Effeithiau Niwro-amddiffynnol Pedwar Glycosid Phenylethanoid Ar H2O2-Apoptosis Anwythol Ar Gelloedd PC12 Trwy'r Llwybr Nrf2/ARE
Mar 04, 2022
Cyswllt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-bost:audrey.hu@wecistanche.com
Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao a Baiyi Lu 1,*
1. Rhagymadrodd
Mae straen ocsideiddiol, sy'n anghydbwysedd o homeostasis gwrthocsidiol, yn achosi perocsidiad lipid, anaf i brotein a DNA, heneiddio celloedd, a marwolaeth celloedd. Mae'r broses hon yn debygol o gyfrannu at nifer o anhwylderau niwroddirywiol, megis clefyd Alzheimer (AD), clefyd Parkinson (PD), ac isgemia / atgyfnerthiad [1]. Mae'n hysbys bod hydrogen perocsid (H2O2), sef un o'r prif rywogaethau ocsigen adweithiol (ROS), yn achosi perocsidiad lipid a difrod DNA [2]. Ar ben hynny, mae H2O2 yn ffynhonnell mewndarddol o radicalau rhydd hydroxyl sy'n cyfrannu at lefel gefndir straen ocsideiddiol cellog [3,4]. Felly, efallai y bydd gan strategaethau therapiwtig ar gyfer atal apoptosis ocsideiddiol a achosir gan straen y potensial i drin clefydau niwroddirywiol.
Ffactor niwclear erythroid 2-ffactor cysylltiedig 2 (Nrf2), yn ffactor trawsgrifio sydd â chysylltiad cryf â straen ocsideiddiol. Mae actifadu Nrf2 yn cymell trawsgrifio nifer o genynnau gwrthocsidiol a dadwenwyno, gan gynnwys heme oxygenase-1 (HO-1), NAD(P)H quinone oxidoreductase 1, gwrthlidiol [13], ac imiwnofodiwleiddio [14] ] bioweithgareddau. Mae Osmanthusfragrans yn gynhwysyn cyffredin mewn sawl bwyd Asiaidd ac mae wedi cael ei fwyta ers amser maith. Fe wnaethom ddangos yn flaenorol fod darnau blodau O.fragrans yn gwella dysgu a chof gofodol, yn atal difrod ocsideiddiol, ac yn arddangos gweithgareddau niwro-amddiffynnol mewn heneiddio a achosir gan d-galactos mewn model llygoden ICR [15]. Salidroside, acteoside, ac isoacteoside yw'r prif ymateb PhGs ar gyfer gweithgareddau gwrthocsidiol darnau blodau O.fragrans [16].
Mae astudiaethau ar effaith niwro-amddiffynnol PhGs wedi cael canlyniadau dymunol. Gostyngodd Salidroside apoptosis celloedd yn sylweddol o gelloedd PC12 a ddatgelwyd yn MPP plus [17,18]. Fe wnaeth Acteoside hefyd liniaru apoptosis a achosir gan MPP plus a straen ocsideiddiol mewn celloedd PC12 [19] ac anaf celloedd SH-SY5Y a achosir gan p25-35- [20]. Ymchwiliwyd i Echinacoside ar apoptosis a achosir gan ffactor necrosis tiwmor-a (TNFa) mewn celloedd SH-SY5Y [21], gwenwyndra dopaminergig a achosir gan MPTP mewn llygod [22], diwylliannau sylfaenol celloedd cortigol llygod mawr a anafwyd gan glwtamad [23], a { {19}}Difrod a achosir gan OHDA mewn celloedd PC12 [24]. Dangosodd y canlyniadau fod PhGs yn arddangos effaith sytoprotective a'u bod yn gyfryngau posibl i drin clefydau niwroddirywiol. Mae astudiaethau wedi dangos bod priodweddau gwrthocsidiol PhGs o dan lawer o fioweithgareddau eraill ar gyfer y cyfansoddion hyn [25]. Fodd bynnag, ychydig o astudiaethau sydd wedi ymchwilio i fecanwaith moleciwlaidd PhGs yn erbyn gwenwyndra ocsideiddiol.
Yn ein hastudiaeth, fe wnaethom ddewis pedwar PhG nodweddiadol fel a ganlyn: salidroside (monosacaridau ffenylethanoid), acteoside (deusacaridau ffenylethanoid), isoacteoside (deusacaridau ffenylethanoid), ac echinacoside (trisacaridau ffenylethanoid). Fe wnaethom ddefnyddio model o farwolaeth niwronaidd gan ddefnyddio celloedd PC12 gwahaniaethol [26] i ymchwilio i effaith amddiffynnol a mecanwaith moleciwlaidd PhGs ar fodel celloedd PC12 a achosir gan H2O. Fe wnaethom ddangos bod PhGs wedi actifadu llwybr Nrf2/ARE trwy rwymo i brotein 1 tebyg i Kelch-gysylltiedig ECH (Keap1). Fe wnaeth y broses hon uwchreoleiddio'r ensymau gwrthocsidiol a chynyddu ymwrthedd celloedd PC12 i straen ocsideiddiol.
Trin anhwylderau niwroddirywiol:PhGs o cistanche
2. Canlyniadau
2.1. PhGs Ataliedig H2O2-Sytowenwyndra a Achosir mewn Celloedd PC12
Profwyd effeithiau sytotocsig H2O2 a PhGs (0.1,1,5, ac 10 卩g/mL) ar gelloedd PC12. Dangosodd y canlyniadau fod H2O2 wedi arwain at golli hyfywedd celloedd PC12 mewn moesau canolbwyntio-ddibynnol ac amser-ddibynnol (Ffigur 1A). Arweiniodd amlygiad celloedd PC12 i 200 H2O2 am 2 awr at hyfywedd celloedd o 57.4 y cant . Ni chafodd cyn-drin celloedd â PhGs ar 0.1,1, 5, a 10 昭/mL unrhyw effaith ar hyfywedd celloedd (Ffigur 1B) ac roedd celloedd PC12 wedi'u diogelu'n sylweddol rhag H2O{2-difrod a achoswyd gan wella'r hyfywedd cell fel 9.549-22.141 y cant , 12.092-25.289 y cant , 1.470-9.289 y cant , a 3.411-11.441 y cant , yn y drefn honno ( Ffigur 1C). Fodd bynnag, ni ddangosodd rhag-driniaeth salidroside (0.1 ^ g/mL), isoacteoside (0.1, 1, 5, a 10 ^g/mL), echinacoside (0.1,1, a 5 ^ g/mL) unrhyw wahaniaeth arwyddocaol ar gell a achosir gan HzOz anaf. Roedd rhag-drin celloedd â PhGs hefyd yn lleddfu'r nodwedd forffolegol a achosir gan H2O2 (Ffigur 1D).
Ffigur 1.Roedd PhGs yn atal sytowenwyndra a achosir gan H2O mewn celloedd PC12. Canfuwyd hyfywedd celloedd gan assay MTT. Effaith sytotocsig H2O2 (A) a PhGs (B) mewn crynodiadau gwahanol ar gelloedd PC12. (C) Gwnaeth PhGs wanhau H2O{2-wedi achosi gostyngiad mewn hyfywedd celloedd. Deorwyd celloedd PC12 â PhGs (0.1, ac 10 mg/mL) am 24 awr, ac yna deorwyd â 2{00 pM H2O2 am 2 arall h ar ôl dileu'r PhGs. (D) Arsylwi morffolegol. Arsylwyd celloedd ar ôl triniaeth gan ficrosgop cyferbyniad cam (x100), CK: grŵp arferol, H2O2: grŵp wedi'i drin H2O2, HL: grŵp trin dos isel salidroside, HH: grŵp trin dos uchel salidroside, ML: grŵp trin dos isel acteoside, MH: grŵp trin dos uchel acteoside, IL: grŵp trin dos isel isoacteoside, IH: grŵp trin dos uchel isoacteoside, SL: grŵp trin dos isel echinacoside, SH: grŵp trin dos uchel echinacoside. ** p < 0.01="" yn="" erbyn="" grŵp="" heb="" ei="" drin;="" #="" p="">< 0.05,="" yn="" erbyn="" grŵp="" wedi'i="" drin="" â="" h2o2;="" ##="" p="">< 0.01,="" yn="" erbyn="" grŵp="" wedi'i="" drin="" â="">
2.2. PhGs Ataliedig H2O2-Croniad Mewngellol o ROS, Perocsidiad Lipid (MDA), a Mwy o Weithgareddau Superoxide Dismutase (SOD) mewn Celloedd PC12
Cynyddodd amlygiad celloedd PC12 i 200 pM H2O2 am 2 awr lefelau ROS, cynnwys MDA, a gostyngodd gweithgarwch SOD (Ffigur 2). Roedd cyn-driniaeth PhGs yn gwanhau lefel ROS, salidroside, ac acteoside, ac roedd y dos uchel o ragdriniaeth isoacteoside ac echinacoside wedi gwanhau lefel ROS yn sylweddol (p < 0.01).="" ni="" ddangosodd="" rhag-driniaeth="" salidroside="" unrhyw="" effaith="" ar="" gynnwys="" mda,="" ond="" gwnaeth="" rhag-drin="" acteoside="" wanhau="" cynnwys="" mda="" yn="" sylweddol="" (p="">< 0.05).="" gwnaeth="" rhag-driniaeth="" isoacteoside="" ac="" echinacoside="" wanhau="" cynnwys="" mda="" yn="" sylweddol="" i="">
Ffigur 2.Fe wnaeth PhGs rwystro cronni ROS ac MDA a chynyddu gweithgareddau SOD mewn celloedd PC12. Deorwyd celloedd PC12 gyda PhGs (0.1, a 10 4g/mL) am 24 awr, ac yna deorwyd gyda 200 |^M H2O2 am un arall 2 awr ar ôl tynnu'r PhGs. (A) Roedd PhGs yn rhwystro cronni ROS ac MDA. (B) PhGs rhwystro cronni MDA. (C) Cynyddodd PhGs weithgareddau SOD. CK: grŵp arferol, Model: grŵp wedi'i drin â H2O2, Salidroside: grŵp wedi'i drin â salidroside, Acteoside: grŵp wedi'i drin ag acteoside, Isoacteoside: grŵp wedi'i drin â isoacteoside, Echinacoside: grŵp wedi'i drin ag echinacoside. ** p < 0.01="" yn="" erbyn="" grŵp="" heb="" ei="" drin;="" #="" p="">< 0.05,="" yn="" erbyn="" grŵp="" wedi'i="" drin="" â="" h2o2,="" ##="" p="">< 0.01,="" yn="" erbyn="" grŵp="" wedi'i="" drin="" â="">
2.3.PhGs Wedi'i Wrthdroi H2O2-Apoptosis Anwythol mewn Celloedd PC12
Cynyddodd triniaeth H2O2 (200 |1M) am 2 awr apoptosis yn sylweddol mewn celloedd PC12, gyda chyfanswm cyfradd apoptotig hyd at 16.02 y cant (Ffigur 3). Fodd bynnag, gostyngodd rhag-driniaeth gyda PhGs (0.1 a 10 卩g/mL) am 24 h y gyfradd apoptosis mewn modd sy'n dibynnu ar grynodiad (p < 0.01).="" gostyngodd="" salidroside,="" acteoside,="" isoacteoside,="" ac="" echinacoside="" yn="" sylweddol="" ganran="" yr="" apoptosis="" celloedd="" 4.750-6.627="" y="" cant="" ,="" 4.413-5.800="" y="" cant="" ,="" 6.593-10.047="" y="" cant="" ,="" a="" 1.530-7.510="" y="" cant="" ,="" yn="" y="" drefn="">
Ffigur 3. Roedd PhGs wedi gwrthdroi apoptosis a achoswyd gan H2O mewn celloedd PC12. Deorwyd celloedd PC12 gyda PhGs (0.1, ac 10 卩g/mL) am 24 awr, ac yna deorwyd gyda 2{00 pM H2O2 am 2 awr arall ar ôl y Tynnwyd PhGs. Yna, mesurwyd apoptosis gan sytometreg llif gan ddefnyddio chwiliwr fflwroleuol PI/FITC. CK: grŵp arferol, Model: grŵp wedi'i drin â H2O2, Salidroside: grŵp wedi'i drin â salidroside, Acteoside: grŵp wedi'i drin ag acteoside, Isoacteoside: grŵp wedi'i drin â isoacteoside, Echinacoside: grŵp wedi'i drin ag echinacoside. ** p < 0.01="" yn="" erbyn="" grŵp="" heb="" ei="" drin;="" ##="" p="">< 0.01,="" yn="" erbyn="" grŵp="" wedi'i="" drin="" â="">
2.4. PhGs Wedi'i Wrthdroi H2O2-Is-reoleiddio Mynegiant Protein HO-1, NQO1, GCLC, a GCLM
Mae HO{{{0}}, NQO1, a glutamad-cystein ligas (GCL) yn ensymau gwrthocsidiol cellog pwysig, ac mae HO-1, NQO1, ac is-unedau catalytig neu addasu GCL (GCLC neu GCLM) yn Mae Nrf2-genynnau i lawr yr afon wedi'u rheoleiddio [27]. Arsylwyd mynegiant protein HO-1, NQO1, GCLC, a GCLM ar ôl triniaeth. Canfuwyd gwahaniaeth amlwg rhwng mynegiant protein HO-1 ac NQO1 gyda neu heb H2O2 (Ffigur 6A-C) (p < 0.01).="" roedd="" phgs="" (0.1="" ac="" 10="" p^g/ml)="" wedi="" gwrthdroi'r="" is-reoleiddiad="" a="" achoswyd="" gan="" h2o="" o="" fynegiant="" protein="" ho-1="" (ac="" eithrio="" salidroside="" yn="" {{32}="" }.1="" pg/ml),="" nqo1="" (ac="" eithrio="" acteoside="" yn="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< {{40}}.01).="" roedd="" h2o2="" hefyd="" yn="" is-reoleiddio="" mynegiant="" protein="" gclc="" a="" gclm="" (p="">< 0.05)="" (ffigur="" 6a,d,e).="" roedd="" phgs="" (0.1="" ac="" 10="" pg/ml)="" wedi="" gwrthdroi="" h2o2-wedi="" achosi="" is-reoleiddio="" mynegiant="" protein="" gclc="" (ac="" eithrio="" echinacoside="" ar="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01)="" a="" gclm="" (ac="" eithrio="" salidroside="" ar="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" yna,="" defnyddiwyd="" yr="" atalyddion="" cemegol="" ar="" gyfer="" ho{{{-1}="" i="" werthuso="" ymhellach="" rôl="" yr="" ensymau="" gwrthocsidiol="" wrth="" reoleiddio="" amddiffyniad="" phgs="" yn="" erbyn="" sytowenwyndra="" a="" achosir="" gan="" h2o.="" roedd="" phgs="" (0.1="" a="" 10="" pg/ml)="" yn="" atal="" sytowenwyndra="" a="" achosir="" gan="" h2o,="" ond="" cafodd="" effaith="" amddiffynnol="" o'r="" fath="" ei="" wrthdroi="" gan="" atalydd="" ho{{2-="" znpp="" (p="">< 0.01)="" ar="" 20="" pm="" (ffigur="" 6f,="" p="">< 0.01)="">
2.5. Mynegiant Keap1 a Dadansoddiad Tocio Moleciwlaidd
O dan amodau ffisiolegol, mae Keap1 yn gweithredu fel protein atalydd o Nrf2 trwy rwymo i barth Neh2 o Nrf2 a thargedu Nrf2 i E3 ubiquitin ligas seiliedig ar Cul3- ar gyfer hollbresennol a diraddio dilynol gan y proteasome 26S [28]. Gwerthuswyd gallu rhwymo i Keap1 o PhGs gan ddadansoddiad tocio moleciwlaidd i ymchwilio i'r mecanwaith o dan eu heffaith gwrthocsidiol.
Effaith gwrthocsidiol: CistanchePhGs
3. Trafodaeth
Fe wnaethom ymchwilio i niwroamddiffyniad PhGs ar sytowenwyndra a achosir gan H2O2 mewn celloedd PC12. Mae'r canlyniadau'n dangos bod rhag-driniaeth PhGs wedi atal sytowenwyndra a achosir gan HzOz yn sylweddol, wedi gwanhau'r lefel ROS mewngellol, wedi gwella lefel ensymau gwrthocsidiol mewngellol, ac yn y pen draw wedi gwrthdroi sytowenwyndra a achosir gan H2O mewn celloedd PC12. Ar ben hynny, cynyddodd PhGs actifadu trawsgrifiadol Nrf2, gwrthdroi'r is-reoleiddio a achosir gan HzOz o fynegiant protein HO-1, NQO1, GCLC, a GCLM. Yn ogystal, dangosodd PhGs ryngweithio posibl â safle rhwymo Nrf2 yn y protein Keap1.
Yn yr anaf celloedd PC12 a achosir gan H2O, cynyddodd perocsidiad lipid, sy'n cyfeirio at ddiraddiad ocsideiddiol lipid, athreiddedd pilenni, gan arwain at ddifrod celloedd [29]. Defnyddir ffurfiant MDA yn eang fel mynegai perocsidiad lipid [30]. Gwellodd H2O2 gynhyrchiad ROS a disbyddodd ensymau amddiffyn gwrthocsidiol, megis SOD, catalase, a GPx. Mae'r broses hon yn arwain at straen ocsideiddiol [31], sy'n chwarae rhan allweddol yn achos a dilyniant y mwyafrif o anhwylderau niwroddirywiol. Yn gyson ag astudiaethau blaenorol, gwelsom lefel uwch o ROS, llai o ensymau gwrthocsidiol mewngellol, a gwell apoptosis o gelloedd PC12 ar ôl triniaeth H2O2. Gwnaeth cyn-driniaeth PhGs wanhau'n sylweddol y cynnydd a achoswyd gan HzOz mewn ROS mewngellol, gwell ensymau gwrthocsidiol mewngellol, ac yn y pen draw gwrthdroi sytowenwyndra a achosir gan HzOz mewn celloedd PC12.
Mae Kuang et al. [32] adroddodd fod echinacoside yn dangos effaith niwro-amddiffynnol sylweddol ar sytowenwyndra a achosir gan H2O mewn celloedd PC12 trwy'r llwybr apoptotig mitocondriaidd. Yn yr astudiaeth hon, canfuom fod echinacoside, salidroside, acteoside, ac isoacteoside yn dangos effeithiau niwro-amddiffynnol trwy wella gweithgaredd gwrthocsidiol celloedd PC12 oherwydd eu bod yn cynyddu actifadu trawsgrifiadol Nrf2 ac yn uwchreoleiddio mynegiant protein i lawr yr afon o HO-1, NQO1, GCLC, a GCLM. Mae nifer o astudiaethau wedi dangos yn glir bod actifadu genynnau targed Nrf2, yn enwedig HO-1, mewn astrocytes a niwronau yn amddiffyn yn gryf rhag llid, difrod ocsideiddiol, a marwolaeth celloedd. Adroddwyd bod y system HO-1 yn weithgar iawn yn y system nerfol ganolog, ac mae'n debyg bod ei fodiwleiddio yn chwarae rhan hanfodol yn pathogenesis anhwylderau niwroddirywiol [33]. Roedd astudiaethau diweddar hefyd yn egluro rôl Nrf2 yn natblygiad a risg PD [9] a Keap1 fel targed effeithlon ar gyfer adweithio Nrf2 yn AD [34]. Mae'r canlyniadau'n cefnogi tystiolaeth newydd ar gyfer Nrf2 fel targed therapiwtig mewn clefydau niwroddirywiol.
Dangosodd dadansoddiad tocio moleciwlaidd y gallai PhGs rwymo i Keap1, gyda'r galluoedd rhwymo canlynol: echinacoside > isoacteoside > acteoside > salidroside. Yn gyson â'r canlyniadau hyn, arweiniodd rhag-driniaeth PhGs at drawsleoli niwclear Nrf2, gyda'r mynegiant Nrf2 canlynol yn y cnewyllyn: echinacoside > isoacteoside * acteoside > salidroside. Tybiwyd gennym fod nifer y glycosidau yn effeithio ar fodd rhwymo posibl PhGs a Keap1, ac achosodd y modd rhwymo ymhellach ryddhau Nrf2 o Keap1. Arweiniodd y broses hon at actifadu Nrf2 a'r genynnau i lawr yr afon ac yn y pen draw mae'n amddiffyn celloedd PC12 rhag straen ocsideiddiol a achosir gan H2 O.
Effeithiau niwro-amddiffynnol cistanchePhGs
4. Defnyddiau a Dulliau
4.1. Cyfansoddion Cemegol ac Adweithyddion
Salidroside (Rhif CAS {{0}}), acteoside (Rhif CAS 61276-17-3), isoacteoside (Rhif CAS 61303-13-7), ac echinacoside (Rhif CAS {{3}). }) eu prynu gan YYuanye Biotechnology Company (Shanghai, Tsieina). Diddymwyd y PhGs mewn PBS i gynhyrchu hydoddiant stoc 10 mg/mL, a gafodd ei storio ar -20 gradd . Prynwyd H2O2 gan Aladdin® (Shanghai, Tsieina). Prynwyd serwm buchol canolig a ffetws RPMI-1640 gan Hyclone (Logan, UT, UDA), a phrynwyd 0.5 y cant trypsin EDTA, penisilin, a streptomycin gan Keyi (Hangzhou, Tsieina). Prynwyd pecynnau diagnostig MDA, SOD, MTT, a DCFH-DA gan Sefydliad Biotechnoleg Beyotime (Nanjing, Jiangsu, Tsieina). Prynwyd Pecyn staenio dwbl Annexin V-FITC/PI gan Solarbio Life Sciences (Beijing, Tsieina). Prynwyd gwrthgyrff i Nrf2, Histone H3, Keap1, HO-1, NQO1, GCLC, GCLM, a p-actin, perocsid perocsid gwrth-lygoden-marchog (HRP) IgG, a gwrth-gwningen-HRP-IgG gan Abcam (Llundain, DU). Prynwyd atalyddion HO{-1 a ZnPP oddi wrth Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, UDA). Prynwyd RNAiso Plus, Kit adweithydd PrimeScript™RT gyda Rhwbiwr gDNA, a SYBR® Premix Ex Taq™ II gan Takara (Shiga, Japan). Prynwyd Adweithydd Trawsnewid Lipofectamine® RNAiMAX gan Thermo Fisher Scientific (Waltham, DU). Roedd dilyniannau siRNA Nrf2 fel a ganlyn: ymlaen, CCGAAUUACAGUCUCUUAA; a gwrth, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Yn y cyfamser, roedd dilyniannau siRNA rheoli fel a ganlyn: ymlaen, UUCUCCGAACGUGUCACGU; and reverse, ACGUGACACGUUCGGGAAA.
4.2. Diwylliant Cell
Cafwyd llinell pheochromocytoma adrenal llygoden (celloedd PC12) gan y Sefydliad Biocemeg a Bioleg Celloedd, SIBS, (CAS, Shanghai, China). Cafodd y celloedd eu cynnal yn RPMI-1640 (Hyclone) yn cynnwys 10 y cant o serwm buchol ffetws (Hyclone), 100 U/mL penisilin, a 0.1 mg/mL streptomycin ar 37 gradd gyda 5 y cant CO2. Roedd y cyfrwng yn cael ei newid bob yn ail ddiwrnod.
4.3. Assay Hyfywedd Cell
Cafodd celloedd PC12 eu hadu mewn 96-blatiau ffynnon ar 2 x 104 cell/ffynnon. Ar ôl eu hatodi, cafodd celloedd eu deori ymlaen llaw gyda neu heb atalydd am 20 munud, eu deor gyda PhGs neu hebddynt am 24 h, ac yna eu deor â H2O2 am 2 awr arall ar ôl tynnu'r PhGs. Ar ôl deori, cafodd y celloedd eu trin â 5 mg / mL MTT am 4 h ar 37 gradd, a chafodd y cyfryngau eu tynnu'n ofalus. Diddymwyd y crisialau formazan a ffurfiwyd gan gelloedd sydd wedi goroesi mewn 150 rL o DMSO i gynhyrchu lliw glas [35], a mesurwyd yr amsugnedd ar 570 nm ar ddarllenydd plât. Roedd y rheolyddion yn defnyddio'r un crynodiad o gyfrwng â DMSO yn unig. Cafodd hyfywedd celloedd ei normaleiddio fel canran y rheolaeth.
Dewiswyd crynodiadau PhGs (0.1,1,5, a 10 Rg/mL) yn dibynnu ar ddadansoddiad cytotoxicity PhGs ac effaith cytoprotective echinacoside a adroddwyd [32]. Yn ôl yr adroddiad, ni ddangoswyd unrhyw effaith cytotoxicity o dan 10 Rg / mL, ac adroddwyd bod echinacoside yn dangos effaith cytoprotective yn y model celloedd anafedig HzOz.
4.4. Assay Apoptosis
Canfuwyd apoptosis gyda Phecyn staenio dwbl Annexin V-FITC/PI (Solarbio). Cafodd celloedd PC12 eu hadu mewn 6-platiau ffynnon ar 2 x 105 cell/ffynnon. Ar ôl eu hatodi, cafodd celloedd eu trin â PhGs (0.1 a 10 Rg/mL) am 24 awr a'u deor â H2O2 am 2 awr arall ar ôl tynnu'r PhGs. Ar ôl deori, golchwyd y celloedd mewn PBS oer, eu centrifugio ddwywaith ar 1500 rpm am 10 munud, a'u hailddarparu mewn 500 rL o glustogfa rhwymol. Atodiadin V (5 rL) wedi'i labelu gan FITC ac ïodid propidium.
Byrfoddau
Is-uned glutamad-cysteine ligas-catalytig GCLC
Is-uned addasydd glutamad-cysteine ligas-catalytig GCLM
H2O2 hydrogen perocsid
HO-1 heme oxygenase 1
Protein cysylltiad Keap1 Kelch ECH 1
NQO1 NAD(P)H quinone oxidoreductase 1
Nrf2 ffactor niwclear erythroid 2-ffactor cysylltiedig 2
PhGs salidroside, acteoside, isoacteoside, ac echinacoside
Rhywogaethau ocsigen adweithiol ROS
Protoporffyrin sinc ZnPP
Dyfyniad Cistanche deserticola: PHG o cistanche
Cyfeiriadau
1. Haul, AY; Chen, YM Straen ocsideiddiol ac anhwylderau niwroddirywiol. J. Biomed. Sci. 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]
2. Maheshwari, A.; Micro, MM; Aggarwal, A. ; Sharma, RK; Nandan, D. Llwybrau sy'n ymwneud ag apoptosis cell germ y ceilliau a achosir gan H2O2 in vitro. FEBS J. 2009,276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]
3. Halliwell, B. Rhywogaethau ocsigen adweithiol a'r system nerfol ganolog. J. Neurochem. 1992, 59,1609-1623. [CrossRef] [PubMed]
4. Richardson, JS; Subbarao, KV; Ang, LC Ar rôl bosibl perocsidiad radical rhydd a achosir gan haearn mewn dirywiad niwral mewn clefyd Alzheimer. Ann. NY Acad. Sci. 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]
5. Zhang, DD Astudiaethau mecanistig o lwybr signalau Nrf2-Keap1. Metab Cyffuriau. Dat. 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]
6. Itoh, K. ; Tong, KI; Yamamoto, M. Mecanwaith moleciwlaidd yn actifadu llwybr Nrf2-Keap1 wrth reoleiddio ymateb ymaddasol i electroffiliau. Radic Rhad. Biol. Med. 2004, 36,1208-1213. [CrossRef] [PubMed]
7. Kong, AN; Owuor, E. ; Yu, R. ; Hebbar, V. ; Chen, C. ; Hu, R.; Mandlekar, S. Ymsefydlu ensymau xenobiotig gan y llwybr kinase map a'r elfen ymateb gwrthocsidiol neu electroffilig (ARE/EpRE). Metab Cyffuriau. Parch 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]
8. Buendia, I. ; Michalska, P.; Navarro, E.; Gameiro, I. ; Egea, J. ; Leon, R. Nrf2-ARE path: Targed sy'n dod i'r amlwg yn erbyn straen ocsideiddiol a niwro-lid mewn clefydau niwroddirywiol. Ffarmacol. Ther. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]
9. Skibinski, G.; Hwang, V; Ando, DM; Daub, A. ; Lee, AK; Ravisankar, A.; Modan, A.S.; Finucane, MM; Shabby, BA; Mae Finkbeiner, S. Nrf2 yn lliniaru LRRK2- a niwroddirywiad a achosir gan a-synuclein trwy fodiwleiddio proteostasis. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]
10. Jimenez, C.; Riguera, R. Glycosidau phenylethanoid mewn planhigion: Strwythur a gweithgaredd biolegol. Nat. Prod. Cynrychiolydd 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]
11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; Orhan, I. ; Abrashev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Gwrthocsidiol a cholinesterases gweithgareddau ataliol Verbascum xanthophoeniceum Griseb. a'i glycosidau ffenylethanoid. Cemegydd Bwyd. 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]
12. Li, N. ; Wang, J.; Ma, J. ; Gu, Z. ; Jiang, C.; Yu, L. ; Fu, X. Effeithiau NeuroprotectiveCistanches HerbaTherapi ar Gleifion â Chlefyd Alzheimer Cymedrol. Cyfatebiaeth Seiliedig ar Evid. Altern. Med. 2015, 2015, 103985. [CrossRef] [PubMed]
13. Liu, YL; Ef, WJ; Mo, L. ; Shi, MF; Zhu, YY; Pan, S. ; Li, XR; Xu, QM; Yang, SL Gwrthficrobaidd, gweithgareddau gwrthlidiol a gwenwyneg glycosidau ffenylethanoid o Monochasma savatieri Franch. cyn Maxim. J. Ethnopharmacol. 2013,149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]
14. Dong, Q. ; Yao, J.; Ffang, JN; Ding, K. Nodweddu strwythurol a gweithgaredd imiwnolegol dau polysacaridau dŵr oer y gellir eu tynnu oCistanche deserticola YC Ma. Carbohydrad. Res. 2007, 342,1343-1349. [CrossRef] [PubMed]
15. Xiong, L. ; Mao, S.; Lu, B. ; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Shen, C. ; Zhao, Y. Detholiad Blodau Osmanthusfragrans ac Acteoside yn Diogelu Yn Erbyn Heneiddio a Achosir gan Galactos mewn Model Llygoden ICR. J. Med. Bwyd 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]
16. Jiang, Y. ; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B. ; Cai, Z. ; Zhou, F.; Li, M. ; Lou, T. ; Zhao, Y. Proffiliau Glycoside Phenylethanoid a Gweithgareddau Gwrthocsidiol Osmanthusfragrans Lour. Blodau yn ôl UPLC/PDA/MS a Model Treulio Efelychedig. J. Amaeth. Cemegydd Bwyd. 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]
17. Li, X. ; Ye, X.; Li, X. ; Haul, X. ; Liang, Q. ; Tao, L. ; Kang, X. ; Mae Chen, J. Salidroside yn amddiffyn rhag apoptosis a achosir gan MPP a mwy mewn celloedd PC12 trwy atal y llwybr NO. Ymennydd Res. 2011,1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]
18. Zhang, L. ; Ding, W. ; Haul, H. ; Zhou, Q. ; Huang, J.; Li, X. ; Xie, Y.; Mae Chen, J. Salidroside yn amddiffyn celloedd PC12 rhag apoptosis a achosir gan MPP a mwy trwy actifadu'r llwybr PI3K/Akt. Cemegydd Bwyd. Gwenwynig. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]
19. Sheng, GQ; Zhang, JR; Pu, XP; Ma, J. ; Li, CL Effaith amddiffynnol verbascoside ar 1-methyl-4- niwrowenwyndra a achosir gan ïon ffenylpyridiniwm mewn celloedd PC12. Eur. J. Ffarmacol. 2002, 451,119-124. [CrossRef]
20. Wang, H.; Xu, Y. ; Yan, J.; Zhao, X. ; Haul, X. ; Zhang, Y.; Guo, J. ; Zhu, C. Mae Acteoside yn amddiffyn celloedd niwroblastoma dynol SH-SY5Y yn erbyn anaf celloedd a achosir gan beta-amyloid. Ymennydd Res. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]
21. Min, D.; Jin, YZ; Yong, J.; Zheng, BL; Mae Yao, HW Echinacoside yn achub y celloedd niwronaidd SHSY5Y o apoptosis a achosir gan TNFa. Gên. Ffarmacol. Tarw. 2005, 505,11-18.
22. Zhao, Q. ; Gao, YH; Li, WW; Cai, DF Effeithiau niwrotroffig a niwroadferol Echinacoside yn y model llygoden MPTP subacute o glefyd Parkinson. Ymennydd Res. 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]
23. Koo, KA; Canwyd, SH; Parc, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Gweithgareddau niwro-amddiffynnol in vitro o glycosidau ffenylethanoid o Callicarpa dichotoma. Med Planta. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]
24. Liu, YG; Li, X. ; Xiong, C. ; Yu, B. ; Pu, X. ; Ie, XS Deilliadau glycoside phenylethanoid synthetig fel asiantau niwro-amddiffynnol posibl. Eur. J. Med. Cemeg. 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]
25. Fu, G. ; Pang, H. ; Wong, YH Glycosidau ffenylethanoid sy'n digwydd yn naturiol: Arweinwyr posibl ar gyfer therapiwteg newydd. Curr. Med. Cemeg. 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]
26. Greene, ALl; Tischler, AS Sefydlu llinell glonal noradrenergig o gelloedd pheochromocytoma adrenal llygod mawr sy'n ymateb i ffactor twf nerfau. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]
27. Liang, QN; Sheng, YC; Jiang, P.; Ji, LL; Xia, YY; Min, Y. ; Wang, ZT Gwahaniaeth system gwrthocsidiol glutathione mewn afu llygod sydd newydd ei ddiddyfnu a llygod ifanc a'i ymwneud â hepatowenwyndra a achosir gan isoline. Arch. Gwenwynig. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]
28. Kobayashi, A.; Kang, M. ; Okawa, H.; Ohtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Synhwyrydd Straen Ocsidyddol Keap1 Swyddogaethau fel Addasydd ar gyfer Ligas Cul3-E3 Seiliedig i Reoleiddio Diraddiad Proteasomal Nrf2. Mol. Cell. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]
29. Cornelius, C. ; Crupi, R. ; Calabrese, V; Graziano, A.; Milone, P.; Pennisi, G. ; Radak, Z.; Calabrese, EJ; Cuzzocrea, S. Anaf trawmatig i'r ymennydd: Straen ocsideiddiol a niwroamddiffyniad. Gwrthocsid. Arwydd Redox. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]
30. Hou, Z. ; Luo, W. ; Haul, X. ; Hao, S.; Zhang, Y.; Xu, F. ; Wang, Z.; Liu, B. Mae halwynog llawn hydrogen yn amddiffyn rhag difrod ocsideiddiol a diffygion gwybyddol ar ôl anaf trawmatig ysgafn i'r ymennydd. Ymennydd Res. Tarw. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]
31. Ansari, MA; Roberts, KN; Scheff, SW Cwrs amser o straen ocsideiddiol a achosir gan gyfyd a phroteinau synaptig mewn cortecs mewn model llygod mawr o TBI. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]
32. Kuang, R. ; Haul, Y. ; Yuan, W.; Lei, L. ; Zheng, X. Effeithiau amddiffynnol echinacoside, un o'r glycosidau ffenylethanoid, ar sytowenwyndra a achosir gan H2O mewn celloedd PC12. Med Planta. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]
33. Scapagnini, G. ; Vato, S.; Abraham, NG; Caruso, C. ; Zella, D.; Fabio, G. Modiwleiddio llwybr Nrf2/ARE gan polyffenolau bwyd: Strategaeth niwro-amddiffynnol maethol ar gyfer anhwylderau gwybyddol a niwroddirywiol. Mol. Neurobiol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]
34. Kerr, F. ; Sofolaadesakin, O.; Ivanov, DK; Gatliff, J. ; Gomez, PB; Bertrand, HC; Martinez, P.; Callard, R. ; Snoeren, I. ; Cochem, HM Direct Keap1-Amhariad Nrf2 fel targed therapiwtig posibl ar gyfer clefyd Alzheimer. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]
35. Hansen, MB; Nielsen, De-ddwyrain; Berg, K. Ailarchwiliad a datblygiad pellach o ddull lliwio manwl gywir a chyflym ar gyfer mesur twf celloedd/lladd celloedd. J. Immunol. Dulliau 1989, 119, 203-210. [CrossRef]
36. Y Wasg, C. Sgrinio Rhithwir mewn Darganfod Cyffuriau; Gwasg Crc: Boca Raton, FL, UDA, 2005.
37. Muegge, I. ; Martin, YC; Hajduk, PJ; Fesik, SW Gwerthusiad o sgôr PMF wrth docio ligandau gwan i'r protein rhwymo FK506. J. Med. Cemeg. 1999, 42, 2498—2503. [CrossRef] [PubMed]
38. Kuntz, ID; Blaney, JM; Oatley, SJ; Langridge, R.; Ferrin, TE Dull geometrig o ryngweithio macromoleciwl-ligand. J. Mol. Biol. 1982,161, 269-288. [CrossRef]
39. MD, E. ; Murray, CW; Auton, TR; Paolini, GV; Mee, RP Swyddogaethau sgorio empirig: I. Datblygu swyddogaeth sgorio empirig gyflym i amcangyfrif affinedd rhwymol ligandau mewn cymhlygion derbynyddion. J. Comput.-Aided Mol. Des. 1997,11,425-445.
© 2018 gan yr awduron. Trwyddedai MDPI, Basel, y Swistir. Mae'r erthygl hon yn erthygl mynediad agored a ddosberthir o dan delerau ac amodau trwydded Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).
