Mae AKT wedi'i Weithredu â Rhag-gyflyru yn Rheoli Goddefgarwch Niwronaidd i Isgemia Trwy'r Llwybr MDM2-p53Ⅱ

3. Trafodaeth

Mae ein canlyniadau'n datgelu bod actifadu llwybr signalau PI3K/AKT wedi'i gyfryngu gan IPC yn sbarduno TG niwronau trwy reoli'r cymhleth MDM2-p53 mewn niwronau cortigol cynradd. Yn gyntaf, gwnaethom gadarnhau effeithlonrwydd y rhagamod o ran niwroamddiffyn [33,39-41] gan ddefnyddio model arbrofol IPC dilys.

Cliciwch i cistanche tubulosa sgîl-effeithiau ar gyfer Neuron

Canfuom fod IPC arbrofol a achosir gan amddifadedd ocsigen a glwcos (OGD) byr (20 munud) wedi'i ddilyn gan 2 awr o ad-ocsigeniad wedi arwain at niwro-amddiffyniad, fel y dangosir gan atal apoptosis niwronaidd ac actifadu caspase-3 a achosir gan weithrediad hirfaith. OGD (90 munud) wedi'i ddilyn gan 4 awr o ailocsigeniad (OGD/R). Rydym yn dangos bod IPC yn lleihau actifadu caspase-3 mewn niwronau cortigol, sy'n cydberthyn â llai o apoptosis ar ôl sarhad isgemig dilynol a mwy difrifol.

Mae'r cydbwysedd rhwng signalau pro- ac antiapoptotig yn sylfaenol i sicrhau goroesiad niwronaidd ar ôl isgemia [3,33,38,42-44]. Er bod perthnasedd digwyddiadau o'r fath wedi'i ddangos mewn modelau strôc hemorrhagic ac isgemig in vivo [43,45], nid yw'r mecanweithiau sy'n rheoleiddio'r llwybrau signalau hyn wedi'u deall yn llawn eto yng nghyd-destun goddefgarwch isgemig. Mae rôl AKT antiapoptotig a'i lwybrau cysylltiedig wedi'u hastudio'n helaeth mewn celloedd canser [46,47] a meinwe'r ymennydd [38,48]; fodd bynnag, hyd yn hyn, mae rôl y llwybr signalau AKT/MDM2- p53 mewn goddefgarwch niwronaidd wedi'i gyfryngu gan yr IPC yn erbyn anaf isgemig yn parhau i fod yn anodd dod o hyd iddo.

Yma, canfuom fod actifadu'r llwybr signalau PI3K/AKT a achosir gan IPC yn hyrwyddo ffosfforyleiddiad MDM2 yn Ser166, sy'n sbarduno ei drawsleoli niwclear a sefydlogi protein, gan atal apoptosis a achosir gan p53-drwy actifadu caspase-3 ar ôl isgemia. Mae actifadu AKT trwy ffosfforyleiddiad yn hyrwyddo goroesiad niwronaidd [24,49] a gall gyfrannu at sefydlu TG [25,50]. Mae ein canlyniadau'n dangos nad yw digonedd cymharol protein AKT wedi newid o dan ysgogiadau isgemig neu rag-gyflyru. Yn ddiddorol, canfuom fod ffosfforyleiddiad cynnar PI3K-gyfryngol o AKT yn Ser473 yn atal sefydlogi p53 a achosir gan isgemia yn y niwronau rhag-amod.

Nid oedd yr effaith oherwydd addasiadau mewn lefelau mRNA p53 [33,34,44] ond i lefelau protein p53 gostyngol oherwydd IPC cyn OGD / R. Gan mai MDM2 yw prif reoleiddiwr sefydlogi p53 a'i fod hefyd yn darged uniongyrchol AKT, mae ein canlyniadau'n nodi rôl llwybr signalau AKT/MDM2-p53 mewn goddefgarwch niwronaidd i isgemia. Mae mRNA MDM2 yn cynyddu'n gyflym ar ôl OGD [34], ond mae gweithgaredd MDM2 yn cael ei reoli'n bennaf gan addasiadau ôl-gyfieithu, yn enwedig ffosfforyleiddiad [51]. Mewn cytundeb da â hyn, canfuom unwaith y caiff ei actifadu gan ffosfforyleiddiad ar ôl IPC, AKT, yn ei dro, ffosfforyladau MDM2 ar weddillion Ser166, sydd wedi'i leoli ger y signal lleoleiddio niwclear [52], a chynhelir yr effaith hon ar ôl anaf OGD / R.

Mae ein canlyniadau'n dangos bod ffosfforyleiddiad MDM2 yn Ser166 yn ddigonol i gael yr effaith niwro-amddiffynnol wedi'i chyfryngu gan yr IPC trwy ansefydlogi p53. Felly, yma, fe wnaethom nodi gweithrediad amser-ddibynnol ar lwybr AKT / MDM2-p53 ar ôl anaf isgemig ac, yn wir, rydym yn dangos bod AKT a ysgogwyd gan IPC wedi sbarduno trawsleoli niwclear MDM2 ectopig, yn ogystal â sefydlogi protein mewndarddol.

Ar ben hynny, mae AKT yn parhau i fod yn weithredol o fewn y cnewyllyn, lle gallai PI3K hefyd fudo mewn ymateb i straen ocsideiddiol ac yna cyfrif am ffosfforyleiddiad AKT [53]. Mae atal ffosfforyleiddiad PI3K-gyfryngol o AKT neu AKT knockdown yn hyrwyddo cadw protein MDM2 yn y cytoplasm, ac mae'n atal ffosfforyleiddiad Ser166 o MDM2, yn ogystal â niwro-amddiffyniad cyfryngol IPC yn erbyn apoptosis niwronaidd a achosir gan isgemia. I'r gwrthwyneb, gwnaethom ddangos bod AKT gweithredol yn rhwymo i brotein MDM2 niwclear.

O ganlyniad, mae AKT gweithredol yn hyrwyddo ffosfforyleiddiadau MDM2 a'i sefydlogi niwclear, sy'n cyfrannu at niwroamddiffyniad wedi'i gyfryngu gan yr IPC. Mae ein canlyniadau'n datgelu bod niwroamddiffyniad a hyrwyddir gan IPC yn dibynnu ar actifadu AKT wedi'i gyfryngu gan PI3K, a oedd yn ffosfforyleiddio MDM2 yn Ser166, gan hyrwyddo cronni niwclear MDM2 ar ôl sarhad isgemig.

Yn unol â hynny, diddymodd ataliad PI3K/AKT gan wortmannin neu ddisbyddiad AKT gan siRNA niwroamddiffyniad a hyrwyddir gan IPC, gan arwain at sefydlogi p53 a'r apoptosis niwronaidd dilynol ar ôl isgemia. Felly, mae ein canlyniadau'n helpu i egluro rôl hanfodol actifadu llwybr AKT-MDM2 sy'n ddibynnol ar IPC mewn goroesiad niwronau yn erbyn anaf isgemig.

Mae'r protein p53 yn ymwneud â rheoli prognosis marwolaeth / goroesi niwronaidd mewn cleifion strôc [34,42,54], yn ogystal ag mewn cleifion TIA [3]. Mae sefydlogi P53 yn peryglu niwroamddiffyniad rhag-gyfryngol i anaf isgemia / atlif [33]. Bydd y rhyngweithio MDM2-p53, felly, yn hanfodol ar gyfer goroesiad niwronaidd yn y cyd-destun hwn [34] ac ar gyfer goddefgarwch wedi'i gyfryngu gan IPC yn erbyn anaf isgemig [33].

Thus, the control of such interaction will also have an impact on stroke outcomes. In this context, we recently found that a single-nucleotide polymorphism (SNP) 309T>Mae G yn yr hyrwyddwr MDM2 yn pennu mynegiant MDM2 ac, yn ei dro, yn modiwleiddio adferiad cleifion sy'n dioddef o strôc [34].

Yn ogystal, gwelsom fod SNP genyn Tp53 (rs1042522) yn modiwleiddio sefydlogi p53 mitocondriaidd a goddefgarwch niwronaidd i isgemia wrth ragweld adferiad swyddogaethol cleifion sy'n dioddef TIA cyn strôc [3]. Felly, bydd rheoli llwybrau apoptotig p53 yn hanfodol i sicrhau effaith niwro-amddiffynnol IPC.

Mae'r canlyniadau hyn yn darparu dull trosiadol i'r astudiaeth y gellid ei weithredu yn y dyfodol er budd cleifion, ac maent yn gosod llwybr signalau PI3K/AKT-MDM2-p53 fel targed hanfodol ar gyfer y strategaethau TG a hyrwyddir gan rag-gyflyru mewn strôc isgemig. I grynhoi, rydym yn dangos bod llwybr signalau PI3K/AKT a ychwanegwyd gan yr IPC yn hyrwyddo ffosfforyleiddiad MDM2 yn Ser166, gan arwain at drawsleoli niwclear MDM2 a'i sefydlogi, sy'n sbarduno TG niwronau trwy hyrwyddo ansefydlogi p53 ac anactifadu dilynol marwolaeth apoptotig a achosir ar ôl sarhad isgemig.

Mae ein canlyniadau'n tynnu sylw at fanteision posibl actifadu AKT yn gynnar mewn goddefgarwch niwronaidd wedi'i gyfryngu gan yr IPC, sy'n rheoleiddio llwybr apoptotig MDM2-p53 o dan anaf isgemig. Mae'r canfyddiadau hyn yn tynnu sylw at gyfle i ddeall y mecanweithiau sy'n rheoleiddio llwybr signalau niwronaidd AKT-MDM2-p53 i ddatblygu strategaethau niwro-amddiffynnol newydd ar gyfer anhwylderau sy'n gysylltiedig â TG.

4. Defnyddiau a Dulliau

4.1. Diwylliannau Sylfaenol Niwronau Cortigol

Paratowyd diwylliannau niwronaidd o gorticau llygoden embryo C57Bl/6J neu p53-null (Tp53 −/ -, B6.129S2, Labordy Jackson) (14.5E). Cafodd niwronau eu hadu ar 1.8 × 105 o gelloedd/cm2 mewn cyfrwng Neurobasal wedi'i ategu â 2 y cant B27 a 2 mM glutamine (Invitrogen, Madrid, Sbaen) a'u deor ar 37 ◦C mewn atmosffer llaith o 5 y cant CO2-yn cynnwys [ 55].

4.2. Modelau Amddifadedd Glwcos Ocsigen a Rhag-gyflyru

Ar ôl 9–1{10}} diwrnod in vitro (DIV), roedd niwronau yn agored i amddifadedd ocsigen a glwcos (OGD) drwy ddeor celloedd ar 37 ◦C am 90 munud mewn deorydd offer gyda chlo aer a nwy yn barhaus gyda 95 y cant N2/5 y cant CO2. Roedd y cyfrwng deori (hydoddiant Hanks wedi'i glustogi heb glwcos: 5.26 mM KCl, 0.43 mM KH2PO4, 132.4 mM NaCl, 4.09 mM NaHCO3, 0.33 mM Na2HPO4, 2 mM CaCl2, a 20 mM HEPES), pH 5% wedi'i gassed â 2 49% yn flaenorol. /5 y cant CO2 am 30 munud. O dan yr amodau hyn, roedd crynodiadau ocsigen yn y cyfrwng deori yn 6.7 ± 0.5 µM fel y'i mesurwyd gydag electrod ocsigen math Clark [56,57].

Pan nodwyd hynny, roedd y niwronau'n agored i rag-gyflyru isgemig (IPC; OGD byr am 20 munud ac yna 2 h o ail-ocsigeniad) cyn isgemia hirfaith dilynol (OGD, 90 mun) a 4 h o ail-ocsigeniad (IPC ynghyd ag OGD / R) (Ffigur S1B) ). Ar yr un pryd, cafodd niwronau eu deor mewn normocsia (Nx) ar 37 ◦C mewn awyrgylch llaith o 95 y cant aer / 5 y cant CO2 neu rag-gyflyru isgemig (IPC). Pan nodwyd, cafodd niwronau eu deor 30 munud cyn IPC mewn hydoddiant Hanks byffer (pH 7.4), yn absenoldeb neu bresenoldeb wortmannin (100 nmol / L), fel y disgrifiwyd yn flaenorol [19].

4.3. Trawsnewidiadau Cell

Trawsnewidiwyd celloedd niwronau (8 DIV) neu HEK-293T â fector plasmid yn mynegi Mdm2 wedi'i dagio gan YFP gan hyrwyddwr dynol MDM2. MDM2p/Mdm2-YFP oedd anrheg gan Uri Alon a Galit Lahav (Addgene plasmid #53962, Watertown, MA, UDA) [58]. Pan oedd angen, defnyddiwyd fector gwag (pYFP) fel rheolydd o dan yr un amodau. Perfformiwyd trawsffurfiad plasmid gan ddefnyddio Lipofectamine® LTX (Invitrogen, Carlsbad, MA, UDA), yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Trawsnewidiwyd celloedd â 1.5 µg/µL o'r fectorau plasmid a'u defnyddio ar ôl 24 h.

Cyflawnwyd dymchweliad AKT mewn 6 niwron DIV trwy drawslifiad â riboniwcleotidau llinyn dwbl (siRNA). Roedd y dilyniannau targedig fel a ganlyn: 50–CUCAAGUACUCAUUCCAGAtt–30, antisense: 5 0–UCUGGAAUGAGUACUUGAGgg–30 (llygoden, s62216, yn cyfateb i niwcleotidau 1006–1025, rhif derbyn GenBank NM_009652) [59}}. Fel rheolydd negyddol, fe wnaethom ddefnyddio Silencer™ Select Negative Control No. 1 siRNA (siControl). Prynwyd pob siRNA gan Ambion®, Invitrogen®, a Thermo Fischer Scientific (Offenbach, yr Almaen). Yn ôl faint o brotein sy'n cael ei ddymchwel, amcangyfrifwyd bod effeithlonrwydd transfection siRNA yn 70-80 y cant ar 3 diwrnod ar ôl y trosglwyddiad. Ar gyfer arbrofion distewi, cafodd niwronau eu trawsnewid â siRNA (10 nM) gan ddefnyddio Lipofectamine® RNAiMAX (Invitrogen), gan ddilyn cyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Deorwyd niwronau ymhellach mewn cyfrwng Neurobasal am 72 h cyn eu defnyddio.

4.4. Canfod Llif Cytometrig o Farwolaeth Cell Apoptotig

Cafodd niwronau eu gwahanu'n ofalus oddi wrth y platiau gan ddefnyddio halen tetrasodium EDTA 1 mM mewn PBS (pH 7.4) a'u staenio ag anecsin V/APC a 7-AAD, wedi'i berfformio'n union fel y disgrifiwyd yn flaenorol [55].

4.5. Caspase-3 Assay Gweithgarwch

Aseswyd gweithgarwch Caspase-3 mewn cell lysates [33] ac yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr gan ddefnyddio'r pecyn Assay Fluorimetric CASP3F gan SIGMA a'i ddarllen ar allyriadau ar donfedd o 405 nm. Mae'r dull yn seiliedig ar ryddhau'r moiety fflwroleuol 7-amino4-methyl coumarin (AMC). Cyfrifir y crynodiad AMC gan ddefnyddio safon AMC.

4.6. Imiwnoblotiau a Chyd-Imiwno-ddyddiad Assay

Cafodd niwronau eu gosod mewn byffer yn cynnwys 1 y cant SDS, 2 mM EDTA, 150 mM NaCl, 12.5 mM Na2HPO4, ac 1 y cant Triton X-100 (NP40: 1 y cant NP40, EDTA diK ynghyd â 5 mM, Tris pH{{13} }} mM, NaCl 135 mM, a glyserol 10 y cant) wedi'i ategu ag atalyddion ffosffatase (1 mM Na3VO4 a 50 mM NaF) ac atalyddion proteas (fflworid ffenylmethylsulfonyl 100 mM, 50 µg/mL gwrth-papain, 50 µg/mL pegin, 50 µg/mL µg/mL amastatin, 50 µg/mL leupeptin, 50 µg/mL bestatin, ac atalydd trypsin ffa soia 50 µg/mL), wedi'i storio ar rew am 30 munud a'i ferwi am 5 munud. Roedd aliwquots o echdynion lysed yn destun gel polyacrylamid SDS (MiniProtean®, Bio-Rad) a'u blotio â gwrthgyrff dros nos ar 4 ◦C. Roedd gwrthgyrff a ddefnyddiwyd yn gwrth-AKT (9272), gwrth-p(Ser473)AKT (9271), caspase gwrth-hollti-3 (Asp175, 9661) (Cell Signaling, Danvers, MA, UDA), gwrth-t53 ( 554157, BD Biowyddorau), gwrth-MDM2 (2A10, ab-16895), gwrth (Ser166) MDM2 (ab131355), gwrth-GFP (ab290; hefyd yn canfod YFP) (Abcam, Caergrawnt, DU), gwrth-LAMIN B (sc-374015, Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, yr Almaen), a antiGAPDH (Ambion, Caergrawnt, DU) dros nos am 4 ◦C. Ar ôl deoriad â marchruddygl peroxidase-gafr gwrth-cwningen IgG gwrth-gwningen (Pierce, Thermo Gwyddonol) neu gafr gwrth-lygoden IgG (Bio-Rad), deorwyd pilenni ar unwaith gyda chemiluminescence gwell SuperSignal West Dura (Pierce) am 5 munud cyn dod i gysylltiad â Kodak XAR{62}} ffilm am 1 i 5 munud a sganiwyd yr autoradiogramau. Mesurwyd dwyster bandiau gan ddefnyddio meddalwedd ImageJ 1.48v, fel y disgrifiwyd yn flaenorol [60].

Ar gyfer y assay cyd-imiwnorhydedd, roedd niwronau wedi'u gorchuddio mewn byffer oerfel iâ yn cynnwys 50 mM Tris (pH 7.5), 150 mM NaCl, 2 mM EDTA, 1 y cant NP{8}}) ​​wedi'i ategu ag atalyddion ffosffatas a ddisgrifir uchod. Ar ôl clirio malurion trwy allgyrchu, deorwyd lysadau niwronaidd (100 mg) ag 1 mg o'r gwrthgorff am 24 awr ar 4 ◦C ac yna ychwanegu 10 ml o brotein A-agarose (GE Healthcare Life Sciences) am 2 awr am 4. ◦C. Cafodd imiwnoprecipitates eu golchi'n helaeth â byffer lysis a'u datrys gan SDS-PAGE a'u imiwnoblotio â gwrthgyrff a nodwyd [61]. Dangosir y cyflenwadau protein cymharol yn Ffigur S1. Mae blotiau llawn a sganiau gel wedi'u cynnwys yn Ffigur S3.

4.7. Imiwnocytocemeg a Dadansoddi Delwedd

Tyfwyd niwronau ar orchuddion gwydr a'u gosod gyda 4 y cant (w / v, mewn PBS) paraformaldehyd am 30 munud a'u himiwneiddio â gwrth-phosphoAKT cwningen (Ser473; 9271; Cell Signaling, MA, UDA), llygoden gwrth-MDM2 (2A10, ab-16895), llygoden gwrth-MAP2 (1:500; M#1406, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, UDA) [55], llygoden gwrth-p53 (1:200; 554157, BD Pharmingen , San Diego, CA, UDA), a gwrth-GFP (1:1000; ab290; hefyd wedi'i ddilysu i ganfod YFP). Canfuwyd labelu imiwno gan ddefnyddio gwrthgyrff eilaidd gwrth-gwningen IgG-Cy3 neu gwrth-lygoden IgG-Cy2 (1:500; Jackson ImmunoResearch. Caergrawnt, DU).

Cafodd niwclei eu staenio â 40,6-diamidino-2 ffenylindole (DAPI; D9542, Sigma-Aldrich). Golchwyd llithriadau clawr, eu gosod mewn adweithydd gwrth-ffâd ysgafn SlowFade (Invitrogen) ar sleidiau gwydr, a'u harchwilio gan ddefnyddio microsgop (microsgop gwrthdro Nikon Eclipse Ti-E, (NY, UDA) â chyfarpar 40 × gwrthrychol, goleuwr ffibr rhag-ganolog Nikon Intensilight C-HGFI, a chamera digidol dyfais du-a-gwyn gyda gwefr Hamamatsu ORCAER neu ficrosgop confocal laser sganio ("Disg Troelli" Roper Scientific Olympus IX81, Tokyo, Japan) gyda thri laserau 405, 491, a 561 nm, offer gyda 40 ×, 63 ×, a 100 × PL amcan olew-trochi Apo ar gyfer delweddu cydraniad uchel a dyfais camera digidol Evolve Photometrics.

Gosodwyd pob gosodiad microsgop i gasglu delweddau fflwroleuol o dan dirlawnder ac fe'u cadwyd yn gyson ar gyfer yr holl ddelweddau a dynnwyd yn yr arbrawf. Dadansoddwyd delweddau gyda meddalwedd ImageJ 1.48v (Sefydliadau Iechyd Cenedlaethol). Dangosir canran y niwronau p(Ser473)AKT plws a p53 plws a meintioliad dwysedd fflworoleuedd protein uchaf p(Ser473)AKT a p53 yn Ffigur S2A. Mewn niwronau MDM a drosglwyddir gan GFP, cyfrifwyd dosbarthiad niwcleocytoplasmig MDM2-GFP fel cymhareb y fflworoleuedd cymedrig niwclear i fflworoleuedd cymedrig cytoplasmig MDM2 mewndarddol, wedi'i fesur mewn 24 niwron (chwe niwron fesul un). cyflwr mewn pedwar diwylliant niwronaidd gwahanol) (Ffigur S2B) [62].

Er mwyn mesur y dwysedd fflworoleuedd niwclear mwyaf posibl o staenio MDM2 mewndarddol a pSer473AKT, mesurwyd 40 niwronau (10 niwronau fesul cyflwr mewn pedwar diwylliant gwahanol) (Ffigur S2C), fel y disgrifiwyd yn flaenorol [44]. Yn y proffiliau dwyster trawsdoriadol cynrychioliadol a ddangosir yn Ffigur 5B, cafodd canran y p(Ser473)AKT ac MDM2 a nodir isod bob amod ei fesur fel fflworoleuedd cymedrig niwclear. Ym mhob achos, nodwyd niwclysau gan staenio DAPI. Dangosir y dwysedd fflworoleuedd niwclear MDM2 mwyaf mewn niwronau sy'n cael eu trin â wortmannin neu siAkt yn Ffigur S2D.

4.8. Dadansoddiad Ystadegol

Gwerthuswyd canlyniadau arbrofol gan ddadansoddiad un ffordd o amrywiant, ac yna prawf post hoc Bonferroni, a ddefnyddiwyd i gymharu gwerthoedd rhwng grwpiau lluosog. Mynegir y canlyniadau fel modd ± SEM. Defnyddiwyd prawf-t y myfyriwr i gymharu dau grŵp o werthoedd. Ym mhob achos, ystyriwyd p < 0.05 yn arwyddocaol (* p < 0.05 yn erbyn Nx; # p<0.05 versus OGD). Statistical analyses were performed using SPSS Statistics 24.0 for Macintosh (IBM).

Sut mae Cistanche yn amddiffyn niwronau?

Mae rhywfaint o dystiolaeth i awgrymu y gallai Cistanche amddiffyn niwronau trwy leihau apoptosis (marwolaeth celloedd wedi'i raglennu) a hyrwyddo goroesiad niwronau. Mae apoptosis yn broses naturiol sy'n digwydd yn y corff i gael gwared ar gelloedd difrodi neu ddiangen, ond gall fod yn niweidiol pan fydd yn digwydd yn ormodol neu'n amhriodol. Canfuwyd bod Cistanche yn atal apoptosis mewn astudiaethau labordy, a gallai'r effaith hon helpu i amddiffyn niwronau rhag difrod.

Yn ogystal, mae Cistanche yn cynnwys nifer o gyfansoddion bioactif y dangoswyd bod ganddynt effeithiau niwro-amddiffynnol. Er enghraifft, mae'n cynnwys echinacoside, y dangoswyd ei fod yn amddiffyn niwronau rhag straen ocsideiddiol a llid. Mae hefyd yn cynnwys acteoside, y canfuwyd bod ganddo briodweddau gwrthlidiol a gwrthocsidiol.

Cyfeiriadau

1. Emberson, J. ; Lees, KR; Lyden, P.; Blackwell, L. ; Albers, G. ; Bluhmki, E.; Brott, T. ; Cohen, G. ; Davies, A.S.; Donnan, G. ; et al. Effaith oedi triniaeth, oedran, a difrifoldeb strôc ar effeithiau thrombolysis mewnwythiennol gydag alteplase ar gyfer strôc isgemig acíwt: Meta-ddadansoddiad o ddata cleifion unigol o hap-dreialon. Lancet 2014, 384, 1929–1935. [CrossRef]

2. Wang, W.-W.; Chen, D.-Z.; Zhao, M.; Yang, X.-F.; Gong, D.-R. Gall pyliau o isgemia dros dro blaenorol gael effaith niwro-amddiffynnol mewn cleifion â strôc isgemig. Arch. Med. Sci. 2017, 5, 1057–1061. [CrossRef] [PubMed]

3. Ramos-Araque, ME; Rodriguez, C.; Vecino, R.; Garcia, CE; Alfonso, MDL; Barba, Llsgr.; Colàs-Campàs, L. ; Purroy, F. ; Arenillas, JF; Almeida, A.; et al. Mae'r Goddefgarwch Isgemig Niwronol yn cael ei Gyflyru gan Polymorphism Tp53 Arg72Pro. Cyfieithiad. Strôc Res. 2019, 10, 204–215. [CrossRef] [PubMed]

4. Iadecola, C. ; Anrather, J. Ymchwil strôc ar groesffordd: Gofyn i'r ymennydd am gyfarwyddiadau. Nat. Neurosci. 2011, 14, 1363–1368. [CrossRef] [PubMed]

5. Zhao, C. ; Jiang, M.; Zhang, L.; Hu, Y.; Hu, Z.; Zhang, M.; Qi, J.; Su, A. ; Lou, N.; Xian, X. ; et al. Mae gama derbynnydd sy'n cael ei ysgogi gan ymlediad peroxisome yn cymryd rhan mewn caffael goddefgarwch isgemia'r ymennydd a achosir gan rag-gyflyru isgemig trwy gludwr glial glial 1 in vivo ac in vitro. J. Neurochem. 2019, 151, 608–625. [CrossRef]

6. Rodriguez, C.; Agulla, J. ; Delgado-Esteban, M. Ailffocysu'r Ymennydd: Dulliau Newydd o Weithredu Niwroamddiffyn yn erbyn Anafiadau Isgemig. Neurochem. Res. 2021, 46, 51–63. [CrossRef] [PubMed] 7. Stenzel-Poore, AS; Stevens, SL; Xiong, Z. ; Lessov, NS; Harrington, AC; Mori, M.; Meller, R.; Rosenzweig, HL; Tobar, E. ; Shaw, ET; et al. Effaith rhag-amod isgemig ar ymateb genomig i isgemia cerebral: Tebygrwydd i strategaethau niwro-amddiffynnol mewn cyfnodau gaeafgysgu a chyflyrau sy'n goddef hypocsia. Lancet 2003, 362, 1028–1037. [CrossRef]

8. Gidday, JM Rhag-gyflyru yr ymennydd a goddefgarwch isgemig. Nat. Neurosci Parch. 2006, 7, 437–448. [CrossRef] [PubMed]

9. Stetler, RA; Gollyngiad, R. ; Gan, Y. ; Li, P. ; Zhang, F.; Hu, X. ; Jing, Z.; Chen, J.; Zigmond, MJ; Gao, Y. Mae rhag-gyflyru yn darparu neuroprotection mewn modelau o glefyd CNS: Paradigms ac arwyddocâd clinigol. Prog. Neurobiol. 2014, 114, 58–83. [CrossRef] [PubMed]

10. Koch, S. ; Della Morte, D.; Dave, KR; Saco, RL; Perez-Pinzon, AC Biomarcwyr ar gyfer Rhag-gyflyru Isgemig: Dod o Hyd i'r Ymatebwyr. Br. J. Ffarmacol. 2014, 34, 933–941. [CrossRef]

11. La Russa, D.; Frisina, M.; Secondo, A. ; Bagetta, G. ; Amantea, D. Modylu Ffactor Mynediad-Rheoleiddio Calsiwm a Weithredir gan Storfa Ymenyddol (SARAF) ac Orai Ymylol1 Yn dilyn Isgemia Ymenyddol Ffocal a Rhag-gyflyru mewn Llygod. Niwrowyddoniaeth 2020, 441, 8–21. [CrossRef]

12. Sisalli, MJ; Annunziato, L.; Scorziello, A. Mecanweithiau Cellog Newydd ar gyfer Niwroamddiffyn mewn Rhag-gyflyru Isgemig: Golygfa o'r Tu Mewn i Organelles. Blaen. Neurol. 2015, 6, 115. [CrossRef]

13. Durukan, A. ; Tatlisumak, T. Goddefgarwch isgemig a achosir gan rag-gyflyru: Ffenestr i gerio mewndarddol ar gyfer cerebroprotection. Exp. Cyfieithiad. Strôc Med. 2010, 2, 2. [CrossRef]

14. Brychdyn, BR; Reutens, D.; Sobey, CG; Sims, K.; Politei, J.; Banikazemi, M.A.; Lee, P. Mecanweithiau Apoptotic ar ol Isgemia'r Ymennydd. Strôc 2009, 40, 788–794. [CrossRef]

15. Zhao, H. ; Sapolsky, RM; Steinberg, GK Phosphoinositide-3-Mae Llwybrau Arwyddion Goroesi Kinase/Akt yn Ymwneud â Goroesiad Niwronol ar ôl Strôc. Mol. Neurobiol. 2006, 34, 249–270. [CrossRef]

16. Uzdensky, AB Rheoleiddio apoptosis yn y penumbra ar ôl strôc isgemig: Mynegiant o broteinau pro- ac antiapoptotig. Apoptosis 2019, 24, 687–702. [CrossRef] [PubMed]

17. Fukunaga, K. ; Mae Kawano, T. Akt yn darged moleciwlaidd ar gyfer therapi trawsgludo signal mewn sarhad isgemig yr ymennydd. J. Ffarmacol. Sci. 2003, 92, 317–327. [CrossRef] [PubMed]

18. Zhao, EY; Efendizade, A. ; Cai, L. ; Ding, Y. Rôl Akt (protein kinase B) a phrotein kinase C mewn anaf isgemia-atlifiad. Neurol. Res. 2016, 38, 301–308. [CrossRef] [PubMed]

19. Delgado-Esteban, M.A.; Martin-Zanca, D.; Andres-Martin, L.; Almeida, A.; Bolanos, JP Mae atal PTEN gan berocsinitrit yn actifadu'r llwybr signalau niwro-amddiffynnol phosphoinositide-3-kinase/Akt. J. Neurochem. 2007, 102, 194–205. [CrossRef]

20. Manning, BD; Toker, A. Arwyddion AKT/PKB: Llywio'r Rhwydwaith. Cell 2017, 169, 381–405. [CrossRef] [PubMed]

21. Diez, H.; Garrido, JJ; Wandosell, F. Rolau Penodol Ffurfiau Akt iso mewn Apoptosis a Rheoleiddio Twf Axon mewn Niwronau. PLoS ONE 2012, 7, e32715. [CrossRef]

22. Santi, SA; Lee, H. Mae'r isoformau Akt yn bresennol mewn lleoliadau isgellog gwahanol. Yn. J. Physiol. Physiol. 2010, 298, C580–C591. [CrossRef]

23. Yang, C.; Talukder, MH; Varadharaj, S.; Velayutham, M.A.; Zweier, JL Mae rhag-gyflyru isgemig cynnar yn gofyn am actifadu eNOS wedi'i gyfryngu gan Akt- a PKA trwy serine1176 phosphorylation. Cardiofasg. Res. 2012, 97, 33–43. [CrossRef] [PubMed]

24. Ouyang, Y.-B.; Tan, Y. ; Crib, M. ; Liu, C.-L.; Martone, ME; Siesjö, BK; Hu, B.-R. Digwyddiadau sy'n Hyrwyddo Goroesi a Marwolaeth ar ôl Isgemia Cerebral Dros Dro: Ffosfforyleiddiad Act, Rhyddhau Sytocrom C, ac Ysgogi Proteasau tebyg i Caspase. Br. J. Ffarmacol. 1999, 19, 1126–1135. [CrossRef] [PubMed]

25. Li, S. ; Hafeez, A.; Noorulla, F.; Geng, X. ; Shao, G. ; Ren, C. ; Lu, G. ; Zhao, H.; Ding, Y. ; Ji, X. Rhagamod mewn niwroamddiffyniad: O hypocsia i isgemia. Prog. Neurobiol. 2017, 157, 79–91. [CrossRef] [PubMed]

26. Mayo, LD; Donner, DB Mae llwybr ffosffatidylinositol 3-kinase/Akt yn hyrwyddo trawsleoliad Mdm2 o'r cytoplasm i'r cnewyllyn. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2001, 98, 11598–11603. [CrossRef]

27. Ashcroft, M.; Ludwig, RL; Woods, DB; Copeland, TD; Weber, HO; Macrae, EJ; Vousden, KH Ffosfforyleiddiad HDM2 gan Akt. Oncogene 2002, 21, 1955–1962. [CrossRef]

28. Zhou, BP; Liao, J.; Mae Xia, W. HER-2/neu yn cymell hollbresennol p53 trwy ffosfforyleiddiad MDM2 wedi'i gyfryngu gan Akt. Nat. Cell Biol. 2001, 3, 973–982. [CrossRef]

29. Grossman, SR; Perez, M.; Kung, AL; Joseph, M.; Mansur, C. ; Xiao, Z.-X.; Kumar, A.S.; Howley, P.; Livingston, DM p300/MDM2 Complexes Cymryd rhan mewn MDM2-Diraddio p53 cyfryngol. Mol. Cell 1998, 2 , 405–415. [CrossRef]

30. Toth, A. ; Nickson, P.; Qin, LL; Erhardt, P. Rheoleiddio Gwahaniaethol Goroesiad Cardiomyocyte a Hypertrophy gan MDM2, Ubiquitin Ligase E3. J. Biol. Cemeg. 2006, 281, 3679–3689. [CrossRef]

31. Hausenloy, DJ; Tsang, A. ; Mocanu, MM; Yellon, DM Mae rhag-gyflyru isgemig yn amddiffyn trwy actifadu kinases prosurvival ar atlifiad. Yn. J. Physiol. Cylch. Physiol. 2005, 288, H971–H976. [CrossRef] [PubMed]

32. Mocanu, MM; Yellon, DM p53 is-reoleiddio: Mecanwaith moleciwlaidd newydd sy'n ymwneud â rhag-gyflyru isgemig. FEBS Lett. 2003, 555, 302–306. [CrossRef]

33. Vecino, R. ; Burguete, MC; Jover-Mengual, T.; Agulla, J. ; Bobo-Jiménez, V.; Salom, JB; Almeida, A.; Delgado-Esteban, M. Mae llwybr MDM2-t53 yn ymwneud â goddefgarwch niwronaidd a achosir gan rag-gyflyru i isgemia. Sci. Rep. 2018, 8, 1610. [CrossRef] [PubMed]

34. Rodriguez, C.; Ramos-Araque, M.E.; Domínguez-Martínez, M.; Sobrino, T.; Sánchez-Morán, I.; Agulla, J.; Delgado-Esteban, M.; Gómez-Sánchez, J.C.; Bolaños, J.P.; Castillo, J.; et al. Single-Nucleotide Polymorphism 309T>Mae G yn yr Hyrwyddwr MDM2 yn Pennu Canlyniad Gweithredol ar ôl Strôc. Strôc 2018, 49, 2437–2444. [CrossRef]

35. Feng, J. ; Parcb, J. ; Cron, P. ; Hess, D.; Hemmings, BA Adnabod Ser Motiff Hydroffobig PKB/Akt-473 Kinase fel Kinase Protein sy'n ddibynnol ar DNA. J. Biol. Cemeg. 2004, 279, 41189–41196. [CrossRef]

36. Lai, TW; Zhang, S.; Wang, YT Excitotoxicity a strôc: Nodi targedau newydd ar gyfer niwroamddiffyniad. Prog. Neurobiol. 2014, 115, 157–188. [CrossRef] [PubMed]

37. Constantino, LC; Rhwymwr, LB; Vandresen-Filho, A.S.; Fiola, GG; Ludka, FK; Lopes, MW; Leal, RB; Tasca, CI Rôl Ffosffatidylinositol-3 Llwybr Kinase yn NMDA Rhag-gyflyru: Gwahanol fecanweithiau ar gyfer Trawiadau a Dirywiad Niwronaidd Hippocampal a Achosir gan Asid Quinolinic. Neurotocs. Res. 2018, 34, 452–462. [CrossRef]

38. Xie, R. ; Cheng, M.; Li, M. ; Xiong, X. ; Daadi, M.; Sapolsky, RM; Zhao, H. Akt Isofformau Amddiffyn yn Wahanol yn erbyn Anafiadau Niwronol a Achosir gan Strôc trwy Reoleiddio Gweithgareddau mTOR. Br. J. Ffarmacol. 2013, 33, 1875–1885. [CrossRef]

39. Soriano, FX; Papadia, S.; Hoffmann, F.; Hardingham, NR; Bading, H. ; Hardingham, GE Mae dosau rhag-gyflyru o NMDA yn hyrwyddo niwro-amddiffyniad trwy wella cyffroedd niwronau. J. Neurosci. 2006, 26, 4509–4518. [CrossRef]

40. Grabb, MC; Choi, Goddefgarwch Isgemig DW yn Niwylliant Celloedd Cortigol Murine: Rôl Hanfodol i Dderbynyddion NMDA. J. Neurosci. 1999, 19, 1657–1662. [CrossRef]

41. Chen, M. ; Lu, T.-J.; Chen, X.-J.; Zhou, Y.; Chen, Q.; Feng, X.-Y.; Xu, L. ; Duan, W.-H.; Xiong, Z.-Q. Rolau Gwahaniaethol Isdeipiau Derbynnydd NMDA mewn Marwolaeth Celloedd Niwronol Isgemig a Goddefgarwch Isgemig. Strôc 2008, 39, 3042–3048. [CrossRef]

42. Gomez-Sanchez, JC; Esteban, MD; Rodriguez-Hernandez, I.; Sobrino, T.; De La Ossa, PC; Reverte, S.; Bolaños, YH; GonzalezSarmiento, R.; Castillo, J.; Almeida, A. Mae polymorphism dynol Tp53 Arg72Pro yn esbonio prognoses swyddogaethol gwahanol mewn strôc. J. Exp. Med. 2011, 208, 429–437. [CrossRef]

43. Xu, W. ; Gao, L. ; Li, T. ; Zheng, J.; Shao, A. ; Zhang, J. Ffactor Niwrotroffig sy'n Deillio o Astrocyt Mesencephalic (MANF) Yn Amddiffyn Yn Erbyn Apoptosis Niwronaidd trwy Weithredu Llwybr Signalau Akt/MDM2/p53 mewn Model Llygoden Fawr o Hemorrhage Mewn-ymenyddol. Blaen. Mol. Neurosci. 2018, 11, 176. [CrossRef] [PubMed]

44. Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C.; Lapresa, R.; Agulla, J. ; Sobrino, T.; Castillo, J.; Bolaños, YH; Almeida, A. Niwclear WRAP53 yn hyrwyddo goroesiad niwronaidd ac adferiad swyddogaethol ar ôl strôc. Sci. Adv. 2020, 6, eabc5702. [CrossRef]

45. Burmistrova, O. ; Olias-Arjona, A.; Lapresa, R.; Jimenez-Blasco, D.; Eremeeva, T.; Shishov, D.; Romanov, A.S.; Zakurdaeva, K.; Almeida, A.; Fedichev, PO; et al. Mae targedu PFKFB3 yn lleddfu anaf isgemia cerebral-atlifiad mewn llygod. Sci. Cynrychiolydd 2019, 9, 1–13. [CrossRef]

46. ​​Tu, Y. ; Kim, E.; Gao, Y. ; Rankin, EWCH; Li, B. ; Mae Chen, YC Theaflavin-3, 30 -gallate yn achosi apoptosis ac arestiad cylchred celloedd G2 trwy'r llwybr Akt/MDM2/p53 mewn celloedd A2780/CP70 canser ofarïaidd sy'n gwrthsefyll cisplatin. Int. J. Oncol. 2016, 48, 2657–2665. [CrossRef] [PubMed]

47. Wan, W. ; Hou, Y.; Wang, K.; Cheng, Y.; Pu, X. ; Ie, X. Mae'r RNA LINC01125 hir di-godio a achosir gan LXR yn atal amlhau celloedd canser y fron trwy lwybr signalau PTEN/AKT/p53. Cell Marwolaeth Dis. 2019, 10, 248. [CrossRef] [PubMed]

48. Tao, J. ; Cui, Y. ; Duan, Y. ; Zhang, N.; Wang, C. ; Zhang, F. Puerarin yn gwanhau diffygion locomotor a gwybyddol yn ogystal ag anaf niwronau hippocampal trwy lwybr signalau PI3K/Akt1/GSK-3 mewn model in vivo o isgemia yr ymennydd. Oncotarget 2017, 8, 106283–106295. [CrossRef] [PubMed]

49. Janelidze, A.S.; Hu, B.-R.; Siesjö, P.; Siesjö, BK Newidiadau i Akt1 (PKB ) a p70S6K mewn Isgemia Ffocal Dros Dro. Neurobiol. Dis. 2001, 8, 147–154. [CrossRef] [PubMed]

50. Pignataro, G. ; Boscia, F.; Esposito, E.; Sirabella, R.; Cuomo, O.; Vinciguerra, A.; Di Renzo, G.; Annunziato, L. NCX1,, ac NCX3: Dau effeithydd newydd o oedi rhag-gyflyru mewn isgemia ymennydd. Neurobiol. Dis. 2012, 45, 616–623. [CrossRef]

51. Li, J. ; Kurokawa, M. Rheoleiddio Sefydlogrwydd MDM2 ar ôl Difrod DNA. J. Cell. Physiol. 2015, 230, 2318–2327. [CrossRef]

52. Olson, DC; Marechal, V. ; Momand, J. ; Chen, J.; Romocki, C. ; Levine, AJ Nodi a nodweddu mdm-2 lluosog o broteinau ac mdm-2-p53 cymhlygion protein. Oncogene 1993, 8, 2353–2360. [PubMed]

53. Uranga, RM; Katz, S.; Mae gan Salvador, GA Signalu Ffosffatidylinositol Gwell 3-kinase (PI3K)/Akt Dargedau Pleiotropig mewn Niwronau Hippocampal Yn Agored i Straen Ocsidiol a achosir gan Haearn. J. Biol. Cemeg. 2013, 288, 19773–19784. [CrossRef] [PubMed]

54. Almeida, A. ; Sánchez-Morán, I.; Rodríguez, C. Mae masnachu mewn pobl mitocondriaidd-niwclear p53 yn rheoli tueddiad niwronaidd mewn strôc. IUBMB Life 2021, 73, 582–591. [CrossRef] [PubMed]

55. Delgado-Esteban, M.A.; Garcia-Higuera, I.; Maestre, C. ; Moreno, S.; Mae Almeida, A. APC/C-Cdh1 yn cydlynu niwrogenesis a maint cortigol yn ystod datblygiad. Nat. Cymmun. 2013, 4, 2879. [CrossRef] [PubMed]

56. Constantino, LC Rôl Derbynyddion NMDA wrth Ddatblygu Ymwrthedd i'r Ymennydd trwy Gyflyru Cyn ac Ôl-gyflyru. Heneiddio Dis. 2014, 5, 430–441. [CrossRef]

57. Almeida, A. ; Esteban, MD; Bolaños, YH; Medina, JM Mae amddifadedd ocsigen a glwcos yn achosi camweithrediad mitocondriaidd a straen ocsideiddiol mewn niwronau ond nid mewn astrocytes mewn diwylliant cynradd. J. Neurochem. 2002, 81, 207–217. [CrossRef]

58. Lahav, G. ; Rosenfeld, N.; Sigal, A. ; Geva-Zatorsky, N.; Levine, AJ; Elowitz, MB; Alon, U. Deinameg y ddolen adborth p53-Mdm2 mewn celloedd unigol. Nat. Genet. 2004, 36, 147–150. [CrossRef]

59. Li, J. ; Karaplis, AC; Huang, DC; Siegel, PM; Camirand, A.; Yang, XF; Muller, WJ; Mae Kremer, R. PTHrP yn gyrru cychwyniad tiwmor y fron, dilyniant, a metastasis mewn llygod ac mae'n darged therapiwtig posibl. J. Clin. Ymchwilio. 2011, 121, 4655–4669. [CrossRef]

60. Maestre, C. ; Esteban, MD; Gomez-Sanchez, JC; Bolaños, YH; Almeida, A. Cdk5 ffosfforyleiddiad Cdh1 a modylu sefydlogrwydd cyclin B1 yn excitotoxicity. EMBO J. 2008, 27, 2736–2745. [CrossRef]

61. De Tudela, MV-P.; Esteban, MD; Maestre, C. ; Bobo-Jiménez, V.; Jiménez-Blasco, D.; Vecino, R.; Bolaños, YH; Almeida, A. Rheoleiddio Rhyngweithio Synthase Bcl-xL-ATP gan Mitochondrial Cyclin B1-Cyclin-Dibynnol Kinase{8}} sy'n Pennu Goroesiad Niwronol. J. Neurosci. 2015, 35, 9287–9301. [CrossRef] [PubMed]

62. Bobo-Jiménez, V.; Esteban, MD; Angibaud, J. ; Sánchez-Morán, I.; de la Fuente, A.; Yajeya, J.; Nägerl, UV; Castillo, J.; Bolaños, YH; Almeida, A. APC/CCdh1-Mae llwybr Rock2 yn rheoli cyfanrwydd dendritig a chof. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 2017, 114, 4513–4518. [CrossRef] [PubMed]