Cynyddu Lefelau Protein YKL-40 Ond Ddim yn C-Adweithiol mewn Cleifion â Chlefyd AlzheimerⅡ

2. Deunydd a Dulliau

2.1. Rhoddwyr Dynol

Cynhwyswyd cyfanswm o 123 o bynciau yn yr astudiaeth hon: (1) pynciau henoed nad ydynt wedi'u dadleoli heb unrhyw dystiolaeth o unrhyw glefyd niwro-ddirywiol (rheolaethau iach) wedi'u dosbarthu fel rheolyddion (n=37); (2) MCI oherwydd cleifion AD (MCI) (n=22); (3) cleifion AD ysbeidiol ysgafn/cymedrol-difrifol tebygol (n=34); (4) Cleifion PD (n=30). Cofrestrwyd cyfranogwyr yr astudiaeth o Glinig Cof (rheolaethau, MCI, a phynciau AD) ac Uned Anhwylderau Symud (cyfranogwyr PD) Ysbyty Universitario 12 de Octubre (Madrid, Sbaen). Rhestrir nodweddion demograffig a chlinigol pwnc yn Nhabl 1.

Dosbarthwyd yr holl gyfranogwyr gan ddefnyddio meini prawf diagnostig sefydledig i'r rhai â MCI neu ddementia AD tebygol [43-45]. Roedd y diagnosis yn seiliedig ar asesiad clinigol manwl, gwerthusiad niwroseicolegol, a niwroddelweddu (MRI). Mesurwyd nam swyddogaethol trwy'r sgôr Sgôr Dementia Clinigol (CDR) [46].

Cliciwch i cistanche tcm ar gyfer trin clefyd Parkinson a chlefyd Alzheimer

Cafodd cleifion PD ddiagnosis yn dilyn meini prawf diagnostig clinigol y Gymdeithas Anhwylder Symud (MDS) [47], a chyflawnodd pob un o'r meini prawf ar gyfer PD a sefydlwyd yn glinigol. Nid oedd cleifion PD yn cyfeirio at gwynion gwybyddol ac nid oeddent yn arddangos symptomau dementia. Roedd y grŵp rheoli yn cynnwys unigolion gwybyddol normal 50 oed neu hŷn, heb arwyddion clinigol o nam gwybyddol a hanes clefyd niwrolegol neu seiciatrig.

Meini prawf gwahardd ar gyfer pob cyfranogwr oedd clefyd serebro-fasgwlaidd sylweddol cydredol a thystiolaeth o unrhyw gyd-forbidrwydd niwrolegol, seiciatrig, meddyginiaeth, neu feddygol nad yw'n niwrolegol a allai effeithio ar wybyddiaeth neu swyddogaeth echddygol. Cafwyd cymeradwyaeth i'r astudiaeth gan Bwyllgor Moeseg Ymchwil Ysbyty Universitario 12 de Octubre, a rhoddodd yr holl gyfranogwyr ganiatâd gwybodus ysgrifenedig.

2.2. Sampl Hylif

Casgliad Casglwyd samplau CSF o bob pwnc (gan gynnwys cleifion iach a phynciau MCI, AD, a PD) a'u prosesu yn unol â gweithdrefnau safonol trwy dyllu meingefnol mewn tiwbiau polypropylen di-haint 15 ml. Yna cafodd samplau eu centrifugio ar 3000 rpm ar 4 ◦C am 10 munud. Supernatant aliquots eu storio ar -80 ◦C mewn 0.5 ml polypropylen tiwbiau cryogenig gyda Protease Atalydd Coctel (Roche, Basel, y Swistir).

Cafwyd samplau gwaed trwy dyllau yn y wythïen flaengar gan gleifion a phobl iach. Cafodd plasma ei ynysu o waed cyfan a gasglwyd mewn tiwbiau 7 ml EDTA-2Na. Cafodd gwaed cyfan ei allgyrchu ar 2000 rpm am 10 munud ar dymheredd ystafell. Yna cafodd supernatants eu casglu a'u dosbarthu mewn tiwbiau cryogenig polypropylen gyda Coctel Atalydd Protease (Roche, Basel, y Swistir) a'u storio ar −80 ◦C.

2.3. Samplau Meinwe

Cafwyd meinwe cortecs orbitofrontal cerebral postmortem gan roddwyr ymennydd a gafodd ddiagnosis o AD ac unigolion rheoli. Cyflenwyd samplau wedi'u rhewi gan y Sefydliad Neuropathology Brain Bank IDIBELL-Hospital Universitari de Bellvitge (Hospitalet de Llobregat, Sbaen). Cafwyd caniatâd gwrthrych yn unol â Datganiad Helsinki, a chafwyd cymeradwyaeth gan Bwyllgor Moeseg Ymchwil y sefydliad cyfrifol.

Ar gyfer pob achos, roedd caniatâd gwybodus ysgrifenedig ar gael. Dewiswyd pynciau yn seiliedig ar ddiagnosis post mortem o AD yn ôl patholeg tangle niwroffibrilaidd a phlaciau A [48]. Roedd achosion AD yn dangos newid niwropatholegol OC uchel (cam Braak V/VI a sgôr plac niwritig cymedrol i aml). Roedd cyfranogwyr rheoli yn cael eu hystyried yn rhai â / heb symptomau niwrolegol neu radd isel o newid niwropatholegol OC. Cafodd cyfanswm o 24 o samplau eu categoreiddio i AD a rheolaethau, fel y dangosir yn Nhabl 2.

2.4. Puro DNA a Genoteipio Apolipoprotein E (APOE).

Echdynnwyd DNA genomig o waed ymylol gan ddefnyddio QIAmp DNA Blood Mini Kit (Qiagen, Hilden, yr Almaen), yn ôl cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Canfuwyd polymorphisms APOE C112R a R158C dynol i adnabod yr alelau APOE ε2, ε3, a ε4, gan ddefnyddio Pecyn Offerynnau LightCycler 480 II (Roche Diagnostics, Basel, y Swistir) yn dilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr.

2.5. Dadansoddiad Protein

Dadansoddwyd crynodiadau CSF a phlasma o'r biomarcwyr niwrolidiol (YKL-40 a CRP) gan ddefnyddio citiau ELISA (Citinase Dynol 3-fel 1 Quantikine ELISA kit (DC3L10), R&D; cit Quantikine ELISA CRP Dynol (DCRP{) {5}}), ymchwil a datblygu) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Archwiliwyd lefelau protein Brain YKL-40 a GFAP hefyd gan blotio Gorllewinol. Cafwyd meinwe cortecs orbitofrontal cerebral postmortem gan roddwyr ymennydd a gafodd ddiagnosis o AD ac unigolion rheoli.

Yn gryno, cafodd samplau cortecs orbitofrontal yr ymennydd dynol eu deor a'u homogeneiddio mewn byffer lysis (50 mM Tris/HCl byffer, pH 7.4 yn cynnwys EDTA 2 mM, 0.2 y cant Nonidet P-40, 1 mM PMSF, Protease, a Choctels Atalydd Ffosffatase; Roche, Basel, y Swistir) ac wedi'i allgyrchu am 10 munud am 14,000 rpm am 4 ◦C. Cafodd goruchwylwyr eu hadennill a'u storio ar −80 ◦C. Penderfynwyd ar gynnwys protein gan ddefnyddio dull BCA (Thermo Fisher Scientific, MA, UDA). Cymysgwyd symiau cyfartal o brotein (20 µg ar gyfer YKL-40 a 5 µg ar gyfer GFAP) â byffer sampl Laemmli wedi'i ategu â -mercaptoethanol, wedi'i gynhesu i 95 ◦C am 5 munud, wedi'i ddatrys gan 10 y cant NuPAGE Bis-Tris Gels ( Thermo Fisher Scientific, MA, UDA), a'i drosglwyddo i bilenni polyvinylidene difluoride (PVDF) (Millipore, MA, UDA).

Wedi hynny, cafodd pilenni eu rhwystro a'u deor dros nos ar 4 ◦C gyda gwrthgyrff cynradd: gwrthgorff monoclonaidd gwrth-YKL-40 cwningen ailgyfunol (ab255297, 1:500, Abcam) a gwrthgorff gwrth-GFAP monoclonaidd llygoden (G3893, 1). :0000, Sigma Aldrich). Yna cafodd pilenni eu deor am 1 awr gyda'r gwrthgyrff eilaidd wedi'u cyfuno â rhuddygl poeth (HRP) priodol (G-21234, 1:5000, Thermo Fisher Scientific, MA, UDA; ab97023, 1:40000, Abcam).

Cafodd llwytho protein ei fonitro gan ddefnyddio gwrthgyrff monoclonaidd HRP-cyfunol llygoden yn erbyn -tubulin (ab40742, 1:5000, Abcam) ar gyfer YKL{5}} neu yn erbyn -actin (A1978, Sigma Aldrich) ar gyfer canfod GFAP. Datgelwyd imiwnocomplexes gan adweithydd cemiluminescence gwell (ECL Clarity; Bio-Rad, CA, UDA). Cynhaliwyd meintioli densitometrig gyda meddalwedd Image Studio Lite 5.0 (Li-COR Biosciences, NE, USA). Cafodd bandiau protein eu normaleiddio i reolaethau llwytho a'u mynegi fel canran o'r grŵp rheoli

2.6. Dadansoddiad Ystadegol

Perfformiwyd dadansoddiad ystadegol a graffiau gan ddefnyddio meddalwedd Stata/IC (Stata 16.1, StataCorp LLC, College Station, TX, UDA) a Prism (fersiwn Meddalwedd GraphPad 8.00, La Jolla, CA, UDA). Ar ôl asesu normalrwydd y dosbarthiad, dadansoddwyd gwahaniaethau mewn lefelau CSF a plasma YKL-40 a CRP rhwng grwpiau gan ddefnyddio prawf rheng nonparametric Kruskal-Wallis. Dangosir y gwerth-p ar gyfer cymariaethau pâr gyda chywiriad Bonferroni. Perfformiwyd model atchweliad llinol lluosog disgrifiadol i gyfrif am newidynnau dryslyd (oedran, rhyw, ac APOE ε4) mewn dadansoddiad cysylltiad CSF YKL-40.

Cafodd rhyngweithiadau newidynnau dryslyd â'r diagnosis clinigol eu heithrio o'r model (arwyddocâd ar gyfer y set gyfan o ryngweithiadau: p > 0.10). Dangosir y cyfernod atchweliad fel "b". Gwerthuswyd gwahaniaethau mewn dosbarthiad rhyw, oedran y cyfranogwyr, oedran ar y cychwyn, a blynyddoedd ers dechrau'r afiechyd rhwng grwpiau gyda phrofion Pearson chi-sgwâr ac ANOVA, lle bo'n briodol.

Archwiliwyd cysylltiadau rhwng biofarcwyr a nodweddion demograffig gyda phrofion cydberthynas Pearson, profion t Myfyrwyr, a phrofion Mann-Whitney U, lle bo'n briodol. Perfformiwyd prawf tueddiad nonparametric (prawf tueddiadau Jonckheere) i werthuso bodolaeth tuedd pan ddangosodd y dangosiad categorïau trefnol. Lluniwyd cromliniau ROC ar ôl modelu presenoldeb neu absenoldeb diagnosis clinigol penodol gyda dadansoddiad logistaidd atchweliad.

Cafodd lefelau mynegiant blot Western YKL{{0}} a GFAP eu normaleiddio i'w rheolyddion llwytho priodol ( -tubulin a -actin) a'u cymharu â chymedr y gymhareb reoli â phrawf Mann-Whitney U nad yw'n barametrig. Mewn graffiau, dangosir lefelau CSF a phlasma YKL-40 a CRP fel amrediad canolrifol ac amrediad rhyngchwartel. Dangosir mynegiant ymennydd YKL-40 fel gwall cymedr ± safonol y cymedr (SEM). Ym mhob achos, pennwyd arwyddocâd ystadegol ar p < 0.05.

Mae mecanwaith Cistanche yn trin clefyd Alzheimer a chlefyd Parkinson

Perlysiau yw Cistanche a ddefnyddiwyd yn draddodiadol mewn meddygaeth Tsieineaidd i drin amrywiaeth o gyflyrau iechyd, gan gynnwys anhwylderau niwrolegol fel clefyd Alzheimer (AD) a chlefyd Parkinson (PD). Mae Cistanche yn cynnwys nifer o gyfansoddion bioactif, gan gynnwys glycosidau ffenylethanoid a glycosidau iridoid, sydd ag effeithiau gwrthocsidiol, gwrthlidiol a niwro-amddiffynnol. Mae'r cyfansoddion hyn yn helpu i amddiffyn celloedd niwronaidd rhag difrod a achosir gan radicalau rhydd a phrosesau llidiol, y credir eu bod yn cyfrannu at ddatblygiad a dilyniant AD a PD.

Yn ogystal, dangoswyd bod Cistanche yn cynyddu lefelau rhai niwrodrosglwyddyddion yn yr ymennydd, gan gynnwys dopamin ac acetylcholine, sy'n bwysig ar gyfer gweithrediad arferol yr ymennydd. Trwy gynyddu'r lefelau niwrodrosglwyddydd hyn, gall Cistanche helpu i wella gweithrediad gwybyddol a lleihau symptomau AD a PD.

Yn gyffredinol, mae mecanweithiau Cistanche wrth drin AD a PD yn cynnwys ei effeithiau gwrthocsidiol, gwrthlidiol a niwro-amddiffynnol, yn ogystal â'i allu i wella lefelau niwrodrosglwyddydd yn yr ymennydd.

i'w barhau...

Víctor Antonio Blanco-Palmero 1,2,3, † , Marcos Rubio-Fernández 1,2, †, Desireé Antequera 1,2 , Alberto Villarejo-Galende 1,2,3 , José Antonio Molina 1,2,3, Isidro Ferrer 1,4,5,6 , Fernando Bartolome 1,2,* ac Eva Carro 1,2,*

1 Canolfan Rhwydwaith ar gyfer Ymchwil Biofeddygol mewn Clefydau Niwro-ddirywiol (CIBERNED), 28031 Madrid, Sbaen; victorb1989@gmail.com (VAB-P.); marcosrubio.imas12@h12o.es (MR-F.); eeara@yahoo.es (DA); avgalende@yahoo.es (AV-G.); cvillaiza@telefonica.net (JAM); 8082ifa@gmail.com (IF)

2 Grŵp o Glefydau Niwroddirywiol, Ysbyty 12 de Octubre Sefydliad Ymchwil (imas12), 28041 Madrid, Sbaen

3 Ysbyty Gwasanaeth Niwroleg Prifysgol 12 de Octubre, 28041 Madrid, Sbaen

4 Sefydliad Ymchwil Biofeddygol Bellvitge (IDIBELL), Hospitalet de Llobregat, E08907 Barcelona, ​​Sbaen

5 Adran Patholeg a Therapiwteg Arbrofol, Prifysgol Barcelona, ​​​​E08900 Barcelona, ​​​​Sbaen 6 Sefydliad y Niwrowyddorau, Prifysgol Barcelona, ​​​​E08000 Barcelona, ​​​​Sbaen * Gohebiaeth: fbartolome.imas12@h12o.es (FB); carroeva@h12o.es (EC); Ffôn.: ynghyd â 34-913908765 (FB & EC); Ffacs: ynghyd â 34-913908544 (FB & EC)