Dulliau Geneteg Cyfunol Ar Gyfer Darganfod Cyfuniadau Rheoleiddiol Uchel A Pheirianneg Gyrwyr Genetig Ar gyfer Gwahaniaethu Niwral

Plymio i chwilio am ffactorau gwahaniaethu celloedd effeithiol

Mae ymchwilwyr yn dal i ymdrechu i ddod o hyd i therapiwteg well i wrthdroi neu arafu dilyniant anhwylderau niwrolegol fel clefyd Parkinson, clefyd Alzheimer, a chlefyd Huntington. Mae'r anhwylderau hyn yn ganlyniad i farwolaeth celloedd niwronaidd mewn gwahanol rannau o'r ymennydd. Nid yw meddyginiaethau neu driniaethau a ddefnyddir i leddfu'r symptomau mewn cleifion wedi'u hen sefydlu.

Cliciwch i cistanche tubulosa powdr ar gyfer neuroprotection

Nid ydynt yn adfer y meinweoedd niwral sydd wedi'u difrodi a gallant arwain at sgîl-effeithiau diangen. Felly, mae nifer cynyddol o astudiaethau'n edrych ar fôn-gelloedd fel therapiwteg addawol, oherwydd eu galluoedd hunan-adnewyddu a hyblygrwydd gwahaniaethu i linellau celloedd dymunol ar gyfer engrafiad i'r claf i adfer y meinweoedd niwral a gollwyd.

Fodd bynnag, cyn y gellir defnyddio bôn-gelloedd yn glinigol wrth drin anhwylderau niwrolegol, mae meysydd o hyd sydd angen gwell dealltwriaeth i ddatgloi eu llawn botensial. Mae bôn-gelloedd yn atgynhyrchiol ac yn hydrin, gyda'r tueddiad i ddod yn unrhyw fath o gell o ystyried y cyfuniad cywir o ffactorau i ysgogi gwahaniaethu. Fodd bynnag, mae dyfnder cymhlethdod yn y rhwydwaith mawr o ffactorau.

Mae'n bwysig pennu'r cyfuniadau o ffactorau trawsgrifio (TF), moleciwlau bach, a/neu ffactorau twf i gyflawni'r synergedd gorau posibl ar gyfer gwahaniaethu bôn-gelloedd gan gynnwys bôn-gelloedd embryonig (ESCs) a bôn-gelloedd plwripotent ysgogedig ar y gyfradd gyflymaf, gan arwain at yn y boblogaeth buraf o linach niwronaidd. Fodd bynnag, gallai fod ffordd strategol o sgrinio ar gyfer y ffactorau hyn mewn modd mwy cost-effeithiol ac amser-effeithiol.

Byddai hyn yn helpu i wneud y gorau o'r protocolau sydd eisoes wedi'u sefydlu sy'n dal i fod yn llafurus neu ar gyfer nodweddu isdeipiau niwronaidd ymhellach fel niwronau pigog canolig, niwronau synhwyraidd, a niwronau serotonergig. Mae'n parhau i fod yn her i broffilio ysgogwyr tynged niwronaidd yn gynhwysfawr a diffinio sut mae'r elfennau hyn yn rhyngweithio â'i gilydd yn y rhwydwaith rheoleiddio.

Mae rhai grwpiau wedi defnyddio dulliau sgrinio trwybwn uchel newydd i egluro'r rhwydwaith rheoleiddiol o dynged celloedd ac wedi darparu mewnwelediadau addysgiadol ar ffactorau sy'n ysgogi trosi a goroesi niwronau. Mae Liu et al. (2018) defnyddio actifadu CRISPR (CRISPRa) i chwilio am TFs neu ffactorau rhwymo DNA sy'n hyrwyddo tynged niwronaidd ESCs. Fodd bynnag, cyfyngwyd y gwaith i astudio ffactorau unigol neu gyfuniadau pâr.

Cynhaliwyd sgrinio systematig arall gan Tsunemoto et al. (2018), a ymchwiliodd i'r berthynas rhwng TFs. Ni ddangosodd y rhan fwyaf o'u TF sengl dethol unrhyw effeithiau yn yr astudiaeth, fodd bynnag, fe wnaethant nodi 76 o gyfuniadau TF pâr i hyrwyddo gwahaniaethu ffibroblastau llygoden i niwronau anwythol.

Yn nodedig, roedd diffyg cysondeb yn eu canlyniadau ag astudiaethau blaenorol, megis peidio â chanfod y cludwr gweithredol dopamin Slc6a3 mewn niwronau a achosir, o bosibl oherwydd colli allan ar ffactorau ychwanegol. Penderfynodd astudiaeth arall y genynnau hanfodol i gynnal neu wella goroesiad niwronau trwy gynnal sgrinio ar sail ymyrraeth CRISPR (CRISPRi) (Tian et al., 2019). Ac eto, roeddent yn gyfyngedig i sgrinio sgRNAs sengl.

Mae angen astudiaethau pellach ar gyfer sgrinio diduedd ar gyfer ffactorau genetig eraill, ac i gynyddu nifer y cyfuniadau o ffactorau, gan y dangoswyd y gallai fod angen coctel o fwy na dau ffactor mewn gwahanol gyd-destunau i ysgogi gwahaniaethu ac ailraglennu yn effeithlon.

Enghraifft dda yw'r cyfuniad o Oct4, Sox2, Klf4, a c-Myc sy'n angenrheidiol ar gyfer rheoleiddio'r rhwydwaith signalau datblygiadol ar gyfer lluosogrwydd ESCs (Takahashi a Yamanaka, 2006). Mewn systemau mor gymhleth, mae angen nodweddu swyddogaethau cyfuniadau genetig lefel uchel yn gynhwysfawr mewn modd trwybwn uchel, ac efallai y bydd y dull Geneteg Cyfunol En Masse (CombiGEM) yn gallu gwneud hynny.

Dull CombiGEM ar gyfer sgrin trwybwn uchel, trefn uchel a systematig o gyfuniadau ffactor

Mae CombiGEM yn cynnig nid yn unig ffordd systematig o gynnal sgriniau cyfun ar raddfa fawr ond mae ganddo hefyd y gallu i gydosod llyfrgelloedd genetig cyfun graddadwy (Wong et al., 2015, 2016; Zhou et al., 2020). Mae'r broses un pot yn caniatáu i'r defnyddiwr sgrinio am lu o gyfuniadau genetig; 1-ffordd, 2-ffordd, 3-ffordd, ac mewn theori, llyfrgelloedd n-ffordd.

Mae hyn yn cynnig dewis arall cyflym i'r broses gonfensiynol o adeiladu a phrofi cyfuniadau diddordeb ymgeiswyr unigol. Er bod nifer o strategaethau sgrinio CRISPR cyfunol eraill wedi'u datblygu hefyd ar gyfer astudio cyfuniadau genetig pâr (Han et al., 2017; Shen et al., 2017; Najm et al., 2018; Truong et al., 2019; DeWeirdt et al., 2020 ), Mae CombiGEM yn cynnig cyfle unigryw i werthuso rhyngweithiadau rhwng tri neu fwy o gyfuniadau genetig.

Er enghraifft, os yw'r defnyddiwr yn bwriadu defnyddio CRISPRa neu CRISPRi ar gyfer gorfynegi neu repressing, yn y drefn honno, restr o gyfuniadau TF ymgeiswyr, gallai rhywun sgrinio llyfrgell cod bar o gyfuniadau sgRNA sy'n targedu TF gan ddefnyddio CombiGEM-CRISPR v2.0 ( Wong et al., 2016; Zhou et al., 2020) fel y dangosir yn Ffigur 1.

Trwy ddefnyddio camau clymu un-pot, mae'r llyfrgell sgRNAs a'u codau bar priodol yn cael eu hymgorffori mewn fector cyrchfan lentifeirws sy'n adrodd am fynegiant protein fflwroleuol wrth actifadu hyrwyddwr math-benodol o gelloedd niwron, fel tubulin 1. Y llyfrgell o sgRNAs a fector lentifeirol ar wahân sy'n llochesu'r Cas9 sy'n enzymatically ddiffygiol naill ai wedi'i asio ag actifydd trawsgrifio neu gellir ei gludo i'r celloedd cychwyn dymunol.

Dros amser, wrth i gelloedd ddechrau gwahaniaethu, dim ond celloedd tebyg i niwronau anwythol fydd yn mynegi fflworoleuedd, a gellir ynysu'r celloedd hyn gan ddefnyddio didoli celloedd a weithredir gan fflworoleuedd i adalw eu cyfuniadau TF lloches trwy ddilyniannu cod bar.

Er mwyn cael gwell dealltwriaeth o'r cyfuniadau sy'n gyrru llinachau celloedd penodol, gellir hefyd archwilio'r celloedd hyn am ohebwyr neu farcwyr llinach celloedd hysbys yn seiliedig ar ddewis y camau gwahaniaethu y mae'r defnyddiwr yn dewis eu hastudio. Gellid defnyddio didoli celloedd wedi'i actifadu'n fagnetig i wahanu celloedd o ddiddordeb yn dibynnu ar fynegiadau marciwr arwyneb y gell.

Gellid cyplysu dilyniannu RNA un gell â’r sgrinio CRISPR cyfunol fel allddarlleniad i broffilio’r math a’r lefelau o enyn i fyny neu i lawrreoleiddio a gellir pennu’r cyfuniad o TFs wedi’u targedu trwy ddarllen y cod bar (Replogle et al., 2020). Gellid defnyddio delweddu cynnwys uchel i fonitro'r newidiadau morffoleg celloedd o'r camau cynnar i ddiweddarach yn natblygiad niwronau.

Gellir pennu perthnasedd ffisiolegol neu ymarferoldeb celloedd tebyg i niwronau anwythol trwy labelu imiwnocytocemegol sy'n benodol ar gyfer aeddfedu niwronau, megis NeuN, TUJ1, a MAP2, a mesurau electroffisiolegol. Fel y soniwyd yn gynharach, mae astudiaethau wedi cyfuno TF a moleciwlau bach i drin tynged celloedd.

Gellir defnyddio CombiGEM hefyd i nodi cyfuniadau moleciwl bach a all gynnal hunan-adnewyddiad bôn-gelloedd, ysgogi gwahaniaethu llinach celloedd, neu hwyluso ailraglennu trwy gynyddu effeithlonrwydd ac o bosibl ddisodli ffactorau genetig. Gellir cymhwyso CombiGEM hefyd trwy bennu'n gyntaf y targedau moleciwl bach o lwybrau signalau, epigenetig, neu ffactorau proses cellog.

Yna trwy ddylunio llyfrgell o sgRNA i actifadu neu anactifadu'r targedau cyffuriau, gellir wedyn nodi'r cyfuniadau effeithiol o foleciwlau bach i wella'r gwahaniaethu neu'r ailraglennu. Adlewyrchir y cysyniad hwn yn dda gan yr astudiaethau a gynhaliwyd gennym yn gynharach i ddarganfod cyfuniadau targed cyffuriau yn erbyn canser a chlefyd Parkinson (Zhou et al., 2020).

Mae'r defnydd o CombiGEM nid yn unig wedi'i gyfyngu i aflonyddiadau sy'n seiliedig ar CRISPR ond gellid hefyd ei gymhwyso i ffactorau rheoleiddio DNA neu RNA eraill i astudio'r sgriniau colli swyddogaeth ag ymyrraeth RNA, yn ogystal â rhai ennill-swyddogaeth gyda'r mynegiant o microRNAs (Wong et al., 2015) a fframiau darllen agored dynol wedi'u gwirio mewn dilyniant fel y rhai a adroddwyd yn llyfrgell ddynol TFome (Ng et al., 2020).

Dull CombiSEAL ar gyfer peirianneg trwybwn uchel o ffactorau trawsgrifio

Gall dod o hyd i'r cyfuniad delfrydol o ffactorau genetig sy'n digwydd yn naturiol achosi heriau o hyd, megis cael ei gyfyngu i TFs nodweddiadol y genom gyda gwybodaeth flaenorol am eu mynegiant a'u rolau mewn gwahaniaethu. Mae astudiaethau wedi dangos bod peirianneg TFs neu gynhyrchu ffactorau trawsgrifio artiffisial yn agor llwybr newydd o opsiynau i gyflymu'r gyfradd gwahaniaethu trwy lwybrau amgen, gan ragori ar ddibyniaeth mynegiant rhagofyniad cyd-ffactorau mewndarddol eraill o fewn y rhwydwaith rheoleiddio genynnau, neu ddisodli'n gyfan gwbl. TFs naturiol gyda rhai mwy effeithlon (Jauch, 2018).

Mae hyn yn galluogi ymchwilwyr i deilwra'r ffactorau gofynnol yn unol â'u hanghenion arbrofol. Rydym yn cynnig, os yw un yn anelu at gynnal mutagenesis trwybwn uchel ar wefannau lluosog i TF sy'n cynnwys gwahanol barthau, y gallai CombiSEAL fod yn blatfform defnyddiol (Choi et al., 2019). Mae'r dull CombiSEAL yn cydosod darnau DNA codio asid amino sydd wedi'u tagio'n gyfunol â chodau bar (Ffigur 1).

Ffigur 1 ｜ Dulliau CombiGEM a CombiSEAL i sgrinio am yrwyr gwahaniaethu genetig effeithiol. Enghraifft o'r dull CombiGEM yw cydosod sgRNAs lluosog wedi'u mynegi o'r un lluniad, a chynrychiolir y cyfuniadau sgRNA gan eu codau bar cydgadwynedig. Mae'r dull CombiSEAL yn cynnwys treigladau a gyflwynir i wahanol rannau o brotein, megis ffactorau trawsgrifio, a nodir fel P1, P2, P(n), a P(n plws 1). Ac adlewyrchir y cyfuniadau o dreigladau gan eu codau bar cydgadwyn cyfatebol. Gall y defnyddiwr gymhwyso'r setiau i systemau dosbarthu DNA eraill, ac yn y cynrychioliad hwn, defnyddir fectorau lentifeirysol. Gellir cynnal strategaethau sgrinio trwy fformat cyfun, ac yn yr enghraifft hon, mae adnabod poblogaethau celloedd sy'n gwahaniaethu i linach niwronau penodol yn cael ei ganfod trwy actifadu'r hyrwyddwr ar gyfer mynegiant protein fflwroleuol, wedi'i labelu fel fflworoleuedd X yn y diagram. Bydd dilyniannu cenhedlaeth nesaf (NGS) o'r codau bar o'r gronfa gell yn dehongli'r targedau DNA neu'r amrywiad(au) trawsgrifiadol. Gallai dadansoddiad llym o'r ffactorau sy'n gyrru gwahaniaethu gwahanol fathau o niwronau ddefnyddio dulliau seiliedig ar arae megis archwilio celloedd â marcwyr llinach celloedd ac yna didoli celloedd wedi'i actifadu'n magnetig (MACS) yn blatiau aml-ffynnon, y gellir eu dilyn i fyny gyda delweddu cynnwys uchel. Fel arall, mae dilyniannu RNA un gell (RNA-Seq) yn galluogi'r defnyddiwr i broffilio mynegiadau genynnau celloedd gyda'r ffenoteipiau dymunol a byddai'n gallu adalw'r codau bar i adnabod cyfuniadau sgRNA neu gyfuniadau treiglo o'r amrywiad(au) bysell. FACS: Didoli celloedd wedi'u hysgogi gan fflworoleuedd.

Mae CombiSEAL yn dechrau gyda rhannau adrannol cyntaf y protein lle mae mutagenesis yn ddymunol. Gall y defnyddiwr gynhyrchu unrhyw nifer o amrywiadau ar gyfer pob adran, yna eu tagio â chodau bar i nodi lleoliad a chyfuniad treigladau. Yna caiff pob pwll o adrannau ei ymgynnull yn olynol trwy eu gosod mewn fector cyrchfan sy'n cynnal y dilyniant protein gwyllt-fath wedi'i addasu gydag ensymau IIS math ystlysu yn y rhanbarth o fwtagenesis arfaethedig.

Mae'r cynllun ymasiad di-fras hwn o gysylltu rhannau lluosog o brotein yn bwysig er mwyn osgoi ychwanegu asidau amino diangen i'r protein. Mae'r dull CombiSEAL yn caniatáu pennu dilyniannau asid amino y gronfa ddethol o amrywiadau o ddiddordeb yn fwy effeithlon a chost-effeithiol, gan osgoi'r angen am ddilyniant darllen hir dros y protein cyfan i nodi'r mathau o dreigladau a ble maent wedi'u lleoli ar draws y protein.

Mae'r gosodiad trefnus hwn yn caniatáu dadansoddiad haws trwy gynnal dilyniant trwybwn uchel o'r gronfa o godau bar crynodol byr sy'n casglu'r cyfuniad o fathau a lleoliadau treigladau asid amino, neu addasiadau dymunol eraill megis cyfnewid parth, mewnosod, a dileu, a oedd wedi'i wneud. wedi'i ddylunio i ddechrau a'i osod ar y TF

Casgliad

O'u cymharu â dulliau treialu a gwallau, mae datblygiadau wedi'u gwneud o ran defnyddio dulliau mwy systematig i bennu'r ffactorau neu'r cyfuniadau hanfodol sydd eu hangen i ysgogi trosi un math o gell i linach niwronaidd. Fodd bynnag, mae'r gallu i nodi cyfuniadau lefel uwch wedi bod yn ddiffygiol, ac yma rydym yn cynnig y gallai dull CombiGEM fynd i'r afael â chyfyngiadau o'r fath.

Mae CombiGEM yn defnyddio system clymu un-pot cod bar i roi cyfuniadau lefel uwch o ffactorau rhwymo DNA at ei gilydd i dargedu DNA ar yr un pryd, gan osgoi'r broses o rowndiau sgrinio lluosog i leihau nifer yr ymweliadau i faint hylaw ar gyfer dilysiadau i lawr yr afon . At hynny, gellir disodli TFs naturiol llai effeithlon â TFs artiffisial neu beirianyddol i reoleiddio mynegiant genynnau yn well. Rydym yn disgrifio dull mutagenesis protein, CombiSEAL, a fydd yn galluogi defnyddwyr i greu cronfeydd mawr o amrywiadau ffactor trawsgrifio trwy gydosod treigladau safle lluosog yn syml wedi'u tagio â chodau bar o fewn y protein a'u gwahanol barthau.

Bydd hyn yn cyflymu ac yn gostwng cost gweithdrefnau sgrinio i adalw'r wybodaeth am y mathau o dreigladau o'r amrywiadau o ddiddordeb. Gobeithiwn y gall y dulliau arfaethedig helpu i ddeall ymhellach ac ehangu'r posibiliadau o hybu adfywiad niwral a gallant fod yn berthnasol yn eang i feysydd ymchwil eraill.

Mae mecanwaith effaith neuroprotective Cistanche

Dangoswyd bod Cistanche yn cael effeithiau niwro-amddiffynnol trwy sawl mecanwaith:

1. Effeithiau gwrthlidiol: Mae Cistanche yn cynnwys cyfansoddion y dangoswyd eu bod yn atal llid mewn gwahanol rannau o'r ymennydd, a all helpu i amddiffyn niwronau rhag difrod.

2. Effeithiau gwrthocsidiol: Mae Cistanche yn cynnwys cyfansoddion sydd â phriodweddau gwrthocsidiol cryf. Mae gwrthocsidyddion yn helpu i amddiffyn niwronau rhag difrod a achosir gan radicalau rhydd a straen ocsideiddiol.

3. Rheoleiddio niwrodrosglwyddyddion: Dangoswyd bod Cistanche yn rheoleiddio rhai niwrodrosglwyddyddion, megis serotonin a dopamin, a all helpu i amddiffyn niwronau a gwella swyddogaeth wybyddol.

4. Symbyliad ffactor niwrotroffig: Dangoswyd bod Cistanche yn ysgogi cynhyrchu ffactorau niwrotroffig, megis ffactor niwrotroffig sy'n deillio o'r ymennydd (BDNF), a all hyrwyddo twf a goroesiad niwronau.

Yn gyffredinol, mae'r mecanweithiau hyn yn gweithio gyda'i gilydd i amddiffyn niwronau rhag difrod, hyrwyddo eu twf a'u goroesiad, a gwella gweithrediad gwybyddol.

Cyfeiriadau

Choi GCG, Zhou P, Yuen CTL, Chan BKC, Xu F, Bao S, Chu HY, Thean D, Tan K, Wong KH, Zheng Z, Wong ASL (2019) Combinatorial mutagenesis en masse yn gwneud y gorau o weithgareddau golygu genom SpCas9. Dulliau Nat 16:722-730.

DeWeirdt PC, Sanson KR, Sangree AK, Hegde M, Hanna RE, Feeley MN, Griffith AL, Teng T, Borys SM, Llinyn C, Joung JK, Kleinstiver BP, Pan X, Huang A, Doench JG (2020) Optimeiddio AsCas12a ar gyfer sgriniau genetig cyfunol mewn celloedd dynol. Nat Biotechnol 39:94-104.

Han K, Jeng EE, Hess GT, Morgens DW, Li A, Bassik MC (2017) Cyfuniadau cyffuriau synergaidd ar gyfer canser a nodwyd mewn sgrin CRISPR ar gyfer rhyngweithiadau genetig pâr. Nat Biotechnol 35:463- 474.

Jauch R (2018) Ailraglennu tynged celloedd trwy beirianneg ffactorau trawsgrifio brodorol. Curr Opin Genet Dev 52:109-116.

Najm FJ, Llinyn C, Donovan KF, Hegde M, Sanson KR, Vaimberg EW, Sullender ME, Hartenian E, Kalani Z, Fusi N, Listgarten J, Younger ST, Bernstein BE, Root DE, Doench JG (2018) Orthologous CRISPR- Ensymau Cas9 ar gyfer sgriniau genetig cyfunol. Nat Biotechnol 36:179-189.

Ng AHM, Khoshakhlagh P, Rojo Arias JE, Pasquini G, Wang K, Swiersy A, Shipman SL, Appleton E, Kiaee K, Kohman RE, Vernet A, Dysart M, Leeper K, Saylor W, Huang JY, Graveline A, Taipale J, Hill DE, Vidal M, Melero-Martin JM, et al. (2020) Llyfrgell gynhwysfawr o ffactorau trawsgrifio dynol ar gyfer peirianneg tynged celloedd. Nat Biotechnol doi: 10.1038/s41587-020-0742-6.

Replogle JM, Norman TM, Xu A, Hussmann JA, Chen J, Cogan JZ, Meer EJ, Terry JM, Riordan DP, Srinivas N, Fiddes IT, Arthur JG, Alvarado LJ, Pfeiffer KA, Mikkelsen TS, Weissman JS, Adamson B (2020) Sgriniau CRISPR un gell cyfun trwy ganllaw uniongyrchol i ddal RNA a dilyniannu wedi'i dargedu. Nat Biotechnol 38:954- 961.

Shen JP, Zhao D, Sasik R, Luebeck J, Birmingham A, BojorquezGomez A, Licon K, Klepper K, Pekin D, Beckett AN, Sanchez KS, Thomas A, Kuo CC, Du D, Roguev A, Lewis NE, Chang AN , Kreisberg JF, Krogan N, Qi L, et al. (2017) Sgriniau CRISPRCas9 cyfun ar gyfer mapio de novo o ryngweithiadau genetig. Dulliau Nat 14:573-576.

Takahashi K, Yamanaka S (2006) Sefydlu bôn-gelloedd lluosog o ddiwylliannau ffibroblast embryonig ac oedolion llygoden gan ffactorau diffiniedig. Cell 126:663-676.

Tian R, Gachechiladze MA, Ludwig CH, Laurie MT, Hong JY, Nathaniel D, Prabhu AV, Fernandopulle MS, Patel R, Abshari M, Ward ME, Kampmann M (2019) Llwyfan yn seiliedig ar ymyrraeth CRISPR ar gyfer sgriniau genetig amlfodd mewn iPSC dynol - niwronau sy'n deillio. Neuron 104:239-255.

Truong VA, Hsu MN, Kieu Nguyen NT, Lin MW, Shen CC, Lin CY, Hu YC (2019) CRISPRai ar gyfer actifadu genynnau ar yr un pryd ac ataliad i hyrwyddo chondrogenesis bôn-gelloedd ac adfywiad esgyrn calfaria. Asidau Niwcleig Res 47:e74. Wong AS, Choi GC, Cheng AA, Purcell O, Lu TK (2015) Geneteg combinatorial hynod gyfochrog mewn celloedd dynol yn gyfochrog. Nat Biotechnol 33:952-961.

Wong AS, Choi GC, Cui CH, Pregernig G, Milani P, Adam M, Perli SD, Kazer SW, Gaillard A, Hermann M, Shalek AK, Fraenkel E, Lu TK (2016) Sgriniad CRISPR-Cas9 cod-bar amlblecs wedi'i alluogi gan CombiGEM . Proc Natl Acad Sci USA 113:2544-2549.

Zhou P, Chan BKC, Wan YK, Yuen CTL, Choi GCG, Li X, Tong CSW, Zhong SSW, Sun J, Bao Y, Mak SYL, Chow MZY, Khaw JV, Leung SY, Zheng Z, Cheung LWT, Tan K , Wong KH, Chan HYE, Wong ASL (2020) Sgrin CRISPR combinatorial tair ffordd ar gyfer dadansoddi rhyngweithiadau ymhlith targedau cyffuriauadwy. Sylw Cell 32: 108020.

Dawn GL Thean, Alan SL Wong*