Mae Gao-Zi-Yao yn Gwella Dysgu a Gweithrediad Cof mewn Hen Lygod Mawr Gorbwysedd Digymell Rhan 2

Anifeiliaid arbrofol

Prynwyd llygod mawr gorbwysedd digymell gwrywaidd deuddeg mis oed ac wyth wythnos oed (SHR) o Ganolfan Model Anifeiliaid Nanjing.

Mae perthynas gref rhwng 8-gwrywod wythnos oed a'r cof. Yn ystod y cyfnod hwn, mae ymennydd y creadur gwrywaidd yn datblygu'n gyflym, ac mae'r cysylltiadau rhwng ei niwronau yn cynyddu'n raddol, sydd yn ei dro yn effeithio ar ddatblygiad ei gof.

Mae ymchwil yn dangos bod cof creaduriaid gwrywaidd yn parhau i wella gydag oedran. Mae hyn nid yn unig yn cael effaith sylweddol ar eu goroesiad ac atgenhedlu ond hefyd yn eu helpu i addasu'n well i'r amgylchedd ac ymdopi â heriau newydd.

Felly, dylem fynd ati i annog gwrywod ifanc i gymryd rhan mewn amrywiaeth o weithgareddau buddiol, megis datrys posau, dysgu sgiliau newydd, ac archwilio meysydd newydd. Mae'r gweithgareddau hyn yn ysgogi eu hymennydd, gan ganiatáu iddynt ddatblygu'n gyflymach a gwella eu galluoedd cof.

Ar yr un pryd, dylem hefyd ddarparu amgylchedd ac awyrgylch addas ar gyfer creaduriaid gwrywaidd ifanc. Gall gwneud iddynt deimlo'n ddiogel ac yn agos hybu datblygiad eu hymennydd a gwella eu cof.

Yn fyr, dylem wneud popeth o fewn ein gallu i helpu gwrywod ifanc i wella eu cof fel eu bod yn dod yn greaduriaid callach, mwy hyderus a galluog. Mae hyn nid yn unig yn ffafriol i'w datblygiad personol ond hefyd i ffyniant a goroesiad y rhywogaeth gyfan. Gellir gweld bod angen i ni wella cof, a gall Cistanche deserticola wella'r cof yn sylweddol, oherwydd mae gan Cistanche deserticola effeithiau gwrthocsidiol, gwrthlidiol a gwrth-heneiddio, a all helpu i leihau adweithiau ocsideiddiol a llidiol yn yr ymennydd, a thrwy hynny amddiffyn y iechyd y system nerfol. Yn ogystal, gall Cistanche deserticola hefyd hyrwyddo twf ac atgyweirio celloedd nerfol, gan wella cysylltedd a swyddogaeth rhwydweithiau niwral. Gall yr effeithiau hyn helpu i wella cof, dysgu a chyflymder meddwl, a gallant hefyd atal datblygiad camweithrediad gwybyddol a chlefydau niwroddirywiol.

Cliciwch gwybod atchwanegiadau i hybu cof

Yn y model hwn, mae gorbwysedd yn dechrau datblygu erbyn 4 mis oed gydag ymddangosiad newidiadau sy'n gysylltiedig â gorbwysedd ym microfasgwlaidd yr ymennydd erbyn 6 mis oed [37].

Roedd llygod mawr yn cael eu cadw dan amodau gwael gyda hylendid safonol, yn cael eu cadw ar dymheredd o 25 gradd gyda chylch golau/tywyll 12/12, ac yn cael eu bwydo â chow llygod mawr a dŵr ad libitum safonol.

Cymeradwywyd yr holl weithdrefnau gan, a chyflawnwyd yn unol â'r canllawiau ar gyfer gofalu am anifeiliaid a'u defnyddio a sefydlwyd gan Brifysgol Soochow, sy'n gyson â'n hadroddiad blaenorol[35].

Perfformiwyd yr arbrofion yn unol â Chanllawiau'r Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol ar Ddefnyddio Anifeiliaid Labordy (NIH, rhif cyhoeddiad 85-23, a ddiwygiwyd 1996). Mae canllawiau ARRIVE yn adrodd ar yr astudiaeth bresennol.

Cymhwyswyd SHR wyth wythnos oed ar gyfer rheoli heneiddio (SHR-Young, n=10). Cafodd llygod mawr deuddeg mis oed eu trin gyda neu heb Gao-Zi-Yao ar gyfer dŵr distyll (Hen SHR-C, n=10), dos isel (Hen SHR-L, n=10), dos canolig (Hen SHR-M, n=10), dos uchel (Hen SHR-H, n=10) trwy fwydo gastrig.

Dosau o Gao-Zi-Yao isel, canolig ac uchel sy'n hafal i 1/2-, 1-, dosau triphlyg ar gyfer defnydd clinigol claf yn ôl arwynebedd y corff. Diddymwyd Gao-Zi-Yao mewn dŵr distyll 5 ml cyn ei gymhwyso a'i weinyddu'n llaethdy un-amser am 4 wythnos.

Roedd pwysedd gwaed a chyfradd curiad y galon yn cael eu monitro bob wythnos trwy'r dull cyff cynffon, ac roedd pwysau'r corff hefyd yn cael ei fonitro bob wythnos yn unol â'n harsylwad blaenorol [35].

Ar ôl 4 wythnos, cynhaliwyd arbrawf drysfa ddŵr Morris, a chafodd llygod mawr eu haberthu o dan anesthesia gan sodiwm pentobarbital (50 mg/kg ip), casglwyd meinwe hippocampus i'w dadansoddi ymhellach. Cymeradwywyd pob protocol arbrofol gan bwyllgor trwyddedu moeseg Prifysgol Soochow.

Arbrawf drysfa ddŵr Morris

Perfformiwyd arbrawf drysfa ddŵr Morris (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co, Ltd., Shanghai, China) fel y disgrifiwyd yn flaenorol gyda rhai addasiadau [38]. Cynlluniwyd y prawf am 6 diwrnod, roedd dyddiau 1 i 5 ar gyfer y cyfnod hyfforddi, ac roedd diwrnod 6 ar gyfer canlyniadau profion.

Derbyniodd llygod mawr hyfforddiant ar gyfer llaethdy 2 funud, gan gofnodi'r amser ar gyfer mynd ar y platfform fel yr amser hwyr. Ar ddiwrnod 6 tynnwyd y platfform. Rhoddwyd llygod mawr yn y cwadrant pellter pellaf a chofnodwyd y llwybr nofio am 2 funud.

Cyfrifwyd paramedrau ar gyfer dysgu a swyddogaeth cof gan y meddalwedd.

Mesur lefelau serwm NO a ffactorau llidiol gan ELISA

Lefelau serwm o NO (Catalog Rhif: S0023), IL-1 (Rhif catalog: A301BH80153), IL-2 (Rhif catalog:A31038348), IL-6 (Rhif catalog: A30681042), andTNF- (Rhif catalog: A38280855) yn cael eu mesur gan ddefnyddio pecynnau ELISA oedd ar gael yn fasnachol (BiotechnologyCo., Ltd. ymchwil ensymau Shanghai. Shanghai, China). Perfformiwyd pob cam yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

Nissl staenio

Cafodd meinwe hippocampus llygod mawr ei ynysu, ei osod, ei fewnosod â pharaffin, yna ei ddeor mewn 1% toluidine staen staen toludin am 5-10 munud ar dymheredd ystafell. Cafodd deg rhan eu rinsio mewn dŵr distyll, eu socian mewn 95% ethanol am 5-30 munud, a'u dadhydradu mewn ethanol 100%.

Ar ôl dadhydradu, gosodwyd y dafell mewn sylene a'i gorchuddio â llithriad gan ddefnyddio cyfrwng resin. Arsylwyd a dadansoddwyd nifer y niwronau yn rhanbarthau CA1, CA2, a gyrus dentate (DG) yr hippocampus gan ddefnyddio rhaglen ddadansoddi ImageJ.

Blot gorllewinol ar gyfer dysgu a phroteinau sy'n gysylltiedig â chof

Cynhaliwyd blot gorllewinol ar gyfer dysgu a phroteinau sy'n gysylltiedig â chof fel y disgrifiwyd yn ein hadroddiad blaenorol gyda rhai addasiadau [39].

Cafodd meinweoedd hippocampus eu homogeneiddio â byffer RIPA (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7.0) yn cynnwys fflworid ffenylmenthanesulfonyl (R&D Systems Inc., Minneapolis, UD). Cafodd homogenadau eu canoli ar 12,000 × g am 10 munud ar 4 gradd .

Gwahanwyd proteinau celloedd gan SDS-PAGE a'u trosglwyddo i bilenni PVDF (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Cafodd y pilenni eu rhwystro mewn llaeth di-fraster 5% yn PBS a 0.1% Tween-20ar dymheredd ystafell.

Yna deorwyd y blotiau gyda gwrthgorff cynradd: Derbynnydd gwrth-glwtamad 1 (1:1000, Abcam, Inc., Rhif Catalog: ab183797), gwrthgorff AntiNMDAR2B (1:1000, Abcam, Inc., Rhif Catalog: ab28373), Gwrth-ffosffo - gwrthgorff CaMKII (1: 1000, Abcam, Inc., Rhif Catalog: ab171095), gwrthgorff Antiphospho-CREB (1: 1000, Abcam, Inc., Rhif Catalog: 32096) neu wrth-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Catalog Rhif: sc-47724).

Nesaf, cafodd pilenni eu deori am 1 h gyda gwrthgorff eilaidd (HRPconjugated gwrth-cwningen Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Rhif Catalog: ab205718). Yna cafodd pilenni eu golchi deirgwaith am 15 munud gan ddefnyddio TBS-T i gael gwared â gwrthgyrff gormodol cyn deor am 1 munud gydag adweithyddion cemiluminescent (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, UDA).

Ymhellach, canfuwyd bandiau imiwn-adweithiol gan system dadansoddi gel electrofforesis (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). Dadansoddwyd dwyster y bandiau gan feddalwedd Image J. Cafodd maint y proteinau targed ei normaleiddio gan fynegiant GAPDH [39].

Dadansoddiad ystadegol

Defnyddiwyd meddalwedd SPSS 18.0 ar gyfer dadansoddiad ystadegol. Cyflwynir data fel y cymedr ± Dadansoddwyd data Grŵp SEM gan ddefnyddio dadansoddiad un ffordd o amrywiant ac yna prawf Myfyriwr-Newman-Keuls. Ystyriwyd bod Pvalue < 0.05 yn ystadegol arwyddocaol â'n hadroddiad blaenorol [35].

Canlyniadau

Pwysedd gwaed systolig (SBP), cyfradd curiad y galon, a phwysau'r corff rhwng SHR ifanc a hen SHR

Dangosodd Yong SHR SBP is yn y pythefnos cyntaf o'i gymharu â'r hen SHR, yna cynyddodd i ddim gwahaniaeth rhwng y ddau grŵp yn y tair wythnos ddiweddarach (Ffig. 2A).

I'r gwrthwyneb, nid oedd cyfradd curiad y galon yn wahaniaeth rhwng y ddau grŵp yn ystod y pythefnos cyntaf, yna cynyddodd SHR ifanc yn sylweddol o'i gymharu â hen SHR yn y tair wythnos ddiweddarach (Ffig. 2B). Dangosodd SHR ifanc bwysau corff is o'i gymharu â'r hen SHR yn ystod y cyfnod arsylwi cyfan (Ffig. 2C).

Paramedrau drysfa ddŵr Morris rhwng SHR ifanc a'r hen SHR

Er mwyn pennu dysgu a chof sy'n dibynnu ar hippocampal, cynhaliwyd arbrawf drysfa ddŵr Morris. Dangosodd Hen SHR hwyrni dianc hirach yn y pedwar diwrnod cyntaf o gymharu â SHR ifanc (Ffig. 3A).

Roedd amseroedd croesi'r cwadrant targed yn llai yn yr hen SHR nag yn SHR ifanc (Ffig. 3B).

Roedd canran yr amser yn y cwadrant platfform targed yn fyrrach mewn hen SHR o'i gymharu â SHR ifanc (Ffig. 3C). Roedd canran hyd y llwybr yn y cwadrant hefyd yn hen SHR shorterin o'i gymharu â'r hen SHR (Ffig. 3D). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu bod gan hen SHR nam mewn gweithrediad gwybyddol.

Nifer y niwronau yn yr hippocampus rhwng SHR ifanc a'r hen SHR

Cafodd nifer y niwronau mewn gwahanol rannau o'r hippocampus ei gyfrif gan staenio Nissl. Dangosodd y canlyniadau fod nifer llai o niwronau yn CA1, CA2, a DGregions o hen SHR o gymharu â SHR ifanc (Ffig. 4).

Roedd dysgu a mynegiant protein yn ymwneud â chof yn yr hippocampus rhwng SHR ifanc a hen SHR

Dangosodd canlyniadau blot y Gorllewin fod mynegiant dysgu a phroteinau sy'n gysylltiedig â chof (GluR1, NMDAR 2B, phosphorylated-CaMK II, a phosphorylated-CREB) yn hippocampus oldSHR yn is na hynny mewn SHRhippocampus ifanc (Ffig. 5).

Effaith Gao-Zi-Yao ar SBP, cyfradd curiad y galon, a phwysau corff yn yr hen SHR

Dadansoddwyd effaith Gao-Zi-Yao ar SBP. Gostyngodd triniaeth gyda dos isel o Gao-Zi-Yao SBP yn sylweddol yn yr hen SHR o'r ail wythnos i'r bedwaredd wythnos o'i gymharu â'r hen grŵp SHR ​​rheoli, gostyngodd dosau canolig ac uchel o Gao-Zi-Yao SBP yn sylweddol yn yr hen SHR o'r wythnos gyntaf i'r pedwerydd wythnos o'i gymharu â'r hen SHR rheoli (Ffig. 6A). Mae canlyniadau TSE yn nodi bod Gao-Zi-Yao yn cael effaith gwrth-hypertensive yn yr SHR.

Gwnaethom hefyd gymharu'r data ar effeithiau cyfradd curiad calon Gao-Zi-Yaoon a phwysau'r corff. Dangosodd ein data nad oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol yng nghyfradd y galon a phwysau'r corff ymhlith yr holl grwpiau yn ystod y cyfnod arsylwi cyfan (Ffig. 6B, C).

Effaith Gao-Zi-Yao ar lefelau serwm o NO, IL-1 , IL-2, a TNF- yn yr hen SHR

Cynyddodd triniaeth gyda dosau canolig ac uchel o GAO-ZIYAO y serwm NO lefelau o gymharu â'r lefelau yn y grŵp rheoli SHR (Ffig. 7A). Roedd triniaeth gyda'r holl ddosau a brofwyd o GAO-ZI-YAO yn lleihau lefelau serum IL-1 , IL-2 o gymharu â'r lefelau yn y grŵp rheoli SHR (Ffig. 7B, C); fodd bynnag, dim ond y dos uchel o GAO-ZI-YAO a ataliodd lefelau serwm TNF- (Ffig. 7D).

Mae'r canlyniadau hyn yn dangos y gallai GAO-ZI-YAO reoleiddio straen ocsideiddiol a llid.

For more information:1950477648nn@gmail.com