Potensial Niwro-amddiffynnol Isothiocyanadau mewn Model in Vitro o Niwro-enwogaeth

Cyswllt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Tiziana Latronico1 · Marilena Larocca2 · Serafna Milella1 · Anna Fasano1 · Rocco Rossano2 · Grazia Maria Liuzzi1

Derbyniwyd: 10 Gorffennaf 2020 / Derbyniwyd: 25 Hydref 2020 / Cyhoeddwyd ar-lein: 16 Tachwedd 2020

© Yr Awdur(on) 2020

Swyddogaeth powdr llysieuol Cistanche: Mae gan dda iawneffaith niwro-amddiffynnol

Haniaethol

Mae isothiocyanadau (ITCs), sy'n bresennol fel rhagsylweddion glwcosinolad mewn llysiau croesferol, wedi dangosgwrthlidiol, gwrthocsidiol, a gweithgareddau gwrth-garsinogenig. Yma, gwnaethom gymharu effeithiau tri ITC gwahanol ar gynhyrchu ROS ac ar fynegiant matrics metalloproteinase (MMP)-2 a -9, sy'n cynrychioli ffactorau pathogenetig pwysig o wahanol glefydau niwrolegol. Cafodd diwylliannau sylfaenol astrocytes llygod mawr eu hysgogi gan LPS a'u trin ar yr un pryd â dosau gwahanol o Allyl isothiocyanate (AITC), 2-Phenethyl isothiocyanate (PEITC), a 2-Sulforaphane (SFN). Dangosodd y canlyniadau fod SFN a PEITC yn gallu gwrthweithio cynhyrchu ROS a achosir gan H2O2. Roedd y dadansoddiad symograffig o uwchnaturiaid meithrin celloedd yn dangos mai PEITC ac SFN oedd yr atalyddion mwyaf effeithiol o MMP-9, tra mai dim ond SFN a lesteiriodd weithgarwch MMP-2 yn sylweddol. Dangosodd dadansoddiad PCR fod yr holl ITCs a ddefnyddiwyd yn atal mynegiant MMP-2 a MMP-9 yn sylweddol. Dangosodd yr ymchwiliad ar y llwybr signalau protein kinase protein-activated mitogen (MAPK) fod ITCs yn modiwleiddio trawsgrifiad MMP trwy atal gweithgaredd kinase protein allgellog-reoleiddiedig (ERK). Mae canlyniadau'r astudiaeth hon yn awgrymu y gallai ITCs fod yn gyfryngau maethol addawol ar gyfer atal a thrin clefydau niwrolegol sy'n gysylltiedig â chyfranogiad MMP.

Geiriau allweddolGwrthocsidiol · Gwrthlidiol · Isothiocyanad · Matrics metalloproteinases · Clefydau niwroddirywiol

Rhagymadrodd

Mae niwroinflammation yn ymateb cymhleth i anaf i'r ymennydd sy'n cynnwys rhaeadr o ddigwyddiadau biocemegol sy'n arwain at actifadu celloedd preswyl y system nerfol ganolog (CNS). Mae actifadu astrocytes yn afreolus yn peryglu eu rôl niwro-amddiffynnol gan arwain at ryddhau cyfryngwyr llidiol, megis rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS), ocsid nitrig (NO), cytocinau, chemocines, a metalloproteinases matrics.

(MMPs).

Mae MMPs yn deulu mawr o endopeptidasau niwtral, Zn2 ynghyd â dibynnol sydd â phrif dargedau cydrannau'r matrics allgellog (ECM) fel ffibronectin, colagen, elastin, a laminin (Latronico a Liuzzi 2017).

Tiziana Latronico

tiziana.latronico@uniba.it

Adran y Biowyddorau, Biotechnolegau, a Biofferylliaeth, Prifysgol Bari "Aldo Moro",

Bari, yr Eidal

Adran y Gwyddorau, Prifysgol Basilicata, Potenza,

Eidal

Yn y CNS, mae MMPs yn ymwneud ag amrywiol ymatebion ffisiolegol, megis morffogenesis, trosiant, ac ailfodelu ECM, embryogenesis, ac atgyweirio clwyfau; fodd bynnag, pan fydd MMPs yn dianc rhag mecanweithiau rheoleiddio maent yn dod yn niweidiol (Rosenberg 2009; Agrawal et al. 2008).

Yn hyn o beth, mae'n hysbys bod newidiadau mewn mynegiant a gweithgaredd MMP yn ddigwyddiadau pathogenetig allweddol mewn sawl anhwylder niwrolegol (Latronico a Liuzzi 2017; Mastroianni a Liuzzi 2007; Brkic et al. 2015). Mae tystiolaeth arbrofol wedi awgrymu, ymhlith MMPs, bod gelatinases A (MMP-2) a B (MMP-9) yn ymwneud yn arbennig â niwro-llid gan y gallai eu dadreoleiddio beryglu cyfanrwydd y rhwystr gwaed-ymennydd (BBB). Mae hyn yn arwain at fwy o recriwtio ac ymdreiddiad o gelloedd gwaed ymylol imiwn i barenchyma’r ymennydd, gan barhau â’r broses ymfflamychol sy’n achosi colled niwronau cynyddol a nam ar y swyddogaeth niwronaidd (Rivest 2009). Mae nifer o astudiaethau in vitro ac in vivo wedi dangos bod cynhyrchu ROS yn un o'r ffactorau sy'n ymwneud ag uwch-reoleiddio mynegiant MMP-9 yng nghelloedd yr ymennydd trwy fecanweithiau signalau sy'n dibynnu ar lwybr signalau kinase a weithredir gan mitogen (MAPK) (Hsieh a Yang 2013).

Yn seiliedig ar y dystiolaeth hon, mae'n amlwg y gallai is-reoleiddio ffactorau niwrowenwynig, gan arwain at lai o ymatebion niwrolidiol, gynrychioli strategaeth therapiwtig effeithiol i atal cychwyniad neu liniaru datblygiad clefydau'r ymennydd.

Yn ystod y blynyddoedd diwethaf, mae'r diddordeb biofeddygol yn y maes niwrolegol yn canolbwyntio fwyfwy ar ymchwil i gyfansoddion naturiol sy'n gallu modiwleiddio'r prosesau sy'n gysylltiedig ag ymatebion niwrolidiol. Yn hyn o beth, mae sawl astudiaeth wedi dangos bod gan gyfansoddion ffytocemegol, megis polyphenols, isothiocyanates (ITCs), ac eraill, botensial niwro-amddiffynnol sydd hefyd yn deillio o'u gallu i atal mynegiant MMPs ac i wrthweithio cynhyrchu ROS (Dinkova-Kostova a Kostov). 2012; Liuzzi et al. 2007, 2011).

Mae isothiocyanadau yn fetabolion a gynhyrchir gan nifer o blanhigion sy'n perthyn i'r teuluoedd Brassicaceae fel system amddiffyn rhag ymosodiad pathogen (Bones a Rossiter 2006). Maent yn tarddu o ddiraddiad ensymatig glwcosinolatau (GSL) gan yr ensym myrosinase. Mae ITCs yn bresennol mewn llysiau croeslifol a fwyteir yn gyffredin fel brocoli, ysgewyll Brwsel, bresych, maip, rhuddygl poeth, kohlrabi, mwstard, radish, berwr y dŵr, a chêl. Mae eu symiau mewn bwyd yn amrywiol iawn ac yn dibynnu ar brosesu a pharatoi bwyd.

Yn ddiweddar mae wedi bod yn dangos bod ITCs yn meddu ar amrywiaeth o effeithiau therapiwtig, gan gynnwys gwrthocsidiol, gwrthfacterol, gwrthlidiol, a chamau cemopreventive (Dufour et al. 2015; Marzocco et al. 2015).

Mae gweithgaredd amddiffynnol ITCs yn cael ei wneud trwy fodiwleiddio gwahanol lwybrau signalau sy'n ymwneud â dadwenwyno, llid, apoptosis, a rheoleiddio cylchredau celloedd. Mae sawl darn o dystiolaeth yn nodi y gallai priodweddau gwrth-garsinogenig a gwrthlidiol ITCs gael eu priodoli'n bennaf i'w gallu i actifadu llwybr ffactor 2 (Nrf2) sy'n gysylltiedig â ffactor niwclear erythroid 2-. Mae Nrf2 yn ffactor trawsgrifio sy'n sensitif i redocs sydd, ym mhresenoldeb asiantau electroffilig a chyflyrau straen ocsideiddiol, yn trawsleoli i'r cnewyllyn lle mae'n clymu'r elfennau ymateb gwrthocsidiol (ARE), gan ysgogi mynegiant genynnau cytoprotective sy'n ymwneud â dadwenwyno ac wrth fodiwleiddio cyflyrau ocsideiddiol a prosesau llidiol (Heiss et al 2001). Yn hyn o beth, adroddwyd bod ITCs yn gallu cynyddu gallu gwrthocsidiol celloedd dynol trwy ysgogi mynegiant ensymau dadwenwyno cam II a thrwy uwch-reoleiddio cynhyrchiad GSH (Wagner et al 2010). Ar ben hynny, adroddwyd bodolaeth croes-siarad rhwng Nrf2 a'r llwybr ffactor niwclear (NF)-κB sy'n arwain at fodiwleiddio llid (Sturm a Wagner 2017; Lee a Johnson 2004). Yn hyn o beth, mae gwahanol fodelau arbrofol in vitro ac in vivo o niwro-llid wedi dangos bod ITCs yn gallu lleihau trawsleoliad NF-κB yn sylweddol gyda'r ataliad canlyniadol o cytocinau prolidiol a MMPs (Lee et al. 2015; Subedi et al. 2017).

Yn y papur hwn, fe wnaethom ymchwilio i effaith tri ITCs hy Allyl isothiocyanate (AITC), 2-Phenethyl isothiocyanate (PEITC), a 2-Sulforaphane (SFN) ar ryddhau MMP{2}} a -9 yn ogystal ag ar gynhyrchu ROS gan astrocytes a weithredir gan LPS. Roedd ein canlyniadau'n dangos bod PEITC, SFN, ac AITC yn gallu atal in vitro mynegiant MMP-9 a MMP-2 mewn astrocytes a weithredir gan LPS ac i wrthweithio cynhyrchu ROS a achosir gan H2O2. Yn ogystal, gwnaethom ddangos bod ITCs yn modiwleiddio gorfynegiant MMPs gyda mecanweithiau sy'n ymwneud ag atal gweithgaredd protein kinase allgellog-reoleiddiedig (ERK). Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai diet sy'n gyfoethog mewn llysiau Cruciferous fod â manteision posibl ar gyfer atal a thrin clefydau niwrolegol yn gyflenwol.

Defnyddiau a dulliau

Cemegau ac adweithyddion

Darparwyd cyfrwng addasedig Dulbecco Eagle's (DMEM), serwm buchol ffetws (FBS), penisilin, a streptomycin gan GIBCO (Paisley, yr Alban). Gelatin, DNase 1, poly-L-lysin

(PLL), trypsin, lipopolysaccharide (LPS), Trypan Blue a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2.{5}}diphenyltetrazolium bromid (MTT) ), Allyl isothiocyanate (AITC) [penfras. 377,430, purdeb 95 y cant (HPLC)], 2-Phenethyl isothiocyanate (PEITC) [penfras. 253,731, purdeb 99 y cant )], 2-Sulforaphane (SFN) [penfras. S6317, purdeb Darparwyd mwy na neu'n hafal i 95 y cant (HPLC)] gan Sigma (St. Louis, MO, UDA). Prynwyd diacetate 2′,7′-dichlorofluorescein (DCFH-DA) gan Calbiochem. Daeth proteinau safonol ac R-250 Coomassie Brilliant Blue o Bio-Rad (Hercules, CA, UDA). Prynwyd gwrthgyrff protein asidaidd ffibrilaidd gwrth-glial (GFAP) (RRID: AB_2294571) gan Serotec (Rhydychen, DU). Roedd gwrthgyrff yn erbyn kinases protein allgellog-reoleiddiedig (ERK) 1/2, ac ERK 1/2 ffosfforyleiddiad (p-ERK 1/2) yn dod o Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA). Daeth pilenni PVDF Hybond-P, System Dadansoddi Blotio Gorllewinol cemoleuedd gwell (ECL), a gwrthgorff eilaidd gwrth-llygoden-HRP gan GE

Gwyddorau Bywyd Gofal Iechyd (Little Chalfont, Swydd Buckingham,

Y Deyrnas Unedig). Daeth parau preimio penodol ar gyfer MMP-2, MMP-9, ac rRNA 18S o Sigma Genosys (Cambs, UK). Prynwyd pecyn mini RNeasy a phecyn Trawsgrifio Gwrthdroi QuantiTect gan Qiagen (Valencia, CA, UDA). Prynwyd yr adweithyddion Master Mix Econo- Taq PLUS GREEN 2X ar gyfer PCR oddi wrth Lucigen Corporation (Middleton, WI, USA).

Datganiad moeseg

Cynhaliwyd yr arbrofion yn ymwneud ag anifeiliaid yn unol ag argymhellion Canllaw NIH ar gyfer Gofalu a Defnyddio Anifeiliaid Labordy a chyda chymeradwyaeth Pwyllgor Gofal a Defnydd Anifeiliaid Sefydliadol Prifysgol Bari, yr Eidal (Rhif Trwydded: 23-98- A).

Paratoi diwylliannau astrocyte

Paratowyd astrocytes o feinweoedd neocortical {{{0}}llygod mawr Wistar (RRID: RGD_737960), Harlan Laboratories srl, Udine, yr Eidal). Ar gyfer paratoi astrocytes defnyddiwyd 6 torllwyth o 12 ci bach, pob un o'r ddau ryw. Cafodd yr anifeiliaid eu ewthaneiddio trwy ddod i gysylltiad â charbon deuocsid (CO2) a'u lladd gan ddisbyddiad cyflym. Cafodd y meinweoedd neocortical eu dyrannu a'u defnyddio ar gyfer puro diwylliannau celloedd glial cynradd yn dilyn y dull a adroddwyd gan Latronico et al. (2018). Yn fyr, ar ôl y dyraniad, disbyddwyd ymennydd llygod mawr o meninges a phibellau gwaed, wedi'i friwgig mecanyddol a'i dreulio â 0.25 y cant trypsin ym mhresenoldeb 0.01 y cant DNase. Ar ôl centrifugio ac asesu hyfywedd celloedd, cafodd celloedd eu platio mewn fflasgiau wedi'u gorchuddio â PLL (75 cm2) ar ddwysedd o 1.5 × 107 o gelloedd/fflasg yn DMEM, 10 y cant FBS, 100 IU mL −1 penisilin, 100 µg mL −1 streptomycin , a'i gynnal ar 37 gradd mewn CO2 o 5 y cant. Ar ôl 7 diwrnod, ysgwyd y fflasgiau i gael gwared ar oligodendrocytes a microglia. Aseswyd purdeb astrocytes, a gafwyd trwy trypsineiddio (0.25 y cant trypsin / 0.02 y cant EDTA), trwy imiwnogydd ar gyfer GFAP.

Trin astrocytes wedi'u hactifadu gan LPS ag Allyl isothiocyanate, Phenethyl isothiocyanate neu 2-Sulforaphane

Ysgogwyd astrocytes cydlifol, wedi'u hadu mewn 96 o blatiau ffynnon, â 10 µg mL −1 o LPS a'u trin ar yr un pryd â chrynodiadau gwahanol o Allyl isothiocyanate (AITC), 2-Phenethyl isothiocyanate (PEITC) neu 2-Sulforaphane (SFN) mewn DMEM di-serwm. Roedd astrocytes mewn astrocytes heb serwm DMEM ac LPS-activated yn cynrychioli rheolaethau negyddol a chadarnhaol, yn y drefn honno. Yn ogystal, ers i atebion stoc AITC (100 µM), PEITC (67 µM), a SFN (56.4 µM) gael eu gwneud yn DMSO, cromlin ymateb dos i DMSO, wedi'i wanhau mewn cyfrwng meithrin ar yr un crynodiad toddyddion sy'n bresennol yn rhedwyd y samplau a ddadansoddwyd i amcangyfrif gwenwyndra cyfansawdd. Ar ôl 20 h o ddeor ar 37 gradd, 5 y cant o CO2 casglwyd a storiwyd y supernatants ar -20 gradd nes eu defnyddio tra bod y celloedd yn destun assay MTT i asesu hyfywedd celloedd.

Assay hyfywedd celloedd MTT

Canfuwyd sytowenwyndra AITC, PEITC, ac SFN ar astrocytes gan ddefnyddio'r MTT [{{0}}(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,{{5} }}deuffenyl tetrazolium bromid] assay. Mae'r assay hwn yn seiliedig ar leihad MTT gan y dehydrogenase succinate mitocondriaidd mewn celloedd hyfyw, i gynnyrch formazan glas anhydawdd y gellir ei fesur yn sbectroffotometrig. Yn fyr, ar ôl triniaeth am 20 h gydag AITC, PEITC neu SFN, tynnwyd y cyfrwng diwylliant a llwythwyd celloedd â 0.5 mg mL -1 o MTT. Ar ôl deori am 2 h ar 37 gradd, tynnwyd 5 y cant o gyfrwng CO2 a chafodd y crisialau formazan mewn celloedd eu hydoddi â 90 y cant ethanol. Ar ôl ysgwyd platiau am 15 munud i gael hydoddi crisialau yn llwyr, pennwyd maint y cynnyrch formazan gan amsugnedd optegol ar 560 nm gyda thonfedd cyfeirio o 690 nm. Mynegwyd hyfywedd celloedd fel canran o reolaeth (CTRL), a gynrychiolir gan gelloedd heb eu trin, a osodwyd ar 100 y cant . Ar gyfer pob cyfansoddyn, cafwyd cromlin ymateb dos o hyfywedd celloedd.

Canfod rhywogaethau ocsigen adweithiol

Perfformiwyd canfod rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) trwy lwytho astrocytes gyda 10 μM o 2 ′, 7 ′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) mewn DMEM di-goch ffenol ar 37 gradd am 30 munud. Yna tynnwyd DCFH-DA o ffynhonnau a chafodd celloedd eu trin am 1 h gydag AITC (400 μM), PEITC (10 μM) neu SFN (25 μM) mewn DMEM di-goch ffenol ym mhresenoldeb H2O2 ar y crynodiad terfynol o 100 μM . Roedd celloedd a gafodd eu trin â DCFH-DA yn unig neu gyda H2O2 yn cynrychioli'r rheolaethau negyddol (CTRL) a chadarnhaol (H2O2), yn y drefn honno. Ar ôl deor, roedd celloedd yn cael eu rinsio â PBS a'u gorchuddio â

Tris–HCl 10 mM/NaCl 150 mM/Triton X-100 0.5 y cant , pH 7.5,

yna wedi'i allgyrchu ar 10,000 × g, 4 gradd am 10 munud. Casglwyd supernatants a pherfformiwyd eu dadansoddiad sbectrofluorimetrig ar 525 nm o dan cyffro ar 485 nm. Cafodd y canlyniadau eu normaleiddio i gyfanswm y cynnwys protein a mynegwyd cynhyrchiad ROS fel canran gymharol o ddwysedd ffotoluminescence (PL) yn erbyn rheolaeth gadarnhaol.

Canfod gelatinasau

Canfuwyd gweithgaredd gelatinase mewn supernatants cell (SNs) gan ddadansoddiad zymograffig fel yr adroddwyd gan Latronico et al. (2013). Yn gryno, cafodd swm o SN, sy'n cyfateb i tua 10 µg o gyfanswm y proteinau, ei hydoddi gyda 30 µl o glustogfa sampl Laemmli heb -mercaptoethanol. Cafodd samplau eu rhedeg mewn gel polyacrylamid 7.5 y cant copolymerized gyda 0.1 y cant (wt / v) gelatin. Ar ôl y rhediad electrofforetig, rinsiwyd geliau ddwywaith gyda 2.5 y cant Triton X-100/10 mM CaCl2 mewn 50 mM Tris–HCl, pH 7.4 a deorwyd am 24 h ar 37 gradd mewn 1 y cant Triton X-100 /50 mM Tris–HCl/10 mM CaCl2, pH 7.4. Cafodd y geliau eu staenio â Coomassie glas gwych R-250 a'u cadw mewn methanol/asid asetig/H2O (4:1:5 v/v). Cafodd gweithgaredd gelatinase ei ddelweddu fel band clir o dreuliad ar gefndir glas y gel a chafodd ei fesur trwy ddadansoddi delweddau densitometrig cyfrifiadurol gan ddefnyddio Meddalwedd Image LabTM (Labordai Bio-Rad). Gelatinase

mynegwyd gweithgaredd fel dwysedd optegol (OD) × mm2, sy'n cynrychioli'r ardal sganio o dan y cromliniau sy'n ystyried disgleirdeb a lled parth lysis y swbstrad. Mynegwyd data gan ddefnyddio'r hafaliad canlynol: ataliad y cant=[100 − (sampl OD/rheolaeth bositif OD) × 100].

Adwaith cadwyn trawsgrifio-polymerase gwrthdro (RT-PCR)

Cafodd astrocytes, wedi'u hadu mewn 6 plât ffynnon, eu hactifadu â LPS (10 µg mL -1) a'u trin ar yr un pryd â ITCs ar y crynodiad diwenwyn mwyaf. Ar ôl 20 h o ddeor, echdynnwyd cyfanswm o RNA o astrocytes gan ddefnyddio pecyn mini Qiagen RNeasy yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Cafodd DNA cyflenwol (cDNA) ei syntheseiddio o 500 ng o RNA trwy ddefnyddio'r pecyn QuantiTect Reverse Trascription yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Defnyddiwyd cyfanswm o 25 ng o gynhyrchion trawsgrifio gwrthdro i chwyddo darn 591 bp gan ddefnyddio paent preimio penodol (synnwyr 5′-GTC ACT CCG CTG CGC TTT TCT CG-3′; antisense 5′-GAC ACA TGG GGC ACC TTC TGA-3′) ar gyfer y dilyniant llygoden fawr MMP-2 a darn 541 bp gan ddefnyddio paent preimio penodol (synnwyr 5′-CGG AGC ACG GGG ACG GGT ATC 3′; gwrth-synnwyr 5′-AAG ACG AAG GGG AAG ACG CAC ATC 3′) ar gyfer y dilyniant llygod mawr MMP-9. Ochr yn ochr, perfformiwyd ymhelaethu ar ddarn 308 bp o rRNA llygoden fawr 18S (synnwyr 5′-GCCTAGATA CCGCAGCTAGGA-3′; antisense 5′-TCATGGCCTCAG TTCCGAA-3′), genyn cyfeirio mewnol cymharol amrywiol. . Mae'r setiau paent preimio, sydd eisoes wedi'u dilysu mewn astudiaethau eraill (Latronico et al. 2013; Liuzzi et al. 2004; Gramegna et al. 2011) yn cydnabod yn benodol y genynnau o ddiddordeb yn unig fel y nodir gan ymhelaethu ar un band o faint disgwyliedig y PCR cynnyrch. Cyflawnwyd yr ymhelaethiad PCR ar gyfer 25 cylch, pob un yn cynnwys dadnatureiddio ar 94 gradd, anelio ar 59 gradd, ac estyniad ar 72 gradd. Ar ôl ymhelaethu, dadansoddwyd y cynhyrchion mewn geliau agarose 1.5 y cant. Ar ôl y dadansoddiad densitometrig o geliau, normaleiddiwyd ymhelaethu ar y genynnau targed i fynegiant rRNA 18S, a mynegwyd canlyniadau fel canran o ataliad o'i gymharu â rheolaeth gadarnhaol fel yr adroddwyd ar gyfer meintioli gelatinase.

Canfod ffosfforyleiddiad ERK 1/2 trwy ddadansoddiad blot gorllewinol

Canfuwyd ERK 1/2 trwy ddadansoddiad immunoblot fel yr adroddwyd yn Latronico et al. (2018). Yn gryno, cydlifiad cynradd

astrocytes ar blatiau mewn {{0}}platiau ffynnon, wedi'u gwneud yn dawel mewn cyfrwng di-serwm am 24 h, wedi'u rhag-drin am 1 awr gydag AITC (4{00 μM), PEITC (10 μM), neu SFN (25 μM) mewn DMEM di-goch ffenol. Ar ôl ysgogiad am 2 h gyda 10 ug mL -1 o LPS, cafodd celloedd eu gorchuddio â 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 2.5 mM Na-pyrophosphate, 1 mM -glycerophosphate 1 y cant Triton X-100, 1 mM ffworid ffenylmethylsulfonyl, aprotinin 20 ug/mL, EGTA 1 mM, Na-fuorid 1 mM, 1 mM Na3VO4, pH 7.5. Datryswyd chwe deg ug o gyfanswm proteinau pob sampl gan 10 y cant o electrofforesis gel SDS-polyacrylamid ac yna cafodd proteinau eu imiwnoblotio ar bilenni polyvinylidene difluoride. Ar ôl blocio dros nos ar 4 gradd gyda 0.05 y cant Tween 20, llaeth 1 y cant, albwmin serwm buchol 1 y cant mewn 150 mM NaCl, 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), chwiliwyd pilenni dros nos ar 4 gradd gyda gwrth-p monoclonaidd ERK 1/2 gwrthgorff (1:500). Yna cafodd pilenni eu golchi deirgwaith gyda 0.05 y cant Tween 20 mewn halwynog wedi'i glustogi Tris, wedi'i archwilio â gwrthgorff eilaidd gwrth-lygoden-marchraidd peroxidase (1:20,000) am 2-h ar 24 gradd a'i ganfod gyda chemiluminescence gwell. I asesu cyfanswm yr ERK, cafodd pilenni eu tynnu a'u deor â gwrthgorff penodol ar gyfer ERK 1/2 nad yw'n ffosfforyleiddiad (1:500). Mesurwyd dwyster y bandiau trwy sganio densitometrig o blotiau a normaleiddiwyd lefelau ffosfforyleiddiad ERK 1/2 i ERK 1/2 nad yw'n ffosfforyleiddiad a'i fynegi fel canran o'i gymharu â'r rheolaeth gadarnhaol (astrocytes a driniwyd â LPS), yn ôl y hafaliad canlynol:

y cant perK 1/2=(rheolaeth ODsample/ODpositive) × 100.

Dadansoddiad ystadegol

Perfformiwyd dadansoddiad data gan ddefnyddio'r GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, UDA). Mynegwyd y data fel gwerthoedd cymedrig ± DC. Cynhaliwyd dadansoddiad ystadegol gan ddefnyddio dadansoddiad un ffordd o amrywiant (ANOVA) ac yna prawf post hoc Cymhariaeth Lluosog Dunnett.

Canlyniadau

Effaith cyfansoddion isothiocyanad ar hyfywedd astrocyte

Perfformiwyd arbrofion rhagarweiniol i werthuso sytowenwyndra AITC, PEITC, neu SFN. I'r diben hwn, cafodd astrocytes wedi'u puro eu trin am 20 h gyda'r cyfansoddion ITC mewn crynodiadau rhwng 5 a 400 µM neu gyda DMSO wedi'u gwanhau mewn cyfrwng meithrin fel y disgrifir yn yr Adran Dull. Fel y dangosir yn Ffig. 1, nid oedd y DMSO yn wenwynig o gwbl mewn crynodiadau a ddefnyddiwyd sy'n cyd-fynd â rhai'r datrysiadau ITC a brofwyd. Ymhlith yr ITCs yr ymchwiliwyd iddynt, AITC

Ffig. 1 Hyfywedd celloedd astrocytes wedi'u trin â chyfansoddion isothiocyanad. Cafodd astrocytes cynradd cydlif eu trin am 20 h ag Allyl isothiocyanate (AITC), 2-Phenethyl isothiocyanate (PEITC), neu 2-Sulforaphane (SFN) ar y crynodiadau a nodwyd a oedd yn destun y assay MTT bryd hynny. Yn ogystal, gan ei fod yn y stoc hydoddiannau eu toddi mewn dimethyl sulfoxide (DMSO), cromlin dos-ymateb i DMSO, gwanhau mewn cyfrwng diwylliant ar yr un crynodiad toddyddion ( y cant ) sy'n bresennol yn y samplau ITC ei redeg ym mhob arbrawf i gael amcangyfrif dibynadwy o wenwyndra TGCh. Roedd y rheolydd (CTRL) yn cynrychioli

persawrus o astrocytes heb eu trin mewn DMEM di-serwm. Mae'r graffiau'n cynrychioli cromliniau dos-ymateb hyfywedd celloedd, wedi'u mynegi fel canran o oroesiad celloedd o gymharu â rheolaeth. Dewiswyd y dosau o gyfansoddion a benderfynodd hyfywedd celloedd uwchlaw 60 y cant fel y crynodiadau diwenwyn uchaf. Gwerthoedd yw ± SD cymedrig o n=3 arbrofion a berfformiwyd ar wahanol boblogaethau celloedd. Mae micrograffiau yn dangos canlyniadau cynrychioliadol morffoleg celloedd a welwyd o dan ficrosgop cyferbyniad cam (chwyddiad 50X) ar ôl triniaeth gyda'r gwahanol gyfansoddion

oedd y lleiaf gwenwynig ar gyfer astrocytes. Yn benodol, nid oedd AITC yn wenwynig ar gyfer celloedd hyd at 400 µM tra bod PEITC a SFN yn wenwynig mewn crynodiadau uwch na 10 a 25 µM, yn y drefn honno. Cadarnhaodd yr arsylwi microsgopig ganlyniadau'r assay MTT gan ddangos bod crynodiadau gwenwynig PEITC a SFN, astrocytes wedi lleihau mewn nifer a bod y rhai a oedd ar ôl yn dangos newidiadau sytotocsig yn eu cytoplasm.

Effaith amddiffynnol cyfansoddion ITC ar gynhyrchu ROS mewn astrocytes sy'n cael eu trin â hydrogen perocsid

Er mwyn gwerthuso effaith amddiffynnol ITCs tuag at straen ocsideiddiol, cafodd astrocytes eu trin ymlaen llaw gyda PEITC, AITC, a SFN ar y crynodiad uchaf nad yw'n wenwynig a ysgogwyd wedyn gyda H2O2. Assayed y cynhyrchiad ROS mewngellol, a ysgogwyd gan H2O2, gan DCFH-DA. Fel y dangosir yn Ffig. 2, mae'r amlygiad i H2O2 signal fflwroleuol gwell yn

Ffig. 2 Cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) mewn astrocytes sy'n cael eu trin â TGCh. Assayed presenoldeb ROS drwy fesur y newidiadau yn y signal fflwroleuol o 2′,7′-dichlorofluorescein (DCFA) fel yr adroddwyd yn yr adran Deunyddiau a Dulliau. Cafodd astrocytes, wedi'u hadu mewn 6 plât ffynnon, eu trin ymlaen llaw am 30 munud gyda DCFA ac yna eu trin am 1 awr gyda 10 μM PEITC, 400 μM AITC, neu 25 μM SFN ym mhresenoldeb H2O2 ar grynodiad terfynol o 100 μM . Roedd astrocytes a gafodd eu trin â DCFA yn unig (CTRL) neu gyda 100 μM H2O2 yn cynrychioli rheolaeth negyddol a chadarnhaol, yn y drefn honno. Mesurwyd y signal fflwroleuol a ganfuwyd mewn lysates cell gan fflworomedr ar 525 nm o dan gyffro ar 485 nm. Mynegwyd y cynhyrchiad ROS fel canran ( y cant ) o ddwysedd ffotoluminescence (PL) o'i gymharu â rheolaeth gadarnhaol. Gwerthoedd yw ± SD cymedrig o n=3 arbrofion a berfformiwyd ar wahanol boblogaethau celloedd. Dangosir gostyngiad ystadegol arwyddocaol o gymharu â H2O2 gan seren (ANOVA un ffordd ac yna prawf post hoc Dun-net; *p <>

astrocytes o gymharu â rheolaeth (CTRL). Fel y dangosir gan y gostyngiad mewn dwyster fflworoleuedd DCF, roedd cyn-driniaeth astrocytes â chyfansoddion ITC yn gwrthweithio cynhyrchu ROS a achosir gan H2O2. Ymhlith yr ITCs a brofwyd, dim ond PEITC a SFN oedd yn gallu lleihau cynhyrchiad ROS yn sylweddol tua 20 a 24 y cant, yn y drefn honno, o'i gymharu â rheolaeth gadarnhaol (H2O2).

Mae'r cyfansoddion isothiocyanate yn atal lefelau MMP-2 a MMP-9 mewn astrocytes a weithredir gan LPS

Gwerthuswyd effaith cyfansoddion ITC ar lefelau MMP-2 a MMP-9 ar astrocytes a weithredir gyda LPS, y gwyddys ei fod yn achosi mynegiant gelatinases (Gottschall a Deb 1996), ac a gafodd eu trin ar yr un pryd ag AITC, PEITC, neu SFN yn yr ystod o grynodiadau nad oeddent yn wenwynig i gelloedd. Fel y dangosir yn Ffig. 3a, roedd dau fand treuliad clir o 72 a 92 kDa yn bresennol ar y gel sy'n cyfateb, yn y drefn honno, i MMP-2 a MMP-9. Cynyddodd actifadu astrocytes ag LPS lefelau MMP-2 ac ysgogodd synthesis MMP-9. Penderfynodd triniaeth ag AITC (Ffig. 3b), PEITC (Ffig. 3c), neu SFN (Ffig. 3d) ddibynnydd dos

gostyngiad mewn lefelau MMP-9, a oedd yn amrywio yn dibynnu ar y cyfansoddyn a ddefnyddiwyd. Yn benodol, ymhlith yr ITC a ddefnyddiwyd, SFN oedd y mwyaf effeithiol o ran atal MMP-9 gan iddo bennu ataliad o 70 y cant ar y dos o 10 μM ac ataliad o 100 y cant ar y dos o 25 μM. Yn ogystal, dim ond SFN ar y crynodiad mwyaf diwenwyn a oedd yn gallu atal MMP-2 yn sylweddol (Ffig. 2d).

Mae'r cyfansoddion isothiocyanate yn atal mynegiant genynnau MMP-2 a MMP-9 mewn astrocytes a weithredir gan LPS

Er mwyn pennu a oedd y cyfansoddion ITC a astudiwyd yn gallu atal mynegiant MMP-2 a MMP-9, perfformiwyd RT-PCR ar astrocytes wedi'u hysgogi gan LPS a gafodd eu trin â'r crynodiad diwenwyn uchaf o ITCs. Fel y dangosir yn y geliau cynrychioliadol yn Ffig. 4a roedd trin astrocytes wedi'u hysgogi gan LPS gyda'r ITCs unigol yn gallu gwrthweithio mynegiant cynyddol mRNA MMP-2 a MMP-9. Fel y dangosir yn Ffig. 4b, dangosodd y dadansoddiad meintiol o'r canlyniadau fod y cyfansoddion ITC, ar y crynodiad diwenwyn mwyaf, wedi pennu ataliad ystadegol arwyddocaol o fynegiant MMP-2 a MMP{-9 mewn cymhariaeth i reolaeth gadarnhaol (LPS). Yn benodol, mae PEITC a SFN yn rhoi'r un ganran o ataliad ar MMP-2 (85 y cant ) ac MMP-9 (100 y cant ) tra bod AITC yn llai effeithiol na PEITC a SFN wrth atal MMP{{17} mynegiant } (65 y cant ) a MMP { { 19 }} ( 90 y cant ) mynegiant.

Mae ERK 1/2 yn ymwneud ag atal mynegiant MMP gan ITC

Gan mai ERK 1/2 yw'r prif lwybr trawsgludo signalau sy'n ymwneud â rheoleiddio mynegiant MMP-2 a MMP-9 mewn astrocytes a weithredir gan LPS (Lee et al. 2003), effaith cyfansoddion ITC ar y actifadu kinases protein allgellog-reoleiddiedig (ERK) 1/2 ei brofi.

Fel y dangosir yn Ffig. 5 ysgogodd LPS gynnydd ystadegol arwyddocaol mewn lefelau ERK 1/2 (p-ERK) â ffosfforyleiddiad a gafodd ei wrthweithio gan rag-driniaeth â'r cyfansoddion ITC.

Trafodaeth

Credir yn eang mai'r prif strategaethau amddiffyn rhag llawer o afiechydon yw osgoi ffactorau risg a mabwysiadu ffordd gywir o fyw yn bennaf. Mae yna lawer o dystiolaeth wyddonol sy'n cefnogi'r ddamcaniaeth bod rhai metabolion naturiol, a gynhyrchir yn nodweddiadol gan wahanol fathau o ffrwythau a llysiau, yn gallu modiwleiddio ffenomenau patholegol fel canser, afiechydon niwrolegol, a chlefydau amlffactoraidd eraill. Yn y senario hwn, cododd yr isothiocyanadau (ITCs) ddiddordeb mawr o ystyried eu gwrthffyngaidd, gwrthfacterol,

Ffig. 3 Effaith cyfansoddion isothiocyanad ar lefelau MMP-2 a MMP-9 mewn astrocytes a weithredir gan LPS. Mewn a adroddir gel symograffig cynrychioliadol o ddadansoddiad o supernatants meithrin o astrocytes actifadu â LPS (10 ug mL-1) ac yn cael eu trin ar yr un pryd am 20 h ag AITC, PEITC, neu SFN ar y crynodiadau a nodir (μM). Cafwyd rheolaethau negyddol a chadarnhaol o astrocytes heb eu symbylu a heb eu trin mewn cyfrwng di-serwm (CTRL) a LPS-

celloedd actifedig (LPS), yn y drefn honno. Mae histogramau b–d yn cynrychioli canlyniadau (cymedr ± SD) o n {{0}} arbrofion a berfformiwyd ar wahanol boblogaethau celloedd, wedi'u mynegi fel canran o ataliad MMP o'i gymharu â LPS, wedi'i gyfrifo ar ôl sganio densitometreg a dadansoddiad cyfrifiadurol o geliau . Dangosir gostyngiad ystadegol arwyddocaol o gymharu ag LPS gan seren (ANOVA un ffordd ac yna prawf post hoc Dunnet; *p < 0.05,="" **p=""><>

eiddo biolegol gwrth-garsinogenig, antimutagenig, gwrthocsidiol, a gwrthlidiol (Dufour et al. 2015; Marzocco et al. 2015; Vig et al., 2009; Talalay a Fahey 2001). Mae iso-thiocyanadau yn tarddu o ddiraddiad ensymatig glwcosinolatau (GSL) sy'n fetabolion eilaidd sy'n bresennol mewn 15 o deuluoedd botanegol o'r urdd Capparales ac sy'n doreithiog iawn yn y teulu Brassicaceae (Fahey et al. 2001). Mae GSL yn cael ei hydroleiddio gan myrosinase (-thioglucoside glucohydrolase e; EC 3.2.3.147) mewn amrywiaeth o gydrannau megis ITCs, nitraidau, thiocyanadau, epithionitrilau, SFGate, glwcos, ac oxazolidines (Li a Kushad 2005). Er bod ITCs wedi cael eu hastudio'n helaeth yn y maes cemotherapiwtig (Grundemann a Huber 2018), ychydig o ymchwiliadau a wnaed i'w potensial therapiwtig mewn clefydau niwrolegol er y dangoswyd gallu SFN ac AITC i groesi'r BBB a chronni i barenchyma'r ymennydd. (Clarke et al. 2011; Jazwa et al. 2011; Zhang 2010). Yn y papur hwn, gwnaethom gymharu effeithiau tri ITCs,

sy'n bresennol mewn nifer o lysiau croeslifol a ddefnyddir yn gyffredin, ar gynhyrchiad rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) a mynegiant matrics metalloproteinase (MMP) mewn model in vitro o niwro-llid a gynrychiolir gan astrocytes wedi'u actifadu â lipopolysaccharid (LPS) neu eu trin â H2O2. Mae astrocytes, y math celloedd glial mwyaf niferus o'r CNS, yn chwarae rhan hanfodol wrth gynnal homeostasis yr ymennydd ac maent yn nodweddion gwahanol glefydau niwrolegol (Cekanaviciute a Buckwalter 2016; Colombo a Farina 2016). Fe'u hystyrir yn rheolyddion hanfodol yr ymateb imiwn cynhenid ​​a gall eu hymateb i sarhad niweidiol, megis straen ocsideiddiol, waethygu adweithiau llidiol a difrod meinwe neu hybu atgyweirio meinwe. Mae'n hysbys bod astrocytes actifedig yn cynhyrchu ffactorau niwrowenwynig fel MMPs sydd â rôl allweddol wrth hyrwyddo niwro-llid a cholled niwronaidd cynyddol mewn clefydau niwrolegol (Hsieh and Yang 2013). Felly, mae modiwleiddio'r

Ffig. 4 Effaith cyfansoddion ITC ar fynegiad MMP-2 a MMP-9 mewn astrocytes a weithredir gan LPS. Cafodd astrocytes, wedi'u hadu mewn 6 plât ffynnon, eu actifadu â LPS (10 µg mL-1) a'u trin ar yr un pryd am 20 h ag AITC (400 μM), PEITC (10 μM) neu SFN (25 μM), yna'n destun RT-PCR. Mae geliau agarose cynrychioliadol mynegiant MMP-2 a MMP-9 yn cael eu hadrodd yn (a). Mae histogramau yn (b) yn cynrychioli canlyniadau (cymedr ± SD) o n=3 arbrofion a berfformiwyd ar gell wahanol

gallai digwyddiadau sy'n digwydd ar ôl actifadu astrocytes liniaru'r ymateb llidiol a'r difrod niwronol.

Dangosodd canlyniadau'r astudiaeth hon fod AITC ymhlith yr ITCs a astudiwyd yn llai gwenwynig gan nad oedd yn arwain at unrhyw ostyngiad yn hyfywedd celloedd ym mhob crynodiad a ddefnyddiwyd. Mewn cyferbyniad, yn debyg i'r hyn a welwyd gan awduron eraill ar linellau celloedd glial amrywiol, dangosodd PEITC a SFN wenwyndra cellog mewn crynodiadau mwy na 10 a 25 µM, yn y drefn honno (Lee et al. 2015; Eren et al. 2018; Su et al. .2015).

Yn y llenyddiaeth wyddonol gyfredol, mae llawer o ddata dadleuol ar y mecanweithiau moleciwlaidd sy'n sail i effeithiau ITCs ar hyfywedd celloedd. Yn hyn o beth, mae'r rhan fwyaf o'r astudiaethau wedi awgrymu bod ITCs yn atal yr apoptosis sy'n achosi twf cellog, ataliad cylchred celloedd, cynhyrchu ROS mewn celloedd canser ond nid mewn celloedd normal (Fofaria et al. 2{015; Qin et al. 2018; Sestili a Fimognari 2015). Canfuom fod gan SFN a PEITC, ond nid AITC, rôl amddiffynnol yn erbyn straen ocsideiddiol mewn astrocytes, yn wir ar y crynodiadau diwenwyn uchaf roeddent yn gallu gwrthweithio cynhyrchu ROS a achosir gan amlygiad i H2O2. Mae'r CNS yn arbennig o agored i straen ocsideiddiol oherwydd ei ddefnydd uchel o ocsigen, systemau gwrthocsidiol gwan, a chynnwys uchel o fiomacromoleciwlau sy'n agored i ocsidiad. Credir bod cynhyrchu ROS a difrod ocsideiddiol yn gysylltiedig â phathogenesis anhwylderau niwrolegol megis clefyd Alzheimer (AD), clefyd Parkinson (PD), Sglerosis Ochrol Amyotroffig (ALS), a Sglerosis Ymledol (MS) (Lee et al. 2015). Felly, er bod SFN a PEITC, yn ein harbrofion in vitro, wedi gwrthweithio cynhyrchu ROS i raddau cymedrol, efallai y byddwn yn tybio y gall gweinyddiaeth hirdymor o ITCs arwain at ostyngiad mwy sylweddol mewn ROS a all, dros amser, arwain at ostyngiad ystyrlon. ar gyfer poblogaethau a fynegir fel canran o ataliad MMP o gymharu â'r rheolaeth gadarnhaol (LPS), wedi'i gyfrifo ar ôl sganio densitometreg a dadansoddiad cyfrifiadurol o geliau. Mae gostyngiad ystadegol arwyddocaol mewn mynegiant MMP-2 a MMP-9 o gymharu â LPS wedi'i nodi gan seren (ANOVA un ffordd ac yna prawf post hoc Dunnet; *p <>

atal a modiwleiddio clefydau'r ymennydd. Mae ROS yn gweithredu fel moleciwl signalau critigol i sbarduno rhaeadru ymateb llidiol i'r CNS. Yn hyn o beth, mae'n hysbys bod ROS yn rheoleiddio mynegiant llawer o enynnau sy'n ymwneud â niwro-lid trwy actifadu ffactorau trawsgrifio pro-llidiol fel ffactor niwclear-κB (NF-κB) (Lee et al. 2015; Chiurchiù et al. 2016; Martorana et al. 2019). Yn y senario hwn, mae MMPs y mae eu mynegiant yn cael ei uwch-reoleiddio gan ROS trwy actifadu NF-κB (Yan a Boyd 2007) yn chwarae rhan bwysig.

Gan fod dadreoleiddio MMP yn cyfrannu at bathogenesis nifer o glefydau niwrolidiol a niwroddirywiol, mae eu hataliad yn cynrychioli strategaeth therapiwtig bwysig. Am y rheswm hwn, mae diddordeb cynyddol yn y degawd diwethaf wedi canolbwyntio ar botensial cyffuriau a chyfansoddion naturiol i atal MMPs. Mae nifer o astudiaethau in vitro wedi dangos bod gweithredu gwrthlidiol a gwrthocsidiol sawl cyffur a chyfansoddion bioactif sy'n bresennol mewn llysiau ac organebau morol yn gysylltiedig â'u gallu i atal mynegiant MMPs (Latronico et al. 2016, 2018; Di Bari et al. .2015). Yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddangos, ymhlith yr ITCs a brofwyd, mai SFN a PEITC oedd y rhai mwyaf effeithiol wrth atal lefelau MMP-2 a MMP-9 a mynegiant mewn astrocytes a weithredir gan LPS. Adroddwyd bod ITCs yn atal MMPs mewn astudiaethau in vivo ac in vitro eraill. Yn benodol, mae Li et al. (2013) bod SFN yn gallu lliniaru'r difrod BBB trwy atal mynegiant MMP-9 mewn model in vivo o enseffalomyelitis awtoimiwn arbrofol. Dywedodd awduron eraill fod SFN wedi gallu gwanhau mynegiant MMP-9 yn dilyn anaf i fadruddyn y cefn mewn llygod (Mao et al. 2010a). Yn ogystal, dangosodd astudiaethau in vitro fod ITCs yn atal mudo celloedd a

Ffig. 5 Mae kinase allgellog a reoleiddir gan signal 1/2 (ERK 1/2) yn ymwneud ag atal mynegiant MMP gan gyfansoddion ITC. Ffilmiau autoradiograffig cynrychioliadol o ddadansoddiad blotio gorllewinol o lysates o astrocytes wedi'u rhag-drin am 1 awr gydag AITC (400 μM), PEITC (10 μM) neu SFN (25 μM), ac yna'n cael eu hactifadu am 2 h gyda LPS (10 ug mL{{ 13}}). Mae celloedd heb eu trin a heb eu symbylu yn cynrychioli rheolaeth negyddol (CTRL). Mae'r histogram yn (b) yn cynrychioli lefelau pERK1/2 goresgyniad mewn celloedd glioma C6 yn gysylltiedig ag ataliad mynegiant MMP-9 wedi'i gyfryngu gan NF-κB (Lee et al. 2015).

Mae'r mecanweithiau moleciwlaidd a ddefnyddir gan ITCs i atal MMPs yn aneglur, ac nid oes unrhyw astudiaethau sy'n ymchwilio i briodweddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol ITCs ar ddiwylliannau astrocyte cynradd. Mae sawl astudiaeth yn cefnogi'r ddamcaniaeth bod effaith ataliol ITCs yn ganlyniad i'w gallu i rwystro NF-κB gan lwybr signalau Nrf2. Yn hyn o beth, mae astudiaeth in vivo yn dangos bod llygod taro Nrf2 yn fwy agored i ymateb llidiol NF-κB-gyfryngol o linyn y cefn ac i fynegiant cynyddol genynnau sy'n ddibynnol ar NFκB gan gynnwys MMP-9 (Mao et al. 2010b ). Er y gallai llwybrau NF-κB a Nrf2 ryngweithio, dangoswyd bod rheoleiddio NF-κB hefyd yn digwydd trwy fodiwleiddio mecanweithiau moleciwlaidd sy'n annibynnol gan Nrf2. Yn wir, canfuom fod AITC, PEITC, a SFN yn atal actifadu ERK1/2 sy'n chwarae rhan ganolog yn y rhaeadru o ddigwyddiadau trawsgludo signal sy'n rheoleiddio trawsgrifiad genynnau MMP yn y pen draw.

Fodd bynnag, roedd y dystiolaeth arbrofol bod SFN ar y crynodiad diwenwyn mwyaf yn atal mynegiant a lefelau MMP yn gyfan gwbl tra bod AITC a PEITC yn atal mynegiant MMP-9 ymestyn uchaf ond dim ond wedi gostwng MMP{{3} } lefelau i tua 50 y cant , gallai awgrymu bod y cyfansoddion hyn yn modiwleiddio trawsgrifiad MMP-9 gyda gwahanol fecanweithiau gweithredu. Yn hyn o beth, adroddwyd bod SFN, yn ogystal ag atal actifadu NF-κB a achosir gan LPS, yn ymyrryd â rhwymiad LPS i dderbynnydd TLR4 (Koo et al 2013). Gallai effaith ataliol SFN ar TLR4 atal astrocytes rhag actifadu gan LPS a gallai hyn arwain at atal mynegiant MMP-9 i fyny'r afon gyda diffyg cynhyrchu MMP-9 o ganlyniad.

a gafwyd ar ôl sganio densitometrig o ffilmiau autoradiograffig a normaleiddio i ERK di-ffosfforyleiddiad 1/2. Mae data'n cynrychioli modd ± SD o n=3 arbrofion a berfformiwyd ar wahanol boblogaethau celloedd. Mae seren yn cynrychioli gwerthoedd sy'n ystadegol wahanol i reolaeth gadarnhaol (astrocytes a weithredir gan LPS), a osodwyd ar 100 y cant (ANOVA un ffordd ac yna prawf post hoc Cymhariaeth Lluosog Dunnett; *p <>

Casgliadau

I grynhoi, mae ein data yn dangos bod trin astrocytes ag ITCs yn lleihau ffurfiant ROS ac yn atal rhyddhau MMP-2 a MMP-9 gan ddarparu mewnwelediadau newydd i briodweddau gwrthocsidiol a gwrthlidiol ITCs ar glial celloedd. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai ITCs fod yn asiantau maethol addawol ar gyfer datblygu ymyriadau niwro-faethiad, yn seiliedig ar ddefnyddio bwydydd iach, ar gyfer atal a thrin clefydau niwrolegol yn gyflenwol.

Cyllid Cyllid mynediad agored a ddarperir gan Università Degli Studi di Bari Aldo Moro o fewn y Cytundeb CRUI-CARE.

Cydymffurfio â safonau moesegol

Gwrthdaro buddiannau Nid yw'r awduron yn datgan unrhyw wrthdaro buddiannau.

Mynediad Agored Mae'r erthygl hon wedi'i thrwyddedu o dan Drwydded Ryngwladol Creative Commons Attribution 4.0, sy'n caniatáu defnyddio, rhannu, addasu, dosbarthu ac atgynhyrchu mewn unrhyw gyfrwng neu fformat, cyn belled â'ch bod yn rhoi credyd priodol i'r awdur gwreiddiol (s) a’r ffynhonnell, darparu dolen i’r drwydded Creative Commons, a nodi a wnaed newidiadau. Mae'r delweddau neu ddeunydd trydydd parti arall yn yr erthygl hon wedi'u cynnwys yn nhrwydded Creative Commons yr erthygl oni nodir yn wahanol mewn llinell gredyd i'r deunydd. Os nad yw deunydd wedi'i gynnwys yn nhrwydded Creative Commons yr erthygl ac nad yw rheoliadau statudol yn caniatáu'ch defnydd arfaethedig neu'n fwy na'r defnydd a ganiateir, bydd angen i chi gael caniatâd yn uniongyrchol gan ddeiliad yr hawlfraint. I weld copi o'r drwydded hon, ewch i http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.