Rhan Dau Mae DsbAL-L yn Rhyngweithio â VDAC1 mewn Apoptosis Celloedd Tiwbaidd Cyfryngol Mitocondrion Ac Yn Cyfrannu At Gynnydd Clefyd Acíwt yr Arennau

Canlyniadau

1. Arweiniodd anaf isgemig i fynegiant DsbA-L mewn celloedd BUMPT ac arennau llygod a chleifion

Er mwyn ymchwilio i weld a oedd anaf isgemig wedi achosi mynegiant DsbA-L, gwnaethom ddisbyddu celloedd BUMPT o ATP am 2 h, ac yna caniatáu iddynt wella am gyfanswm cyfnod o 4 h. Roedd canlyniadau RT-qPCR ac imiwnoblotting yn dangos bod mynegiant DsbA-L wedi'i ysgogi yn I/R 2-0, wedi cyrraedd uchafbwynt yn I/R 2-2, ac yna'n gostwng yn raddol i lefelau a welwyd yn I/R 2-0 (Ffigur 1a, e ac i). Cadarnhaodd staenio imiwnedd fflworoleuedd DsbA-L y canfyddiadau hyn ymhellach a nododd fod DsbA-L yn cael ei fynegi'n bennaf yn cytoplasm celloedd BUMPT (Ffigur 1 m ac n). Fe wnaethom ganfod ymhellach fynegiant DsbA-L mewn llygod C57BL/6 a gafodd eu trin ag isgemia (28 munud) ac anaf atlifiad (24 h a 48 h). Roedd canlyniadau RT-PCR ac imiwnoblotting yn nodi bod mynegiant DsbA-L wedi'i ysgogi yng nghortecs a medwla allanol aren y llygod ar ôl 24 h o atlifiad a chyrhaeddodd uchafbwynt 48 h ar ôl atlifiad (Ffigur 1 b, c, f, g , j, a k). Cadarnhawyd y canfyddiadau hyn ymhellach gan staenio imiwn-histocemegol DsbAL (Ffigur 1 o a p). Yn olaf, gwnaethom ymchwilio i weld a oedd lefelau mynegiant DsbA-L wedi'u hysgogi mewn cleifion ag AKI a achosir gan isgemia. Dangosodd y canlyniadau hyn fod lefelau mRNA DsbA-L a phrotein wedi cynyddu'n sylweddol mewn cleifion ag AKI a achosir gan isgemia o'u cymharu â chleifion MCD (Ffigur 1. d, h, ac l). Dilyswyd y canlyniadau hyn ymhellach gan staeniad immunofluorescence o DsbA-L (Ffigur 1. q a r).

Ffigur 1. Cafodd DsbA-L ei ysgogi gan I/R mewn celloedd BUMPT ac arennau llygod a chleifion. Cafodd y model I/R mewn celloedd BUMPT ei ysgogi gan 10 mM antimycin A ac ionoffor calsiwm 1.5 mM am 2 awr a'i adfer am 0, 2, a 4 h. Ysgogwyd model llygod I/R gan isgemia arennol dwyochrog am 28 munud ac atlifiad am 24 a 48 h. Casglwyd samplau biopsi arennol oddi wrth gleifion AKI a achosir gan I/R a chleifion Clefyd Newid Lleiaf (MCD). (ad) RT-qPCR canfod mynegiant DsbA-L mewn celloedd BUMPT, meinwe cortigol arennau llygod a chleifion allan o fedwla ac arennau gyda neu heb gyflwr I/R. (e- h) Dadansoddiad imiwnoblot o DsbA-L a b-tiwbwlin mewn celloedd BUMPT o dan fodel I/R mewn celloedd BUMPT, meinwe cortigol, cleifion y tu allan i'r medwla a'r arennau. (i- l) Dadansoddiad densitometreg o fynegiant protein DsbA-L a b-tiwbwlin. (m, o, a q) Immunofluorescence a staenio imiwn-histocemegol o DsbA-L mewn celloedd BUMPT ac arennau llygod a chleifion â chyflwr I/R neu hebddo, yn y drefn honno. (n, t, ac r) Dadansoddiad meintiol o staenio DsbA-L. Chwyddiad gwreiddiol x 400. Bar Craith: 10µM mewn m100µM mewn o a q. Cafodd pob arbrawf (e- h, m, o, a q) ei ailadrodd 6 gwaith yn annibynnol gyda chanlyniadau tebyg. Defnyddiwyd profion t Myfyrwyr dau gynffon i gymharu dau grŵp. (a- d, i- l, n, p, ac r). # td<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group.

Cliciwch yma i wybod manteision Cistanche

2. Cafodd anaf arennol a achosir gan IR, apoptosis celloedd tiwbaidd, a difrod mitocondriaidd eu gwanhau mewn llygod PT-DsbA-LKO

Cafodd sbwriel llygod PT-DsbA-L-WT a PT-DsbA-L-KO eu trin gyda neu heb isgemia (28 mun) ac anaf atlifiad (24 h a 48 h). Yn dilyn y driniaeth hon, cawsom samplau gwaed a samplau o feinweoedd yr arennau i'w harchwilio ymhellach. Yn swyddogaethol, nodweddwyd dirywiad swyddogaeth arennol a achosir gan I/R gan lefelau cynyddol o nitrogen wrea gwaed (BUN) a creatinin yn y llygod PT-DsbA-L-WT; gwanhawyd yr effaith hon yn sylweddol yn y llygod PT-DsbA-L-KO (Ffigur 2a a b). Roedd dadansoddiadau Histoleg a TUNEL hefyd yn gwirio bod difrod meinwe nodedig a achosir gan I/R ac apoptosis yn y llygod PT-DsbA-L-WT, er bod hyn wedi'i wella yn y llygod PT-DsbA-L-KO (Ffigur 2c, d, f, ac g). Yn ddiddorol, dangosodd dadansoddiadau microsgopeg electron (EM) fod llygod PT-DsbA-L-KO yn dangos gwanhad amlwg o'r difrod mitocondriaidd a achosir gan I/R (Ffigur 2 e ac h). Cadarnhaodd Immunoblotting ymhellach fod llygod PT-DsbA-LKO hefyd wedi mynegi lefelau is o caspase holltedig-3, cyfraddau cronni Bax yn is yn y mitocondria, a lefelau is o ryddhau cytochrome c (Cyt-c) i'r cytosol (Ffigur 2 I- o). Dangosodd canlyniadau dadansoddiad RT-qPCR fod PT-DsbA-L-KO wedi gwrthdroi'r gostyngiad o NRF1 a PCG{-1a a achoswyd gan yr I/R(Ffigur 2 p a q), a gadarnhawyd ymhellach gan y dadansoddiad imiwnoblotting ( Ffigwr 2 r- t). Dangosodd y data hyn fod DsbA-L yn chwarae rhan ganolog yn AKI a ysgogwyd gan I/R.

Ffigur 2. Gwanhau anaf arennol a achosir gan IR, apoptosis celloedd tiwbaidd, difrod mitocondrion, a mynegiant Bax, Cytc, a caspase3 hollt mewn llygod PT-DsbA-L-KO. Cafodd rhydwelïau arennol dwyochrog llygod sbwriel PT-DsbA-L-KO a PT-DsbA-L-WT eu clampio am 28 munud ac yna eu rhyddhau am 48 h i sefydlu model IR. (a) BUN (b) creatinin serwm (c) Hematocsilin ac eosin staenio. (d) Adrannau cynrychioliadol o gelloedd TUNEL-positif. (e) Canfod morffoleg mitocondrion gan ficrosgop electron. (f) Sgôr difrod tiwbaidd. (g) Nifer y celloedd TUNEL-positif. (h) Sgôr anafiadau mitocondria. (ff) Dadansoddiad imiwnoblot o fynegiant caspase3 holltedig a DsbA-L, a mynegiant BAX a Cyt-c mewn ffracsiynau mitocondriaidd a sytosolig. defnyddiwyd b-tubulin a GAPDH fel lysate cyfan neu reolaeth llwytho cytosolig, yn y drefn honno. Defnyddiwyd COX IV fel rheolydd llwytho mitocondria. (j- o) Dadansoddiad o'r ddelwedd graddlwyd rhyngddynt. (ll a q) RT-qPCR canfod mynegiant NRF1 a PCG-1a. (r) Dadansoddiad immunoblot o fynegiad NRF1 a PCG-1a. (s ac t) Dadansoddiad o'r ddelwedd graddlwyd rhyngddynt. Chwyddiad gwreiddiol x 400 neu x6000. Bar Craith: 100µM mewn c&d 20µM mewn e. Ailadroddwyd pob arbrawf (ce, I, ac r) 6 gwaith yn annibynnol gyda chanlyniadau tebyg. Defnyddiwyd ANOVA un ffordd ar gyfer y cymariaethau grŵp lluosog. (a, b, f- h, jo, pq&s- t). # td<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group. # P<0.05 versus sham group. * P<0.05 versus PT-DsbA-L-WT with IR group.

Cistanche tubulosa

3. Apoptosis a achosir gan I/R wedi'i gyfryngu gan DsbA-L mewn celloedd BUMPT

Er mwyn ymchwilio ymhellach i weld a yw DsbA-L yn cyfryngu apoptosis mewn celloedd BUMPT a achosir gan I/R, fe wnaethom drawsnewid celloedd BUMPT â siRNA DsbA-L ac yna disbyddu'r celloedd hyn o ATP am 2 h; yna caniatawyd i'r celloedd ymadfer am 2 h. Canfu dadansoddiadau FCM fod siRNA DsbA-L wedi gwanhau apoptosis a achosir gan I/R yn sylweddol mewn celloedd BUMPT (Ffigur 3a). Cadarnhaodd dadansoddiadau imiwnoblotio ymhellach fod siRNA DsbA-L wedi atal y cynnydd a achoswyd gan I/R mewn mynegiant caspase -3 hollt, y croniad cynyddol o Bax yn y mitocondria, a rhyddhau mwy o Cyt-c i'r cytosol (Ffigur 3 b- h). Dangosodd canlyniadau dadansoddiad RT-qPCR fod I/R yn atal mynegiant NRF1 a PCG-1a, a gafodd ei wrthdroi gan siRNA DsbA-L (Ffigur 3 i a j). Roedd y canlyniadau imiwnoblotting yn gyson â chanfyddiadau RT-qPCR (Ffigur 3 km). Mewn cyferbyniad, fe wnaeth y plasmid DsbA-L wella apoptosis a achosir gan I/R mewn celloedd BUMPT, cynyddu mynegiant caspase hollt-3, cynyddu croniad Bax, a chynyddu rhyddhau Cyt-c i'r cytosol (Ffigur 3 o- u). Dangosodd canlyniadau dadansoddiad RT-qPCR fod I/R yn atal mynegiant NRF1 a PCG-1a, a gafodd ei wella gan y plasmid DsbA-L (Ffigur 3 v ac w). Cadarnhaodd y canlyniadau imiwnoblotting ymhellach ganfyddiadau RT-qPCR (Ffigur 3 x- z). Cadarnhaodd y data hyn ymhellach fod DsbA-L wedi cyfryngu'r broses o apoptosis yn ogystal â chamweithrediad mitocondriaidd yn ystod anaf isgemig.

Ffigur 3. Cyfryngodd DsbA-L y mynegiant a achoswyd gan IR o hollt caspase3, BAX, a Cyt-c mewn celloedd BUMPT. Trawsnewidiwyd plasmid a siRNA DsbA-L i gelloedd BUMPT ac yna eu hamlygu i ddisbyddiad ATP am 2 h ac adferiad am 2 awr. (a&n) Dadansoddiad cytometreg llif o apoptosis celloedd BUMPT. (b&o) Dadansoddodd yr imiwnoblotiau fynegiant caspase3 holltedig a DsbA-L, a mynegiant BAX a Cyt-c mewn ffracsiynau mitocondriaidd a sytosolig. defnyddiwyd b-tubulin a GAPDH fel lysate cyfan neu reolaeth llwytho cytosolig, yn y drefn honno. Defnyddiwyd COX IV fel rheolydd llwytho mitocondria. (c- h, a q- u) Dadansoddiad o'r ddelwedd graddlwyd rhyngddynt. (i, j a v, w) Mae RT-qPCR yn canfod mynegiant NRF1 a PCG-1a. (ng ac x) Dadansoddiad immunoblot o fynegiant NRF1 a PCG-1a. (l, m ac y,z) Dadansoddiad o'r ddelwedd graddlwyd rhyngddynt. Cafodd pob arbrawf (a, b, k, n, o, ac x) ei ailadrodd 6 gwaith yn annibynnol gyda chanlyniadau tebyg. Defnyddiwyd ANOVA un ffordd ar gyfer y cymariaethau grŵp lluosog. (c- j,c- m, p- w & y, z). # td<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group. # P<0.05 versus scramble with the saline group. * P<0.05 versus scramble with IR group.

Atodiad Cistanche

4. Roedd DsbA-L yn rhyngweithio â VDAC1 mewn celloedd BUMPT a oedd wedi bod yn destun disbyddiad ATP yn ogystal ag yn arennau llygod a chleifion ag AKI

Roedd canlyniadau blaenorol yn awgrymu bod sianel anion sy'n ddibynnol ar foltedd-1 (VDAC1), protein pwysig o'r bilen mitocondriaidd allanol, yn ymwneud ag apoptosis celloedd36 Nododd ein hastudiaeth ddiweddar fod DsbA-L hefyd yn cael ei fynegi yn y mitocondria. Felly, gwnaethom ragdybio bod DsbAL-L yn rhyngweithio â VDAC1 i reoleiddio dilyniant AKI. Dangosodd canlyniadau imiwnorhydedd (IP) fod y gwrthgorff gwrth-VDAC1 wedi tynnu proteinau VDAC1 a DsbA-L i lawr, tra bod gwrth-DsbA-L yn dyddodi DsbA-L a VDAC1 mewn lysadau rheoli cyfan a grwpiau I/R o gelloedd BUMPT, a arennau llygod ac arennau cleifion (Ffigur 4a). Ymhellach, defnyddiwyd y lysates mitochondrial o gelloedd BUMPT arennau llygod, ac arennau cleifion hefyd ar gyfer cyd-IP o DsbA-L a VDAC1; roedd y canfyddiadau'n gyson â'r rheini ar gyfer y lysate cyfan (Ffigur 4b). Mae strwythur DsbA-L yn cynnwys parth rhwymo niwcleotid/parth ATPase (asidau amino 1-51), parth amino-terminal (NTD), rhanbarth helical ar gyfer pylu (asidau amino 56-178), a parth terfynell carbocsyl (CTD; asidau amino 185-216) (Ffigur 4c). Yn seiliedig ar strwythur VDAC1, roedd rhagfynegiad meddalwedd yn dangos y gallai parth N-terminal (asidau amino 1 i 25) o VDAC1 ryngweithio â DsbA-L (Ffigur 4d). Er mwyn egluro pa barthau o VDAC1 sy'n gallu rhyngweithio â DsbA-L, gwnaethom adeiladu tri plasmid ar gyfer HA-VDAC1 yn cynnwys asidau amino 1- 75, asidau amino 76-1098, a'r genyn llawn (Ffig 4e). Gwnaeth y gwrthgorff gwrth-HA waddodi DsbA-L mewn grwpiau yn cynnwys VDAC1 gydag asidau amino 1-75 a'r genyn llawn, ond nid gyda VDAC1 a'r plasmid yn cynnwys asidau amino 76-1098. Roedd hyn yn dangos bod DsbA-L yn rhyngweithio â'r rhanbarth o VDAC1 sy'n cynnwys asidau amino 1-75 (Ffigur 4f). Er mwyn ymchwilio ymhellach i ba ranbarthau penodol o VDAC1 a oedd yn rhyngweithio â DsbA-L, gwnaethom drawsgludo celloedd BUMPT gyda'r HA-Tag o plasmidau VDAC1 gyda D9-13, 22-27, D39-45, {{59} }}, D9-13, 22-27, 39-45, 55-57. Dangosodd canlyniadau IP fod y gwrthgorff gwrth-HA ond yn dyddodi DsbA-L gyda'r plasmidau D39-45 a 55-57, ac nid y plasmidau D9-13 a 22-27 (gweler Ffigur 4g ). Dangosodd hyn ymhellach fod DsbA-L yn rhyngweithio ag asidau amino 9-13 a 22-27 o VDAC1. Mae Ffigur 4g yn cynnwys model sy'n dangos sut mae DsbAL-L yn rhyngweithio ag asidau amino 9-13 a 22-27 o VDAC1 (Ffigur 4g). Gyda'i gilydd, mae'r data hyn yn dangos bod DsbA-L yn rhyngweithio ag asidau amino 9-13 a 22-27 o VDAC1.

Ffigur 4. Rhyngweithio rhwng DsbA-L a VDAC1 mewn celloedd BUMPT gyda disbyddiad ATP neu hebddo ac arennau llygod I/R arennol a chleifion. (a&b n=3 fesul grŵp) Echdynnwyd y lysate cyfan neu mitocondriaidd ar gyfer cydimiwnedd cilyddol DsbA-L a VDAC1 mewn celloedd BUMPT a gafodd eu trin â disbyddiad ac adferiad ATP ac arennau llygod a chleifion AKI a achosir gan I/R. (cn=3 fesul grŵp) Parthau swyddogaethol a strwythur DsbA-L. (dn=3 fesul grŵp) Model rhagfynegi rhyngweithiad DsbA-L a VDAC1. (e- gn=3 fesul grŵp) Dadansoddwyd imiwnoprecipitadau gwrth-HA ar gyfer HA ac yna eu canfod ar gyfer DsbA-L gan ddefnyddio imiwnblotio.

Herba Cistanche

5. Cydleoli DsbA-L neu VDAC1 yn y mitocondria, a chydleoli DsbA-L a VDAC1 mewn (i) celloedd BUMPT wedi'u disbyddu ATP a (ii) arennau llygod a chleifion

I gadarnhau ein canlyniadau IP, cynhaliom assay cyd-leoli. Dangosodd microsgopeg confocal imiwnofflworoleuedd fod DsbA-L neu VDAC1 yn lleoledig i mitocondria celloedd BUMPT ac arennau llygod ffug a chleifion MCD a bod yr effaith hon wedi'i gwella ymhellach mewn celloedd BUMPT a oedd wedi'u disbyddu o ATP, ac yn arennau llygod a chleifion ag AKI (Ffigur 5 a, b, d, e, g, ac h). Yn ddiddorol, cadarnhaodd microsgopeg confocal immunofluorescence fod y signal cydleoli o DsbA-L a VDAC1 mewn celloedd BUMPT, ac arennau llygod ffug a chleifion MCD, yn gymharol wan. Fodd bynnag, cynyddwyd y signal cydleoli'n sylweddol mewn celloedd BUMPT a oedd wedi'u disbyddu o ATP, ac yn arennau llygod a chleifion ag AKI (Ffigur 5 c, f, ac i). Gyda'i gilydd, mae'r data hyn yn darparu tystiolaeth bellach i gefnogi rhyngweithiad DsbA-L a VDAC1 yn y mitocondria.

Ffigur 5. Cydleoli DsbA-L a VDAC1 ym mitocondria celloedd BUMPT ac arennau llygod AKI a chleifion. (a, d&g n=4 fesul grŵp) Lleoli DsbA-L yn y mitocondria mewn celloedd BUMPT gyda neu heb ddisbyddiad ac adferiad ATP, model arennau llygod yn y grwpiau ffug ac I/R yn ogystal â MCD a I/R cleifion. (b, e&h n{5}} fesul grŵp) Lleoli VDAC1 yn y mitocondria mewn celloedd BUMPT gyda neu heb ATP disbyddu ac adferiad, model arennau llygod yn y grwpiau ffug ac I/R yn ogystal â MCD ac I/ R. (c, f&i n=4 fesul grŵp) Cydleoli DsbA-L a VDAC1 yn y mitocondria mewn celloedd BUMPT gyda neu heb ddisbyddiad ATP ac adferiad, model arennau llygod yn y grwpiau ffug a I/R yn ogystal â chleifion MCD ac I/R.

6. Apoptosis celloedd BUMPT wedi'i gyfryngu gan VDAC a achosir gan isgemia-atlifiad

Nesaf, gwnaethom geisio pennu a oedd VDAC1 yn rhan o'r broses o apoptosis a achosir gan I / R mewn celloedd BUMPT. Roedd canlyniadau imiwnoblotting yn dangos bod mynegiant VDAC1 wedi'i ysgogi yn I/R 2-0, ac wedi cyrraedd uchafbwynt yn I/R 2-2, cyn hynny'n gostwng yn raddol i'r lefelau a welwyd yn I/R 2-0 ( Ffigur 6 a a b). Dangosodd dadansoddiad FCM fod apoptosis wedi'i achosi gan I/R mewn celloedd BUMPT; gwanhawyd yr effaith hon trwy gymhwyso VDAC1 siRNA (Ffigur 6c). Roedd canlyniadau imiwnoblotting yn cadarnhau ymhellach bod siRNA VDAC1 wedi lleddfu'n sylweddol y cynnydd a achosir gan I/R mewn mynegiant caspase hollt, y croniad cynyddol o Bax yn y mitocondria, a'r cynnydd yn rhyddhau Cyt-c i'r cytosol (Ffigur 6d- k). Mewn cyferbyniad, cafodd y newidiadau uchod eu gwella gan orfynegiant y plasmid VDAC1 (Ffigur 6 l- s). Gyda'i gilydd, dangosodd y data hwn fod VDAC1-wedi cyfryngu apoptosis a achosir gan I/R mewn celloedd BUMPT.

Ffigur 6. Cyfryngwyd mynegiant a achosir gan IR o hollt caspase3, BAX, a Cyt-c mewn celloedd BUMPT gan VDAC1. Trosglwyddwyd siRNA neu plasmid VDAC1 i gelloedd BUMPT ac yna datgelwyd i ddisbyddiad ATP am 2 h ac adferiad am 2 awr. (a) Dadansoddiad immunoblot o VDAC1 a b-tiwbwlin mewn celloedd BUMPT. (b) Dadansoddiad o'r ddelwedd graddlwyd rhyngddynt (c) Dadansoddiad cytometreg llif o apoptosis celloedd BUMPT. (ch) Dadansoddodd yr imiwnoblotiau fynegiant caspase3 hollti, VDAC1, a DsbA-L, a mynegiant BAX a Cyt-c mewn ffracsiynau mitocondriaidd a sytosolig. defnyddiwyd b-tubulin a GAPDH fel lysate cyfan neu reolaeth llwytho cytosolig, yn y drefn honno. Defnyddiwyd COX IV fel rheolydd llwytho mitocondria. (k) Dadansoddiad o'r ddelwedd graddlwyd rhyngddynt. (i) Dadansoddiad cytometreg llif o apoptosis celloedd BUMPT. (i) Mae'r imiwnoblotiau'n dadansoddi mynegiant caspase3 hollti, VDAC1, a DsbAL, a mynegiant BAX a Cyt-c mewn ffracsiynau mitocondriaidd a sytosolig. defnyddiwyd b-tubulin a GAPDH fel lysate cyfan neu reolaeth llwytho cytosolig, yn y drefn honno. Defnyddiwyd COX IV fel rheolydd llwytho mitocondria. (ns) Dadansoddiad o'r ddelwedd graddlwyd rhyngddynt. Ailadroddwyd pob arbrawf (a,c,d,l & m) 6 gwaith yn annibynnol gyda chanlyniadau tebyg. Defnyddiwyd profion t Myfyrwyr dau gynffon i gymharu dau grŵp. (b), Defnyddiwyd ANOVA unffordd ar gyfer y cymariaethau grŵp lluosog. (e- k ac n- s). # td<0.05: versus saline group, sham group, or MCD group.# P<0.05 versus scramble with the saline group. * P<0.05 versus scramble with IR group.

Dyfyniad Cistanche

Xiaozhou Li,a,b,1 Jian Pan,a,b,1 Huiling Li,c Guangdi Li, g Bohao Liu,a,b Xianming Tang,a,b Xiangfeng Liu,f Zhibiao He,a,b Zhenyu Peng,a ,b Hongliang Zhang,a,b Luxiang Wang,a,b Yijian Li,d Xudong Xiang, a, b Xiangping Chai, a, b Yunchang Yuan, e Peilin Zheng,h a Dongshan Zhang a,b *

Adran Meddygaeth Frys, Gweriniaeth Pobl Tsieina

b Sefydliad Meddygaeth Frys a Chlefydau Anodd, Ail Ysbyty Xiangya, Prifysgol Canolbarth y De, Changsha, Hunan 410011, Gweriniaeth Pobl Tsieina

c Adran Offthalmoleg, Gweriniaeth Pobl Tsieina

d Adran Llawfeddygaeth Wrinol, Gweriniaeth Pobl Tsieina

e Adran Llawfeddygaeth y Frest, Gweriniaeth Pobl Tsieina

f Adran Llawfeddygaeth Gyffredinol, Ail Ysbyty Xiangya, Gweriniaeth Pobl Tsieina

g Adran Iechyd y Cyhoedd, Prifysgol De Canolog, Changsha, Hunan, Gweriniaeth Pobl Tsieina

h Adran Endocrinoleg, Ysbyty Pobl Shenzhen, Ail Goleg Meddygol Clinigol Prifysgol Jinan, Ysbyty Cysylltiedig Cyntaf Prifysgol Gwyddoniaeth a Thechnoleg De, Shenzhen, Gweriniaeth Pobl Tsieina

1 Cyfrannodd Xiaozhou Li a Jian Pan yn gyfartal at yr astudiaeth hon