Mae Serovarau Salmonela Enterica yn Absenoldeb Genynnau Ttra A PduA yn Gwella Ymateb Imiwnedd Celloedd Yn ystod Heintiau Cyw

Salmonela spp. yw un o’r prif bathogenau a gludir gan fwyd sy’n gyfrifol am achosi colledion economaidd i’r diwydiant dofednod a dod â chanlyniadau i iechyd y cyhoedd hefyd. Mae gallu goroesi pathogenau yn yr amgylchedd berfeddol yn ystod llid yn ogystal â'u perthynas â'r system imiwnedd letyol, yn chwarae rhan allweddol yn ystod heintiau mewn dofednod. Amcan yr astudiaeth hon oedd meintioli presenoldeb poblogaethau celloedd macroffagau a CD4+ /CD8+ gan ddefnyddio’r dechneg imiwn-histocemeg, mewn llinachau masnachol o ieir sydd wedi’u heintio’n arbrofol gan fathau gwyllt a mutant o Salmonela. Enteritidis a Salmonela Typhimurium heb genynnau ttrA a pduA. Sbardunodd Salmonela Enteritidis ∆ttrA∆pduA ganran uwch o'r ardal staen na'r math gwyllt, ac eithrio ieir dodwy golau. Mae straen math gwyllt Salmonela Typhimurium a heintiau Salmonela Typhimurium ∆trA∆pduA yn arwain at batrwm tebyg lle, ar 1 a 14 dpi, roedd y tonsiliau caecal ac ilewm adar yn dangos arwynebedd mwy mynegiannol wedi'i staenio o gymharu â 3 a 7 dpi. Ym mhob llinach a astudiwyd, arsylwyd ymdreiddiad amlwg o macroffagau o gymharu â chelloedd CD4+ a CD8+. Yn gyffredinol, dangosodd anifeiliaid a heintiwyd gan y straen mutant ardal â staen positif uwch na'r math gwyllt. Arweiniodd dileu genynnau ttrA a pduA at ymdreiddiad dwysach o macroffagau a chelloedd CD4+ a CD{8+ yn yr adar lletyol, gan awgrymu nad oedd unrhyw wanhad pathogen, hyd yn oed mewn gwahanol fathau o Salmonela.

manteision cistanche i ddynion-cryfhau system imiwnedd

Mae Salmonela enterica yn bathogen a gludir gan fwyd sy'n achosi colledion i dda byw yn ogystal ag effeithio'n uniongyrchol ar iechyd y cyhoedd. Salmonela enterica subsp. enterica serovar Mae Enteritidis (Salmonella Enteritidis) a Typhimurium (Salmonella Typhimurium) wedi'u cysylltu'n bennaf â heintiau bwyd ers degawdau. Rhwng 1995 a 2010, nodwyd Salmonela Enteritidis mewn 34,2% o'r holl samplau positif ar gyfer Salmonela spp1. Heblaw hynny, cyhoeddodd Winter et al.2 astudiaeth sylweddol yn ymchwilio i rôl genyn amgodio tetrathionate, gan ddewis y seroteip Salmonela Typhimurium ond gan ddefnyddio llygod fel model arbrofol. O ystyried hyn, gallai dyfnhau ein gwybodaeth am ryngweithio lletyol-pathogen helpu i wella mesurau rheoli a dileu. Mae sawl ffactor yn gysylltiedig â pathogenesis salmonellosis, megis gallu'r pathogen i ddyblygu mewn amgylchedd mwcaidd llidus, yn dibynnu ar gaffael maetholion a resbiradaeth anaerobig2. Fodd bynnag, nid yw argaeledd maetholion yn gwarantu goroesiad bacteriol mewn amgylchedd cystadleuol sydd â phoblogaeth ddwys gan ficro-organebau eraill. Felly, mae gallu Salmonela enterica i fetaboleiddio tetrathionate gan ddefnyddio tetrathionate reductase i gynhyrchu 1,2-propanediol fel ffynhonnell ynni yn rhoi mantais ffitrwydd. Mae'r ensym hwn wedi'i gyfansoddi gan TtrA, TtrB, a TtrC. Mae'r is-uned gyntaf a ddyfynnwyd yn perthyn i'r uwchdeulu molybdopterin (MPT) ac mae ganddi barth terfynu FeS sy'n ymwneud â lleihau tetrathionate yn thiosylffad (S2O3 2−)2–4. Mae Te 1,2-propanediol yn cael ei ddefnyddio gan ficro-gyfrannau bacteriol (MCP). Mae'r adeiledd hwn yn cynnwys saith gwahanol brotein, ac ymhlith y rhain mae PduA yn brif gydran strwythur MCP5. Yn gyntaf, mae 1,{18}}propanediol yn cael ei drawsnewid yn propionaldehyde, sydd yn ei dro yn cael ei leihau i propanol a propionad gan actifedd propanediol dehydratase. Mae'r broses hon yn cynhyrchu ATP trwy ffosfforyleiddiad, graddiant electron (1-propanol) i adfywiad NAD, a chyfryngwr (propionyl-CoA) y gellir ei ddefnyddio fel ffynhonnell carbon ac ynni trwy gydol methyl sitrad trwy, gan ddibynnu ar fitamin B12 wedi'i syntheseiddio. mewn modd mewndarddol6. Yn ystod heintiadau ieir, dilynir gallu Salmonela enterica serovars i oresgyn a goroesi o fewn y celloedd epithelial berfeddol a macroffagau gan osgoi ymateb imiwn7. Yn y cyd-destun hwnnw, mae'r haint yn gyfnod hollbwysig sy'n dibynnu ar y rhyngweithio rhwng celloedd bacteriol a gwesteiwr a'r gallu bacteriol i oresgyn y rhwystrau epitheliwm berfeddol i warantu ei gytrefu a'i ddyblygu. Serch hynny, mae'n actifadu'r ymatebion llidiol ac imiwn8 sy'n arwain at endocytosis a ffagocytosis gan gelloedd epithelial a chyflwyno antigen (APCs), yn y drefn honno. Mae gweithgaredd gwrthficrobaidd y celloedd hyn yn sbarduno ymateb cynhenid ​​​​drwy macroffagau ac mae'r cydosodiad ymateb imiwn addasol yn dibynnu ar actifadu CD4+ a CD8+9. Er mwyn taflu goleuni ar y rhyngweithiadau lletyol-pathogen y tu ôl i’r haint berfeddol gan Salmonela mewn cywion ieir, rydym yn gwerthuso poblogaeth celloedd y system imiwnedd yn ystod cytrefu’r perfedd a haint systemig mewn adar o linachau masnachol sy’n cael eu herio gan fathau mutant gwyllt o Salmonela Enteritidis a Salmonela Typhimurium , gan gario dileadau mewn genynnau sy'n gysylltiedig â metaboleiddio tetrathionate (ttrA) ac 1,2-propanediol (PDU).

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Canlyniadau

Arbrawf 1 - Her Salmonela Enteritidis.

Dangosir canlyniadau meintioli presenoldeb y celloedd ymateb imiwn mewn tonsiliau caecal, caecum, ilewm, ac afu o frwyliaid, ieir dodwy ysgafn, ac ieir dodwy lled-drwm yn Nhablau 1, 2, a 3. Gwelsom fwy o CD 4+ a ymdreiddiad celloedd macrophage o frwyliaid wedi'u herio â Salmonela Enteritidis ∆ttrA∆pduA (SEΔttrAΔpduA) nag o frwyliaid a heriwyd â straen math gwyllt Salmonela Enteritidis (wt-SE) neu adar heb eu heintio, ym mhob meinwe a werthuswyd. Canfuwyd eithriad ar gyfer ymdreiddiad celloedd CD4+ ar 3 dpi yn y tonsiliau caecal, ilewm, ac afu, ac ar gyfer ymdreiddiad macrophage ar 3 a 14 dpi yn yr afu o frwyliaid heriedig SEΔttrAΔpduA. Ar ben hynny, gwelwyd bod nifer y celloedd CD8+ a ymdreiddiwyd yn fwy gan adar a heriwyd â SEΔttrAΔpduA ar 1 a 7 dpi yn y caecum a'r afu, sef 3 dpi yn y tonsiliau caecal, a 14 dpi yn yr ilewm. Mewn cyferbyniad, roedd gan adar â her wt-SE ymdreiddiad uchel o gelloedd CD8+ yn yr ilewm a'r tonsiliau caecal ar 1 a 7 dpi, yn y drefn honno (Tab. 1; Ffig Atodol S1). Mae Tabl 2, a Ffig. Atodol S2 yn dangos y CD4+ a'r CD8+, a'r ymdreiddiad macrophage a geir ym meinweoedd ieir dodwy lled-drwm. Yn gyffredinol, roedd amrywiaeth mawr rhwng yr ardaloedd o ymdreiddiadau celloedd o ran y straen her a'r meinweoedd a astudiwyd. Dangosodd adar a heriwyd gyda SEΔttrAΔpduA ardaloedd uwch wedi'u gorchuddio gan gelloedd CD4+ (mewn ilewm ar 1 a 14 dpi, ac afu ar 7 dpi), a macroffagau (mewn ilewm ar 7 dpi, ac afu yn 3, 7, a 14 dpi), nag yn yr un meinwe o adar her wt-SE. Ar y llaw arall, canfuwyd celloedd CD{8+ mewn symiau mwy mewn tonsiliau caecal (ar 1 a 7 dpi) a caecum (ar 3 dpi) o adar a heriwyd â straen wt-SE. Yn wahanol i gywion dodwy brwyliaid a lled-drwm, fe wnaeth Salmonela Enteritidis ∆trA∆pduA sbarduno ardaloedd celloedd ymateb imiwn llai dwys na’r math gwyllt, yn yr her gan ieir dodwy ysgafn. Dangosodd adar wt-SEchallenged ardaloedd ymdreiddiad CD4+ mwy mewn tonsiliau caecal (ar 1 a 3 dpi), caecum (ar 3, 7, a 14 dpi), ilewm (ar 1 a 7 dpi), ac afu (yn 14 dpi). Yn yr un modd, mae heriau gyda SEΔttrAΔpduA wedi arwain at lai o ardaloedd ymdreiddiad CD8+ mewn tonsiliau caecal (ar 1 dpi) ac ilewm (ar 7 a 14 dpi), a macroffagau mewn tonsiliau caecal a caecum (ar 3 dpi), mewn cymhariaeth ag adar her wt-SE. Ni welwyd unrhyw newidiadau sylweddol i ardal celloedd system imiwnedd CD8+ a chelloedd macrophage yn yr afu gan adar â her SEΔttrAΔpduA ac wt-SE. Dangosir canlyniadau manwl yr her gydag ieir dodwy yn Nhabl 3 (gweler Ffig Atodol S3).

Tabl 1. Cynrychiolaeth o'r gwahaniaeth sylweddol sy'n ymwneud â dosbarthiad meintiol celloedd ymateb imiwn gwahanol mewn organau brwyliaid sydd wedi'u heintio â straenau gwyllt a mutant Salmonela Enteritidis ar ddiwrnodau gwahanol ar ôl yr haint. DPI, dyddiau ar ôl yr haint; ∆-SE, Salmonela Enteritidis ∆ttrA∆pduA; wt-SE, Salmonela Enteritidis math gwyllt; ns, dim gwahaniaeth arwyddocaol. O fewn pob organ a DPI, mae * yn golygu gwahaniaeth gan ANOVA dwy ffordd ac yna prawf cymharu Bonferroni rhwng gwerthoedd straen gwyllt a mutant (*P Llai na neu hafal i 0.05; **P Llai na neu'n hafal i 0.01; ***P Llai na neu'n hafal i 0.001; ****P Llai na neu'n hafal i 0.0001). Y straen a gyflwynir yn y tabl (∆-SE neu wt-SE) fel un arwyddocaol o fewn yr organ a DPI yw'r un sy'n dangos y prif arwynebedd ymchwyddiant i bob cell.

Tabl 2. Cynrychioliad o'r gwahaniaeth sylweddol sy'n ymwneud â dosbarthiad meintiol celloedd ymateb imiwn gwahanol mewn organau ieir dodwy lled-drwm sydd wedi'u heintio â rhywogaethau gwyllt a mutant Salmonela Enteritidis ar ddiwrnodau gwahanol ar ôl yr haint. DPI, dyddiau ar ôl yr haint; ∆-SE, Salmonela Enteritidis ∆ttrA∆pduA; wt-SE, Salmonela Enteritidis math gwyllt; ns, dim gwahaniaeth arwyddocaol. O fewn pob organ a DPI, mae * yn golygu gwahaniaeth gan ANOVA dwy ffordd ac yna prawf cymharu Bonferroni rhwng gwerthoedd straen gwyllt a mutant (*P Llai na neu hafal i 0.{{10}}5 ;**P Llai na neu'n hafal i 0.01; ***P Llai na neu'n hafal i 0.001; ****P Llai na neu'n hafal i 0.0001). Y straen a gyflwynir yn y tabl (∆-SE neu wt-SE) fel un arwyddocaol o fewn yr organ a DPI yw'r un sy'n dangos y prif arwynebedd ymchwyddiant i bob cell.

Tabl 3. Cynrychiolaeth o'r gwahaniaeth sylweddol yn ymwneud â dosbarthiad meintiol gwahanol gelloedd ymateb imiwn mewn organau ieir dodwy golau sydd wedi'u heintio â rhywogaethau gwyllt a mutant Salmonela Enteritidis ar ddiwrnodau gwahanol ar ôl yr haint. DPI, dyddiau ar ôl yr haint; ∆-SE, Salmonela Enteritidis ∆ttrA∆pduA; wt-SE, Salmonela Enteritidis math gwyllt; ns, dim gwahaniaeth arwyddocaol. O fewn pob organ a DPI, mae * yn golygu gwahaniaeth gan ANOVA dwy ffordd ac yna prawf cymharu Bonferroni rhwng gwerthoedd straen gwyllt a mutant (*P Llai na neu hafal i 0.{{10}}5 ;**P Llai na neu'n hafal i 0.01; ***P Llai na neu'n hafal i 0.001; ****P Llai na neu'n hafal i 0.0001). Mae'r straen a gyflwynir yn y tabl (∆-SE neu wt-SE) fel un arwyddocaol o fewn yr organ a DPI yn dangos yr ardal ymdreiddiad mawr i bob cell.

system imiwnedd sy'n cynyddu planhigion cistanche

Cliciwch yma i weld cynhyrchion Gwella Imiwnedd Cistanche

【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Arbrawf 2 - Her Salmonela Typhimurium.

Dangosir canlyniadau meintioli presenoldeb y celloedd ymateb imiwn mewn tonsiliau cecal, caecum, ilewm, ac afu o frwyliaid, ieir dodwy lled-drwm, ac ieir dodwy ysgafn yn Nhablau 4, 5, a 6, yn y drefn honno. Ar y cyfan, dangosodd brwyliaid a heintiwyd gan y straen mutant ardal wedi'i marcio'n gadarnhaol yn uwch na'r rhai a heriwyd gyda straen math gwyllt Salmonela Typhimurium (wt-STM), ar bob un o'r pedwar diwrnod samplu. Ar ben hynny, ni welwyd unrhyw newidiadau i gelloedd ymateb imiwn yn y grwpiau rheoli heb eu heintio. Cyrhaeddodd ardaloedd celloedd Te CD4+ ym mhob meinwe brwyliaid wahaniaeth ystadegol ar 1 dpi, gyda ymdreiddiadau mwy ar gyfer yr her gyda Salmonela Typhimurium ∆ttrA∆pduA (STM∆ttrA∆pduA). Roedd gwahaniaeth sylweddol rhwng ardal yr ymateb imiwn meintiol gan adar â her STM∆ttrA∆pduA- a wt-STM, gyda ymdreiddiadau mwy pan oedd yr her gyda'r straen mutant yn y caecum a'r ilewm ar 1 dpi, a'r afu ar 14 dpi (CD8+ cell); yn y caecum, ilewm, a'r afu ar 1 a 14 dpi (macrophages) (Tabl 4; Ffig Atodol S4). Ni ddangosodd y canlyniadau o adar dodwy lled-drwm unrhyw wahaniaeth ystadegol rhwng heriau straen mutant a math gwyllt ar gyfer celloedd CD4+ yn y caecum, a chelloedd CD{8+ yn y tonsiliau caecal a'r ilewm ym mhob un o'r 4 diwrnod gwerthuso ar ôl heintiau (Tabl 5; Ffig Atodol S5). Fodd bynnag, pan welwyd ardal grynodiad arwyddocaol o gelloedd system imiwnedd heriwyd yr ieir dodwy lled-drwm gan STM∆ttrA∆pduA: prif ardal ymdreiddiad macroffagau ym mhob meinwe a astudiwyd (ar 1 a 14 dpi); ardal ymdreiddiad mawr o gelloedd CD4+ yn y tonsiliau caecal a'r afu (yn 1, 7, a 14 dpi) (Tabl 5; Ffig Atodol S5). Mae Tabl 6, a Ffig. Atodol S6 yn dangos y CD4+, CD8+, a'r ymdreiddiad macrophage a geir ym meinweoedd ieir dodwy golau. Dangosodd adar a heriwyd â STM∆ttrA∆pduA arwynebedd celloedd system imiwnedd mawr o CD4+ a chelloedd macrophage mewn tonsiliau caecal a caecwm (ar 14 dpi), ac ilewm (ar 1 a 14 dpi) o gymharu â chelloedd ymateb imiwn ardal o'r un meinweoedd o adar her wt-STM. Ni ddaethpwyd o hyd i unrhyw wahaniaeth ystadegol ar gyfer ardal ymdreiddiad CD{{8+ yn y tonsiliau caecal, caecum, ac ilewm gan adar a heriwyd. Mewn cyferbyniad â chanlyniadau a gafwyd mewn meinweoedd eraill, roedd gan yr afu o adar â her STM∆ttrA∆pduA ardal wedi'i staenio'n fwy mynegiannol o gelloedd ymateb imiwn ar gyfer celloedd CD4+ a CD8+ ym mhob un o'r pedwar dpi, a macroffagau ar 1 a 14 dpi.

Tabl 4. Cynrychiolaeth o'r gwahaniaeth sylweddol sy'n ymwneud â dosbarthiad meintiol celloedd ymateb imiwn gwahanol mewn organau brwyliaid sydd wedi'u heintio â straeniau gwyllt a mutant Salmonela Typhimurium ar ddiwrnodau gwahanol ar ôl yr haint. DPI, dyddiau ar ôl yr haint; ∆-STM, Salmonela Typhimurium ∆ttrA∆pduA; wt-STM, Salmonela Typhimurium gwyllt-fath; ns, dim gwahaniaeth arwyddocaol. O fewn pob organ a DPI, mae * yn golygu gwahaniaeth gan ANOVA dwy ffordd ac yna prawf cymharu Bonferroni rhwng gwerthoedd straen gwyllt a mutant (*P Llai na neu hafal i 0.05; **P Llai na neu'n hafal i 0.01; ***P Llai na neu'n hafal i 0.001; ****P Llai na neu'n hafal i 0.0001). Mae'r straen a gyflwynir yn y tabl (∆-STM neu wt-STM) yn arwyddocaol o fewn yr organ a DPI yw'r un sy'n dangos y prif arwynebedd ymdreiddiad i bob cell.

Tabl 5. Cynrychioliad o'r gwahaniaeth sylweddol sy'n ymwneud â dosbarthiad meintiol celloedd ymateb imiwn gwahanol mewn organau ieir dodwy lled-drwm sydd wedi'u heintio â straeniau gwyllt a mutant Salmonela Typhimurium ar ddiwrnodau gwahanol ar ôl yr haint. DPI, dyddiau ar ôl yr haint; ∆-STM, Salmonela Typhimurium ∆ttrA∆pduA; wt-STM, Salmonela Typhimurium gwyllt-fath; ns, dim gwahaniaeth arwyddocaol. O fewn pob organ a DPI, mae * yn golygu gwahaniaeth gan ANOVA dwy ffordd ac yna prawf cymharu Bonferroni rhwng gwerthoedd straen gwyllt a mutant (*P Llai na neu hafal i 0.{{10}}5 ;**P Llai na neu'n hafal i 0.01; ***P Llai na neu'n hafal i 0.001; ****P Llai na neu'n hafal i 0.0001). Mae'r straen a gyflwynir yn y tabl (∆-STM neu wt-STM) yn arwyddocaol o fewn yr organ a DPI yw'r un sy'n dangos y prif arwynebedd ymdreiddiad i bob cell.

Tabl 6. Cynrychiolaeth o'r gwahaniaeth sylweddol yn ymwneud â dosbarthiad meintiol gwahanol gelloedd ymateb imiwn mewn organau ieir dodwy golau sydd wedi'u heintio â straenau gwyllt a mutant Salmonela Typhimurium ar wahanol ddyddiau ar ôl yr haint. DPI, dyddiau ar ôl yr haint; ∆-STM, Salmonela Typhimurium ∆ttrA∆pduA; wt-STM, Salmonela Typhimurium gwyllt-fath; ns, dim gwahaniaeth arwyddocaol. O fewn pob organ a DPI, mae * yn golygu gwahaniaeth gan ANOVA dwy ffordd ac yna prawf cymharu Bonferroni rhwng gwerthoedd straen gwyllt a mutant (*P Llai na neu hafal i 0.{{10}}5 ;**P Llai na neu'n hafal i 0.01; ***P Llai na neu'n hafal i 0.001; ****P Llai na neu'n hafal i 0.0001). Mae'r straen a gyflwynir yn y tabl (∆-STM neu wt-STM) yn arwyddocaol o fewn yr organ a DPI sy'n dangos yr ardal ymdreiddiad mawr i bob cell.

Trafodaeth

Gall bacteria, pan fyddant yn agored i gyflyrau anaerobig, ddefnyddio swbstradau metabolig tetrathionate ac 1,2-propanediol ar gyfer ffynonellau egni a resbiradaeth10. Felly, mae Salmonela spp. wedi bod yn destun ymchwiliadau ers tro i sut y byddai dileu genynnau y gwyddys eu bod yn gyfrifol am y llwybrau hyn yn effeithio ar eu goroesiad yn y gwesteiwr. Hyd eithaf ein gwybodaeth, dim ond un astudiaeth a oedd yn ymchwilio i rolau genynnau amgodio tetrathionate a phropanediol ar yr un pryd a gyhoeddwyd. Adroddodd ein grŵp ymchwil effeithiau’r dileadau hyn drwy werthuso haint systemig ac ysgarthu fecal Salmonela Enteritidis a Salmonela Typhimurium mewn llinachau masnachol o gywion11. Er mwyn cynyddu'r drafodaeth ar y pwnc hwn, roedd y canlyniadau presennol yn amlygu'r gell imiwnedd a ymdreiddiwyd mewn gwahanol feinweoedd o linachau cyw a heriwyd gyda straeniau math gwyllt a mutant sy'n cario dileadau mewn genynnau ttrA a pduA. Yn ystod 2-wythnos arbrawf, mae'r ardaloedd o gelloedd CD4+ a CD8+ sydd wedi'u staenio'n bositif yn dilyn patrwm tebyg yn bennaf, lle mae 1 a 14 dpi yn cyflwyno nifer uwch o ymateb imiwn celloedd. Gellir esbonio hyn gan brif gyswllt y system amddiffyn letyol pan fydd y pathogen yn goresgyn. Mae’r adroddiad blaenorol wedi dangos, mewn cywion ieir sydd wedi’u heintio, hyd yn oed pan nad yw Salmonela’n cael ei ysgarthu ar 12 dpi, gall yr haint ddod yn bositif trwy swab cloacal o 13 dpi12, gan esbonio pam roedd ardaloedd celloedd system imiwnedd ar 3 a 7 dpi yn is ond yn ôl i gynnydd. . Ar yr olwg gyntaf, disgwylir y byddai ymateb y gwesteiwr yn lleihau pan fyddai pduA a ttrA yn cael eu dileu gan fod y genynnau hyn yn chwarae rhan bwysig yn y goroesiad yn ystod heintiad gan Salmonela2,4,13-15. Fodd bynnag, dangosodd ein canlyniadau o gymharu mwtant dwbl heb y ddau enyn i’r gwrthwyneb, roedd y mathau mutant o Salmonela Enteritidis a Salmonela Typhimurium wedi sbarduno celloedd ymateb imiwn uwch na’r mathau gwyllt o rywogaethau.

Manteision cistanche tubulosa- cryfhau'r system imiwnedd

Gallai ardal staen fyrraf arwain at nifer uchel o gytrefi ar y llwybr berfeddol, gan gadarnhau astudiaeth flaenorol, lle cafodd straeniau Salmonela Enteritidis ∆ttrA∆pduA a Salmonela Typhimurium ∆ttrA∆pduA eu hadennill mewn niferoedd uwch o swabiau cloacal na'u math gwyllt11 . Gall Salmonela ymddwyn fel bacteriwm allgellog neu fewngellog, yn dibynnu ar y repertoire maetholion sydd ar gael, ac mae'n digwydd fel newid rhwng cytrefu berfeddol a mewnoli i gelloedd cynnal16. Pan fydd y bacteria yn cael eu llyncu a'u lladd gan macroffagau, mae rhai darnau peptid yn cael eu trosglwyddo i wyneb y gell cyflwyno antigen, yn cael eu hamgodio gan y prif gymhleth histocompatibility (MHC), dosbarth II. Mae'r rhwymiad peptid-MHC II hwn yn ysgogi'r lymffocytau T CD4+. Fodd bynnag, os yw'r bacteria'n penderfynu goresgyn y gell letyol, gan fynd i mewn i cytoplasm y macrophage, mae'r cysylltiad peptid â math arall o MHC, dosbarth I, yn ysgogi cynhyrchu lymffocytau T CD8+17. Yn ddiddorol, mae celloedd CD4+ a CD8+ yn cyflwyno'r un patrwm o'r macroffagau trwy gydol yr arbrawf, hyd yn oed yn cynrychioli gwahanol ymatebion imiwn. Gan fod celloedd CD4+ a CD8+ yn cynrychioli lymffocytau T yn bennaf sy'n rhan o'r ymateb imiwn addasol, mae'r macroffagau, yn rhan o'r ymateb imiwn cynhenid9. Yn ogystal â hyn, gwelsom fod brwyliaid yn cyflwyno ardaloedd mwy mynegiannol wedi’u marcio’n gadarnhaol nag ieir dodwy, a gadarnhawyd gan astudiaeth flaenorol lle dangosodd brwyliaid a heriwyd â straenau mutant, er enghraifft, cytrefiad coluddol mwy ymledol a haint systemig11. Mae ein canfyddiadau'n awgrymu bod y dull imiwn-histocemeg yn darparu gwybodaeth ddiddorol am ymddygiad celloedd ymateb imiwn ar organau lluosog o wahanol linachau masnachol yn ystod heintiad gan Salmonela enterica serovars. Ar ben hynny, mae tystiolaeth yr astudiaeth bresennol bod dileu'r ddau enyn, hyd yn oed mewn gwahanol fathau o Salmonela, wedi arwain at facteria a arweiniodd at gell ymateb imiwn uwch yn y gwesteiwr, gan ddangos nad yw'r pathogen wedi'i wanhau. Gallwn ystyried efallai bod Salmonela wedi gallu dod o hyd i fecanwaith goroesi arall a oedd yn dod yn fwy pathogenig fyth. Dangoswyd, yn yr astudiaeth flaenorol, bod defnyddio operonau ttr a pdu mewn cytgord ag operonau cob a PRP yn angenrheidiol ar gyfer resbiradaeth anaerobig16, gan ein harwain i gredu bod angen nid yn unig dileu mwy o enynnau o bob operon18, ond mae gennym hefyd ystyried dileu'r set gyfan hon, er mwyn cyrraedd llai o rywogaethau pathogenaidd o Salmonela enterica.

Defnyddiau a dulliau

Cymeradwywyd yr arbrofion, a berfformiwyd yn dilyn canllawiau a rheoliadau perthnasol, gan y Pwyllgor Moesegol ar Ddefnyddio Anifeiliaid o Brifysgol Talaith Sao Paulo (CEUA / Proses Unesp - 006621 / 18; ar Fai 10fed, 2018), yn y Patholeg Adar. Labordy'r Adran Patholeg, Teriogenoleg, ac Un Iechyd o'r Ysgol Gwyddorau Amaethyddol a Milfeddygol, Prifysgol Talaith Sao Paulo (FCAV/ Unesp), Jaboticabal, Brasil.

Straenau bacteriol ac adeiladu mutant.

Cafodd y straenau bacteriol a ddefnyddir yma eu storio o fewn cyfrwng cryoprotectant a gymhlethwyd gan broth Lysogeny (LB; BD DifcoTM, UDA) wedi'i ategu â 30% o glyserol (Merck, BR-H30402394 228) a'i storio mewn uwch-rewgell (− 80 gradd ) yn y Labordy Patholeg Adar o FCAV/UNESP. Salmonela Enteritidis P125109 (rhif derbyn: AM933172) a Salmonela Typhimurium str. Anogwyd 9819 i ymwrthedd i asid nalidixig a sbectinomycin (Nalr Spcr ) a darparwyd y cefndir genetig ar gyfer llunio straenau mutant gan dechneg Lambda-goch20 gyda mân addasiadau, a ddisgrifir yn Saraiva et al.11. Mae bacteria mutant a adeiladwyd yma wedi'u nodi ar y testun fel SEΔttrAΔpduA (Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA) a STMΔtrAΔpduA (Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆due).

Arbrawf in vivo.

Arbrawf 1 - Salmonela Enteritidis. Cafwyd tri deg chwech o gywion diwrnod oed o bob un o dair llinach wahanol (brwyliaid, ieir dodwy lled-drwm, ac ieir dodwy ysgafn), sef cyfanswm o gant ac wyth o anifeiliaid, o ddeorfeydd masnachol. Ar ôl cyrraedd, archwiliwyd gwaelod y blychau cardiau cludo i gadarnhau statws rhydd o Salmonela yr adar21, a chafodd yr anifeiliaid eu cadw mewn cewyll metelaidd y tu mewn i'r ystafell a oedd wedi'i haddasu a chawsant borthiant a dŵr heb wrthfiotigau ad libitum. Dewiswyd rhaglen olau 24-h ar y diwrnod cyntaf i sicrhau'r amlyncu dŵr a bwyd gorau posibl, yna mabwysiadwyd rhaglen golau 12-h yn yr wythnos gyntaf, gan ostwng i 8 awr ar y diwrnodau sy'n weddill. Paratowyd yr inoculum yn ôl Berchieri Junior et al.22. Ar gyfer hyn, cafodd y diwylliannau rhew eu brechu mewn LB a'u deor dros nos ar 37 gradd o dan 150 rpm. Y diwrnod canlynol, trosglwyddwyd y diwylliannau bacteriol i gyfryngau ffres a'u deor am 18 h o dan yr un amodau ag o'r blaen. Yna, cafodd 0.2 mL o'r diwylliannau sy'n cynnwys 108 o unedau ffurfio cytrefi fesul ml (CFU/mL) eu brechu ar lafar gan gludydd metelaidd yn uniongyrchol i gnwd yr adar. Ffurfiwyd naw grŵp (A i I) a'u rhannu ar hap yn ôl y gwahanol linachau a straeniau (Tabl 7). Ar ddiwrnod un-, tri, saith, a 14-diwrnod ar ôl yr haint (dpi), roedd tri aderyn fesul grŵp bob dydd, erbyn y bore, yn cael eu ewthaneiddio gan ddadleoliad ceg y groth i gynaeafu'r toriad medial o'r tonsiliau caecal, caecum, ac ilewm, a rhan distal llabed chwith yr iau ar gyfer dadansoddiad pellach imiwn-histocemeg (IHC). Ar gyfer hyn, cafodd samplau eu boddi o fewn n-Hexane pa (n-Hexano pa, Synth, Brasil) a oedd wedi'i oeri'n flaenorol mewn nitrogen hylifol. Yn syth ar ôl i'r meinwe rewi, fe'i trosglwyddwyd i cryotube 2 mL (Corning, UDA) a'i gyflyru mewn nitrogen hylifol. Ar ôl samplu, cafodd y meinweoedd eu storio ar −80 gradd tan y broses ar gyfer IHC.

Arbrawf 2 - Salmonela Typhimurium. Cynhaliwyd yr arbrawf hwn gan ddilyn yr un nodweddion a grybwyllwyd uchod yn Arbrawf 1. Rhannwyd tri deg chwech o gywion (1 diwrnod oed) ar hap yn naw grŵp (A i I) yn seiliedig ar eu llinachau a'u straen (Tabl 7).

Tabl 7. Sefydlu grwpiau yn ôl y gwahanol linachau a straeniau. SE∆ttrA∆pduA, Salmonela Enteritidis ∆ttrA∆pduA; STM∆ttrA∆pduA, Salmonela Typhimurium ∆ttrA∆pduA; wt-SE, Salmonela Enteritidis math gwyllt; wt-STM, Salmonela Typhimurium gwyllt-fath; NC, rheolaeth negyddol.

Imiwnohistocemeg.

Adran meinwe. Trosglwyddwyd y samplau a gasglwyd o −80 gradd i cryostat (Leica CM1860, Leica Biosystems Nussloch GmbH, yr Almaen) ar −22 gradd lle cawsant eu blocio'n unigol mewn cyfansawdd OCT (Tissue-Tek®, Sakura Finetek Europe BV, yr Iseldiroedd) fesul 30 munud ymlaen llaw i adran 6 µm gan ddefnyddio llafnau tafladwy proffil isel (Leica 819, Leica Biosystems Nussloch GmbH, yr Almaen). Mae'n werth nodi bod adrannau wedi'u gwneud ar −22 gradd , ac eithrio adrannau'r afu, a gafodd eu gwneud ar −15 gradd . Paratowyd sleidiau yn cynnwys tair ailadroddiad o doriad pob organ fesul ymateb cell imiwn a farciwyd, gyda theneuo rhwng pob ailadroddiad. Gan ddefnyddio brwsh paent, gosodwyd y toriadau adran meinwe ar sleidiau histolegol wedi'u trin ymlaen llaw gyda poly-l-lysin (Sigma-Aldrich, y Deyrnas Unedig, Cat rhif. P4832) e silane (Sigma-Aldrich, UDA. Cat rhif. 440574). Cafodd y sleidiau eu storio ar −20 gradd wedi hynny nes bod IHC wedi'i staenio. Staenio celloedd imiwnedd. Yn gyntaf, cafodd y sleidiau eu boddi mewn aseton oergell 200 ml (Aseton PA - ACS, Synth, Brasil) a'u deor ar −20 gradd am 10 munud. Ar ôl hynny, trosglwyddwyd y sleidiau i siambr lleithder (EasyPath®, Brasil) ar dymheredd yr ystafell am 5 munud i sychu'r samplau. Golchwyd y sleidiau wedi hynny gyda PBS a gadawyd pwll am 5 munud i osgoi dadhydradu meinwe. Deg, meinweoedd eu boddi mewn 200 ml o 4% H2O2 y 10 munud mewn lle tywyll a golchi eto gyda PBS. Cafodd yr ardal o amgylch yr adrannau meinwe ei sychu â phapur amsugnol a chafodd y sampl ei osgoi gan feiro hydroffobig (Dako Pen, Dako Denmarc A/S, Denmarc). Ailadroddwyd y cam golchi gan adael pwll fel o'r blaen. Defnyddiwyd y pecyn di-biotin Canfod HRP/DAB IHC Penodol Llygoden a Chwningen - Micropolymer (Abcam ©, UDA) i staenio'r celloedd imiwnedd, gan ddewis y dull Avidin-Biotin Streptavidin Peroxidase Complex (ABC). Ar gyfer hyn, tynnwyd y pwll, ac ychwanegwyd defnynnau adweithydd atalydd lliw cefndir amhenodol at y meinweoedd. Cafodd y sleidiau eu cynnal y tu mewn i'r siambr lleithder mewn lle tywyll am 30 munud, ailadroddwyd y cam golchi, a 200 µL o wrthgorff cynradd (CD Gwrth-Chicken Llygoden4-UNLB; Llygoden Anti-Chicken CD{{34} } UNLB; Llygoden Anti-Chicken Monocyte/Macrophage-UNLB, Southern Biotech, UDA) wedi'i wanhau mewn cyfran o 1:200 (v/v) yn yr adweithydd gwanedig gwrthgyrff (gwrthgyrff gwanedig, Abcam©, UDA) wedi'i ychwanegu wedi hynny. Deorwyd y sleidiau ar 4 gradd am 18 h. Y diwrnod canlynol, golchwyd y sleidiau fel o'r blaen. Ychwanegwyd deg, defnyn o'r gwrthgorff eilaidd (Reveal Complement, Abcam©, USA) ar ôl tynnu'r gormodedd PBS, a gosodwyd y siambr lleithder mewn amgylchedd tywyll am 30 munud. Yn dilyn hynny, cafodd gostyngiad o 3,3′-diaminobenzidine (DAB Chromogen 50 ×, Abcam©, UDA) ei wanhau mewn 1 ml o swbstrad (DAB Substrate, Abcam©, USA), pa gyfaint sy'n ddigon ar gyfer tair sleid, a'i ychwanegu at yr adrannau meinwe. Un munud yn ddiweddarach, cafodd y sleidiau eu boddi mewn 200 ml dH2O am 5 munud. Ar ôl hynny, cawsant eu trosglwyddo i giwb plastig yn cynnwys Harris hematoxylin (Êxodo Científca, Brasil) a chawsant eu gadael am 1 munud. Yn ddiweddarach, golchwyd y sleidiau am 10 munud o dan ddŵr rhedeg ar bwysedd isel. Cyflwynwyd y sleidiau i'r gyfres alcohol-xylene (70% Alcohol, 90% Alcohol, 100% Alcohol, Xylene I, a Xylene II). Yn y diwedd, gosodwyd y gorchuddion ar y sleidiau ar ôl ychwanegu diferyn o gyfrwng mowntio di-ddŵr (Entellan®, Merck, Brasil). Cymerwyd delweddau o'r adrannau meinwe ar hap, gan ddewis pum maes gweld ar hap, gan ddefnyddio microsgop optegol (lens 400 ×) (Coleman®, model N-120) gydag addasydd camera digidol, ar gyfer dadansoddiad ystadegol pellach (Ffig. 1). ).

Dadansoddi data.

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Cyfrifwyd y ganran o gelloedd CD{{0}} a CD8+ a macroffagau gan ddefnyddio Image-Pro Plus v.4.5.0.29 (MediaCybernetics, USA). Cawsant eu meintioli fel gwerthoedd canrannol yn ôl ardal bositif marciwr celloedd imiwn/cyfanswm arwynebedd. Gwnaed dadansoddiad ystadegol a graffeg gan ddefnyddio meddalwedd GraphPad Prism v.8.0.1 ar gyfer macOS (GraphPad Sofware, La Jolla California, UDA) a chyflwynwyd data i Variance Analysis (ANOVA) ac yna cymariaethau lluosog Bonferroni, gan ystyried lefel arwyddocâd is na 5% (P Llai na neu hafal i 0.05).

Ffigur 1. Rhan o'r caecum o frwyliaid sydd wedi'u heintio gan Salmonela Typhimurium ∆trA∆pduA yn dangos imiwn-ymatebau mewn macroffagau, 7 diwrnod ar ôl yr haint (×400; Avidin-Biotin Streptavidin Peroxidase, wedi'i wrth-staenio â Hematoxylin).

Cyfeiriadau

1. Freitas Neto, OC, Penha Filho, RC & Barrow, PA Ffynonellau salmonellosis nad yw'n deiffoid dynol: Adolygiad. Braz. J. Poult. Sci. 12(1), 1–11. https://doi.org/10.1590/S1516-635X2010000100001 (2010).

2. Gaeaf, SE et al. Mae llid y perfedd yn darparu derbynnydd electronau resbiradol ar gyfer Salmonela. Natur 467, 426–429. https://doi.org/ 10.1038/nature09415 (2010).

3. Hinsley, AP a Berks, BC Penodoldeb llwybrau anadlol sy'n ymwneud â lleihau cyfansoddion sylffwr gan Salmonela enterica. Microbioleg (Darllen) 148, 3631–3638. https://doi.org/10.1099/00221287-148-11-3631 (2002).

4. Tiennimitr, P. et al. Mae llid y berfedd yn caniatáu i Salmonela ddefnyddio ethanolamine i gystadlu â'r microbiota. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 108, 17480–17485. https://doi.org/10.1073/pnas.1107857108 (2011).

5. Staib, L. a Fuchs, TM Rheoleiddio ffycos a 1,2-defnyddio propanediol gan Salmonela enterica serovar Typhimurium. Blaen. Microbiol. 6, 1116. https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.01116 (2015). 6. Horswill, AR ac Escalante-Semerena, JC Propionate catabolism mewn Salmonela Typhimurium LT2: Mae dwy uned wedi'u trawsgrifio'n ddargyfeiriol yn cynnwys y locws prp ar 8.5 centisomes, mae prpR yn amgodio aelod o'r teulu sigma o ysgogwyr, a'r genyn BCDE. gyfystyr ag operon. J. Bacteriol. 179, 928–940. https://doi.org/10.1128/jb.179.3.928-940.1997 (1997).

7. Soria, MC, Soria, MA, Bueno, DJ a Terzolo, AD Cymharu 3 dull meithrin a phrofion PCR ar gyfer canfod Salmonella Gallinarum a Salmonela Pullorum mewn porthiant dofednod. Poult. Sci. 92, 1505–1515. https://doi.org/10.3382/ps.2012-02926 (2013).

8. Van Immerseel, F. et al. Deinameg ymdreiddiad celloedd imiwnedd yn lamina caecal propria mewn ieir ar ôl haint newyddenedigol â straen Salmonela Enteritidis. Dev. Cyf. Imiwnol. 26, 355–364. https://doi.org/10.1016/s0145-305x(01)00084-2 (2002).

9. Montassier, HJ Fisiopatologia do system imiwn. Yn Doenças das Aves (golau AndreattiFilho, RL et al.) 467–489 (FACTA, 2020).

10. Price-Carter, M., Tingey, J., Bobik, TA & Roth, JR Mae tetrathionate derbynnydd electron amgen yn cynnal twf anaerobig B12-dibynnol Salmonela enterica serovar Typhimurium ar ethanolamine neu 1,{{4} }propanediol. J. Bacteriol. 183, 2463–2475. https://doi.org/10.1128/JB.183.8.2463-2475.2001 (2001).

11. Saraiva, M. et al. Darganfod rôl genynnau ttrA a pduA ar gyfer serovarau Salmonela enterica mewn model haint ieir. Pathol Adar. https://doi.org/10.1080/03079457.2021.1909703 (2021).

12. Beal, RK, Wigley, P., Powers, C., Barrow, PA a Smith, AL Mae ymatebion imiwn traws-adweithiol cellog a humoral i serovarau Salmonela enterica Typhimurium ac Enteritidis yn gysylltiedig ag amddiffyniad i ail-herio heterologaidd. milfeddyg. Imiwnol. Imiwnopathol. 114, 84–93. https://doi.org/10.1016/j.vetimm.2006.07.011 (2006).

13. Gaeaf, SE a Bäumler, AJ Camp syfrdanol: Er mwyn cystadlu â microbiota'r perfedd, mae Salmonela yn gyrru ei westeiwr i ddarparu derbynnydd electron anadlol. Microbau perfedd 2, 58–60. https://doi.org/10.4161/gmic.2.1.14911 (2011).

14. Rivera-Chávez, FI et al. Mae Salmonela yn defnyddio tacsis ynni i elwa o lid y coluddyn. PLoS Pathog. 9, e1003267. https:// doi.org/10.1371/journal.ppat.1003267 (2013).

15. Khan, CM Te Deinamig Rhyngweithiadau rhwng Salmonela a'r microbiota, o fewn cilfach heriol y llwybr gastroberfeddol. Int. Atod. Res. Ddim. 2014, 1–23. https://doi.org/10.1155/2014/846049 (2014).

16. Yoo, W., Kim, D., Yoon, H. & Ryu, S. Mae Ensym IIANtr yn rheoleiddio goresgyniad Salmonela trwy catabolism 1,2-propanediol a propionate. Sci. Rep. 7, 44827. https://doi.org/10.1038/srep44827 (2017).

17. Salyers, AA a Whitt, DD Cynnal amddiffynfeydd rhag pathogenau bacteriol: Amddiffynfeydd meinwe a gwaed. Yn Pathogenesis Bacterial: A Molecular Approach (gol Salyers, AA & Whitt, DD) 16–29 (Gwasg ASM, 1994).

18. Góes, V. et al. Salmonela Heidelberg genyn ochr-gam colli gofynion anadlol mewn model haint cyw iâr. Pathog Microb. 171, 105725. https://doi.org/10.1016/j.micpath.2022.105725 (2022).

19. Barrow, PA, Hassan, JO a Berchieri, A. Jr. Gostyngiad mewn ysgarthiad fecal o straen Salmonela Typhimurium F98 mewn ieir sydd wedi'u brechu â bywyd ac wedi'u lladd organebau S. Typhimurium. Epidemiol. Heintio. 104, 413–426. https://doi.org/10.1017/s095026880 0047439 (1990).

20. Datsenko, KA & Wanner, BL Anactifadu genynnau cromosomaidd yn Escherichia coli K-12 un cam gan ddefnyddio cynhyrchion PCR. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 97, 6640–6645. https://doi.org/10.1073/pnas.1201632977 (2000).

21. Zancan, FB, Berchieri Junior, A., Fernandes, SA & Gama, NMSQ Salmonela spp. ymchwiliad mewn bocs cludo adar diwrnod oed. Braz. J. Microbiol. 31, 230–232. https://doi.org/10.1590/S1517-83822000000300016 (2000).

22. Berchieri, A. Jr., Murphy, CK, Marston, K. & Barrow, PA Sylwadau ar ddyfalbarhad a throsglwyddiad fertigol Salmonela enterica serovars Pullorum a Gallinarum mewn ieir: Effaith cefndir genetig bacteriol a gwesteiwr. Pathol Adar. 30, 221–231. https://doi.org/10.1080/03079450120054631 (2001).