gafwyd â rhai cyfansoddion ynysig yn flaenorol [8]. Meintioli PPGs(phenylpropanoidglycosidau)mewn detholiadau broomrape yn seiliedig ar y dull UPLC-UV gyda chanfod ar 330 nm, a graddnodi safonol allanol gan ddefnyddio acteoside (Sigma-Aldrich, Mwy na neu'n hafal i 99 y cant, HPLC) fel safon grŵp. Paratowyd cromlin graddnodi llinol mewn chwe chrynodiad o fewn yr ystod 1–200 ug/mL a dangosodd llinoledd da (R2 Yn fwy na neu'n hafal i 0.999). Mae canlyniadau meintiol yn cynrychioli gwerth cymedrig ± SD tri chwistrelliad ac fe'u mynegwyd fel cyfwerthoedd acteoside miligram (eq) fesul gram o echdyniad (mg acteoside eq/g).

CistanchewediFfenylpropanoidglycosidau

2.5. Gweithgaredd gwrth-radical in vitro

2.5.1. Assay sborionu radical ABTS

Cynhaliwyd prawf gwrthradical ABTS gan ddefnyddio'r dull a ddisgrifiwyd gan Kontek et al. [9], gydag addasiadau bach fel a ganlyn: defnyddiwyd 20 y cant MeOH i baratoi adweithyddion (7 mM ABTS a 4.9 mM persulfate potasiwm); paratowyd datrysiadau darnau OC, PA, a PR, ar bedair lefel grynodiad yn yr ystod o 100 - 400 ug / mL, a datrysiadau Trolox, ar chwe lefel crynodiad yn yr ystod o 10 - 250 ug / mL, gyda 50 y cant MeOH. Cyfran y sampl i ABTS ynghyd â datrysiad gweithio oedd 1:25 (v/v). Mesurwyd yr amsugnedd ar 734 nm ar ôl deori 30 munud yn y tywyllwch gan ddefnyddio sbectrophotometer UV-vis (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, UDA).

Cyfrifwyd yr ataliad amsugnedd ( y cant ) fel a ganlyn: [(Abscontrol-Abssample)/Abscontrol] ×100.

Cyfrifwyd y Cyfwerthoedd Trolox (TE) o echdynion ysgubau gan ddefnyddio fformiwla TE {{0}} sampl/safon, lle m yw goledd y cromliniau llinell syth (ataliad amsugno yn erbyn crynodiad). Mae gwerth TE y sampl yn disgrifio ei weithgarwch normaleiddio yn erbyn Trolox (TEstandard =1.0). Cyrhaeddwyd y gwerthoedd IC50 ar gyfer detholiadau OC, PA, a PR a Trolox yn arbrofol, yna fe'u cyfrifwyd o'u cromliniau llinell syth (ataliad amsugno yn erbyn crynodiad) ac fe'u mynegir mewn ug/mL.

Perfformiwyd yr assay yn driphlyg, a chyflwynir y canlyniadau fel modd ± gwyriadau safonol (SD).

2.5.2. Assay sborionu radical DPPH

Cynhaliwyd y prawf gwrthradical DPPH gan ddefnyddio'r dull a ddisgrifiwyd gan Jedrejek et al. [8] a Brand-Williams et al. [10], gydag addasiadau bach fel a ganlyn: datrysiadau echdynion OC, PA, a PR, ar bedair lefel grynodiad yn yr ystod o 50 - 250 ug/mL, a hydoddiannau Trolox, ar chwe lefel crynodiad yn yr ystod o 10− 250 ug/ml, eu paratoi gyda 50 y cant MeOH. Cyfran y sampl i DPPH oedd 1:19 (v/v). Mesurwyd yr amsugnedd ar 517 nm ar ôl deoriad 30 munud yn y tywyllwch gan ddefnyddio sbectrophotometer UV-vis (Evolution 260 Bio).

Cyfrifwyd yr ataliad amsugnedd ( y cant ) fel a ganlyn: [(Abscontrol-Abssample)/Abscontrol] ×100.

Cyfrifwyd gwerthoedd Cyfwerth Trolox (TE) ac IC50 samplau prawf yn yr un modd ag ym mhrawf ABTS (Adran 2.5.1). Perfformiwyd yr assay mewn triphlyg, a chyflwynir y canlyniadau fel modd ± SD.

2.6. Atebion stoc o gyfansoddion planhigion profedig a darnau ar gyfer arbrofion gyda phlasma dynol

Paratowyd hydoddiannau stoc o'r cyfansoddion a brofwyd a'r echdynion planhigion mewn 50 y cant DMSO. Roedd crynodiad terfynol DMSO yn y samplau a brofwyd yn is na 0.05 y cant a phennwyd ei effeithiau ym mhob arbrawf.

2.7. Ynysu plasma dynol

Cafwyd gwaed dynol, neu blasma, gan chwe rhoddwr rheolaidd (dynion a menywod nad oeddent yn ysmygu) i fanc gwaed (Lodz, Gwlad Pwyl) a chanolfan feddygol (Lodz, Gwlad Pwyl). Casglwyd gwaed fel hydoddiant CPD (citrad/ffosffad/decstros; 9:1; v/v gwaed/CPD) neu hydoddiant CPDA (citrad/ffosffad/decstros/adenin; 8.5:1; v/v; gwaed/CPDA). Nid oedd y rhoddwyr wedi cymryd unrhyw feddyginiaeth na sylweddau caethiwus (gan gynnwys tybaco, alcohol, ac ychwanegion gwrthocsidiol) am o leiaf bythefnos cyn rhodd. Perfformiwyd ein dadansoddiad o'r samplau gwaed o dan ganllawiau Datganiad Helsinki ar gyfer Ymchwil Dynol ac fe'i cymeradwywyd gan y Pwyllgor Moeseg Ymchwil mewn Arbrofi Dynol ym Mhrifysgol Lodz. Paratowyd plasma trwy allgyrchu gwaed dynol ffres ar 4500x g am 25 munud ar dymheredd ystafell. Cyfrifwyd y crynodiad protein trwy fesur amsugnedd y samplau a brofwyd yn 280 nm, yn ôl gweithdrefn Whitaker a Granum [11].

CistanchewediFfenylpropanoidglycosidau

2.8. Marcwyr straen ocsideiddiol mewn plasma dynol

2.8.1. Mesur perocsidiad lipid

Cafodd perocsidiad lipid plasma ei feintioli trwy fesur crynodiad sylweddau adweithiol asid thiobarbitwrig (TBARS). Cyfrifwyd crynodiad TBARS gan ddefnyddio'r cyfernod difodiant molar (ε =156, 000 M− 1cm− 1). Disgrifir y dull yn fwy trylwyr mewn man arall [12,13].

2.8.2. Mesur grŵp carbonyl

Cyfrifwyd lefel y grwpiau carbonyl gan ddefnyddio'r cyfernod difodiant molar (ε=22,000 M− 1 cm− 1) ac fe'i mynegwyd fel grwpiau carbonyl nmol / mg o brotein plasma, yn ôl Bartosz [13 ] a Levine et al. [14].

2.8.3. Penderfyniad grŵp Thiol

Mesurwyd cynnwys y grŵp thiol mewn proteinau plasma yn sbectroffotometrig gan ddefnyddio Darllenydd Microplate Nano SPECTROstar (BMG LABTECH, yr Almaen) trwy amsugnedd ar 412 nm gyda 5,5′-dithiol-bis-(2- asid nitrobenzoig). Disgrifir y dull yn fanylach mewn man arall [15–17].

2.9. Paramedrau hemostasis

2.9.1. Mesur amser prothrombin (PT)

Pennwyd PT yn geulometrig gan ddefnyddio Dadansoddwr Ceulo Optig (model K-3002, Kselmed, Grudziadz, Gwlad Pwyl) yn ôl Malinowska et al. [18].

2.9.2. Mesur amser thrombin (TT)

Penderfynwyd ar y TT yn geulametrig gan ddefnyddio Dadansoddwr Ceulo Optig (model K-3002, Kselmed, Grudziadz, Gwlad Pwyl), yn ôl y dull a ddisgrifiwyd gan Malinowska et al. [18].

2.9.3. Mesur amser thromboplastin rhannol actifedig (APTT)

Pennwyd yr APTT yn geulametrig gan ddefnyddio Dadansoddwr Ceulo Optig K-3002 (Kselmed, Grudziadz, Gwlad Pwyl) yn ôl Malinowska et al. [18].

2.10. Dadansoddi data

Perfformiwyd y prawf Q-Dixon i ddileu data ansicr. Profwyd y data ar gyfer dosbarthiad arferol gyda phrawf Shapiro-Wilk a chydraddoldeb amrywiant â phrawf Levene. Nodwyd gwahaniaethau ystadegol arwyddocaol gan ddefnyddio ANOVA, ac yna prawf cymariaethau lluosog Tukey neu brawf Kruskal-Wallis. Ystyriwyd bod cymariaethau yn arwyddocaol yn p < 0.05.="" cyflwynir="" y="" gwerthoedd="" fel="" modd="">

3. Canlyniadau a thrafodaeth

Deg wedi'u hynysu gennym ni o'r blaenffenylpropanoidglycosidau[8], gan gynnwys 2′-O-acetylacteoside, 2′-O-acetylpoliumoside, 3-O-methylpoliumoside, acteoside, arena y tu mewn, crenatoside, pheliposide, ochr podiwm, tubuloside A, a wiedemannioside D, ynghyd â thri ar hyn o bryd astudiwyd darnau o rêp banadl (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Phelipanche are naria (PA), a P. ramosa (PR)) i'w lliniaruocsidiolstraena phriodweddau gwrthgeulo mewn system plasma dynol. Cyflwynir strwythurau cemegol y ffenylpropanoidau a brofwyd yn Ffig. 1, ac, fel y gwelir, maent i gyd wedi'u hadeiladu yn ôl patrwm tebyg, gyda'r un is-unedau/tebyg: hydroxytyrosol, monosacaridau (glwcos, rhamnose, a/neu xylose), ac asid hydroxycinnamic. Mae'r rhan fwyaf o'r cyfansoddion PPG a archwiliwyd yn cael eu hamnewid ag asid caffeic, ond gellir disodli hwn â naill ai asid coumarig neu ferulic.

Ar wahân i gyfansoddion PPG unigol, mae tri darn o rêp banadl - OC, PA, a PR, sy'n gymysgedd o sawl PPG.(phenylpropanoidglycosidau)ac a wasanaethwyd yn flaenorol fel deunydd cychwyn ar gyfer ynysu cyfansawdd, hefyd wedi'u cynnwys yn yr astudiaeth fiolegol. Rheswm arall dros ddewis tair rhywogaeth wahanol oedd y gwahaniaeth mawr yn y proffil ffytocemegol yn eu plith, fel y gwelir yn Ffig. 2. Cyflwynir cymhariaeth fanylach o'r darnau OC, PA, a PR, gan gynnwys y data meintiol, yn Nhabl 1. Acteoside oedd prif gyfansoddyn y dyfyniad O. Caryophyllaceae (690 mg/g), teniposide, ac arena y tu mewn yn bennaf yn P. Arenaria (gyda'i gilydd 550 mg/g), tra poliumoside a'i ddeilliad asetylaidd oedd y metabolion pwysicaf yn Dyfyniad P. ramosa (gyda'i gilydd 640 mg/g). Roedd y darnau a archwiliwyd hefyd yn wahanol yng nghynnwys cyffredinol ffenylpropanoidau, canfuwyd y swm uchaf yn OC (810 mg / g), ychydig yn is mewn PR (795 mg / g), ac yn is yn PA (685 mg / g). Ar ben hynny, mae'n deilwng nodi bod presenoldeb PPGs gyda moieties heblaw am caffeoyl, megis coumaroyl neu feruloyl, wedi'i ganfod mewn dyfyniad P. ramosa yn unig, lle'r oedd y cyfansoddion hyn yn gyfystyr ag un rhan o chwech o gyfanswm y PPGs (tua 120 mg/ g) (Tabl 1).

Astudiaethau blaenorol o weithgaredd gwrth-radical offenylpropanoidglycosidaugan Heilmann et al. [19] a Jedrejek et al. [8], gan gynnwys tua 30 o wahanol PPGs(phenylpropanoidglycosidau)megis acteoside, isoacteoside, a crenatoside, wedi datgelu ei berthynas gref â strwythur moieties acyl (asid ffenolig a tyrosol). Yn gyffredinol, arweiniodd addasu neu amnewid catechol moiety uned acyl at ostyngiad sylweddol yn y gweithgaredd chwilota yn erbyn rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) a radical DPPH. Yn yr astudiaeth gyfredol, archwiliwyd y potensial gwrthradical in vitro o dri detholiad ysgub (OC, PA, a PR) gyda phrofion ABTS a DPPH, a chymharwyd y canlyniadau â'i gilydd yn ogystal â gweithgaredd cydrannau ffenylpropanoid unigol a fesurwyd yn ein hastudiaeth flaenorol [8]. Mynegwyd y canlyniadau fel gwerthoedd Cyfwerth Trolox (TE) ac IC50 (Tabl 2). Yn gyffredinol, roedd y tri dyfyniad yn sborionwyr da o radicalau ABTS a DPPH ond hefyd gwelwyd gwahaniaethau rhwng y samplau a brofwyd (roedd TE amcangyfrifedig yn yr ystod o 0.5–0.7; roedd 1.0 yn sy'n cyfateb i Trolox). Roedd gweithgaredd sborionio gwrthradical samplau yn y drefn ganlynol: Trolox > OC > PA > PR. Roedd gan echdyniad Orobanche Caryophyllaceae (IC50=155–275 µg/mL) dros 20 y cant yn fwy o weithgarwch na detholiad Phelipanche ramosa (IC50=200–320 µg/mL).

Gellir esbonio'r gweithgaredd chwilota radical uchaf a adroddwyd o'r dyfyniad OC gan y PPGs uchaf(phenylpropanoidglycosidau)cynnwys yn y sampl hwn, yn ogystal â mewnbwn acteoside, ei brif gynhwysyn, sydd yn ôl yr ymchwil flaenorol [8,19] yn un o'r sborionwyr radical rhydd cryfaf ymhlith y metabolion o'r grŵp hwn (TEDPPH=0 .87;[4]). Fodd bynnag, o ystyried cydberthynas gweithgarwch gwrthradical a chynnwys ffenylpropanoidau yn y darnau OC, PA, a PR, ni chanfuwyd unrhyw gydberthynas syml rhwng y ddau ffactor hyn (r < 0.5),="" sy'n="" nodi="" mewnbwn="" sylweddol="" o="" proffil="" ansoddol.="" mae="" hyn="" yn="" ymwneud="" yn="" bennaf="" â="" dyfyniad="" p.="" ramosa,="" sydd="" er="" gwaethaf="" y="" lefel="" uchel="" o="">(phenylpropanoidglycosidau)({{0}}.8 g/g) wedi'i nodweddu gan y gweithgaredd biolegol isaf ymhlith y samplau a brofwyd (TE ~ 0.5). Y dyfyniad PR, fel y crybwyllwyd uchod, oedd yr unig sampl i feddu ar y ffenylpropanoidau ag asidau coumarig neu fferulig, sylweddau â diffyg moiety catechol B-ring, yr adroddwyd eu bod wedi lleihau potensial gwrthocsidiol. Roedd gan bedwar cyfansoddyn PPG ag asid caffeig wedi'i addasu, gan gynnwys 3-O-methylpoliumoside, ramose A, a wiedemannioside D, a brofwyd gennym ni'r TEDPPH o tua 0.3 [8] yn flaenorol. Felly, mae'r canlyniadau cyfredol yn unol â chanfyddiadau'r arbrofion in vitro gwrthradical blaenorol ar ffenylpropanoidau ac yn eu cadarnhau.

Fel Chen et al. [20] a ddisgrifir, mae'n gysylltiedig â mwy o allu H-rhoi neu sefydlogi'r radical gan wahanol grwpiau swyddogaethol o gymysgedd o gyfansoddion. Mae sawl elfen strwythurol wedi'u nodi fel rhai sy'n gwella gweithgaredd gwrthocsidiol uniongyrchol polyffenolau, yn enwedig y rhai sy'n gysylltiedig â nifer a lleoliad grwpiau hydrocsyl. Credir bod gweithgaredd sborion radical rhydd yn cynyddu gyda'r nifer cynyddol o grwpiau -OH. Fodd bynnag, mae lleoliad y grwpiau hyn, mewn moleciwl, yn cael hyd yn oed mwy o effaith ar y gweithgaredd a wneir. Cyfansoddion grymus cymharol sefydlog yw'r rhai sy'n meddu ar 3,{3}} moiety dihydroxy yn eu strwythurau, yn ogystal â'r rhai sydd â mwy na dau grŵp hydrocsyl [21]. Mae strwythur cemegol y sylwedd gwrthocsidiol yn caniatáu dealltwriaeth o'r mecanwaith adwaith gwrthocsidiol. Roedd Lopez-Munguía et al. [22] yn seiliedig ar ddwysedd cyfrifiadau theori swyddogaethol (DFT) pennu bod y PPGs(phenylpropanoidglycosidau)mae mecanwaith gwrthocsidiol yn mynd rhagddo trwy drosglwyddiad electron sengl colled proton dilyniannol (SPLET). Fodd bynnag, mae Li et al. [23] ymgais i archwilio mecanweithiau gwrthocsidyddion ffenolig ffenolpropanoid, daeth i'r casgliad, y gall PPGs (acteoside, forsythoside B, a poliumoside) fod yn rhan o lwybrau lluosog i gyflawni'r camau gwrthocsidiol, gan wella rôl gweddillion siwgr.

Mae astudiaethau wedi dangos bod gwrthocsidyddion sy'n deillio o blanhigion yn fodylyddion effeithiol o hemostasis mewn clefydau cardiofasgwlaidd [24-26]. Mae planhigion amrywiol a ddefnyddir mewn meddygaeth draddodiadol yn cynnwys lefelau sylweddol o PPGs [27,28]. Yn ogystal, PPGs(phenylpropanoidglycosidau)gwyddys bod ganddynt ystod o weithgareddau biolegol, gan gynnwys eiddo gwrthlidiol, gwrth-nephritig, a gwrth-hepatoxic [29-33].

Yn eu hastudiaeth ddiweddar, mae Jedrejek et al. Disgrifiodd [8] unigedd PPGs(phenylpropanoidglycosidau)o dri banadl o Wlad Pwyl ac aseswyd eu gweithgaredd gwrthocsidiol gan y prawf DPPH. Yn seiliedig ar hynny, mae'r astudiaeth bresennol yn gwerthuso a allai'r deg PPG dethol sydd wedi'u hynysu o'r gweithfeydd hyn leihauocsidiolstraenmewn plasma dynol wedi'i drin ag ocsidydd biolegol cryf, hy y rhoddwr radical hydrocsyl H2O2/Fe, ac yn modiwleiddio priodweddau ceulo plasma in vitro. Penderfynwyd ar briodweddau gwrthocsidiol deg PPG ynysig yn unol â pharamedrau dethol oocsidiolstraen: Lefel TBARS fel marciwr perocsidiad lipid, ynghyd â lefelau grŵp carbonyl a grŵp thiol, fel marcwyr difrod protein ocsideiddiol.

Gostyngwyd lefelau perocsidiad lipid plasma a charbonyliad protein mewn plasma a achosir gan H2O2/Fe yn sylweddol ym mhresenoldeb wyth cyfansoddyn a brofwyd, sef. acteoside, crenatoside, 2′-O-acetylacteoside, pheliposid, arena y tu mewn, tubuloside A, poliumoside ac 3- O-methylpolimuoside, o gwbl crynodiadau a brofwyd (1, 5 a 50 µg/ mL); fodd bynnag, ni welwyd y naill effaith na'r llall ar gyfer dau o'r cyfansoddion a brofwyd, sef. 2′-O-acetylpoliumoside a wiedemannioside D, neu unrhyw un o'r darnau a brofwyd mewn unrhyw grynodiad (1, 5, a 50 µg/mL). Yn ogystal, ni chanfuwyd bod yr un o'r cyfansoddion a brofwyd neu'r darnau a brofwyd yn amddiffyn y plasma rhag H2O2/Fe - ocsidiad grŵp thiol a achosir mewn proteinau (Ffig. 3-5). Fodd bynnag, gall y darnau a brofwyd fod yn ffynhonnell cyfansoddion â phriodweddau biolegol amrywiol.

Am y tro cyntaf, mae canlyniadau'r astudiaeth bresennol yn dangos bod wyth o'r PPGs a brofwyd(phenylpropanoidglycosidau)dangos potensial gwrthocsidiol mewn plasma dynol ym mhresenoldeb rhywogaethau ocsigen adweithiol alldarddol trwy atal perocsidiad lipid a charbonyliad protein mewn plasma wedi'i drin â H2O2 / Fe. Yn ogystal, ni chyflwynodd 2′-O-acetylpoliumoside a wiedemannioside D unrhyw effaith o'r fath. Yn gyffredinol, mae ein canfyddiadau yn gyson ag arbrofion in vitro blaenorol ar PPGs. Roedd Heilmann et al. [19] a Jedrejek et al. [8] adrodd am gydberthynas rhwng strwythur cemegol PPGs a'u gweithgareddau. Priodweddau gwrthocsidiol PPGs(phenylpropanoidglycosidau)Ymddengys eu bod yn ymwneud yn bennaf ag adeiledd eu nodweddion acyl, hy yr uned asid ffenolig a ffenylpropanoid, gan gynnwys presenoldeb a/neu addasu moiety catechol. Er enghraifft, canfuwyd bod wiedemannioside D yn colli ei botensial gwrthocsidiol tuag at blasma wedi'i drin â H2O2/Fe yn dilyn disodli ei fwyniant cafffeoyl â moiety feruloyl.

Mae newidiadau yn y broses geulo yn aml yn deillio oocsidiolstraen; gall y newidiadau hyn fodiwleiddio swyddogaethau'r system gardiofasgwlaidd a gallant arwain at ddatblygiad clefydau cardiofasgwlaidd [1]. Allan o'r deg cyfansoddyn planhigion a thri echdyniad planhigion a brofwyd yn yr astudiaeth bresennol, dangosodd tubuloside, ochr podiwm, ac 3-O-methylpoliumoside a'r holl echdynion a brofwyd eu bod yn ymestyn amser thrombin yn sylweddol ar bob crynodiad a brofwyd, sef. 1, 5, a 50 µg/mL (Ffig. 6B). Fodd bynnag, ni newidiodd yr un o'r darnau hyn, nac unrhyw un o'r cyfansoddion a brofwyd, PT neu APTT (Ffig. 6A ac C).

Ffig. 6. Effeithiau cyfansoddion a brofwyd (acteoside, crenatoside, 2′-O-acetylacteoside, pheliposid, arenarioside, tubuloside A, poliumoside, 3-O-methylpoliumoside, 2′-O-cetylpolimuoside, wiedemannioside D) a phlanhigyn dyfyniadau (P. arenaria extract - PA, P. ramosa extract – PR, ac O. caryophyllacea extract - OC) (1–50 µg/mL) ar baramedrau haemostatig plasma dethol: PT(A), TTn (B) ac APTT (C). Mae data'n cynrychioli modd ± SEM o chwe arbrawf annibynnol.n* p < 0.05="" (vs.="" rheolaeth),="" ns="" –="" p=""> 0.05 (vs. rheolaeth).

Mae Tabl 3 yn cymharu effeithiau'r PPGs (5 µg/mL) ar fiofarcwyr oocsidiolstraenmewn plasma wedi'i drin â H2O2/Fe a'u dylanwad ar geulo. Wyth o'r PPGs a brofwyd(phenylpropanoidglycosidau)dangos potensial gwrthocsidiol yn unig yn y plasma dynol wedi'i drin; fodd bynnag, canfuwyd bod gan dri PPG a brofwyd briodweddau gwrthocsidiol a photensial gwrthgeulo. Yn ddiddorol, nid oedd canlyniadau'r prawf DPPH yn cyd-fynd â'r rhai a gafwyd yn y model biolegol gan ddefnyddio plasma dynol wedi'i drin â H2O2 / Fe: gall potensial gwrthocsidiol y darnau a brofwyd gael eu rhwystro gan rai cyfansoddion sy'n bresennol yn y plasma.

I gloi, mae ein canfyddiadau presennol yn taflu goleuni newydd ar botensial gwrthocsidiol a phriodweddau gwrthgeulo PPGs(phenylpropanoidglycosidau). Mae'n ymddangos bod strwythur y PPGs(phenylpropanoidglycosidau), yn enwedig presenoldeb moieties acyl a catechol, yn ymwneud yn bennaf â'u priodweddau gwrthocsidiol a gwrthgeulo. Mae'n bosibl iawn y bydd gan PPGs y potensial i drin clefydau cardiofasgwlaidd sy'n gysylltiedig â nhwocsidiolstraen. Fodd bynnag, mae angen arbrofion pellach i bennu crynodiadau'r cyfansoddion hyn sydd eu hangen ar gyfer modelau in vivo.

Datganiad gwrthdaro buddiannau

Mae'r awduron yn datgan nad oes ganddynt unrhyw fuddiannau ariannol cystadleuol hysbys neu berthnasoedd personol a allai ymddangos i ddylanwadu ar y gwaith a adroddir yn y papur hwn.

Cyfeiriadau

[1] A. Daiber, S. Chlopicki, Ailymweld â ffarmacoleg oocsidiolstraena chamweithrediad endothelaidd mewn clefyd cardiofasgwlaidd: tystiolaeth ar gyfer therapïau sy'n seiliedig ar redox, Free Radic. Biol. Med. 157 (2020) 15–37.
[2] J.-J. Sauvain, A. Setyan, P. Wild, P. Tacchini, G. Lagger, F. Storti, S. Deslarzes, MJ Guillemin, M. Rossi, M. Riediker, Biofarcwyr oocsidiolstraena'i gysylltiad â'r capasiti lleihau wrinol mewn gweithwyr cynnal a chadw bysiau, J. Occupat. Med. Gwenwynig. 6 (2011) 18–23.
[3] P. Nowak, B. Olas, B. Wachowicz,Oocsidiolstraena hemostasis, Post. Biocemeg. 56 (2010) 239–247.
[4] M. Martinez-Huelamo, J. Rodriguez-Morato, A. Boronat, R. de la Torre, Modiwleiddio Nrf2 gan olew olewydd a polyffenolau gwin a niwroprotection, Gwrthocsidyddion 6 (2017) 73 .
[5] S. Amor, P. Chalons, V. Aires, D. Delmas, Echdynion Polyphenol o win coch a grawnwin: effeithiau posibl ar ganserau, Clefydau 6 (2018) 1–12.
[6] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): un o'r rhoddion fferyllol gorau o feddyginiaeth Tseiniaidd traddodiadol, Blaen. Ffarmacol. 7 (2016) 41–49.
[7] Y. Jiang, P.-F. Tu, Adolygiad: dadansoddiad o gyfansoddion cemegol mewn rhywogaethau Cistanche, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[8] D. Jedrejek, S. Pawelec, R. Piwowarczyk, L. Precio, A. Stochmal, Adnabod a digwyddiad ffenylethanoid a glycosidau iridoid mewn chwe ysgubau Pwyleg (Orobanche spp. a Phelipanche spp., Orobanchaceae), Phytochemistry 170 ( 2020), 112189.
[9] B. Kontek, D. Jedrejek, W. Oleszek, B. Olas, Gweithgaredd gwrth-radical a gwrthocsidiol in vitro o echdynion sy'n deillio o hopys sy'n gyfoethog mewn asidau chwerw a xanthohumol, Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1–9.
[10] W. Brand-Williams, ME Cuvelier, C. Berset, Defnyddio dull radical rhydd i werthuso gweithgaredd gwrthocsidiol, Lebensm. Doethineb. Technol. 28 (1995) 25–30.
[11] JR Whitaker, PE Granum, Dull absoliwt ar gyfer pennu protein yn seiliedig ar y gwahaniaeth mewn amsugnedd yn 235 a 280 nm, rhefrol. Biocemeg. 109 (1980) 156–159.
[12] B. Wachowicz, Niwcleotidau Adenin mewn thrombosytau adar, Cell Biochem. Funct. 2 (1984) 167–170.
[13] G. Bartosz, Druga twarz tlenu, Warsz. PWN 1 (2008) 7.
[14] RL Levine, D. Garland, CN Oliver, A. Amici, I. Climent, AG Lenz, BW Ahu, S. Shaltier, ER Stadtman, Pennu cynnwys carbonyl mewn proteinau a addaswyd yn ocsidiol, Methods Enzym. 186 (1990) 464–478.
[15] DM Joel, J. Gressel, LJ (Gol.), Musselman, Orobanchaceae Parasitig: Mecanweithiau Parasitig a Strategaethau Rheoli, Springer, Heidelberg, yr Almaen, 2013, tt. 1–10.
[16] Y. Ando, ​​M. Steiner, sylffydryl a grwpiau disulfide o bilenni platennau: pennu grwpiau disulfide, Biochim. Bioffys. Acta 311 (1973) 26–37.
[17] Y. Ando, ​​M. Steiner, sylffydryl a grwpiau disulfide o bilenni platennau: pennu grwpiau sylfhydryl, Biochim. Bioffys. Acta 311 (1973) 38–44.
[18] J. Malinowska, J. Kołodziejczyk-Czepas, M. Moniuszko-Szajwaj, I. Kowalska, W. Oleszek, A. Stochmal, B. Olas, ffracsiynau ffenolig o Trifolium pallidum a Trifolium scabrum rhannau o'r awyr mewn plasma dynol yn amddiffyn rhag newidiadau a achosir gan hyperhomocysteinemia, Food Chem. Gwenwynig. 50 (2012) 4023–4027.
[19] J. Heilmann, I. Calis, H. Kirmizibekmez, W. Schuhly, S. Harput, O. Stiher, Gweithgaredd sborionwyr radical offenylpropanoidglycosidaumewn leukocytes polymorphonuclear ysgogol FMLP: perthnasoedd strwythur-gweithgaredd, Planta Med. 66 (2000) 746–748.
[20] H. Chen, Y. Zhou, Y. Shao, F. Chen, Asidau ffenolig rhad ac am ddim yn Shanxi finegr oed: newidiadau yn ystod heneiddio a gweithgareddau gwrthocsidiol synergaidd, Int. J. Bwyd Pro 19 (2015) 1183–1193.
[21] CA Rice-Evans, NJ Miller, G. Paganga, Strwythur-perthynas gweithgaredd gwrthocsidiol o flavonoids ac asidau ffenolig, Radic Rhad ac Am Ddim. Biol. Med. 20 (1996) 933–956.
[22] A. Lopez-Munguía, ´ Y. Hernandez-Romero, ´ J. Pedraza-Chaverri, A. MirandaMolina, I. Regla, A. Martínez, E. Castillo, analogs glycosid Phenylpropanoid: synthesis enzymatic, gweithgaredd gwrthocsidiol a damcaniaethol astudiaeth o'u mecanwaith sborionwyr radical rhydd, PloS One 6 (2011) 20115.
[23] X. Li, Y. Xie, K. Li, A. Wu, H. Xie, Q. Guo, P. Xue, Y. Maleshibek, W. Zhao, J. Guo, D. Chen, Gwrthocsid a cytoprotection acteosid a'i ddeilliadau: cymhariaeth a chemeg fecanistig, Moleciwlau 23 (2018) 498.
[24] SE Kulling, HM Rawel, Chokeberry (Aronia melanocarpa) – adolygiad o'r cydrannau nodweddiadol a'r effeithiau posibl ar iechyd, Planta Med. 74 (2008) 1625–1634.
[25] BJ Mc Even, Dylanwad diet a maetholion ar swyddogaeth platennau, Semin. Thromb. Hemost. 40 (2008) 214–226.
[26] B. Olas, Amlswyddogaetholdeb aeron tuag at blatennau gwaed a rôl ffenolig aeron mewn anhwylderau cardiofasgwlaidd, Platennau 5 (2016) 1–10.
[27] UB Ismailoglu, I. Saracoglu, Harput yr Unol Daleithiau, I. Sahin-Eredemli, Effeithiau ffenylpropanoid a glycosidau iridoid ar amhariad radical rhydd o ymlacio endotheliwm-ddibynnol mewn cylchoedd aortig llygod mawr, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193–197.
[28] ZF Bai, Y. Liu, XQ Wang, Ymchwiliad o blanhigion meddyginiaethol ethnig Orobanche, Cistanche a Boschniakia, Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548–4552.
[29] Gall K. Hayashi, T. Nagamatsu, M. Ito, H. Yagita, Y. Suzuki, Acteoside, cydran o Stachys sieboldii MIQ, fod yn asiant antinphritic addawol (3): effaith asetonid ar y mynegiant ar intercellular moleciwl adlyniad-1 mewn glomerwli neffritig arbrofol mewn llygod mawr a chelloedd endothelaidd diwylliedig, Jpn. J. Ffarmacol. 70 (1996) 157–168.
[30] C. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Gweithgaredd hepatoprotective o ffenylpropanoidau o Cistanche deserticola, Planta Med. 64 (1998) 120–125.
[31] Mae WF Chiou, LC Lin, CF Chen, Acteoside yn amddiffyn celloedd endothelaidd rhag radical rhydd a achosirocsidiolstraen, J. Pharm. Pharm. 56 (2004) 743–748.
[32] S. Sahpaz, N. Garbacki, M. Tits, F. Bailleul, Ynysu a gweithgaredd ffarmacolegol esters ffenylpropanoid o Marrubium vulgare, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389–392.
[33] L. Lie-Chwen, W. Yea-Hwey, H. Yu-Chang, Ch Shiou, L. Kuo-Tong, Ch Yueh-Ching, W. Wen-Yen, S. Yoh-Chiang, Yr effaith ataliol offenylpropanoidglycosidaua glwcosidau iridoid ar gynhyrchu radical rhydd a mynegiant 2 integrin mewn leucocytes dynol, J. Pharm. Ffarmacol. 58 (2006) 129–135.