Effaith Amddiffynnol Olew Hanfodol Thymws Serrulatus Ar Neffrowenwyndra a Achosir gan Gadmiwm mewn Llygod Mawr, Trwy Atal Straen Ocsidyddol A Phrisio Mynegiant NF-κB, INOS, a Smad2 MRNA
Mar 17, 2022
Cyswllt: ali.ma@wecistanche.com
Mohd Nazam Ansari1,*, Najeeb Ur Rehman1,*, Aman Karim2, Faisal Imam3 ac Abubaker M. Hamad4,5
Cistanche deserticola ma ar gyfer clefyd yr arennau, cliciwch yma i gael y sampl
Crynodeb:
Pwrpas yr ymchwil oedd archwilio effaith amddiffynnol olew hanfodol o thymus serru latus Hochst. cyn Benth. (olew TSA) yn erbyncadmiwm(Cd)-wedi'i ysgogiarennolgwenwyndra. Cynlluniwyd y protocol arbrofol gan ddefnyddio 30 o lygod mawr Wistar albino oedolion iach a neilltuwyd i grwpiau ffeil yn cynnwys chwe anifail ym mhob grŵp. Cafodd grŵp 1 ei drin fel rheolaeth arferol a chafodd grwpiau 2,3, 4, a 5 eu trincadmiwmclorid (CdCl2, 3 mg/kg, IP) am 7 diwrnod. Cafodd Grŵp 3 hefyd ei drin â silymarin (100 mg / kg, PO) fel grŵp safonol, tra bod grwpiau 4 a 5 yn cael eu rhoi ag olew TSA ar ddosau o 100 a 200 mg / kg PO, yn y drefn honno. Mesurwyd y nephrotoxicity gyda pharamedrau amrywiol megisarenmarcwyr swyddogaeth, marcwyr straen ocsideiddiol (glutathione (GSH) a malondialdehyde (MDA)), a lefelau mynegiant asid riboniwcleig negesydd (mRNA) o ffactorau llidiol. Gwerthuswyd yr astudiaethau histolegol hefyd yn y protocol arbrofol. Dangosodd y grwpiau a gafodd eu trin gan yCdCl gynnydd sylweddol yn lefelau'r serwmarenmarcwyr swyddogaeth ynghyd â lefelau MDA mewn homogenad arennau. Fodd bynnag,arennolCanfuwyd bod lefel GSH wedi gostwng yn sylweddol. Canfuwyd bod CdCl2 wedi uwchraddio'n sylweddol lefelau ffactor niwclear kappaB (NF-κB p65), synthase nitric ocsid anwythadwy (iNOS), a mamau bach yn erbyn decapentaplegic (Smad2) o gymharu â'r grŵp rheoli arferol. Ar y llaw arall, fe wnaeth olew TSA wella'n sylweddol y lefelau cynyddol o farcwyr swyddogaeth arennau serwm, gwrthocsidyddion nad ydynt yn ensymatig, a pherocsidiad lipid. Yn ogystal, fe wnaeth olew TSA ostwng yn sylweddol y mynegiant cynyddol o NF-κBp65, iNOS, a Smad2 mewn llygod mawr meddw Cd. At hynny, cafodd y newidiadau histolegol yn samplau meinwe aren grwpiau a driniwyd â Cd eu lleddfu'n sylweddol yn y grwpiau sy'n cael eu trin ag olew silymarin a TSA. Mae'r astudiaeth bresennol yn datgelu bod olew TSA yn lleddfu a achosir gan Cdarennolanaf, a chynigir hefyd y gallai'r effaith nephroprotective a arsylwyd fod oherwydd potensial gwrthocsidiol olew TSA a iachâd oherwydd ei weithred gwrthlidiol.
Geiriau allweddol:cadmiwm; llid; NF-κB; anaf arennol; Smad 2; Thymus serrulatus
1. Rhagymadrodd
Mae datguddiad cemegol amgylcheddol yn parhau i fod yn broblem iechyd cyhoeddus fawr yn fyd-eang. Mae amlygiad i gadmiwm (Cd), un o'r metelau gwenwynig mwyaf adweithiol, wedi cynyddu yn y biosffer o ffynonellau naturiol ac anthropogenig [1]. Mae'r amlygiad Cd hefyd oherwydd yr halogiad mewn pridd, aer, dŵr, a bwyd, yn ogystal â mwg sigaréts [2]. Mae amsugniad sylweddol uwch ynghyd â chyfradd ysgarthiad is yn arwain at faich cynyddol o Cd mewn gwahanol organau. Gall y Cd niweidio organau lluosog yn dibynnu ar ei ddos, llwybr, a hyd ond mae'n effeithio'n bennafarennauac yn achosi nam arennol [3].
Mae'rarennauyn organau hanfodol yn y corff dynol ac yn gyfrifol am swyddogaethau hanfodol amrywiol, gan gynnwys cael gwared â metabolion niweidiol, gwastraff nitrogenaidd, a rhai cyffuriau ag wrin [4]. Nododd astudiaethau cynharach fod gwenwyndra Cd yn arwain at gamweithrediad anwrthdroadwy oarennoltiwbiau [5] ac yn achosi llai o gael gwared ar y cemegau gwenwynig, cyffuriau, neu'r ddau sy'n arwain at acíwtarenmethiant. Ar ben hynny,arennolgall anaf a achosir gan amlygiad cronig o CD arwain at fethiant cronig yn yr arennau ac os na chaiff ei drin gall arwain at farwolaeth [6,7]. Mae cronni CD mewn tiwbiau troellog agos yn rhwystro adamsugniad tiwbaidd ac yn arwain at polyuria a phroteinwria. Bu astudiaethau o effeithiau annormal cyffredin Cd ar weithrediad yr arennau, ond mae diffyg gwybodaeth fanwl o hyd am fecanweithiau moleciwlaidd ac mae angen archwilio hyn ymhellach [8].
Datgelodd astudiaethau dros yr ychydig ddegawdau diwethaf fod y tebygolrwydd mwyaf oarennoldifrod oherwydd rhyddhau Cd yn y gell sy'n ysgogi straen ocsideiddiol [9,10]. Un o'r mecanweithiau a awgrymir yw'r aflonyddwch yn y system amddiffyn gwrthocsidiol naturiol, sy'n achosi gorgynhyrchu radicalau rhydd o ocsigen (OFR) [11] ymhellach ac yn arwain at ostyngiad mewn lefelau glutathione (GSH) ac, yn ei dro, apoptosis ocsideiddiol sy'n gysylltiedig â straen [ 12]. Allan o nifer o fecanweithiau a adroddwyd, mae llai o gynnwys GSH a difrod celloedd a achosir gan OFR yn bennaf gyfrifol am berocsidiad lipid [13,14].
Mae llenyddiaeth flaenorol hefyd yn canfod bod y gydberthynas rhwng straen ocsideiddiol a llid yn gwella amrywiolarennolafiechydon [15]. Felly, gellir awgrymu bod gwenwyndra arennol yn cael ei achosi gan Cd trwy lwybrau signalau mewngellol cymhleth sy'n cael eu cyfeirio'n bennaf gan straen ocsideiddiol. Mae ffactor niwclear-κB (NF-κB) yn rheoli nifer o enynnau llidiol ym mhob math o gelloedd [16]. NF-κB yw prif achos amrywiolarenclefydau a gellir ei actifadu gan amlygiad Cd. Mae clefyd cronig yn yr arennau wedi'i ganfod mewn modelau dynol ac anifeiliaid trwy ddadreoleiddio proteinau Smad2 [9]. Nododd astudiaethau cynharach y gallai is-reoleiddio NF-κB a Smad2 fod yn fecanweithiau buddiol ar gyfer y cyffuriau gwrthlidiol [17].
Ymhlith y polisïau triniaeth, rhagdybir mai gwanhau straen ocsideiddiol a achosir gan Cd gan ddefnyddio gwrthocsidyddion naill ai o ffynonellau naturiol neu synthetig yw'r prif ddull posibl o drin neffrowenwyndra a achosir gan Cd. Felly, mae ymchwilwyr yn ddiweddar wedi ceisio mecanweithiau amddiffynnol yn erbyn gwenwyndra a achosir gan gemegau neu gyffuriau ac maent hefyd wedi ystyried cyfansoddion sy'n weithredol yn fiolegol ag effaith gwrthocsidiol ac llidiol [18,19].
Mewn gwahanol rannau o'r byd, mae gwahanol rywogaethau o'r genws Thymus wedi'u defnyddio'n draddodiadol i drin anhwylderau amrywiol megis broncitis, asthma, pertwsis, laryngitis, tonsilitis, a pheswch [20]. Thymus serrulatus Hochst. Mae Ex Benth (teulu Lamiaceae) yn tyfu yn Ethiopia ac yn draddodiadol fe'i defnyddiwyd i drin y ffliw [21] a pheswch [22]. Mae T. serrulatus yn is-lwyn lluosflwydd â llawer o ganghennau sy'n tyfu ym mharthau Afromontane ac Afroalpine yn Ethiopia ac Eritrea [23].
Adroddwyd bod T. serrulatus yn meddu ar weithgareddau anthelmintig, gwrthfacterol, ffwngladdol [23], diuretig [22], vasodilatory [24], a gwrthhyperlipidemig [25]. Ymhellach, adroddwyd bod gan olew hanfodol T. serrulatus (olew TSA) briodweddau antiseptig, gwrthffyngaidd a vermifuge, ymhlith eraill [26]. Dangosodd olew hanfodol y planhigyn o wahanol ardaloedd Ethiopia weithgaredd hepatoprotective addawol mewn llygod mawr [27]. Yn ogystal, mae astudiaethau blaenorol wedi dangos bod cydberthynas gadarnhaol rhwng gweithgareddau ffarmacolegol yr olew hanfodol â phresenoldeb cynhwysion actif fel thymol, carvacrol, p-cymene, -terpinene, ac asid rosmarinig [26,27]. Ar y llaw arall, mae thymol a carvacrol, sydd wedi'u canfod fel prif gyfansoddion mewn olew hanfodol, yn gynhyrchion naturiol pwysig gyda gweithgareddau sborionu radical rhad ac am ddim ac eiddo gwrthocsidiol [28]. Nododd astudiaeth flaenorol fod gan gyfuniad o thymol a carvacrol nephroprotective synergaidd
effaith y gellid ei phriodoli i weithgareddau gwrthocsidiol, gwrthlidiol ac antiapoptotig [29]. Yn ogystal, mae thymol a carvacrol, sydd wedi'u canfod fel prif gyfansoddion mewn planhigion sy'n cynnwys olew hanfodol, hefyd wedi achosi gostyngiad yn yr imiwnoglobwlin E (IgE), interleukin -4 (IL-4), interleukin{ Lefelau {6}} (IL-5), ac interleukin-13 (IL-13) yn ogystal â nifer y celloedd llidiol sy'n achosi anhwylderau llwybr anadlu [30].
Hyd y gwyddom, ni adroddwyd am effaith T. serrulatus ar neffrowenwyndra. Felly, yn yr astudiaeth hon, fe wnaethom ddamcaniaethu a cheisio ymchwilio i effaith nephroprotective yr olew hanfodol a echdynnwyd o T. serrulatus o darddiad Ethiopia yn erbyn neffrowenwyndra a achosir gan Cd gan ddefnyddio llygod mawr Wistar albino trwy werthusoarenmarcwyr swyddogaeth, marcwyr llidiol, statws gwrthocsidiol, a newidiadau histolegol.
2. Canlyniadau
2.1. Cynnyrch Olew Hanfodol ( y cant )
Rhoddodd hydrodistyllu rhan awyrol y T. serrulatus 0.09 y cant (v/w) olew hanfodol melyn golau gydag arogl nodweddiadol.
2.2. Effaith Olew TSA ar Fiofarcwyr Gweithrediad yr Arennau
Canfuwyd bod lefelau wrea gwaed, asid wrig, creatinin, a nitrogen wrea gwaed (BUN) yn sylweddol uwch (p < 0.01)="" mewn="" llygod="" mawr="" a="" gafodd="" eu="" trin="" â="" cd="" yn="" unig="" (3="" mg/kg,="" ip="" )="" am="" 7="" diwrnod.="" fodd="" bynnag,="" fe="" wnaeth="" gweinyddu="" olew="" tsa="" a="" silymarin="" mewn="" llygod="" mawr="" meddw="" cd="" wella'r="" gyfradd="" a="" achosir="" gan="" cd="" yn="">arendifrod fel y nodir gan lefelau ataliedig o wrea gwaed, asid wrig, creatinin, a BUN (Ffigur 1A–D).
2.3. Effaith Olew TSA ar Berocsidiad Lipid a Straen Ocsidiol
Mae'rarennoldangosodd meinwe llygod mawr lefelau perocsidiad lipid sylweddol uwch o ran MDA a gostyngiad mewn cynnwys GSH ar ôl gweinyddu Cd. Yn ogystal, mae triniaeth olew TSA ar ddosau o 100 a 200 mg/kg yn lleihau'r lefelau MDA yn dibynnu ar ddosau mewn llygod mawr meddw Cd. Ymhellach, roedd lefelau GSH yn sylweddol uwch yn y grwpiau TSA-trin olew a silymarin o gymharu â'r grŵp Cd (Ffigur 2A, B).
2.4. Effeithiau TSA Oil ar p65, NF-κB, iNOS, a Mynegiant mRNA Smad2
Aseswyd y newidiadau yn y digwyddiadau signalau gan blotio Gorllewinol. Awgrymodd dadansoddiad blot gorllewinol fod datguddiad Cd yn sylweddol (p < 0.001)="" wedi="" dadreoleiddio="" mynegiant="" mrna="" nf-κb="" p65,="" inos,="" a="" smad2="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" cyfeirio.="" roedd="" triniaeth="" olew="" tsa="" yn="" is-reoleiddio="" mynegiant="" mrna="" p65,="" nf-κb,="" inos,="" a="" smad2="" yn="" sylweddol="" mewn="" modd="" dos-ddibynnol="" o'i="" gymharu="" â="" llygod="" mawr="" a="" oedd="" yn="" destun="" datguddiad="" cd="" yn="" unig="" (ffigur="">
2.5. Effaith Olew TSA ar Histopatholeg
Dangosodd dadansoddiad histopatholegol o lygod mawr y grŵp rheoli normalarenpensaernïaeth histolegol gyda thiwbiau troellog arferol, glomerwlws, a chapsiwl Bowman gyda gofod arferol yn ogystal â statws arferol ffibrau colagen a deunyddiau asid cyfnodol-Schiff (PAS) - positif fel pilen islawr (Ffigur 4). Mae ffotomicrograffau o'r grŵp gwenwynig yn dangos glomeruli annormal (G), dirywiad (D), a necrosis (N) o tiwbiau troellog, a gofod Bowman dirywiol a bron yn absennol. Mae tiwbiau troellog annormal yn dynodi aflonyddwch histolegol (T), wedi'i rwystro gan feinwe difrodi (B), a necrosis. Mae ffotomicrograph o grŵp gwenwynig lliw trihome Masson (MT) yn dangos cynnydd mewn deunyddiau colagenig (C). Ar ben hynny, mae photomicrograph y grŵp gwenwynig lliw PAS yn dangos dyddodiad annormal o ddeunyddiau PAS-positif (P) a ddadleoliodd parenchyma'r aren; mae hefyd yn dangos gwendid neu golled pilen islawr gyfan (L). Fe wnaeth triniaeth ag olew TSA ar ddogn isel adfer y glomeruli arferol a thiwbiau troellog arferol, er bod ychydig o ddioddef o hyd o effeithiau gwenwynig ar ffurf tiwbiau blocio (B) ac ychydig mwy o ddeunydd colanig (C), yn ogystal â dyddodiad annormal o Deunyddiau PAS-positif (P). Roedd triniaeth ag olew TSA ar ddogn uchel yn rhoi lluniau histolegol o olwg histolegol bron yn normal yn agos iawn at olwg y driniaeth safonol (chwyddiad 400 × a bar graddfa 20 µm ar gyfer pob ffotomicrograff).
3. Trafodaeth
Yn yr amgylchedd, mae metelau trwm fel arfer yn bresennol ac yn dueddol o amsugno, ocsideiddio, ac ymyrryd â thynged celloedd. Yn arbennig, mae Cd yn gyfansoddyn diwydiannol naturiol sy'n achosi nifer o effeithiau gwenwynig a pheryglus, gan gynnwys nephrotoxicity, ar iechyd pobl [31,32]. Mae ei ddyddodiad mewn amrywiol organau yn achosi straen ocsideiddiol sy'n gwanhau swyddogaeth y system gwrthocsidiol frodorol ac, o ganlyniad, yn arwain at ddatblygiad afiechydon patholegol difrifol amrywiol [33]. Mae llwybr gwenwyndra a achosir gan Cd yn cynnwys cynhyrchu rhywogaethau ocsigen adweithiol (ROS), sydd wedyn yn achosi anaf arennol [34]. Felly, gellir tybio y gallai gwrthocsidyddion fod yn darged da ar gyfer yr ymagwedd therapiwtig bosibl tuag at wenwyndra sy'n gysylltiedig â Cd [35]. Yn yr adroddiad hwn, astudiwyd effaith liniaru addawol olew TSA ar straen ocsideiddiol a achosir gan Cd ac anaf arennol gan ddefnyddio llygod mawr.
Gall niwed arennol difrifol a achosir gan Cd fod yn gysylltiedig â lefelau serwm uchel o wrea, asid wrig, a creatinin oherwydd gollyngiadau i'r llif gwaed [36,37]. Yn yr astudiaeth bresennol, adroddwyd hefyd am lefelau sylweddol uwch o wrea, asid wrig, a creatinin mewn serwm ar ôl dod i gysylltiad â Cd am 7 diwrnod, a gadarnhaodd yr anaf arennol difrifol (Ffigur 1). Mae'r canlyniadau a arsylwyd yn ategu astudiaethau blaenorol [19,38]. Mae gweinyddu olew TSA ar y ddau ddos (100 a 200 mg / kg, PO) yn gwella camweithrediad arennol a achosir gan Cd yn sylweddol a ategwyd gan y gostyngiad yn lefelau serwm wrea, asid wrig, a creatinin. Yn yr astudiaeth bresennol, sylwyd bod datguddiad Cd yn arwain atarendifrod trwy wella perocsidiad lipid ac aflonyddu ar y system gwrthocsidiol naturiol, gan ddangos mwy o straen ocsideiddiol. Mae canfyddiadau a arsylwyd yn awgrymu y gallai olew TSA atal newidiadau a achosir gan Cd mewn newidynnau sy'n gysylltiedig â gwrthocsidyddion mewn llygod mawr. Mae'r canfyddiadau hyn yn cyd-fynd â rhai Kawamoto et al. [39], a adroddodd berocsidiad lipid cynyddol ar ôl datguddiad Cd. Nododd astudiaethau cynharach fod amlygiad cronig o Cd wedi arwain at lai o wrthocsidyddion nonnzymatic (meinwe GSH) [40]. Mae canfyddiadau o'r astudiaeth bresennol yn ategu rhai Koyuturk et al. [41], a ddisgrifiodd lai o gynnwys GSH arennol mewn llygod mawr meddw Cd. Gallai'r gostyngiad mewn cynnwys GSH fod oherwydd ei ddefnydd wrth atal perocsidiad lipid a achosir gan straen ocsideiddiol [41] a dadwenwyno metelau trwm [42,43]. Fodd bynnag, mae ein canfyddiadau yn anghytuno â rhai Kamiyama et al. [44], a ddisgrifiodd lefel uwch o GSH arennol mewn llygod mawr wedi'u trin â CD. Cafodd lefel perocsidiad lipid a gwrthocsidydd mewn llygod mawr wedi'u trin â CD eu modiwleiddio'n sylweddol â gweinyddiaeth olew TSA, gan nodi gostyngiad mewn ROS, ail-gydbwyso'r system amddiffyn gwrthocsidiol, neu'r ddau. Mae'r canfyddiadau hyn yn ategu rhai astudiaeth gynharach a ddisgrifiodd effaith liniarul thymoquinone yn erbyn anaf arennol a achosir gan gemegau [45].
Mae apoptosis yn digwydd mewn meinweoedd ac yn amrywio o necrosis o dan rai anhwylderau swyddogaethol [46]. Mae apoptosis yn un o brif nodweddion sy'n gysylltiedig â CDarenanaf. Yn gynharach, disgrifiwyd bod gwenwyndra Cd yn achosi apoptosis mewn tiwbiau procsimol trwy ysgogi'r llwybr NF-kB, sy'n cyfrannu at gamweithrediad arennol [47,48]. Yn yr astudiaeth hon hefyd, gwelwyd cynnydd mewn mynegiant protein NF-kBp65 mewn llygod mawr wedi'u trin â CD. Fodd bynnag, fe wnaeth rhoi olew TSA mewn llygod mawr wedi'u trin â CD adfer mynegiant protein NF-kBp65 yn sylweddol. Mae'r canfyddiadau a arsylwyd yn cyd-fynd â'r canfyddiadau blaenorol [18,19]. Felly, mae ataliad NF-kB mewn llygod mawr meddw Cd wedi dangos tystiolaeth o allu gwrthlidiol olew TSA.
Mae synthase nitrig ocsid anwythol (iNOS) yn cael ei fynegi'n fawr mewn cyflyrau llidiol a heintiau. Felly, mae'n elfen hanfodol o ymateb addasol y gwesteiwr i ysgogiadau gwenwynig. Adroddwyd yn gynharach bod anaf arennol a achosir gan Cd yn cael ei gyfryngu gan synthesis nitrig ocsid gan ysgogiad iNOS [49]. Yn yr astudiaeth hon hefyd, canfuwyd bod amlygiad i Cd yn achosi mwy o fynegiant iNOS (Ffigur 3B), tra gallai olew TSA ar y ddau ddos wrthdroi mynegiant iNOS yn sylweddol mewn llygod mawr meddw Cd.
Nododd llenyddiaeth flaenorol fod Cd yn un o'r metelau trwm mwyaf gwenwynig a'i fod yn cael ei amsugno'n bennaf gan y tiwbiau procsimol a'i gronni'n bennaf yn y cortecs arennol, sy'n arwain at friwiau mewn tiwbiau troellog procsimol [50]. Mae'r canfyddiadau hyn yn ategu rhai'r astudiaeth bresennol. Uwchgaptenarengwiriwyd y difrod gan bresenoldeb difrod sylweddol i glomeruli mewn llygod mawr wedi'u trin â CD. Mae'r canfyddiadau hyn yn ategu canfyddiadau Damek Poprawa a Sawicka-Kapusta [51], a adroddodd atroffi capilarïau glomerwlaidd a necrosis tiwbynau cyfagos. Mae canfyddiadauarenmarcwyr swyddogaeth a marcwyr straen ocsideiddiol - lle gwnaeth olew TSA leddfu newidiadau dirywiol a achosir gan Cd a gwellaarenswyddogaeth oherwydd ei effeithiau gwrthocsidiol a gwrthlidiol posibl - wedi'u cadarnhau gan arsylwadau histopatholegol.
4. Defnyddiau a Dulliau
4.1. Cemegau ac Adweithyddion
Cafwyd cadmiwm clorid (CaCl2) gan Sigma Chemicals Co. (St. Louis, MO, UDA).Arennaucafwyd citiau diagnosteg swyddogaeth gan Crescent Diagnostics (Jeddah, KSA). Cafodd gwrthgyrff (cynradd yn ogystal ag uwchradd) eu caffael gan Santa Cruz (Dallas, TX, UDA). Roedd y cemegau a ddefnyddiwyd o radd ddadansoddol ac o ansawdd uchel nad oedd angen eu puro ymhellach.
4.2. Deunydd Planhigion ac Echdynnu
Rhannau ffres o'r awyr o T. serrulatus Hochst. cyn casglwyd Benth o ardal Amba Alajemountain, De Tigray, Ethiopia. Dilyswyd y deunydd planhigion gan fotanegydd, Dr. Getinet Masresha, Adran Bioleg, Prifysgol Gondar, a chafodd y sbesimen ei adneuo yn llysieufa'r brifysgol (TH-001/2011).
Cafodd y rhannau ffres o'r awyr eu torri'n ddarnau bach a'u hydrodistyllu am 3 h gan ddefnyddio cyfarpar Clevenger. Perfformiwyd hydrodistyllu 11 gwaith nes bod swm digonol wedi'i gasglu. Sychwyd yr olew hanfodol a gafwyd gan ddefnyddio sodiwm sylffad anhydrus a'i storio mewn cynhwysydd caeedig dynn ar 4 ◦C nes ei ddefnyddio ymhellach [26]. Mynegwyd y cynnyrch olew hanfodol a gyfrifwyd mewn canran (y cant v/w), yn seiliedig ar bwysau'r deunydd planhigion ffres.
4.3. Anifeiliaid
Cafwyd tri deg o lygod mawr albino gwrywaidd yn pwyso 180-220 g gan Animal House, Coleg Fferylliaeth, Prifysgol Tywysog Sattam Bin Abdulaziz (PSAU), KSA. Cafodd llygod mawr eu cynefino am 1 wythnos a'u cynnal o dan gylchoedd golau/tywyll 12 h gyda chyfleusterau labordy safonol. Yn ystod y cyfnod arbrofol a chynefin, roedd anifeiliaid yn cael eu bwydo â diet pelenni a mynediad am ddim i ddŵr. Dilynwyd Cyfarwyddiadau a Chanllawiau a ddarparwyd gan yr uned gofal anifeiliaid, PSAU, KSA, wrth gynnal yr holl arbrofion. Cafodd y protocol ei gymeradwyo ymlaen llaw gan y Pwyllgor Ymchwil Bio-foesegol (BERC), PSAU (BERC-004-12-19).
4.4. Dylunio Arbrofol
Ar gyfer asesu effaith nephroprotective olew TSA yn erbyn gwenwyndra a achosir gan Cd, dyrannwyd llygod mawr ar hap yn bum grŵp (n=6). Derbyniodd Grŵp 1 (rheolaeth arferol) hydoddiant halen ffisiolegol (0.9 y cant NaCl) bob dydd am 7 diwrnod. Derbyniodd Grŵp 2 (rheolaeth wenwynig) gadmiwm clorid (3 mg/Kg, IP, 7 diwrnod). Cafodd Grŵp 3 (rheolaeth gadarnhaol) ei gydweinyddu CdCl2 a silymarin (100 mg/kg, PO) am 7 diwrnod yn olynol. Cafodd grwpiau 4 a 5 eu cydweinyddu olew CdCl2 a TSA ar ddosau o 100 a 200 mg / Kg (PO, 7 diwrnod), yn y drefn honno. Dewiswyd y dos o CdCl2 yn seiliedig ar lenyddiaeth a adroddwyd yn flaenorol [19,52].
Ar ôl 24 h o driniaeth, anestheteiddiwyd yr holl lygod mawr gwrywaidd gydag ychydig bach o ether diethyl i gasglu'r samplau gwaed o plexws retro-orbital ac yna centrifugation, a pherfformiwyd gwahanu serwm a'i storio ar −20 ◦C nes ei ddefnyddio ymhellach. am benderfynuarenmarcwyr swyddogaeth (fel asid wrig, creatinin, ac wrea). Ar ôl casglu serwm llwyddiannus, cafodd y ddwy aren eu hynysu oddi wrth yr holl lygod mawr. Y chwitharenyn cael ei storio ar unwaith ar −80 ◦C nes bod dadansoddiad pellach o'r marciwr straen ocsideiddiol (MDA a GSH) a dadansoddiad blot y Gorllewin. Yn y cyfamser, roedd yr aren gywir yn cael ei storio ar gyfer astudiaethau histopatholegol.
4.5. Pennu Biomarcwr Gweithrediad yr Arennau
sBiomarcwyr oarengwerthuswyd swyddogaeth, hy, asid wrig, wrea, a creatinin, trwy ddefnyddio pecynnau masnachol penodol yn unol â'r dulliau a grybwyllir ym mhrotocolau gweithgynhyrchwyr.
4.6. Pennu Marcwyr Straen Ocsidiol yn yr Arennau
Cafodd meinweoedd eu homogeneiddio a'u briwgig (10 y cant w/v) mewn byffer ffosffad 0.1 M oerfel iâ ar pH 7.4, a chafodd yr hydoddiant ei allgyrchu am 30 munud ar 12,000 × g a 4 ◦ C. Defnyddiwyd y homogenad a gafwyd ar gyfer amcangyfrif lefelau GSH ac MDA.
Amcangyfrifwyd marciwr perocsidiad lipid MDA trwy ddefnyddio dull a ddisgrifiwyd yn flaenorol [53]. Yn gryno, cafodd 0.25 ml o homogenad ei ddeor ar dymheredd o 37 gradd am 1 h mewn ysgydwr metabolig. Ar ôl deori, ychwanegwyd 0.5 mL o 0.67 y cant o asid thiobarbitwrig (TBA) a 0.5 mL o 5 y cant (w/v) asid trichloroasetig oer (TCA) , ac yna centrifugation (1000 × g, 15 mun). Wedi hynny, cadwyd y supernatant mewn baddon dŵr berw am 10 munud. Mesurwyd yr amsugnedd a ddatblygwyd ar 535 nm, hy, arsylwyd lliw pinc.
Ar gyfer GSH, mae'r Jollow et al. [54] dull ei ddilyn. Yn gryno, ar ôl dyddodiad o 1 ml PMS gydag 1 ml o asid sylffosalicylic (4 y cant ), deorwyd y samplau prawf (4 ◦C, 1 h), ac yna centrifugation (1200 × g , 15 mun, 4 ◦C). Roedd y cymysgedd assay yn cynnwys uwchnatur (0.1 mL), byffer ffosffad (0.1 M, pH 7.4) (1.7 mL), a dithiol-bis-2-asid nitrobenzoig (DTNB) (0.4 y cant mewn byffer ffosffad, 0.1 M, pH 7.4) (0.2 mL) mewn cyfanswm cyfaint o 2.0 mL. Dadansoddwyd amsugnedd samplau ar 412 nm o fewn 5 munud ar ôl ychwanegu DTNB at y cymysgeddau adwaith.
4.7. Techneg Blotiau Gorllewinol
Perfformiwyd dadansoddiad blot gorllewinol ac echdynnu protein fel y crybwyllwyd yn yr astudiaeth flaenorol [55].Arennaubriwgig meinweoedd a pharatowyd y homogenate mewn cymysgedd atalydd proteas a byffer lysis protein oer [55]. Er mwyn ynysu cyfanswm y proteinau, cadwyd y lysates meinwe mewn rhew am 60 munud, gyda vortexing amgen (ar ôl 10 munud), parhaodd gyda'r centrifugation yn 12,000 × g (4 ◦C, 10 mun). Mae dull Lowry et al. [56] ei ddilyn i bennu cyfanswm y protein. Ar gyfer dadansoddiad blotiau Gorllewinol, cafodd protein (25-50 µg) ei ynysu'n fyr o bob grŵp a'i symud i bilenni nitrocellwlos a gafwyd o Bio-Rad USA. Cafodd blociau protein ei rwystro ar unwaith ar 4 ◦C (am 24 h); ar ôl hynny, perfformiwyd deori â gwrthgyrff cynradd yn erbyn NF-κB p65, iNOS, a Smad2 a gwrthgyrff eilaidd peroxidase-conjugated ar dymheredd ystafell. Dadansoddwyd y proteinau gyda chymorth pecyn canfod cemiluminescence (GE Health Care, Mississauga, Canada). Cafodd dwyster bandiau protein ei normaleiddio i fandiau beta-actin gan ddefnyddio'r ImageJ (NIH, Bethesda, UDA). Cafodd delweddau eu dal gyda sganiwr blotiau gorllewinol cemegol aC-Digit a gafwyd gan LI-COR, UDA.
4.8. Dadansoddiad Histopatholegol
Iawnarenrheolwyd meinweoedd sampl wedi'u gosod mewn fformalin niwtral 10 y cant mewn peiriant prosesu meinwe (ASP300s, Leica Biosystems, IL, UDA); cafodd pob sampl ei fewnosod mewn cwyr paraffin a'i sleisio'n adrannau 4–5-µm-trwchus. Dewiswyd tair rhan o bob grŵp a'u staenio â lliw hematoxylin ac eosin (H&E), staen asid-Schiff (PAS) cyfnodol, a staen trichrome Masson (MT) [57]. Dadansoddwyd pob rhan o feinwe gan ddefnyddio microsgop (Olympus BX 52) ar gyfer disgrifiad histopatholegol a gofnodwyd gan histopatholegydd, wedi'i ddallu i'r grwpiau arbrofol. Defnyddiwyd camera Olympus DP21 wedi'i osod dros y microsgop i dynnu lluniau.
4.9. Dadansoddiad Ystadegol
Mynegwyd gwerthoedd fel cymedr ± SEM. Defnyddiwyd dadansoddiad ANOVA unffordd gan ddefnyddio prawf post hocTukey i fesur arwyddocâd data biocemegol y gwahanol grwpiau. Mesurwyd gwahaniaethau yn sylweddol ar werthoedd p < 0.05="" o="" gymharu="" â'r="" grŵp="" rheoli="" arferol="" neu="" reolaeth="" wenwynig.="" cyflawnwyd="" yr="" ymchwiliad="" ystadegol="" gan="" ddefnyddio="" graphpadprim="" v.="" 4.0="">
5. Casgliadau
Daw'r astudiaeth hon i'r casgliad bod olew hanfodol T. serrulatus yn lleddfu nam arennol a achosir gan Cd, a oedd o bosibl wedi'i gyfryngu gan welliant yn y paramedrau straen biocemegol ac ocsideiddiol newidiedig yn ogystal â gwelliant yn y strwythurau histolegol. At hynny, gallai T. serrulatus fod yn gyfrwng priodol i'w ddatblygu yn y dyfodol ar gyfer amddiffyn arennol aaren- anhwylderau cysylltiedig.
Ariannu:Ni dderbyniodd yr ymchwil hwn unrhyw gyllid allanol.
Datganiad Argaeledd Data:Nid yw rhannu data yn berthnasol.
Gwrthdaro Buddiannau:Nid yw'r awduron yn datgan unrhyw wrthdaro buddiannau. Nid oedd gan y cyllidwyr unrhyw rôl yng nghynllun yr astudiaeth; wrth gasglu, dadansoddi neu ddehongli data; yn ysgrifen y llawysgrif; neu yn y penderfyniad i gyhoeddi'r canlyniadau.
Argaeledd Sampl:Mae samplau o olew hanfodol TSA ar gael gan yr awduron.
Cyfeiriadau
1. Dua, TK; Dewanjee, S.; Khanra, R.; Bhattacharya, N.; Bhaskar, B. ; Zia-Ul-Haq, M.; De Feo, V. Effeithiau dau berlysiau bwytadwy cyffredin, Ipomoea dyfrol ac Enhydra fluctuans, ar bathoffisioleg a achosir gan gadmiwm: Ffocws ar amddiffyn ocsideiddiol a mecanwaith gwrth-apoptotig. J. Cyfieithiad. Med. 2015, 13, 245. [CrossRef] [PubMed]
2. Elkhadragy, MF; Abdel Moneim, AE Effaith amddiffynnol dyfyniad methanolig Fragaria ananassa ar cadmiwm clorid (CdCl2) - hepatowenwyndra a achosir gan lygod mawr. Gwenwynig. Mech. Dulliau 2017, 27, 335–345. [CrossRef]
3. Wu, H. ; Liao, Q. ; Chillrud, SN; Yang, Q.; Huang, L.; Bi, J. ; Yan, B. Amlygiad Amgylcheddol i Gadmiwm: Asesiad Risg Iechyd a'i Gysylltiadau â Gorbwysedd a Gweithrediad Arennau â Nam. Sci. Rep. 2016, 6, 29989. [CrossRef]
4. Ferguson, MA; Vaidya, VS; Bonventre, JV Biomarcwyr anaf acíwt i'r arennau neffrotocsig. Tocsicoleg 2008, 245, 182–193. [CrossRef] [PubMed]
5. Ibrahim, MA; Almaden, AH; El Moneim, MA; Tammam, HG; Khalifa, AC; Nasibe, MN Gwenwyndra hematolegol, arennol a hepatig a achosir gan gadmiwm: Y gwelliant gan Spirulina platensis. Saudi J. Med Fforensig. Sci. 2018, 1, 5–13. [CrossRef]
6. Galley, HF A ellir atal methiant arennol acíwt? JR Coll. Surg. Edinb. 2000, 45, 45–50. [PubMed]
7. Finn, W. ; Porter, G. Biomarcwyr wrinol a neffrowenwyndra. Mewn Nephrotocsinau Clinigol, 2il arg.; Cyhoeddwyr Academaidd Kluwer: Norwell, MA, UDA, 2003; 621–655.
8. Prozialeck, toiled; Edwards, JR Mecanweithiau ar gyfer anaf tiwbyn procsimol a achosir gan gadmiwm: Mewnwelediadau newydd gyda goblygiadau ar gyfer biomonitro ac ymyriadau therapiwtig. J. Ffarmacol. Exp. Ther. 2012, 343, 2–12. [CrossRef] [PubMed]
9. Lan, HY Rolau amrywiol TGF-8/Smads mewn ffibrosis arennol a llid. Int. J. Biol. Sci. 2011, 7, 1056–1067. [CrossRef] [PubMed]
10. Luo, T. ; Liu, G. ; Hir, M. ; Yang, J.; Cân, R.; Wang, Y.; Yuan, Y.; Bian, J. ; Liu, X. ; Gu, J. ; et al. Trin difrod ocsideiddiol arennol a achosir gan gadmiwm mewn llygod mawr trwy roi asid alffa-lipoic. Amgylch. Sci. Llygredd. Res. Int. 2017, 24, 1832–1844. [CrossRef] [PubMed]
11. Angeli, JK; Cruz Pereira, CA; de Oliveira Faria, T.; Stefanon, I. ; Padilha, AS; Mae amlygiad Vassallo, DV Cadmiwm yn achosi anaf fasgwlaidd oherwydd straen ocsideiddiol endothelaidd: Rôl angiotensin II a COX lleol-2. Radic Rhad. Biol. Med. 2013, 65, 838–848. [CrossRef]
12. Orororo, OC; Asagba, SO; Tonukari, NJ; Okandeji, OJ; Mbanugo, JJ Effeithiau Hibiscus Sabdarrifa L. Anthocyanins ar Straen Ocsidyddol a Achosir gan Gadmiwm mewn Llygod Mawr Wistar. J. Appl. Sci. Amgylch. Manag. 2018, 22, 465–470. [CrossRef]
13. Inoue, M. Mecanweithiau amddiffynnol yn erbyn rhywogaethau ocsigen adweithiol. Yn Yr Afu: Bioleg a Pathobioleg, 5ed arg.; Arias, IM, Boyer, JL, Fausto, N., Jokoby, WB, Schachter, DA, Shafritz, DA, Eds.; Gwasg Raven: Efrog Newydd, NY, UDA, 2011; 443–459.
14. Yadav, RK; Singh, M.; Roy, S.; Ansari, MN; Saeed, AS; Kaithwas, G. Modiwleiddio'r ymateb straen ocsideiddiol gan olew had llin: Rôl perocsidiad lipid a mecanweithiau gwaelodol. Prostaglandinau Cyfryngol Lipid Arall. 2018, 135, 21–26. [CrossRef] [PubMed]
15. Gong, X. ; Ivanov, VN; Davidson, MM; Mae Hei, TK Tetramethylpyrazine (TMP) yn amddiffyn rhag neffrowenwyndra sodiwm a achosir gan arsenit trwy atal cynhyrchu ROS, camweithrediad mitocondriaidd, llwybrau signalau pro-inflamiadol, a marwolaeth celloedd wedi'i raglennu. Arch. Gwenwynig. 2015, 89, 1057–1070. [CrossRef] [PubMed]
16. Bonizzi, G. ; Karin, M. Y ddau lwybr actifadu NF- KB a'u rôl mewn imiwnedd cynhenid ac ymaddasol. Tueddiadau. Imiwnol. 2004, 25, 280–288. [CrossRef]
17. Imam, F. ; Al-Harbi, DIM; Al-Harbi, MM; Ansari, MA; Al-Asmari, AF; Ansari, MN; Al-Anazi, WA; Bahashwan, A.S.; Almutairi, MM; Alshammari, M.A.; et al. Mae Apremilast yn atal apoptosis a achosir gan doxorubicin a llid yn y galon trwy atal actifadu llwybrau signalau NF-B trwy straen ocsideiddiol. Ffarmacol. Cynrychiolydd 2018, 70, 993–1000. [CrossRef]
18. Erboga, M. ; Kanter, M.; Aktas, C. ; Sener, U.; Erboga, ZF; Donmez, YB; Mae Gurel, A. Thymoquinone yn lleddfu neffrowenwyndra a achosir gan gadmiwm, apoptosis, a straen ocsideiddiol mewn llygod mawr yn seiliedig ar ei briodweddau gwrth-apoptotig a gwrth-ocsidydd. Biol. Trace Elem. Res. 2016, 170, 165–172. [CrossRef]
19. Ansari, MN; Aloliet, RI; Ganaie, MA; Khan, TH; Rehman, N.; Imam, F. ; Mae Hamad, AM Roflumilast, atalydd ffosffodiesterase 4, yn gwanhau gwenwyndra arennol a achosir gan gadmiwm trwy fodiwleiddio actifadu NF-KB ac ymsefydlu NQO1 mewn llygod mawr. Gwariant Dynol. Gwenwynig. 2019, 38, 588–597. [CrossRef]
20. Begrow, F. ; Engelbertz, J.; Feistel, B. ; Lehnfeld, R.; Bauer, K.; Verspohl, EJ Effaith thymol mewn echdynion teim ar eu gweithrediad antispasmodig a chlirio ciliaraidd. Med Planta. 2010, 76, 311–318. [CrossRef]