Effeithiau Polygona-polysaccharose Ar Ferroptosis mewn Llygod Mawr Neffropathi Diabetig

Geiriau allweddol:neffropathi diabetig;polygona-polysaccharose; ferroptosis; trosglwyddorin; FTH1; GPX4

 

Neffropathi diabetig(DN) yn gymhlethdod microfasgwlaidd difrifol odiabetes mellitus[1] Mae DN yn ddifrifolcymhlethdod microfasgwlaidd diabetesmellitus [1], fel arfer yn cyflwyno fel microalbuminuria yn y camau cynnar, ac yna datblygiad cynyddol o Mae'r cyfnod cynnar fel arfer yn cyflwyno microalbuminuria, ac yna datblygiad cynyddol proteinwria enfawr, gostyngiad cynyddol yn y gyfradd hidlo glomerwlaidd, a chynnydd cynyddol mewn creatinin gwaed [2 ]. cynnydd cynyddol mewn creatinin[2] . Os na chaiff ei drin, gall y clefyd arwain at glefyd cronig. Os na chaiff ei drin, gall arwain at niwed arennol cynyddol cronig ac yn y pen draw afiechyd cyfnod olaf. Os na chaiff ei drin, gall arwain at anaf arennol cynyddol cronig ac yn y pen draw methiant arennol cyfnod olaf[3] . Marwolaeth haearn Mae marwolaeth haearn yn gasgliad haearn-ddibynnol o asid brasterog annirlawn marwolaeth haearn yn gasgliad haearn-ddibynnol o ocsidiad ffosffolipid asid brasterog annirlawn sy'n arwain at farwolaeth celloedd, a amlygir yn bennaf gan y prif amlygiad o farwolaeth haearn yw'r casgliad o haearn-ddibynnol perocsidau lipid mewngellol[4] . [4] . Astudiaethau Darganfuwyd bod cysylltiad agos rhwng anaf celloedd epithelial tiwbaidd arennol a marwolaeth haearn[5] . Mae Wang et al.

Canfu Wang et al [6] fod cysylltiad agos rhwng mynegiant glutathione peroxidase 4 (GPX4) mewn mynegiant interstitial tiwbaidd arennol (GPX4) â difrifoldeb a dilyniant clefyd DN. Mae GPX4, fel targed pwysig ar gyfer sbarduno rhaglen marwolaeth haearn, yn synhwyrydd o straen ocsideiddiol a signalau marwolaeth celloedd, ac mae llai o fynegiant GPX4 yn arwain at gynnydd sylweddol mewn gostyngiadau mynegiant GPX4 byw, gan arwain at gynnydd sylweddol mewn ocsigen byw yn y corff. 7] . . Felly, atal marwolaeth celloedd epithelial tiwbaidd arennol trwy reoleiddio marwolaeth haearn Felly, gall atal marwolaeth celloedd epithelial tiwbaidd arennol trwy reoleiddio marwolaeth haearn i liniaru anaf arennol DN fod yn strategaeth effeithiol i drin DN. gall marwolaeth celloedd epithelial trwy reoleiddio marwolaeth haearn fod yn strategaeth effeithiol ar gyfer triniaeth DN.
Mae'rpolysacaridoC. flavusyw'r ffarmacolegol mwyaf niferus a phwysig Mae'n un o gydrannau ffarmacolegol mwyaf toreithiog a phwysig C. flavus. Canfu'r astudiaeth arbrofol ei fod yn chwarae rhan bwysig wrth wella swyddogaeth arennol DN a lleddfu'r ymateb llidiol. Li et al[8] . Li et al[9] . Canfu Li et al[9] fod ymyrraeth C. flavus polysacarid wedi gwella'n sylweddol anhwylderau metaboledd glwcolipid a goddefgarwch inswlin mewn llygod diabetig. Mae Li et al. Canfu astudiaeth arall fod lefelau glwcos, glwcos 24 h a goddefgarwch inswlin llygod â neffropathi diabetig wedi gwella'n sylweddol ar ôl ymyrraeth polysacarid dyfyniad melyn. Canfu astudiaeth arall fod glwcos gwaed, 24-h microalbwmin wrin, creatinin gwaed (SCr) a nitrogen wrea gwaed (BUN) mewn llygod model neffropathi diabetig wedi gwella'n sylweddol ar ôl ymyrraeth Fructus flavus polysacarid. a gostyngwyd lefelau nitrogen wrea gwaed (BUN) yn sylweddol mewn model neffropathi diabetig[10] . Triniaeth DN â polysacarid o Flos Chrysanthemi Fodd bynnag, nid yw mecanwaith penodol ei weithred yn glir. Felly, y presennol Yn yr astudiaeth hon, defnyddiwyd diet braster uchel ynghyd â chwistrelliad streptozotocin (STZ) i sefydlu model llygod mawr DN.
Felly, yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom sefydlu model llygod mawr DN trwy ddeiet braster uchel ynghyd â chwistrelliad streptozotocin (STZ), a gwelsom effaith polysacarid C. flavus ar farwolaeth haearn mewn llygod mawr. Felly, cynhaliwyd yr astudiaeth bresennol i arsylwi effaith C. flavus polysacarid ar farwolaeth haearn mewn llygod mawr sy'n cael eu bwydo â diet braster uchel ynghyd â chwistrelliad streptozotocin (STZ), ac i egluro mecanwaith gweithredu C. flavus polysacarid ar DN.

Defnyddiau a dulliau
1.1 Anifeiliaid
Cafodd hanner cant o lygod mawr SD gwrywaidd iach gyda màs corff o (200±20) g eu cartrefu yn y Sefydliad Radioleg, Academi Gwyddorau Meddygol Tsieineaidd, Beijing, Tsieina, o dan gylchred golau-tywyll 12-h ar dymheredd o (25±2) gradd a lleithder cymharol o (50 ±15) y cant , ac yn bwydo ad libitum. Deiet siwgr uchel a braster uchel (10 y cant lard, swcros 20 y cant, colesterol 2.5 y cant, 67.5 y cant porthiant confensiynol), (4.8 y cant braster, protein 20 y cant a 59.4 y cant cyfanswm siwgr), Beijing Huafukang Biotechnology Co Cymeradwywyd yr arbrawf hwn gan Ysbyty Meddygaeth Integreiddiol Cangzhou (CZX2022-KY-023).

1.2 Cyffuriau a pharatoi
PolysacaridoFlos Astragalus(purdeb 70 y cant , rhif swp S27804 ), roedd Shanghai Yuanye Biotechnology Co Ltd Ltd a baratowyd gyda halwynog yn y crynodiad o 200 , 800 mg / ml , yn y drefn honno . hydoddiant 800 mg/ml. Mae tabledi Irbesartan (lot 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co (Hangzhou) Pharmaceutical Co, Ltd. wedi'i baratoi mewn halwynog ar 30 mg/mL. ateb.

 

1.3 Prif adweithyddion ac offerynnau
Protein wrin (rhif swp C035-2-1), SCr (rhif swp C011-2-1), BUN (rhif swp C013-2-1) BUN (rhif swp C013-2-1), malondialdehyd ( MDA, rhif swp C003-1- 2), glutathione (GSH, lot C006-2-1), cyfanswm cynnwys ïon haearn (rhif swp A039-2-1), Nanjing Jiancheng Sefydliad Ymchwil Peirianneg Fiolegol Sefydliad Peirianneg Fiolegol , Nanjing, Tsieina; Transferrin (rhif swp ab278498), ferritin Transferrin (lot ab278498), cadwyn drom ferritin (FTH1, lot ab75973), GPX4 (lot ab252833), a -ferritin (lot ab252833). ab252833), -actin (lot ab179467), Abcam, DU. iMark680 marciwr ensymau amlswyddogaethol, Bio-Rad, UDA. Allgyrchydd Fresco17, Thermo, UDA; 5810 benchtop allgyrchydd wedi'i rewi, Eppndorf, yr Almaen; Meintioli fflworoleuedd ABI Prism® 7500 Biosystemau Cymhwysol, UDA; DYCZ-24Tanc electrofforesis fertigol DN, Ffatri Offeryn Liuyi Beijing, Beijing, Tsieina; SH-523 delweddu cemiluminescence Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modelu, grwpio a rhoi cyffuriau
Ar ôl 1 wythnos o fwydo addasol, dewiswyd 10 llygod mawr ar hap fel arfer Cyfeiriwyd y 40 llygod mawr sy'n weddill at y dull llenyddiaeth [11] i sefydlu model llygod mawr DN. Cafodd y llygod mawr eu bwydo â diet siwgr uchel a braster uchel am 7 wythnos, ac yna'n ymprydio am 12 awr heb ddŵr. Cafodd y llygod mawr eu bwydo â diet siwgr uchel a braster uchel am 7 wythnos, yna'n ymprydio â bwyd a dŵr am 12 h. Cafodd STZ ei chwistrellu'n fewnberitoneol ar 30 mg/kg. Ar ôl 72 h, casglwyd gwaed o wythïen y gynffon i ganfod glwcos gwaed ar hap, ac ystyriwyd bod glwcos gwaed o Fwy na neu'n hafal i 16.7 mmol/L yn fodelu diabetes yn llwyddiannus. Cafodd y llygod mawr eu bwydo â diet siwgr uchel a braster uchel am 1 wythnos, a 24-h wrin yn cael ei gasglu o'r cawell metabolig.

 

 

1.5.5 Assay blotiau gorllewinol
Casglu meinweoedd yr arennau, ychwanegu 150 μL o byffer lysis RIPA, homogenize Roedd y supernatant protein ei gadw ar ôl centrifugation. Penderfynwyd ar gyfanswm crynodiad y protein gan ddefnyddio pecyn profi protein BCA. Pennwyd cyfanswm y crynodiad protein trwy ddefnyddio pecyn assay protein BCA, a chafodd y crynodiad protein ei homogeneiddio. Defnyddiwyd symiau cyfartal o brotein 20 ug, 8 y cant -12 y cant SDS-PAGE ar gyfer gwahanu protein, a throsglwyddwyd y protein Roedd y pilenni ar gau gyda 5 y cant o bowdr llaeth sgim ar dymheredd yr ystafell am 2 h. Ychwanegwyd gwrthgorff cynradd gwrth-lygod mawr cwningen Transferrin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) a GPX4 (1:3 000). 3,000), GPX4 (1:3,000), -actin (gwanhau 1:5,000), a'i ddeor dros nos ar 4 gradd . Deorwch 4 gradd dros nos. Golchwyd y bilen, ychwanegwyd gwrthgorff eilaidd (1:9 000) a'i ddeor am 2 awr ar dymheredd yr ystafell. Cafodd y pilenni eu golchi â TBST, eu datblygu gan gemiluminescence ECL a'u canfod gan ddefnyddio
Defnyddiwyd meddalwedd Image J i ddadansoddi gwerthoedd graddlwyd y bandiau.

 

1.6 Dulliau ystadegol
SPSS Statistics25.0 defnyddiwyd meddalwedd ystadegol ar gyfer dadansoddi. Arbrawf Mynegwyd y canlyniadau fel xˉ±s, a phrofwyd yr holl ddata am normalrwydd a chi-sgwâr. Profwyd yr holl ddata ar gyfer normalrwydd a chi-sgwâr, a defnyddiwyd profion t os oeddent yn fodlon, a defnyddiwyd profion nad oeddent yn barametrig os nad oeddent yn fodlon. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 Canlyniadau
2.1 Effeithiau polysacarid Flavopiridium ar fàs corff a glwcos gwaed ymprydio llygod mawr model O'i gymharu â'r grŵp arferol, gostyngwyd màs corff llygod mawr yn y grŵp model yn sylweddol (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Gweler Tabl 2.

2.2 Effeithiau polysacarid Flavopiridium ar fynegeion swyddogaeth arennol llygod mawr model
O'i gymharu â'r grŵp arferol, roedd lefel SCr, lefel BUN a chynnwys protein wrin 24 awr llygod mawr yn y grŵp model yn sylweddol uwch (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Effeithiau polysacarid dyfyniad melyn ar forffoleg histopatholegol aren llygod mawr model
Ni ddangosodd strwythur glomerwlws a thiwbaidd llygod mawr grŵp arferol unrhyw annormaleddau, ac ni chafodd y bilen thylakoid a'r stroma thylakoid eu lluosogi, ac nid oedd unrhyw ymdreiddiad celloedd llidiol, ac ati; y model Yn y llygod mawr model, arsylwyd dirywiad tiwbaidd ffocal ac atroffi, ac roedd y bilen islawr glomerwlaidd ychydig Roedd y llygod mawr yn y grŵp model yn dangos dirywiad tiwbaidd ffocal ac atroffi, pilen islawr glomerwlaidd wedi'i dewychu ychydig, hyperplasia thylakoid, a dirywiad brasterog glomeruli a tiwbyn. Roedd y llygod mawr ym mhob grŵp gweinyddu cyffuriau yn dangos llai o friwiau, ac roedd y gwelliant yn fwy amlwg yn y grŵp cyffuriau positif a'r dos uchel o polysacarid Flavopiridium. Roedd y gwelliant yn fwy amlwg yn y grŵp cyffuriau positif a'r dos uchel o polysacarid Flavopiridium. Gweler Ffigur 1.