Poblogaethau Celloedd T CD8 A CD4 mewn Arennau Dynol
Mar 25, 2022
Crynodeb:Cefndir: Mewn safleoedd ar y ffin, ac mewn organau mewnol, mae celloedd T cof preswyl meinwe (TRM) yn cyfrannu at y rhwystr imiwnedd yn erbyn pathogenau fel firysau, bacteria, ffyngau a chanser. Fodd bynnag, prin yw'r wybodaeth am bresenoldeb a swyddogaeth y celloedd hyn yn yr aren ddynol. Er mwyn deall yn well yr amddiffyniad imiwnolegol trwy gyfrwng celloedd T yn yr organ hwn, fe wnaethom anelu at bennu agweddau ffenoteipaidd a swyddogaethol celloedd T CD8 a CD4 sy'n bresennol mewn celloedd T iach a allografft.aren meinwe. Dulliau: Gan ddefnyddio cyd-cytometreg amlsianel, aseswyd ffenoteip a swyddogaeth celloedd T mewn samplau meinwe arennol iach (n=5) aarenmeinwe allograft (n=7) a chymharu'r agweddau hyn â chelloedd T mewn gwaed ymylol o reolaethau iach (n=13). Canlyniadau:Arennauroedd samplau meinwe yn cynnwys symiau sylweddol o gelloedd CD8 a CD4 T. Mewn cyferbyniad â'r celloedd sy'n cylchredeg,arenMynegodd celloedd T CD69 a CD103 yn aml ac roeddent yn beicio'n egnïol yn amlach. Ar ben hynny, bron i gydarenMynegodd celloedd T CXCR3, ac yn aml mynegodd CXCR6 o'i gymharu â chelloedd T yn y cylchrediad. Yn amlwg,arenRoedd celloedd T yn cynhyrchu mwy o IFN na chelloedd cylchredeg ac roeddent yn aml yn amlswyddogaethol. Casgliad: Mae celloedd T swyddogaethol gyda nodweddion nodweddiadol TRM yn byw mewn bodau dynolarenmeinweoedd. Mae'r celloedd hyn yn aml yn beicio'n weithredol ac yn aml yn mynegi CXCR3 a CXCR6.
Geiriau allweddol:lymffocytau meinwe-breswyl; celloedd T; CD8; CD4; CD69; CD103; aren; allografft
BYDD CISTANCHE YN GWELLA CLEFYD YR ARREN/ARENAU
1. RhagymadroddMae celloedd T cof preswylwyr (TRM) yn parhau mewn meinweoedd i ddarparu amddiffyniad lleol hirdymor rhag pathogenau. Mewn cyferbyniad ag ail-gylchredeg celloedd T, ni ellir canfod poblogaethau TRM mewn gwaed ymylol, ac maent yn wahanol iawn i ailgylchredeg poblogaethau celloedd T o ran eu ffenoteip, eu swyddogaeth, a'u metaboledd [1]. Yn wir, nid yw hyn yn syndod o ystyried y ffaith bod systemau organau gwahanol, fel yr ysgyfaint, yn agored i lwythi uwch o wahanol bathogenau nag sy'n wir am y cylchrediad, sydd yn gyffredinol wedi'i ynysu o'r byd y tu allan [2].Mae cadw meinwe TkM yn parhau am flynyddoedd ac yn cael ei gyfryngu gan fecanweithiau sy'n cynnwys echelin -1-sffingosin derbynnydd ffosffad1 (S1PR1)-sphingosine 1-ffosffad (SP1) Sphingosine. Mae S1PR1 yn dderbynnydd a fynegir gan gelloedd T sy'n cyfryngu alltudiad o organau lymffoid eilaidd wrth eu rhwymo i'r moleciwl signalau bioactif SP1, sy'n gyfryngwr pwysig o fasnachu celloedd T. Gellir torri ar draws yr echel hon gan CD69, lectin math-c wedi'i rhwymo â philen sy'n antagonizes mynegiant S1PR1, gan gyfryngu cadw. Ar ben hynny, mewn llygod mae mynegiant S1PR1 yn cael ei achosi gan y ffactor trawsgrifio tebyg i Krüppel Ffactor 2 (KLF2), y canfuwyd ei fod wedi'i isreoleiddio yn TRM, a thrwy hynny hefyd yn atal echdoriad lymffocyte [3]. Yn ei dro, dangoswyd bod is-reoleiddio KLF2 yn cael ei gyfryngu gan homolog ffactor trawsgrifio Blimpl mewn celloedd T (Hobit), a fynegir mewn modd TpM-benodol mewn celloedd T murine [4]. Ymhellach, mae rhai TRM hefyd yn mynegi CD103 (integrin E), lle gellir adnabod TRM gan ddefnyddio mynegiant CD69 a CD103 [1].
Er bod gwybodaeth am ffenoteip TRM a swyddogaeth yn cynyddu ar gyfer meinweoedd dynol amrywiol, ychydig a wyddys am yr agweddau hyn yn yaren. Yma, mae celloedd T yn agored i set benodol o bathogenau fel bacteria yn esgyn o'r llwybr wrinol isaf a firysau renotropig fel polyomavirus BK (BKPyV). Yn wir, fe wnaethom ddisgrifio’n ddiweddar sut mae arennau dynol yn cynnwys is-set o gelloedd T sy’n mynegi CD69 a/neu CD103, ac ymhlith y rhain mae celloedd CD8 T sy’n targedu’n benodol y proteinau BKPyV virion protein1 (VP1) a phrotein antigen T mawr (LTAG) [5]. Fe wnaethom ni, ac eraill, hefyd ddangos presenoldeb celloedd CD69/CD103-yn mynegi celloedd T (MAIT) amrywiolyn cysylltiedig â mwcosa mewnarenmeinwe [6,7].
Er mwyn deall yn well pa fath o gelloedd T yw'r ymateb imiwn lleol yn yr organ hwn, defnyddiwyd cytometreg llif amlsianel i ymchwilio i ffenoteip a swyddogaetharenTRMs, wedi'u hynysu oddi wrth y rhoddwrarendeunydd derbynwyr trawsblaniadau arennol (RTRs)a chan iacharenmeinwe ger carcinomas celloedd clir arennol, i weld sut mae'r poblogaethau hyn yn cymharu â phoblogaethau celloedd T yn y cylchrediad.Canfuom fod dynolarenmae meinwe yn dal symiau sylweddol o gelloedd CD4 a CD8 T gan fynegi dim ond CD69, CD69, a CD103, neu dim un o'r marcwyr hyn. Canfuom fod celloedd CD69-CD103- i mewnarenmae meinwe yn wahanol iawn i gelloedd T yn y cylchrediad a gall gynrychioli poblogaeth TRM heb y marcwyr TRM canonaidd. Ymhellach, rydym yn dangos bod celloedd T yr arennau yn beicio'n weithredol yn amlach, fel y bernir gan fynegiant cynyddol o Ki-67, o gymharu â gwaed. Gwelsom hefyd fod celloedd CD8 a CD4 T ynarenmae meinwe bron bob amser yn mynegi CXCR3 ac yn aml yn mynegi CXCR6. Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu rôl i'r derbynyddion chemokine hyn wrth ddenu a chynnal poblogaethau celloedd T cof sy'n byw yn yr arennau.
2. Defnyddiau a Dulliau
2.1. Cleifion a SamplauCafwyd samplau o Glefydau Arennol Biobank o leoliad UMC Amsterdam AMC. Yn y Biobanc hwn, mae samplau cleifion, megis gwaed aarenmeinwe, yn cael eu casglu a'u storio o fyw'n iacharenrhoddwyr a RTRs a ddilynir cyn ac ar ôl trawsblannu aren. Cynhaliwyd yr astudiaeth hon yn unol â'r egwyddorion a amlinellwyd yn Natganiadau Helsinki ac Istanbul a rhoddodd yr holl gyfranogwyr ganiatâd gwybodus ysgrifenedig cyn cofrestru yn y Biobank. Yn ogystal, rhoddwyd meinwe gweddilliol cleifion a gafodd neffrectomi tiwmor (meinwe'r arennau ymhell o'r tiwmor) gan yr Adran Patholeg a'i storio hefyd yn y Biobank. Cafodd y meinweoedd hyn eu prosesu'n ddienw yn unol â Chod Ymddygiad Ffederasiwn Cymdeithasau Gwyddonol Meddygol yr Iseldiroedd (Ymchwil Meinweoedd Dynol ac Ymchwil Feddygol: Cod Ymddygiad ar gyfer Defnydd Cyfrifol, 2011 www.federa.org).
2.2. Celloedd Mononiwclear Gwaed Ymylol (PBMCs)Cafwyd samplau gwaed o sytomegalofirws (CMV) - rheolaethau iach seronegyddol (bywarenrhoddwyr cyn llawdriniaeth, n= 13). Dangosir nodweddion y rhai a gymerodd ran yn yr astudiaeth hon yn Nhabl 1. Cafodd PBMCs eu hynysu o waed heparin sodiwm gan allgyrchiad graddiant dwysedd safonol a'u cadw'n gryopydd tan ddiwrnod y dadansoddiad.
2.3. Meinwe'r ArennauCafwyd samplau meinwe arennau iach (n {{0}}) o arennau a dynnwyd trwy lawdriniaeth oherwydd carsinoma celloedd arennol (meinwe nontumorous pell o begwn cyfochrog yr aren) a meinwe trawsblaniad aren (n {{1) }}) a gafwyd o alografftiau arennol allblanedig ar ôl methiant trawsblaniad. Cyfeirir at y samplau hyn fel samplau arennau iach a thrawsblaniad, yn y drefn honno. Cafodd tafelli o cortecs yr arennau eu torri'n giwbiau 1-mm gyda'r McElwain Tissue Chopper (Ted Pella, Redding, CA, UDA), wedi'u trosglwyddo i diwbiau 50 mL, a'u golchi â PBS oer nes nad oedd unrhyw waed. yn amlwg yn bresennol ac roedd y supernatant yn glir. Ychwanegwyd cyfrwng treulio wedi'i gynhesu ymlaen llaw (37 gradd), 40 mL fesul 10 g o feinwe (DNAse Math IV (50 KU/mL)(Sigma Aldrich, Zwiindrecht, Yr Iseldiroedd), math colagenas IV (0.5 mg/mL)(Worthington Biocemegol, Lakewood, NJ, UDA), BSA(60 mg/mL)(Sigma Aldrich), serwm llo ffetws 20 uL/mL (FCS, VWR International BV, Amsterdam, Yr Iseldiroedd), TRIS (0.025 M)(Merck BV, Amsterdam, Yr Iseldiroedd), penisilin-streptomycin (Biochrom GMBH, Berlin, yr Almaen) yn HBSS (Westburg BV, Leusden, Yr Iseldiroedd)), a'i ddeor mewn ysgydwr am 20 munud ar 37 gradd. Trosglwyddwyd yr ataliad cynnes i diwb C (Miltenvi, Bergisch Gladbach, yr Almaen) a bu'n destun y rhaglen M_spleen_04.01 ar y GentleMacs(Miltenyi). Cafodd y cyfrwng treulio ei ddadactifadu â PBS oer a throsglwyddwyd yr ataliad celloedd canlyniadol trwy hidlydd cell i gael ataliad un-gell, a oedd yn destun centrifugio graddiant dwysedd safonol yn unol â phrotocol y gwneuthurwr (Lymphoprep, Abbott Diagnostics Technologies AS, Oslo, Norwy ). Roedd y celloedd mononiwclear ynysig (MNCs arennau).cryopreserved tan ddiwrnod y dadansoddiad yn IMDM wedi'i ategu â 20 y cant FCS,000036 v/v y cant -mercaptoethanol, 5 y cant DMSO, penisilin, a streptomycin.
2.4. Cytometreg llifPerfformiwyd mesuriadau ar sytomedr llif LSFortessa (BD Biosciences). Ar gyfer pob sampl, dadansoddwyd 2×106 PBMCs neu 0.5×106 i 10×106 arennau MNC. Roedd cyfaint pob adwaith staenio yn gymharol â nifer y celloedd ac arhosodd y crynodiadau gwrthgorff yn gyson. Deorwyd celloedd â'r gwrthgyrff arwyneb (Tabl Atodol S1) am 30 munud ar 4 gradd yn y tywyllwch. Cafodd celloedd marw eu heithrio gan ddefnyddio'r llifyn hyfywedd gosodadwy eFluor455UV (eBioscience Inc., Thermo Fisher Scientific, San Diego, CA, UDA). Ychwanegwyd gwrthgyrff monoclonaidd gyda thargedau mewngellol (Tabl Atodol S1) ar ôl gosod a threiddiad y celloedd gan ddefnyddio Set Staenio Ffactor Trawsgrifio FoxP3/Transcription (eBioscience Inc.). Dilynwyd dulliau cyhoeddedig ar gyfer cytometreg llif a didoli celloedd at ddibenion imiwnolegol [8]. Mae'r strategaeth gatio a ddefnyddiwyd ar gyfer y dadansoddiad ffenoteipaidd i'w gweld yn Ffigur Atodol S1. Rydym wedi dangos yn flaenorol nad oedd unrhyw un o'r marcwyr a ddadansoddwyd wedi'u heffeithio gan y dull treulio a ddefnyddiwyd i ynysu MNCs arennau [7].
Arweiniodd cyfyngiadau ar samplau meinwe at wahardd samplau o baneli llenni. Mae CD3 ynghyd â chyfrifon celloedd wedi'u dadansoddi fesul sampl mewn PBMCs iach, MNCs arennau iach ac arennau TX i'w gweld yn Ffigur S3. MNCs Dim ond pan oeddent yn cynnwys dros 50 y cant o gelloedd byw o fewn y lymffocyt, fel yr aseswyd gan y dve hyfywedd, a nodweddwyd is-setiau celloedd T seiliedig ar CD69/CD103 ymhellach os oedd cyfanswm eu cyfrif celloedd yn fwy na 50.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA METHIANT YR AREN/ARENAU
2.5. Assay YsgogiadYsgogwyd PBMC a MNC yr arennau fel y disgrifiwyd yn flaenorol [7,9]. Cafodd PBMCs a MNCs arennau eu dadmer ym mhresenoldeb DNAse I(200 KU/mL), eu golchi, a'u caniatáu i wella dros nos mewn platiau ffynnon, gwaelod crwn, 96- heb eu trin (Corning) mewn cyfrwng meithrin (RPMI wedi'i ategu â 10 y cant FCS a phenisilin-streptomycin) mewn crynodiad o 20 × 106 / mL （100 μL/well）.
Y bore wedyn, ychwanegwyd phorbol 12-myristate 13-asetad (PMA, 10 ng/mL; Sigma Aldrich) ac ionomycin(1 ug/mL; Sigma Aldrich) i ysgogi'r celloedd. Ychwanegwyd canolig yn unig fel y rheolaeth negyddol. Perfformiwyd yr holl ddeoriadau mewn cyfrwng diwylliant ym mhresenoldeb CD28 (clôn 15E8; 2 ug/mL), CD29 (clôn TS 2/16; 1 ug/mL), brefeldin A(10 ug/mL, Invitrogen), a GolgiStop ( BD Biowyddorau) mewn cyfrol derfynol o 200 uL am 4 awr ar 37 gradd a 5 y cant CO2.
Yn dilyn hynny, deorwyd y celloedd am 30 munud gyda'r gwrthgyrff arwyneb (Tabl Atodol S2). Cafodd celloedd marw eu heithrio gan ddefnyddio llifyn hyfywedd gosodadwy eFluor780 (bioscience Inc., Thermo Fisher Scientific, San Diego, CA, UDA). Ychwanegwyd gwrthgyrff monoclonaidd ar gyfer staenio mewngellol (Tabl S1) ar ôl gosod a threiddiad y celloedd gan ddefnyddio Set Adweithydd Cytofix/Cytoperm (BD Biowyddorau). Cafodd celloedd eu golchi ddwywaith a'u dadansoddi ar sytomedr llif LSFortessa. Mae'r strategaeth gatio a ddefnyddiwyd yn y dadansoddiad swyddogaethol i'w gweld yn Ffigur Atodol S2. Er mwyn pennu amlbwrpasedd pob is-set cell T, cyfrifwyd nifer cyfartalog swyddogaethau pob poblogaeth gan ddefnyddio'r fformiwla ganlynol: ((canran y celloedd sy'n cynhyrchu 1 cytocin]*1) plws ([canran y celloedd sy'n cynhyrchu 2 cytocin]*2) plws ([canran y celloedd sy'n cynhyrchu 3 cytocin]*3) plws ([canran y celloedd sy'n cynhyrchu 4 cytocin]*4) plws ([canran y celloedd sy'n cynhyrchu pob un o'r 5 cytocin]*5))/100.
2.6.Dadansoddi Data
Dadansoddwyd data gan ddefnyddio fersiwn FlowJo 10 (FlowJo, Ashland, NEU, UDA). Crëwyd yr holl graffiau a ffigurau gan ddefnyddio fersiwn Graphpad Prism 8.00 ar gyfer Windows (Meddalwedd GraphPad, La Jolla, CA, UDA). Defnyddiwyd yr un rhaglen hefyd ar gyfer dadansoddiadau ystadegol o'r data. Defnyddiwyd y prawf Mann-Whitney-U nad oedd yn baramedrig i bennu arwyddocâd samplau heb eu paru. Er mwyn cymharu samplau pâr, defnyddiwyd prawf rheng arwydd Wilcoxon. p-gwerthoedd<0.05 were="" considered="" statistically="">
3. Canlyniadau
3.1.Mynegiant Unigryw o CD8 a/neu CD4 a Marcwyr Preswyliad Meinwe gan Gelloedd T mewn Meinwe Arennau IachYn gyntaf, fe wnaethom gymharu mynegiant CD4 a CD8 gan CD3-gelloedd T positif mewn gwaed ymylol i gelloedd a ganfyddir mewn meinwe arennau iach. Roedd celloedd T CD4-CD8 plws (CD8) yn llawer amlach yn cael eu canfod ym meinwe'r arennau nag mewn gwaed ((canolrif) 25 y cant yn erbyn 38 y cant )(Ffigur la). Mewn cyferbyniad, CD4*CD{{9} }(CD4) canfuwyd celloedd T mewn amleddau uwch yn y gwaed nag ym meinwe'r arennau ((70 y cant vs.52 y cant) Ffigur la). Yn gyffredinol, gwelwyd celloedd CD4 T yn amlach mewn meinwe arennau iach na chelloedd CD8 T (Ffigur 1b).
Nesaf, fe wnaethom ymchwilio i fynegiant y marcwyr meinwe-preswyliaeth, CD69 a CD103, mewn CD8 a CD4-is-setiau cell T diffiniedig. Yn ôl y disgwyl, bron iawn nid oedd CD69 a CD103 wedi'u mynegi gan gelloedd mewn gwaed ymylol (Ffigur 1c). Mewn meinwe iach, mynegwyd y ffenoteipiau CD69-CD103-, CD69 plws CD103-, CD69tCD103plws , a CD69-CD103 plws ffenoteipiau gan 46 y cant , 45 y cant , 6.6 y cant, a 1.8 y cant o gelloedd CD8T, 61 y cant, 38 y cant, 0.44 y cant, a 0.43 y cant o CD4Tcells, yn y drefn honno (Ffigur lc). I gloi, canfuwyd niferoedd sylweddol o gelloedd CD8, ond yn enwedig celloedd T CD4, mewn meinwe arennau dynol iach. At hynny, canfuwyd mynegiant CD69 a CD103, marcwyr preswyliad meinwe, yn bennaf ymhlith celloedd T a geir mewn meinwe iach ac nid mewn gwaed.
3.2.Patrymau Mynegiant Gwahanol o Farcwyr sy'n Enwebu Is-setiau Cyffredin fesul T Cell in Health/gan Meinwe Arennau
Mae CD45RA, ffosffatas tyrosine, CCR7, derbynnydd chemokine y gwyddys ei fod yn cyfryngu masnachu mewn celloedd T i organau lymffoid eilaidd, a CD28 a CD27, y ddau yn dderbynyddion cydsymbyliad sy'n ymwneud yn gryf ag actifadu celloedd T, i gyd yn farcwyr a ddefnyddir yn draddodiadol i nodi is-setiau celloedd T swyddogaethol J1{ {53}},1l. Roeddem am ymchwilio i ba raddau y mae dosbarthiad yr is-setiau hyn mewn gwaed yn wahanol i'r dosbarthiad ym meinwe'r arennau. Yn ôl y disgwyl, yr is-setiau cell CD8 T mwyaf a ganfuwyd yn y cylchrediad (hy, y rhai a oedd yn ymwneud â Mwy na neu'n hafal i 5 y cant o gyfanswm y boblogaeth) oedd y rhai â CD45RA ynghyd â CCR7 ynghyd â CD28 ynghyd â CD27 plus (celloedd T naïf neu TN, ( canolrif) 13 y cant ), CD45RA-CCR7 ynghyd â CD28 ynghyd â CD27 plws (Tcells cof canolog neu TcM, 6 y cant ), CD45RA-CCR7-CD28 ynghyd â CD27 plws (TEv1,3{1 y cant), CD45RA-CCR7-CD28 plws CD27-(Tau2,10 y cant ), CD45RA-CCR7-CD28-CD27*(TEy3,6 y cant) , CD45RA-CCR7-CD28-CD27-(TM4,6 y cant)a CD45RA ynghyd â CCR7-CD28-CD27-(TEMRA) , 10 y cant ) ffenoteip. Mewn meinwe iach, canfuwyd bron dim (0.6 y cant) o gelloedd CD8 T gyda ffenoteip TN a dim ond ychydig (0.8 y cant) a ddangosodd ffenoteip Treth. Mewn cyferbyniad, roedd celloedd CD8 T a ganfuwyd mewn meinwe arennau iach yn cynnwys llawer o TEv1-(22 y cant), TEM2-(12 y cant), Tpx3-(18 y cant),TEx{ {65}} (23 y cant ), a TEyRA (11 y cant ) poblogaethau celloedd T (Ffigur ld a Ffigur S4). Wrth edrych ar gelloedd CD4 T yn y gwaed, y poblogaethau mwyaf oedd y rhai a fynegodd Ty- (35 y cant ), TcM- (25 y cant ), TEMl- ( 16 y cant ), TFM { {76}} ( 9 y cant ), a poblogaeth gyda CD45RAtCCR heb ei nodi fel arall7-CD28 ynghyd â ffenoteip CD27* (0.4 y cant) (Ffigur 1d a Ffigur S4).Mewn meinwe arennau iach, ychydig o gelloedd CD4 T a fynegodd TN- (3 y cant) neu TcM -(3 y cant) ffenoteip. Yn lle hynny, canfuwyd nifer sylweddol o gelloedd â ffenoteip TEM1-(22 y cant), TEM2-(40 y cant), neu TEM4(14 y cant) mewn meinwe iach (Ffigur ld a Ffigur S4) . I gloi, mae dosbarthiad is-setiau celloedd CD8 a CD4 T diffiniedig CD45RA/CCR7/CD28/CD yn amrywio'n sylweddol rhwng gwaed a meinwe iach yr arennau.
3.3. Celloedd CD8 a CD4 T mewn Meinwe Arennau Dynol Iach Yn Amlach Yn Cynnwys Celloedd Beicio GweithredolNesaf, gwnaethom ymchwilio i weld a oes gwahaniaethau yn y mynegiant o farcwyr sy'n nodweddiadol o broffil effeithydd sytotocsig, rhwng poblogaethau celloedd T CD8 a CD4 mewn gwaed a meinwe'r arennau. Yn gyntaf, buom yn edrych ar fynegiant y ffactorau trawsgrifio blwch-T T-bet ac eomeso-dermin(Eomes). Mae'r rheolyddion trawsgrifiadol hyn yn ymwneud yn uniongyrchol â chynhyrchu celloedd effeithydd cyfnod acíwt, gan ysgogi mynegiant moleciwlau fel interferon-y a gransym B, ac wrth gynhyrchu ymatebion cof eilaidd. Yn ôl y disgwyl, mynegiant o T-bet yn aml ymhlith cylchrediad y gwaed CD8 Tcells (54 y cant ), tra bod celloedd cylchrediad y gwaed CD4 T anaml cyn-pwyso'r ffactor trawsgrifio hwn (13 y cant ). Yn ddiddorol, ar gyfer celloedd T CD4, roedd mynegiant T-bet yn sylweddol uwch ymhlith celloedd T a ganfuwyd mewn meinwe arennau iach nag yn y cylchrediad (53 y cant o'i gymharu â 13 y cant). Canfuwyd rhywfaint o fynegiant yn aml hefyd ymhlith celloedd cylchredol CD8 T (59 y cant), tra'n brin eto ymhlith celloedd cylchrediad gwaed CD4 T (15 y cant). Fodd bynnag, roedd mynegiant Eomes yn amlach ymhlith celloedd CD4 T ym meinwe'r arennau (32 y cant) nag mewn gwaed (Ffigur 2a, b).
Nesaf, fe wnaethom ymchwilio i fynegiant gransym B, proteas serine y gwyddys ei fod yn cyfryngu apoptosis ar ôl pigiad i'r cytoplasm gan gelloedd T sytotocsig. Yn unol ag adroddiadau blaenorol, canfuwyd mynegiant T-bet a gransym B mewn niferoedd sylweddol wrth gylchredeg celloedd CD8 T (28 y cant ). Fodd bynnag, roedd ei fynegiant yn brin ymhlith celloedd T CD4 sy'n cylchredeg (1 y cant), Ar gyfer celloedd T CD8, roedd mynegiant gransym B yn debyg ym meinwe'r arennau a phoblogaethau cylchredol (28 y cant ys.23 y cant) (Ffigur 2c). Yn ddiddorol, nid oedd yr amleddau mynegiant T-bet ac Eomes uwch a ganfuwyd mewn celloedd CD4 T yr arennau yn cyfateb ag amlder mynegiant uwch o gransym B yn y compartment hwn (5 y cant ). Yna fe edrychon ni ar fynegiant KLRGl, derbynnydd cyd-hibitory y gwyddys ei fod wedi'i fynegi'n bennaf gan gelloedd effeithydd cyfnod acíwt cytotocsig a chelloedd cof effeithydd. Mynegwyd KLRG1 yn aml trwy gylchredeg celloedd CD8 T (54 y cant), ond nid gan gelloedd T CD4 ( 10 y cant). Ni chanfuwyd unrhyw wahaniaethau rhwng adrannau anatomegol mewn mynegiant KLRG1l ar gyfer celloedd CD8 neu CD4 T. Yn olaf, fe wnaethom ymchwilio i fynegiad Ki-67, marciwr sy'n dynodi celloedd wrthi'n beicio. Yn unol ag arsylwadau blaenorol, roedd mynegiant Ki{-67 ymhlith celloedd T CD8 a CD4 cylchredeg T yn brin (1 y cant a 2 y cant, yn y drefn honno). Yn ddiddorol, ymhlith celloedd CD8 T, ond yn enwedig ymhlith celloedd T CD4, roedd mynegiant Ki-67 yn cael ei ganfod yn llawer mwy aml mewn celloedd T mewn meinwe arennau (3 y cant ac 11 y cant, yn y drefn honno) (Ffigur 2e). I gloi, canfuwyd celloedd T CD4 mewn meinwe arennau dynol iach, ond nid celloedd CD8 T yn y compartment hwn, a fynegwyd yn amlach T-bet a Chartrefi. Fodd bynnag, nid oedd hyn yn trosi i fynegiant amlach o gransym B gan gelloedd CD4 T yr arennau. Ar ben hynny, er bod niferoedd cyffredinol y celloedd beicio yn isel, roedd meinwe'r arennau'n cynnwys celloedd CD8 a CD4 T beicio llawer mwy gweithredol na'r cylchrediad.
3.4. Mae Celloedd T CD8 a CD4 mewn Meinwe Arennau Iach bron i gyd yn sefyllfa CXCR3-Sefyllfa CXCRYna buom yn edrych am wahaniaethau o ran mynegiant marcwyr eraill, sy'n nodweddiadol o gylchredeg poblogaethau o ells cof nad ydynt yn sytotocsig ar unwaith, fel y dangoswyd yn flaenorol ar gyfer poblogaethau celloedd T sy'n cylchredeg. Edrychwyd yn gyntaf ar fynegiant IL-7R , a fynegir yn bennaf ar gelloedd cof naïf a gwahaniaethol cynnar yn y cylchrediad, lle mae'n ymwneud â chynnal amlhau homeostatig [10,12,13]. Mewn gwaed ymylol, mynegwyd IL-7Ra yn aml gan gelloedd CD8 T (84 y cant) a chelloedd CD4 T (98 y cant). Mynegodd celloedd T CD8 a CD4 mewn meinwe arennau iach y marciwr hwn yn llawer llai aml na chelloedd T sy'n cylchredeg (71 y cant a 76 y cant, yn y drefn honno) (Ffigur 2f).
Nesaf, fe wnaethom ymchwilio i fynegiant amrywiol dderbynyddion chemokine eraill Yn ddiddorol, mynegwyd CXCR3, derbynnydd chemokine a oedd yn ymwneud â masnachu Tcell i feinweoedd llidus[14-17], gan niferoedd hynod fawr o gelloedd CD8 a CD4 T ym meinwe'r arennau (99). y cant a 91 y cant , yn y drefn honno ), ac yn sylweddol llai aml trwy gylchredeg celloedd T (58 y cant a 26 y cant , yn y drefn honno) (Ffigur 2g). Yn olaf, fe wnaethom bennu mynegiant CXCR6, y gwyddys ei fod yn gysylltiedig â ffurfio poblogaethau TRM [18-22]. Er bod CXCR6 yn cael ei fynegi gan boblogaeth fach yn unig o gylchredeg celloedd CD8 T (16 y cant), a bron nid trwy gylchredeg celloedd CD4 T. mynegodd cyfran sylweddol uwch o Tcells CD8 a CD4 mewn meinwe arennau y moleciwl hwn (40 y cant a 40 y cant, yn y drefn honno) (Ffigur 2h). I gloi, roedd marcwyr sydd fel arfer yn gysylltiedig â chyflwr nad yw wedi'i wahaniaethu'n syth yn y cylchrediad, yn debygol-7Ra, CCR7, CD28, a CD27, yn cael eu mynegi'n llawer llai aml gan gelloedd CD8 a T yr arennau o'u cymharu â'r rhai mewn gwaed. cyferbyniad, roedd celloedd T yr arennau yn aml yn mynegi CXCR6 a bron bob amser yn mynegi CXCR3.
3.5.Ychydig iawn o wahaniaethau yn y ffenoteip rhwng celloedd yr Arennau Iach ac Allograft TNesaf, roeddem am ymchwilio i weld a oedd y canfyddiadau hyn yn dal i sefyll mewn meinwe o alograffau arennau a drawsblannwyd a gafwyd ar gyfer arwyddion clinigol amrywiol (Tabl 1).O ran niferoedd y celloedd CD8 a CD4 T mewn meinwe iach ac allograft, ni welwyd unrhyw wahaniaethau (Ffigur 3a). Fodd bynnag, gwnaethom sylwi ar duedd ansylweddol tuag at fwy o gelloedd CD4T a llai o gelloedd CD8T mewn meinwe iach nag mewn meinwe alograft (Ffigur3b). Yn ogystal, wrth edrych ar CD69/CD103expression a CD45RA/CCR7/CD28/CD27-is-setiau diffiniedig, dim gwahaniaethau yn nosbarthiad CD69/CD{13}} neu CD45RA/CCR7/CD28/CD27- nodwyd is-setiau diffiniedig, waeth beth fo ffenoteip CD8/CD4 (Ffigur 3d a Ffigur S5). Wrth archwilio amlder mynegiant y marcwyr sy'n fwy nodweddiadol ar gyfer celloedd T sy'n cylchredeg sytotocsig, ni welsom unrhyw wahaniaethau mewn mynegiant T-bet, KLRG1 na gransym B rhwng celloedd iach arennau neu alografft T (Ffigur 3a,gh). Canfuom fod mynegiant Eomes i'w weld yn llai aml mewn celloedd CD4 T meinwe alografft, nag mewn celloedd T meinwe iach (Ffigur 3f). Ni welwyd unrhyw wahaniaethau ym mynegiant y marcwyr eraill. (Ffigur 3-l a Ffigur S5b-d). I gloi, ar wahân i amlder mynegiant is o Eomes ymhlith celloedd Allograft CD4 T, nid oedd poblogaethau celloedd yn wahanol rhwng poblogaethau astudio.
3.6. CD{2}}CD{3}}T Mae celloedd T mewn Meinwe'r Arennau Yn Wahanol i Gelloedd CylchrediadO ystyried cyfansoddiad ffenotypig tebyg celloedd CD8 a CD4 T a geir mewn meinwe arennau iach ac mewn meinwe alografft arennau, fe wnaethom gyfuno data o'r ddau grŵp astudio i archwilio nodweddion y celloedd hyn ymhellach yn ôl mynegiant CD69 a CD103. Gan fod celloedd CD69-CD103 plws bob amser yn cael eu canfod mewn amleddau isel iawn(<50 events),="" we="" excluded="" these="" cells="" from="" further="" analyses.="">Yn gyntaf, fe wnaethom ymchwilio i wahaniaethau yn yr is-setiau hyn yn ôl cydfynegiant CD69/CD1{{03 ym mhoblogaethau celloedd T yr arennau (Ffigur 4 a Ffigur S6). Yn ddiddorol, ar gyfer celloedd CD8 a CD4 T fel ei gilydd, nodwyd gwahaniaethau sylweddol yn y dosbarthiad o CD45RA/CCR7/CD28/CD27-is-setiau diffiniedig ymhlith CD69-CD103-,CD69 a CD27- {14}}a CD69*CD103* is-setiau. Ar gyfer celloedd CD8 T, roedd celloedd CD69-CD103-yn cynnwys poblogaeth sylweddol o gelloedd TeyRA (21 y cant ) a oedd yn llawer llai ymhlith is-setiau CD69 ynghyd â CD103- a CD69 plws CD103 (5.8 y cant a 2.2 y cant, yn y drefn honno). Ar gyfer celloedd CD4 T, ychydig o gelloedd TEyRA a welwyd ymhlith is-setiau CD69-CD103-, CD69*CD{41}}, a CD69 ynghyd â CD103* (2.6 y cant ,0 y cant, a 1.7 y cant , yn y drefn honno). Yn lle hynny, roedd gan y celloedd hyn isboblogaethau mawr o TFw1 (26 y cant .24 y cant , a 10 y cant , yn y drefn honno) a TEy2 ells (30 y cant ,46 y cant , a 27 y cant , yn y drefn honno). Ymhlith CD69 ynghyd â CD103-ac yn arbennig ymhlith y celloedd CD69 * CD103 *, gwelwyd is-boblogaeth TEM4 llawer mwy (6 y cant, 11 y cant a 34 y cant, yn y drefn honno).
O ystyried y gwahaniaethau hyn a'r sylw blaenorol mai prin fod poblogaethau celloedd T yr arennau'n cynnwys celloedd TN a TcM, gwnaethom ymchwilio ymhellach i'r celloedd CD{0}}CD103- a ddarganfuwyd ym meinwe'r arennau er mwyn pennu i ba raddau yr oedd y celloedd hyn nid dim ond celloedd sy'n cylchredeg sy'n pasio trwy gylchrediad yr arennau. Er mwyn gwneud hynny, gwnaethom gymharu'r celloedd hyn â chelloedd sy'n cylchredeg. Roedd celloedd CD69-CD103~ ym meinwe'r arennau yn wahanol iawn i'r rhai yn y cylchrediad: mynegwyd T-bet, Ki-67, a CXCR3 yn amlach gan gelloedd T yr arennau, waeth beth fo ffenoteip CD8/CD4 (Ffigur 5a-c). Mewn cyferbyniad, mynegwyd IL-7R , CCR7, CD28, a CD27 i gyd yn sylweddol llai aml gan gelloedd T aren CD69-CD103-, waeth beth fo ffenoteip CD8/CD4 (Ffigur 5d- g). Mynegodd CD69-CD103-CD4 Tcells ym meinwe'r arennau KLRG1 yn sylweddol amlach nag yn y gwaed a chelloedd CD{25}}CD{26}}CD8 T ym meinwe'r arennau yn mynegi Eome yn sylweddol amlach na mewn gwaed.
Nesaf, roeddem am weld sut roedd cydfynegiant CD69 a CD103 yn effeithio ar farcwyr potensial swyddogaethol. Yn gyntaf, buom yn edrych ar farcwyr sy'n gysylltiedig â photensial sytotocsig. Er bod gwahaniaethau wedi'u nodi rhwng isboblogaethau unigol, ni welwyd unrhyw batrymau dilynol ar gyfer T-bet ac Eomes mewn celloedd CD8 T pan gafodd CD69 neu CD103 eu cydfynegi (Ffigur 6a,b). Mewn cyferbyniad, mewn celloedd CD4 T cynyddodd y ffactorau trawsgrifio hyn ynghyd â Cydfynegiant CD69 a CD103 (Ffigur 6a,b). Wrth edrych ar KLRG1, fe wnaethom sylwi ar gyfer celloedd CD8 T, bod mynegiant KLRG1 wedi dirywio ynghyd â chydfynegiant CD69/CD103. Ar gyfer celloedd CD4 T gwelwyd tuedd debyg. Fodd bynnag, yma dim ond celloedd CD{17}}CD103-sy'n mynegi KLRG1 yn amledd uwch na chelloedd CD69 ynghyd â CD103- a CD69 ynghyd â CD103* (Ffigur 6c). Gostyngodd amlder mynegiant gransym B hefyd ynghyd â marcwyr preswyliad meinwe, gyda'i amlder mynegiant ar ei isaf ymhlith celloedd CD69 a CD103*, o fewn celloedd T CD8 a CD4 (Ffigur 6d). Nid oedd mynegiant Ki-67, a oedd yn uwch ymhlith celloedd T yr arennau o'i gymharu â chelloedd T yn y gwaed, yn wahanol yn ôl cydfynegiant CD69 neu CD103 (Ffigur 6e).
Yna fe wnaethom ymchwilio i farcwyr sydd fel arfer yn gysylltiedig â phroffil cof noncytotocsig yn ôl cydfynegiad CD69/CD103. Roedd mynegiant IL-7Ra, CCR7, a CD28 ar ei uchaf o fewn y poblogaethau CD{5}}CD103-, gyda thueddiad mewn diffinio mynegiant ynghyd â chydfynegiant CD69/CD103 (Ffigur 6f-h ). Yna fe wnaethom edrych ar fynegiant CXCR3 a CXCR6. Mynegwyd y ddau dderbynnydd chemokine amlaf gan gelloedd CD69tCD103t, waeth beth fo'u ffenoteip CD8/CD4, a dangoswyd tuedd ar i fyny gyda chydfynegiant CD69/CD103. Dim ond ar gyfer CXCR6, roedd y duedd hon yn ystadegol arwyddocaol, gan effeithio ar CD8 a CD4 Tells (Ffigur 6j,k). I gloi, mae celloedd CD{23}}CD103- ym meinwe'r arennau yn wahanol iawn i gelloedd yn y cylchrediad a gallant fod yn ymwneud â phoblogaeth TBv arall nad yw wedi'i nodi gan fynegiad CD69 neu CD103. Yr unig farciwr a oedd yn gyson wahanol, waeth beth fo ffenoteip CD8/CD4, o ran cydfynegiad CD69 a CD103, oedd CXCR6.
3.7.Celloedd T yn Meinwe'r Arennau Yn Amlach yn Cynhyrchu Interfferon- Na Chelloedd T yn y GwaedYn olaf, fe wnaethom ymchwilio i gapasiti cynhyrchu cytocin yn ôl poblogaethau celloedd T diffiniedig CD8/CD ym meinwe'r arennau. Yn gyntaf, gwnaethom gymharu cynhyrchu interferon-y (IFNy), ffactor necrosis tiwmor (TNF), interleukin-2 (IL-2), ffactor ysgogi cytrefi granulocyte-macrophage (GM-CSF), a IL-17 gan CD8/CD ysgogol poblogaethau celloedd T diffiniedig a geir mewn gwaed i'r rhai mewn meinwe arennau iach (Ffigur 7a-e). Yn ddiddorol, dim ond IFNy a fynegwyd yn gyson gan gyfran uwch o gelloedd T mewn meinwe arennau iach, o'i gymharu â chelloedd T yn y gwaed, waeth beth fo ffenoteip CD8/CD4 (Ffigur 7a). Sylwyd hefyd ar wahaniaethau ar lefel is-setiau unigol. Yn benodol, cynhyrchwyd TNF a GM-CSF yn amlach gan gelloedd T CD4 ym meinwe'r arennau (Ffigur 7b.c). O ran amlswyddogaethol (hy, nifer y cytocinau a gynhyrchir ar yr un pryd), canfuwyd bod celloedd T CD4 ym meinwe'r arennau yn fwy amlswyddogaethol na chelloedd CD4 yn y gwaed (Ffigur 7f).
Nesaf, buom yn edrych ar wahaniaethau mewn gallu cynhyrchu cytocin rhwng celloedd T wedi'u hysgogi o feinwe iach ac alograft. Ni chanfuwyd unrhyw wahaniaethau wrth gynhyrchu cytocinau unigol, nac mewn nifer o cytocinau a gynhyrchwyd ar yr un pryd rhwng celloedd T o feinwe arennau iach neu alografft (Ffigur S7). Gan fod CD69 yn cael ei fynegi ar symbyliad celloedd T, dim ond y gwahaniaeth rhwng CD103-negyddol a CD103-gan fynegi celloedd CD4 a CD8 T (Ffigur 7g-) a astudiwyd gennym. Wrth gymharu celloedd CD4 a CD8 T sy'n mynegi CD103 â chelloedd nad ydynt yn mynegi CD103 ym meinwe'r arennau, gwnaethom sylwi bod celloedd CD8 a CD4 CD103 yn mynegi mwy o IFNy na chelloedd CD (Ffigur 7g). Yn ogystal, er bod celloedd sy'n cynhyrchu IL-1ZA yn isel ymhlith celloedd CD103 ynghyd â CD8 a CD4 T ym meinwe'r arennau, fe'u canfuwyd yn gyson yn amlach yn y boblogaeth hon o gymharu â'r boblogaeth CD{103-. I gloi, cynhyrchodd mwy o gelloedd T ym meinwe'r arennau IFNy o'u cymharu â chelloedd T sy'n cylchredeg, waeth beth fo ffenoteip CD8/CD4. Yn wir, canfuwyd y ganran uchaf o gelloedd sy'n cynhyrchu IFNy ymhlith y celloedd T sy'n deillio o'r arennau CD4 a CD8. Yn ogystal, nid oedd celloedd T mewn alografftiau arennau yn wahanol i'r rhai mewn meinwe arennau iach o ran y paramedrau hyn.
4. Trafodaeth
Yn yr astudiaeth gyfredol aethom i'r afael ag amrywiaeth is-setiau celloedd T, yn ôl mynegiant CD8 a CD4, a marcwyr preswyliad meinwe, CD69 a CD103, mewn arennau dynol a'u cymharu â'r rhain â gwaed. Yn wir, canfuwyd niferoedd sylweddol o gelloedd CD8 a CD4 T ym meinwe'r arennau. Ymhellach, roedd y celloedd T hyn mewn arennau yn cynnwys nifer sylweddol o gelloedd CD69*CD103-. Canfuwyd celloedd CD69 ynghyd â CD103 plws hefyd, ond yn bennaf ymhlith y celloedd CD8 T ac nid oeddent bron yn bodoli ymhlith celloedd CD4 T. Roedd canfyddiad tebyg yn ymwneud â TRM yr ysgyfaint yn flaenorol [23]. Yn ôl y disgwyl, roedd y fath CD69 a CD103-yn mynegi poblogaethau bron yn absennol o'r cylchrediad. Roedd gwahaniaeth trawiadol wrth gymharu celloedd T yn yr aren â'r rhai mewn gwaed, yn ymwneud â dosbarthiad amlwg o'r is-setiau traddodiadol CD45RA/CCR7/CD28/CD27-diffiniedig. Yn ddiddorol, ni fynegwyd mynegiant CD28 yn amlach pan oedd celloedd T yn cydfynegi CD69 yn unig neu mewn cyfuniad â CD103. Yn ddamcaniaethol, dylai hyn wneud y poblogaethau hyn yn llai agored i signalau cydsymbyliad gan CD80 a CD86. Roedd gwahaniaethau eraill yn ymwneud ag amlder mynegiant uwch o CXCR3, CXCR6, a Ki-67. Yn ogystal, roedd celloedd T yr arennau yn aml yn cynnwys celloedd cynhyrchu IFNy ac roeddent yn aml yn amlswyddogaethol. Yn wir, o fewn yr aren, roedd CD103 a Tpys yn cynnwys mwy o gelloedd cynhyrchu IFN na'u cymheiriaid negyddol CD. Yn ogystal, roedd celloedd CD103T yn cynhyrchu IL-17 yn amlach, er bod hyn yn ymwneud â phoblogaeth gymedrol.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA HEINTIAD YR AREN/ARENAU
O ran mynegiant amlach CXCR3 gan gelloedd T aren CD8 a CD4, dangoswyd yn flaenorol bod echel CXCR3/CXCL10 yn ymwneud â siapio poblogaethau TpM mewn croen, afu a meinwe lymffoid [24-28]. Yn ogystal, mae'n ymwneud â masnachu mewn pobl i epitheliwm dan straen a llid mewn ystyr cyffredinol [14-17]. O ystyried amlder uchel CXCR3 ymhlith y celloedd T hyn mewn meinwe arennau iach, mae'n ymddangos bod CXCR3 yn gysylltiedig â homeostasis TRM ym meinwe'r arennau hefyd ac efallai na fydd o reidrwydd yn cynnwys llid neu arwyddion perygl i wneud hynny. O ran CXCR6, dangoswyd eisoes bod echel CXCR6/CXCL16 yn hanfodol ar gyfer masnachu Tpst i wahanol adrannau fel yr ysgyfaint, y croen, yr afu a'r ymennydd, a gall ymwneud â mecanwaith cyffredinol sy'n hanfodol ar gyfer arwain a chadw TRM i a mewn meinweoedd, hefyd yn ymwneud â TRM ym meinwe'r arennau dynol [18-22].
Mae Farber a coworkers wedi nodweddu a chymharu'n helaeth boblogaethau CD8 a CD4 TRM sy'n byw mewn gwahanol fathau o feinwe dynol sy'n deillio o roddwyr organau. Disgrifiwyd sut mae poblogaethau TRM yn yr ysgyfaint, y ddueg, y coluddion bach, a meinweoedd lymffoid eilaidd amrywiol yn wahanol o ran y trawsgrifiad, ond hefyd i fynegiant amrywiol broteinau, gan gynnwys cytocinau, yr ymchwiliwyd iddynt yn yr astudiaeth gyfredol [29-31. Fodd bynnag, nid oedd yr ymchwiliadau hyn yn cynnwys poblogaethau TRM yn yr aren ddynol, a data ar hyn
pwnc yn brin. Fe wnaethom ddangos yn flaenorol fod celloedd CD8 T sy'n targedu proteinau polyomafeirws BK VP1 a LTAG, sy'n deillio o firws sydd â thropiaeth gref ar gyfer celloedd epithelial arennol, i'w canfod mewn arennau alografft. Mynegodd y celloedd T firws-benodol hyn CD69 a CD103 mewn niferoedd uwch na'u cymheiriaid a ganfuwyd yng nghylchrediad yr un cleifion. At hynny, roedd y celloedd T hyn yn gyffredinol yn mynegi ffenoteip B-negyddol CD45RA-CD27-gransym B-negative[5]. Yn ddiweddarach, mae eraill hefyd wedi adrodd ar boblogaethau TRM mewn meinwe arennau dynol a gafwyd o nephrectomïau trawsblaniad. Yn y cyhoeddiad hwn, mae'r awduron yn adrodd bod celloedd T yn y meinweoedd hyn yn ymwneud yn bennaf â CD8 T cels [321. Yn lle hynny, canfuom fod celloedd T CD4, mewn gwirionedd, yn cynnwys yr is-set celloedd T mwyaf. Fodd bynnag, canfuom hefyd fod y cydbwysedd wedi symud, er nad yn sylweddol, tuag at niferoedd uwch o gelloedd CD8 T mewn meinwe alografft o'i gymharu â meinwe arennau iach. O'r herwydd, efallai y bydd yr anghysondeb hwn yn cael ei esbonio gan grŵp astudio gwahanol, ac efallai bod yr amddiffyniad imiwnolegol ym maes iechyd yn canolbwyntio'n fwy ar fygythiadau allgellog, fel bacteria, yn erbyn bygythiadau mwy mewngellol, fel firysau a chanser yn y gwesteiwyr imiwno-gyfaddawd. Ni welsom wahaniaethau eraill yn y marcwyr a astudiwyd, rhwng celloedd iach yr arennau a chelloedd alograft T. Fodd bynnag, dylid defnyddio ymchwil pellach, gan ddefnyddio technegau gyda golwg ehangach ar drawsgrifiadau, megis dilyniannu RNA, neu broteome, fel sbectrometreg màs, i sefydlu a yw hyn yn wir.
Yn ogystal, de Leur et al. disgrifio sut roedd TRM mewn arennau'n mynegi gransym B yn aml, tra ein bod wedi canfod dim ond symiau isel o gransym B mewn meinwe arennau iach ac alografft [32]. Fodd bynnag, fe wnaethom ganfod celloedd T sylweddol T-bet ac Eomes-mynegi mewn meinwe'r arennau, sydd fel arfer yn gysylltiedig yn wir, wrth gylchredeg poblogaethau celloedd T, â mynegiant uwch o gransym B [10]. Er efallai na fydd yr olaf yn syndod, o ystyried y ffaith bod mynegiant gransym B hefyd yn cael ei ysgogi'n uniongyrchol gan T-bet [33,34], nid oedd y cysylltiad hwn yn amlwg ymhlith celloedd T yr arennau yn yr astudiaeth gyfredol. Fel yr ydym ni ac eraill wedi dangos bod hefyd TRM dynol ysgyfaint, ymennydd, a chroen [25,26,3536], yn ogystal â meinwe sy'n deillio o arennau preswylydd MAIT ælls 【6,7】 yn isel yn eu gransym B cynnwys, tra'n aml yn mynegi symiau sylweddol o T-bet ac Eomes, gallai hyn fod yn nodwedd gyffredin o TkM (dynol). Ar ben hynny, yn yr ysgyfaint, gwelwyd bod mynegiant gransym B TRM yr ysgyfaint yn cael ei uwchreoleiddio'n gyflym ar ôl ei ysgogi [35l, gan awgrymu y gallai hyn ddigwydd mewn TeM eraill hefyd. Yma, roedd yr awduron yn rhagdybio bod cytotoxicity cudd o'r fath yn amddiffyn cyfanrwydd strwythurol meinweoedd rhag difrod gan gelloedd T sytotocsig.
I gloi, rydym yn dangos bod nifer sylweddol o glsau T ym meinwe'r arennau ac yn cynnwys poblogaethau sy'n mynegi CD69 plus a CD103 plus yn aml, moleciwlau lle mae celloedd T yn cadw at feinweoedd ac yn parhau ynddynt. Serch hynny, mae'n ymddangos bod celloedd T CD69-CD103- T ym meinwe'r arennau yn wahanol i gelloedd T sy'n cylchredeg a gallant ymwneud â phoblogaeth TiM wahanol arall, o bosibl yn parhau yn yr arennau gan fecanweithiau eraill i'w datgelu. Opsiwn arall efallai yw bod y celloedd CD{4}}CD103-T hyn yn ymwneud â phoblogaeth sydd newydd adael y cylchrediad, a dim ond nodweddion ffenotypig newydd y bu i wair eu caffael o ganlyniad i ryngweithio â micro-amgylchedd yr arennau. Mae angen ymchwiliadau pellach i'r boblogaeth hon i egluro'r posibiliadau hyn. Ymhellach. Roedd celloedd T aren CD8 a CD4 yn aml yn seiclo'n weithredol ac yn mynegi CXCR6 yn amlach. Yn ogystal, dadleoliodd poblogaethau CD8 a CD4 fynegiad arbennig o uchel o CXCR3, gan awgrymu'n gryf y derbynyddion chemokine hyn, yn ogystal â CXCR6 mewn croniad TRM a dyfalbarhad mewn arennau dynol. Felly, mae angen ymchwiliadau pellach i wella ein delwedd o boblogaethau Tpv yn yr aren ddynol. Serch hynny, mae'r canfyddiadau a gyflwynir yma yn gam cyntaf cadarn tuag at nodweddiad manylach o boblogaethau celloedd T ym meinwe'r arennau a'u rôl mewn iechyd ac afiechyd.