Effaith Amddiffynnol Panduratin A Ar Apoptosis a Achosir gan Cisplatin O Gelloedd Tiwbwl Agosach Arennol Dynol Ac Anafiad Acíwt i'r Arennau mewn Llygod
Mar 18, 2022
Cefndir:Mae cisplatin yn gemotherapi effeithiol ond ei brif sgîl-effaith, aciwtanaf i'r arennau, yn cyfyngu ar ei ddefnydd. Mae Pandurate A, cyfansoddyn bioactif a dynnwyd o Boesenbergia rotunda, yn dangos nifer o weithgareddau biolegol megis effeithiau gwrth-ocsidiol. Ymchwiliodd yr astudiaeth bresennol i effaith nephroprotective pandurate A ar y cisplatin a achosiranaf arennol.Dulliau: Fe wnaethom ymchwilio i effaith pandurate A ar wenwyndra cisplatin mewn llygod a diwylliannau celloedd arennol dynol gan ddefnyddio celloedd RPTEC/TERT1. Canlyniadau: Dangosodd y canlyniadau fod pandurate A yn lleddfu gwenwyndra arennol a achosir gan cisplatin mewn celloedd llygod a RPTEC / TERT1 trwy leihau apoptosis. Arddangos llygod a gafodd eu trin ag un pigiad mewnperitoneol (ip) o cisplatin (20 mg/kg pwysau corff (BW))arennolanaf a nam ar y tiwbynswyddogaeth yr arennaufel y dangosir gan archwiliad histolegol a mwy o creatinin serwm. Gwellodd cyd-weinyddu pandurate A (50 mg/kg BW) ar lafarswyddogaeth yr arennauac wedi gwellaarennolanaf tiwbyn o cisplatin trwy atal actifadu kinase allgellog a reoleiddir gan signal (ERK) 1/2 a caspase 3. Mewn celloedd tiwbaidd procsimol arennol dynol, apoptosis celloedd a achosir gan cisplatin trwy actifadu proteinau pro-apoptotig (ERK1/2 a caspase 3), a lleihau'r protein gwrth-apoptotig (Bcl-2). Lleihawyd yr effeithiau hyn yn sylweddol trwy gyd-driniaeth ag A pandurate. Yn ddiddorol, ni newidiodd pandurate A y casgliad mewngellol o cisplatin. Ni newidiodd effeithiolrwydd gwrth-ganser cisplatin yn y colon dynol neu linellau celloedd canser yr ysgyfaint celloedd nad ydynt yn fach. Casgliadau: Mae'r astudiaeth bresennol yn amlygu bod gan pandurate A effaith amddiffynnol bosibl ar neffrowenwyndra cisplatin.
Geiriau allweddol:cemotherapi; anaf acíwt i'r arennau; panduratin A; tiwbyn procsimol arennol dynol; gwrth-apoptosis; arennol; aren
BYDD CISTANCHE YN GWELLA DIALYSIS AREN/ARENOL
RHAGARWEINIAD
Mae neffrowenwyndra a achosir gan gyffuriau yn broblem fawr yn y lleoliad clinigol oherwydd yn aml mae'n anochel y defnyddir cyffuriau neffrowenwynig. Gellir diffinio nephrotoxicity gan anafiadau arennol gan gynnwys difrod glomerwlaidd ac anaf tiwbaidd sy'n arwain at amhariad ar swyddogaeth arennol.1) Cyffuriau cyffredin sy'n gysylltiedig âanaf i'r arennausy'n gwrthlidiol, yn wrthfiotigau ac yn gyfryngau cemotherapiwtig, fel cisplatin.2–4) Mae cisplatin yn gyffur cemotherapiwtig sbectrwm eang, nerth uchel.5) Fodd bynnag, mae tua un o bob tri chlaf sy'n cael triniaeth cisplatin yn dioddef o neffrowenwyndra6,7) ac anghydbwysedd electrolyte.8,9) Nodweddir nephrotoxicity a achosir gan cisplatin gan anaf tiwbyn procsimol, anaf fasgwlaidd, a llid.4) Mae cronni cisplatin mewn celloedd arennol yn achosi llwybrau lluosog sy'n hyrwyddo marwolaeth celloedd. Mae rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS) wedi'i nodi fel cyfryngwr allweddol mewn nephrotoxicity cisplatin.10,11) Yn ogystal, mae ROS yn achosi neffrowenwyndra trwy actifadu kinases protein a weithredir gan mitogen (MAPKs).10,12,13) Mae nifer o astudiaethau wedi nodi bod cisplatin gall ei hun ysgogi kinase allgellog a reoleiddir gan signal (ERK) 1/2 (aelod o MAPKs) yn uniongyrchol in vitro ac in vivo. 14,15)
Mae rhai ffytogemegau penodol yn lleddfu neffrowenwyndra a achosir gan cisplatin trwy atal croniad ROS ac apoptosis.16-18) Er bod effeithiau nephroprotective y ffytogemegau hyn wedi'u hadrodd mewn astudiaethau rhag-glinigol, nid oes unrhyw gyffuriau cymeradwy o ffytogemegau ar gyfer neffrowenwyndra cisplatin o hyd (gweler yr adolygiad manwl). ) Mae arfer clinigol presennol yn darparu triniaethau cefnogol i adfer swyddogaeth arennol yn unig.20) Felly, mae'n dal yn bwysig chwilio am gyfryngau effeithiol i atal neu drin neffrowenwyndra a achosir gan cisplatin. Mae Pandurate A yn ffytocemegol diddorol. Mae'n sialcone cyclohexanol wedi'i hynysu o Boesenbergia rotunda, planhigyn a ddefnyddir mewn meddygaeth draddodiadol a bwyd.21) Dangoswyd bod Panduratin A yn atal neu'n trin straen ocsideiddiol, llid, a chlefyd metabolig.22,23) Anaf i tiwbiau procsimol arennol a achosir gan mae cisplatin yn cael ei gyfryngu, yn rhannol o leiaf, trwy fwy o straen ocsideiddiol a llid.11) Felly, fe wnaethom ymchwilio i effaith pandurate A ar wenwyndra cisplatin mewn anifeiliaid a diwylliannau celloedd gan ddefnyddio celloedd RPTEC/TERT1. Gwnaethom hefyd brofi a yw cyd-driniaeth ag A pandurate yn effeithio ar weithgarwch gwrthganser cisplatin mewn llinellau celloedd canser dynol.
DEUNYDDIAU A DULLIAU
Cemegau Thiazolyl blue tetrazolium bromide (MTT), 2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), cisplatin, and compound C (AMP-activated protein kinase (AMPK) inhibitor) were purchased from Sigma-Aldrich (MO, U.S.A.). 3 H-1-Methyl-4-phenylpyridinium (3 H-MPP+) was purchased from PerkinElmer, Inc. (Bangkok, Thailand). Annexin V- fluorescein isothiocyanate (FITC) apoptosis detection kit was purchased from BD Biosciences (CA, U.S.A.). Primary antibodies for p-ERK1/2 (Cat. No. 9102S), ERK1/2 (Cat. No. 9101S), Bcl-2 (Cat. No. 2872T), caspase-3 (Cat. No. 9662S), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (Cat. No. 2118S), p-AMPKα (Cat. No.2531S), AMPKα (Cat. No. 5832S), Bax (Cat. No. 5023) and β-actin (Cat. No. 4970T) antibodies were obtained from Cell Signaling (MA, U.S.A.) and anti-neutrophil gelatinase-associated lipocalin (NGAL) antibody (Cat. No. STCSC-515876) was purchased from Santa Cruz Biotechnology (CA, U.S.A.). Pandurate A >Roedd purdeb 98 y cant a bennwyd gan HPLC wedi'i ynysu o Boesenbergia rotunda fel y disgrifiwyd yn flaenorol gan ein grŵp.24) Casglwyd rhisomau Boesenbergia rotunda o Kanchanaburi, Gwlad Thai. Adnabuwyd y planhigyn gan Tuanta Sematong. Mae'r sbesimen taleb (Rhif BKF 68909) wedi'i adneuo yn y Forest Herbarium, Adran Goedwigaeth Frenhinol, Bangkok.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA SWYDDOGAETH YR AREN/ARRENAU
AnifeiliaidPrynwyd llygod C57BL/6 gwrywaidd (8-wythnos oed) oddi wrth Nomura Siam International Co., Ltd. (Bangkok, Gwlad Thai). Mae Protocol Gofal a Defnydd Anifeiliaid Rhif MUSC61-063-464 wedi'i gymeradwyo gan y Pwyllgor Sefydliadol Gofal a Defnydd Anifeiliaid, MUSC-IACUC. Roedd y llygod yn cael mynediad rhydd i fwyd a dŵr. Ar ôl un wythnos o ymaddasu, rhannwyd llygod ar hap a gweinyddwyd triniaethau fel a ganlyn: halwynog arferol gan chwistrelliad intraperitoneol (ip) sengl ar ddiwrnod 4 (grŵp rheoli); pandurate A (50 mg/kg pwysau'r corff (BW)) trwy lifiad llafar am 7 d (grŵp pandurate A); cisplatin (20 mg/kg BW) trwy un pigiad ip ar ddiwrnod 4 (grŵp cisplatin); pandurate A (50 mg/kg BW/d) drwy gavage llafar am 7 d a cisplatin (20 mg/kg BW) drwy un pigiad ip ar ddiwrnod 4 (grŵp cyd-driniaeth). Ar ddiwrnod 7, cafodd llygod eu hanestheteiddio'n ddwfn gan sodiwm thiopental. Tynnwyd gwaed a'i allgyrchu am 10 munud am 3000 pm. Cadwyd y supernatants a gasglwyd ar −80 gradd hyd nes yswyddogaeth arennolei fesur.Arennaueu casglu ar gyfer mesur mynegiant protein ac astudiaethau histopatholegol.
Pennu Gweithrediad Arennol ac Arholiad HistolegolPennwyd swyddogaeth arennol trwy fesur creatinin serwm gan ddefnyddio Stanbio Creatinine Liquicolor (NY, UDA) a dadansoddwr cemeg gwaed, Licenza (Rhufain, yr Eidal). I archwilio difrod tiwbaidd arennol a achosir gan cisplatin, llygodenarennaueu gosod mewn paraformaldehyd 4 y cant. Mae'rarenstaeniwyd tafelli â hematocsilin ac eosin (H&E) a ffotograffwyd gan ficrosgop ysgafn. Defnyddiwyd canran yr anaf tiwbaidd i werthuso'r anaf tiwbaidd arennol: 0=dim anaf tiwbaidd 1=<10%; 2="10–25%;" 3="26–50%;" 4="51–75%;" 5="">75 y cant . Sgoriwyd y sleidiau'n ddall gan batholegydd. Cyfrifwyd sgôr gymedrig pob grŵp o anifeiliaid trwy gyfrif 10 maes gwahanol ar sleid.
Llinellau CellPrynwyd celloedd RPTEC/TERT1, celloedd canser y colon (HCT116) a chelloedd canser yr ysgyfaint celloedd nad ydynt yn fach (A549) gan American Type Culture Collection (VA, UDA). Yn gryno, cafodd celloedd RPTEC/TERT1 eu meithrin yng nghyfrwng/F-12 cyfrwng Eagle (DMEM/F12) cyflawn addasedig Dulbecco (DMEM/F12) fel y disgrifiwyd yn flaenorol.25) Cafodd celloedd HCT116 ac A549 eu meithrin mewn cyfrwng DMEM/F12 a RPMI1640, yn y drefn honno, wedi'u hategu gyda gwrthfiotigau penisilin-streptomycin a serwm buchol ffetws 10 y cant (FBS). Cafodd celloedd eu meithrin ar 37 gradd mewn awyrgylch llaith o 5 y cant CO2 a 95 y cant O2.
Assay Hyfywedd Celloedd a Dadansoddiad Apoptosis CellPenderfynwyd ar hyfywedd celloedd trwy amlygu'r celloedd RPTEC/TERT1 i 0.5mg/mL adweithydd MTT am 1h ar 37 gradd C. Tynnwyd yr adweithyddion, diddymwyd yr halen formazan a ffurfiwyd mewn dimethyl sulfoxide (DMSO) a'i ganfod gan Darllenydd microplate EnVision ar amsugnedd 570nm. Adroddwyd ar hyfywedd celloedd fel canran o reolaeth. Annexin V ac ïodid propidium (Defnyddiwyd dadansoddiad PIstaining i bennu apoptosis celloedd. Yn gryno, datgelwyd celloedd RPTEC/TERT1 gan 0.25 y cant asid trypsin-ethylenediaminetetraacetig (EDTA). Deorwyd yr ataliadau celloedd ag Annexin V-FITC a PI yn y tywyllwch yn y tywyllwch. 4 gradd am 15 munud ac yna golchi ddwywaith gyda byffer rhwymo.Cafodd celloedd apoptotig eu cyfrif gan sytomedr llif a'u mynegi fel canran o gyfanswm y celloedd.
Asesiad o Groniad ROS MewngellolPennwyd lefelau ROS gan assay DCFH-DA. Deorwyd celloedd RPTEC/TERT1 â 10uM DCFH-DA a'u deor am 30 munud ar 37 gradd . Nesaf, tynnwyd llifyn DCFH-DA a golchwyd celloedd â halwynog wedi'i glustogi â ffosffad (PBS). Mesurwyd lefel ROS mewngellol ar donfeddi o 485 a 530nm ar gyfer cyffro ac allyriadau, yn y drefn honno. Adroddir bod croniad ROS mewngellol yn ganran o ddwysedd fflwroleuol o'i gymharu â chelloedd rheoli.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA CLEFYD YR AREN/ARENAU
Dadansoddiad Cronni PlatinwmMesurwyd platinwm cronedig mewn celloedd RPTEC/TERT1 a llygoden a oedd wedi'u treulioarennaugan sbectromedr UNICAM 989 QZ AA (Geleen, yr Iseldiroedd). Ychwanegwyd deg microlitr o 1 y cant Triton X-100 a 400uL o 1 y cant o asid nitrig at bob sampl 100μL. Yna deorwyd samplau am o leiaf 1 awr. Cyn canfod platinwm, gwanhawyd pob sampl 10:1 gydag asid nitrig 1 y cant. Cyfrifwyd y crynodiad platinwm gan ddefnyddio atchweliad llinol o gromlin safonol platinwm a baratowyd gan ddefnyddio 2.5mg/ml o cisplatin-gwanedig mewn asid nitrig 1 y cant. Cyfrifwyd y platinwm fel ng/rhif cell neu ng/arenpwysau.
3H-MMP* Assay Nifer DerbynDefnyddiwyd ein dull blaenorol i bennu faint o 3H-MPP a mwy a oedd yn cael eu derbyn i gelloedd RPTEC/TERT1.25) Yn gryno, golchwyd celloedd â chlustogiad cludiant cynnes a'u deor ymhellach am 20 munud. Deorwyd y monolayers celloedd gyda H-MPP plus (10nM) ac yna golchi â chludiant cludo oer iâ. Casglwyd y samplau a mesurwyd gweithgaredd ymbelydrol H-MPP a mwy gan ddefnyddio rhifydd pefriiad hylif.
Dadansoddiad Blotio GorllewinolProseswyd mynegiadau protein yn ôl ein hastudiaeth flaenorol.26)Proteinau wedi'u tynnu o'r llygodenarena chafodd celloedd RPTEC/TERT1 eu canoli ar 12000rpm am 20 munud ar 4 gradd . Cafodd symiau cyfartal o broteinau wedi'u hynysu o gelloedd a meinwe eu dadnatureiddio a'u gwahanu gan 10-12 y cant electrofforesis gel sodiwm dodecyl sylffad-polyacrylamid (SDS-PAGE). Trosglwyddwyd samplau i bilenni nitrocellwlos ac yna blocio protein amhenodol 1h gan ddefnyddio llaeth sych di-fraster (5 y cant). Deorwyd y pilenni â gwrthgorff sylfaenol am 24 awr ac yna cawsant eu deor â gwrthgorff eilaidd am 1 awr. Canfuwyd dwyster mynegiant protein gan ddefnyddio swbstrad HRP chemiluminescent a'i fesur gan feddalwedd ImageJ.
Dadansoddiad YstadegolMynegir data fel cymedrig ± gwyriad safonol (SD). Dadansoddwyd data gan ANOVA unffordd gan ddefnyddio profion posthoc Tukey (GraphPad Prism 8.0). Ystyrir arwyddocâd pan fo'r gwerth-p yn llai na 0.05.
CANLYNIADAU Mae Panduratin A yn Lliniaru Arennau Acíwt a Achosir gan SisplatinAnaf Gwnaethom ymchwilio i effaith pandurate A aranaf i'r arennaua achosir gan cisplatin mewn llygod. Gwelsom y gwenwyndra cyffredinol yn gyntaf trwy fesur newid pwysau corff mewn llygod yn dilyn triniaeth â halwynog arferol, pandurate A (50 mg / kg BW), cisplatin (20 mg / kg BW), a cisplatin (20 mg / kg BW) a pandurate A (50 mg/kg BW). Canfuwyd gostyngiad arwyddocaol mewn pwysau corff yn y llygod a gafodd eu trin â cisplatin. Lliniarwyd y golled pwysau corff trwy gyd-driniaeth â pandurate A (Ffig. 1A). O'i gymharu â'r rheolaeth,swyddogaeth yr arennaua fesurwyd gan lefel creatinin serwm yn dangos nad oedd llygod wedi'u trin pandurate A yn unig yn newid lefel creatinin serwm; tra bod y llygod a gafodd eu trin â cisplatin wedi cynyddu lefelau creatinin serwm yn sylweddol, gan ddangos nam ar weithrediad yr arennau. Gostyngodd y lefel creatinin serwm mewn cyd-weinyddu pandurate A yn sylweddol o'i gymharu â llygod wedi'u trin â cisplatin (Ffig. 1 B). Yn ogystal, mae'r casgliad o blatinwm ynarennid oedd meinwe yn arwyddocaol wahanol mewn llygod a gafodd eu trin â cisplatin yn unig o gymharu â llygod a gafodd eu trin ar y cyd â cisplatin a phandurate A (Ffig. 1 C). Mae'r data hyn yn dangos nad oedd pandurate A yn effeithio ar gynnwys cisplatin mewn meinwe arennol. Mae'rarennaua gafwyd o lygod a gafodd eu trin â cherbyd neu pandurate A yn unig heb ddangos unrhyw newidiadau patholegol amlwg. Fodd bynnag, dangosodd llygod wedi'u trin â cisplatin fwy o ddifrod tiwbaidd o'i gymharu â llygod wedi'u trin â cherbydau fel y dangosir gan y cynnydd mewn dirywiad a dihysbyddiad, ffurfio castiau goleuol, ymdreiddiad celloedd mononiwclear, karyomegaly, gwaedlif rhyng-tiwbaidd, ac ymlediad. Gwanhawyd y newidiadau patholegol hyn yn sylweddol gan gyd-weinyddu pandurate A (Ffig. 2 A, Tabl 1). Penderfynwyd ar lefelau mynegiant NGAL (biomarciwr nephrotoxicity), ac ERK1/2 a caspase hollt 3 (proteinau pro-apoptotig). Dangosodd ein hastudiaeth fod llygod a gafodd eu trin â cisplatin yn cynyddu mynegiant NGAL, p-ERK1/2, a hollt caspase 3 yn sylweddol o gymharu â llygod wedi'u trin â cherbydau. Roedd cyd-driniaeth â pandurate A yn lleihau'r proteinau hyn a achosir gan driniaeth cisplatin yn sylweddol (Ffig. 2 B).
Mae Pandurate A yn Atal Sytowenwyndra a Achosir gan Cisplatin mewn Celloedd Tiwbaidd Agosaf Arennol Dynol trwy Atal Llwybrau Signalau ApoptotigMae cisplatin (50 µM) yn dynodi- llai o ddichonoldeb celloedd RPTEC/TERT1 yn dilyn deoriad 72 h. Yn ddiddorol, cynyddodd cyd-driniaeth â pandurate A (1 a 5 µM) hyfywedd celloedd yn sylweddol (Ffig.
3A). Cadarnhawyd effaith amddiffynnol Panduratin A yn erbyn cytotoxicity cisplatin trwy fesur apoptosis celloedd. Yn ôl y disgwyl, cynyddodd amlygiad y celloedd i 50 µM cisplatin am 48 h apoptosis celloedd RPTEC / TERT1 yn sylweddol. Gwanhawyd yr effaith hon gan pandurate A (Ffig. 3 B). Archwiliwyd a oedd effaith pandurate A ar wenwyndra cisplatin yn gofyn am actifadu AMPK. Fel y dangosir yn Ffig. 3C, cynyddwyd mynegiant protein o p-AMPK, ffurf weithredol o AMPK, gan pandurate A tra'i fod wedi'i leihau gan cisplatin. Yn ogystal, penderfynwyd effaith amddiffynnol pandurate A o dan ataliad AMPK. Yn ddiddorol, nid oedd deor y celloedd â 10 µM cyfansawdd C, atalydd o AMPK, yn gwanhau effaith amddiffynnol pandurate A ar hyfywedd celloedd (Ffig. 3D). Mae'r canlyniadau hyn yn dangos y gallai effaith amddiffynnol pandurate A gael ei gyfryngu gan fecanweithiau AMPK-annibynnol. Nesaf, gwnaethom archwilio effaith pandurate A ar rai proteinau sy'n ymwneud ag apoptosis celloedd a achosir gan cisplatin. Fel y dangosir yn Ffig. 4, cynyddodd cisplatin yn sylweddol broteinau pro-apoptotig p-ERK1/2 a caspase hollt 3. Gostyngodd cisplatin fynegiant protein gwrth-apoptotig Bcl-2. Roedd cyd-driniaeth â pandurate A yn gwrthdroi mynegiant y proteinau hyn. Gan fod ROS yn ffactor mawr sy'n ymwneud ag apoptosis celloedd arennol a achosir gan cisplatin, 11,27) fe wnaethom bennu effaith panduratin A ar groniad ROS oherwydd cisplatin. Cynyddodd cisplatin lefelau mewngellol o ROS yn sylweddol. Yn ddiddorol, panduratin Mae cryn dipyn yn llai o groniad ROS a achosir gan cisplatin.
Nid yw Panduratin A yn Effeithio Croniad Cellog o Cisplatin OCT2cyfryngu cludiant cisplatin i'r celloedd tiwbaidd procsimol arennol dynol.289 Er mwyn archwilio'r posibilrwydd o panduratin A yn lleihau cronni cisplatin, fe wnaethom fesur swyddogaeth cludo OCT2. Dangosodd y canlyniadau nad oedd deori celloedd â 5uM panduratin A am 10 munud a 24 awr yn cael unrhyw effaith ar groniad cellog H-1-methyl-4-phe-nylpyridinium (H-MPP plus ), swbstrad o OCT2. Nesaf, cadarnhawyd effaith panduratin A ar groniad cellog cisplatin. Ni chafodd Panduratin A unrhyw effaith sylweddol ar y croniad platinwm yn y celloedd arennol dynol (Ffig. 5).
Nid yw Effaith Amddiffynnol Panduratin A yn Effeithio ar Weithgaredd Gwrth-ganser CisplatinPenderfynwyd ar effaith Panduratin A ar wenwyndra cisplatin mewn llinellau celloedd canser. Gostyngwyd gallu celloedd HCT116 ac A549 sy'n llinellau celloedd canser y colon a'r ysgyfaint, yn y drefn honno, yn sylweddol 72h ar ôl triniaeth â cisplatin (50μuM). Ni wnaeth cyd-driniaeth â panduratin A (5μM) wanhau cytowenwyndra cisplatin. Yn ddiddorol, roedd panduratin A ynddo'i hun hefyd yn lleihau'r
TRAFODAETH
Mae'r astudiaeth bresennol yn datgelu bod panduratin A yn lleihau neffrowenwyndra cis-platin heb amharu ar weithgaredd gwrthganser cisplatin mewn llinellau celloedd canser yr ysgyfaint y colon a'r celloedd nad ydynt yn fach. Gwnaethom ddangos bod cyd-driniaeth â panduratin A yn gwanhau acíwtanaf i'r arennaumewn llygod a achosir gan cisplatin. Er bod yr astudiaeth bresennol yn dangos yr effaith amddiffynnol ar cisplatin a achosiranaf i'r arennau,ni nodir prif darged panduratin A. Gallai Panduratin A actifadu AMPK mewn celloedd tiwbaidd procsimol arennol (Ffig. 3) a mathau eraill o gelloedd.30-2)Mae'n ymddangos yn annhebygol bod effaith amddiffynnol panduratin A yn gofyn am actifadu AMPK gan fod tystiolaeth yn dangos bod ataliad o AMPK gan ddefnyddio atalyddion cemegol ni newidiodd effaith amddiffynnol graddfa Pandu A. Panduratin Gwell swyddogaeth arennol fel y dangosir gan creatinin serwm gostyngol. Mae cydberthynas rhwng swyddogaeth arennol â nam cisplatin ag anafiadau tiwbyn arennol megis dirywiad, ffurfio castiau luminal, gwaedlif, ac ymlediad. Roedd cydberthynas dda rhwng canlyniadau anaf tiwbyn arennol â'n data sy'n dangos ymsefydlu mynegiant NGAL ynarenmeinwe llygod wedi'u trin â cisplatin. Yn ogystal, ategir y dystiolaeth hon gan yr astudiaeth flaenorol sy'n dangos bod NGAL yn cael ei fynegi'n amlwg mewn tiwbiau arennol yn dilyn aciwt.anaf i'r arennaua achosir gan cisplatin.3) Yn ddiddorol, cyd-drin y llygod â panduratin Anaf tiwbyn arennol wedi'i wanhau gan cisplatin. Dangosodd y dadansoddiad histolegol fod cisplatin yn cynyddu ymdreiddiad celloedd mononiwclear a diddymwyd yr effaith hon gan panduratin A. Mae'r canlyniadau hyn yn awgrymu y gallai panduratin A, a ddangoswyd yn flaenorol yn wrth-lid, 24.3435) wanhau effaith llidiol cisplatin mewn meinwe arennol. Gallai actifadu MAPK achosi marwolaeth celloedd.2415) Dangosodd ein canlyniadau fod cisplatin yn ysgogi actifadu ERK1/2 a caspase 3. Roedd mynegiadau o'r proteinau hyn yn cael eu gwanhau gan panduratin A.
Adroddwyd am lwybrau lluosog sy'n cyfrannu at neffrowenwyndra a achosir gan cisplatin (gan gynnwys apoptosis, straen ocsideiddiol, a llid).4 Fe wnaethom ddefnyddio llinell gell RPTEC/TERT1 i nodi mecanweithiau panduratin A sy'n lleddfu gwenwyndra a achosir gan cisplatin mewn celloedd tiwbaidd arennol procsimol dynol. Mae celloedd RPTEC/TERT1 wedi'u hawgrymu fel model celloedd arennol ar gyfer gwenwyndra a achosir gan xenobiotig.36 Mae panduratin A yn arddangos effaith amddiffynnol mewn perthynas â sytowenwyndra cisplatin fel y dangosir gan ostyngiad yn apoptosis celloedd RPTEC/TERT1. Mae mecanweithiau gwenwyndra cisplatin mewn celloedd tiwbaidd procsimol arennol yn gymhleth. Mae actifadu ERK1/2 a caspase 3 a disbyddiad Bcl-2 wedi'u cysylltu ag apoptosis celloedd arennol oherwydd cisplatin.373) Yn gyson ag astudiaethau blaenorol, dangosodd yr astudiaeth bresennol fod cisplatin yn cynyddu mynegiant p-ERK1/2 a caspase hollt 3 ac yn lleihau mynegiant Bcl-2. Mae ein canlyniadau'n dangos bod panduratin A yn atal proteinau signalau apoptotig a achosir gan cisplatin, p-ERK1/2 a caspase hollt 3, ac yn cynnal protein gwrth-apoptotig. Bcl-2. Yn ychwanegol at actifadu ERK1/2 a caspase 3, mae mwy o grynhoad ROS mewngellol yn ffactor allweddol mewn apoptosis celloedd arennol oherwydd cisplatin.139 Adroddodd astudiaeth flaenorol fod panduratin A yn amddiffyn rhag difrod ocsideiddiol mewn hepatocytes trwy leihau ffurfiant ROS mewngellol a achosir gan adweithiol canolradd.4 Gallai'r gostyngiad mewn croniad ROS yn dilyn triniaeth â panduratin A gael ei gyfryngu naill ai trwy atal cynhyrchu ROS neu gynnydd mewn adwaith sborion ROS. Fe wnaethom adrodd bod panduratin Mae lefel glutathione uwch, moleciwl sborion ROS, a allai leihau cronni ROS mewn meinwe arennol (gweler deunyddiau atodol). Fodd bynnag, nid ydym yn diystyru bod mecanweithiau eraill yn gysylltiedig â lleihau ROS. Datgelodd ein canlyniadau fod panduratin A yn lleihau cronni ROS mewngellol, sy'n cyfrannu at effaith amddiffynnol panduratin A. Lefel fewngellol cisplatin yw'r prif ffactor sy'n effeithio ar ddifrifoldeb gwenwyndra a achosir gan cisplatin. Dywedwyd bod cludwyr arennol megis OCT2, cludwyr copr a chludwyr allwthio amlgyffuriau a thocsin-1 (MATE1) yn cyfrannu at gludo cisplatin.4)Fodd bynnag, caiff cludo cisplatin i'r celloedd tiwbaidd procsimol arennol ei gyfryngu'n bennaf gan OCT2. Dangoswyd bod atal OCTs yn gwanhau gwenwyndra arennol a achosir gan cisplatin mewn celloedd arennol meithrinedig ac anifeiliaid.发9,42） Fodd bynnag, mae'n ymddangos yn debygol nad yw panduratin A yn effeithio ar swyddogaeth cludo OCT2 na chroniad cisplatin sy'n awgrymu effaith amddiffynnol panduratin A yn erbyn nid yw gwenwyndra cisplatin yn cael ei gyfryngu trwy leihau cludiant neu groniad cisplatin.
BYDD CISTANCHE YN GWELLA POEN YN YR AREN/ARENIAD
Mae Panduratin A yn arddangos effeithiau ad-amddiffynnol trwy atal apoptosis celloedd arennol. Pe bai panduratin A hefyd yn atal apoptosis celloedd canser, byddai'n lleihau effeithiolrwydd cemotherapi. Felly, gwnaethom brofi a yw panduratin A yn lleihau gweithgarwch gwrthganser cisplatin. Yn arwyddocaol, nid yw cyd-driniaeth â sgôr Pandu A yn newid gweithgaredd gwrth-ganser cisplatin mewn celloedd canser y colon neu gelloedd canser yr ysgyfaint nad ydynt yn fach. Ar ben hynny, mae panduratin A ei hun yn wenwynig i'r ddwy linell gell canser. Mae'r canlyniadau'n dangos bod effaith panduratin A yn ddetholus, gan effeithio'n wahanol ar gelloedd arennol arferol a chelloedd canser. Er y gallai cyfnod cyfan A fod yn gyfrwng da ar gyfer atal neffrowenwyndra a achosir gan cisplatin, dylid ymchwilio i'r wybodaeth am effeithiau ffarmacolegol panduratin A o dan fodel xenograft sy'n glinigol berthnasol yn y dyfodol.
CASGLIAD
Dangosodd ein hastudiaeth bresennol fod panduratin A yn darparu effaith amddiffynnol amlwg ar neffrowenwyndra cisplatin trwy leihau straen ocsideiddiol ac atal actifadu ERK1/2 a caspase 3. Ni newidiodd effaith amddiffynnol panduratin A weithgaredd gwrth-ganser cisplatin mewn celloedd canser. Er y gallai rhwystro rhai digwyddiadau niweidiol ond gael effeithiau ad-amddiffynnol rhannol, gallai panduratin A fod yn asiant ymgeisiol da i liniaru neffrowenwyndra cisplatin oherwydd ei fod yn lleihau gwenwyndra cisplatin trwy fecanweithiau lluosog.