Targedu Canser y Prostad Uwch Gyda STEAP1 Derbynnydd Antigen Chimerig T Cell A Tiwmor-leoliad IL-12 Imiwnotherapi

Mae chwe antigen epithelial trawsbilen o'r brostad 1 (STEAP1) yn antigen arwyneb celloedd ar gyfer targedu therapiwtig mewn canser y prostad. Yma, rydym yn adrodd ar fynegiant eang STEAP1 o'i gymharu ag antigen pilen penodol i'r brostad (PSMA) mewn canserau metastatig angheuol y prostad a datblygiad therapi cell-T derbynnydd antigen chimerig STEAP (CAR). Mae celloedd CAR T STEAP1 yn dangos adweithedd mewn dwysedd antigen isel, gweithgaredd antitumor ar draws modelau canser metastatig y prostad, a diogelwch mewn model llygoden sy'n taro i mewn STEAP1 dynol. Mae dianc antigen STEAP1 yn fecanwaith ailadroddus o wrthwynebiad triniaeth ac mae'n gysylltiedig â phrosesu a chyflwyniad antigen tiwmor llai. Mae cymhwyso therapi rhyngleukin-12 (IL1) lleoledig tiwmor ar ffurf parth cyfuno colagen (CBD)-IL-12 protein ymasiad wedi'i gyfuno â therapi celloedd CAR T STEAP1 yn gwella effeithiolrwydd gwrth-tiwmor trwy ailfodelu micro-amgylchedd tiwmor oer imiwnolegol canser y prostad a brwydro yn erbyn dihangfa antigen STEAP1 trwy ymgysylltu ag imiwnedd gwesteiwr a lledaenu epitope.

Planhigyn cistanche perlysiau Tsieineaidd - Antitumor

Metastatic prostate cancer represents an incurable disease responsible for over 33,000 deaths per year in the United States1. Prostate cancer is critically reliant on androgen receptor (AR) signaling and thus the suppression of gonadal androgen production through surgical or chemical castration (androgen deprivation therapy) has been a mainstay of treatment for advanced disease. However, metastatic prostate cancer inevitably develops resistance to androgen deprivation therapy and enters a stage called metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). mCRPC is currently incurable and is considered the end stage of the disease and is associated with a median overall survival of three years2. In the past decade, multiple therapies including an inhibitor of extragonadal androgen synthesis (abiraterone acetate)3, second-generation AR antagonists (enzalutamide)4, radioactive isotope (radium-223)5, and a prostate-specific membrane antigen (PSMA)-specific radioligand therapy (lutetium Lu 177 via votide tetraxetan)6 have been approved for mCRPC. Each of these agents extends survival on average by several months but long-term remissions are rare. Strategies to reprogram the immune system to combat prostate cancer first gained traction with the clinical approval of the dendritic cell vaccine sipuleucel-T for asymptomatic mCRPC7. More recently, several types of immunotherapies including immune checkpoint inhibitors, a DNA cancer vaccine, antibody-drug conjugates (ADC), T cell engaging bispecific antibodies (T-BsAb), and chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapies have been under active clinical investigation8,9. CARs are synthetic receptors that leverage the potency, expansion, and memory of T cells and can be engineered against virtually any tumor-associated cell surface antigen. The adoptive transfer of CAR T cells has rapidly become an established treatment for hematologic malignancies with exceptional response rates leading to six clinical approvals in the last five years10. In contrast, CAR T cell therapies targeting solid tumors have lagged due to additional challenges related to the lack of bona fide tumor-specific antigens, inhospitable tumor microenvironments, and poor trafficking, persistence, and expansion of CAR T cells11. Despite the challenges observed in driving effective immune responses toward solid tumors, recent early-phase clinical trials investigating CAR T cell therapies targeting PSMA in mCRPC have reported safety and evidence of significant biochemical and radiographic responses12,13. These preliminary results serve to embolden efforts to develop and optimize new CAR T cell therapies for prostate cancer. While PSMA is the preeminent target for therapeutic and diagnostic development in prostate cancer, recent work indicates that PSMA expression may be quite heterogeneous in mCRPC14. Tumor antigen heterogeneity, especially in the context of single antigen-targeted CAR T cell therapies for solid tumors like prostate cancer, is an important barrier to therapeutic efficacy15. Thus, identifying cell surface antigens with broad and relatively homogeneous expression in prostate cancer is imperative. In addition, very few if any tumor-associated antigens demonstrate tumor-restricted expression—most also exhibit low-level expression in normal tissues that could represent liabilities for CAR T cell therapies due to on-target off-tumor toxicities which can lead to devastating consequences including death16. We previously performed integrated transcriptomic and cell surface proteomic profiling of human prostate adenocarcinoma cell lines and identified six transmembrane epithelial antigens of the prostate 1 (STEAP1) as one of the most highly enriched cell surface antigens17. STEAP1 was first described over two decades ago18 and was recognized as being highly expressed in prostate cancer. STEAP1 is strongly expressed in >80% o mCRPC ag asgwrn neu nod lymff19, 62% o sarcoma Ewing20, a mathau lluosog o ganser eraill21. Mae STEAP1 yn perthyn i deulu STEAP o Metallo reductases a all ffurfio homotrimers neu heterotrimers gyda phroteinau STEAP eraill22. Mae gan STEAP1 rôl swyddogaethol sefydledig wrth hyrwyddo amlhau celloedd canser, goresgyniad, a thrawsnewid epithelial-i-mesenchymal-26.

Manteision cistanche tubulosa-Antitumor

At hynny, mae STEAP1 yn dangos mynegiant cyfyngedig mewn meinwe normal27 sy'n ei wneud yn darged cymhellol iawn ar gyfer therapi canser. Mae asiantau imiwnotherapiwtig lluosog wedi'u datblygu i dargedu STEAP1 ond nid oes yr un ohonynt wedi'u cymeradwyo'n glinigol. Canfuwyd bod gan yr ADC vandor tuzumab ved otin (DSTP3086S) sy'n cynnwys gwrthgorff gwrth-STEAP1 IgG1 wedi'i ddyneiddio sy'n gysylltiedig â monomethyl auristatin E broffil diogelwch derbyniol mewn treial clinigol cam I yn mCRPC ond ychydig o ymatebion gwrthrychol tiwmor a welwyd28. Mae T-BsAb sy'n ymgorffori dau barth rhwymo darn-antigen gwrth-STEAP1 (Fab), darn gwrth-CD3 cadwyn newidyn sengl (scFv), a pharth darn y gellir ei grisialu (Fc) wedi'i beiriannu i ddiffyg swyddogaeth effeithydd o'r enw AMG 509 yn cael ei werthuso ar hyn o bryd. mewn treial clinigol cam I (NCT04221542) yn mCRPC29. Adroddwyd yn ddiweddar hefyd bod T-BsAb deufalent deufalent anghymesur o'r enw BC261 yn dangos gweithgarwch gwrth-tiwmor cryf ar draws modelau rhag-glinigol lluosog o ganser y prostad a sarcoma Ewing30. Yn ogystal, dangoswyd bod derbynnydd cell T cyfyngedig (TCR) dosbarth I antigen leukocyte dynol (HLA) sy'n benodol ar gyfer peptid STEAP1 yn atal twf sarcoma Ewing lleol a metastatig mewn model xenograft preclinical ar ôl trosglwyddo mabwysiadol o gelloedd T trawsgenig31. Yn yr astudiaeth hon, rydym yn cynnal dadansoddiad cymharol o fynegiant cymharol STEAP1 a PSMA mewn mCRPC angheuol i ymchwilio i ddefnyddioldeb targedu STEAP1 yn oes bresennol theranosteg PSMA. Rydym yn peiriannu ac yn sgrinio CARs STEAP1 ail genhedlaeth ar gyfer actifadu celloedd-T penodol i antigen a sytolysis celloedd targed i gynhyrchu ymgeisydd arweiniol ar gyfer nodweddu pellach. Rydym yn pennu penodoldeb epitope swyddogaethol celloedd CAR T STEAP1 ac yn proffilio ehangiad ac imiwnoffenoteip cynhyrchion celloedd CAR T STEAP1 gan roddwyr lluosog. Yna byddwn yn sefydlu cryfder a diogelwch rhagarweiniol therapi celloedd CAR T STEAP1 mewn modelau cyn-glinigol perthnasol o ganser y prostad ond yn arsylwi colli mynegiant antigen STEAP1 yn rheolaidd fel mecanwaith ymwrthedd i driniaeth. Er mwyn goresgyn y mater hwn, rydym yn gwerthuso gweinyddiad cydredol CBD-IL-12 sy'n ailfodelu micro-amgylchedd tiwmor gwrthimiwnedd canser y prostad ac yn defnyddio imiwnedd mewndarddol i ehangu ymatebion gwrth-tiwmor. Gyda'i gilydd, mae'r astudiaethau hyn yn darparu sail resymegol gref ar gyfer cyfieithu clinigol therapi celloedd CAR T STEAP1 i ddynion â mCRPC ac yn arwain strategaethau i oresgyn mecanweithiau posibl ymwrthedd therapiwtig.

Manteision cistanche tubulosa-Antitumor

Canlyniadau

Mynegir STEAP1 yn fras mewn meinweoedd mCRPC sy'n anhydrin â thriniaeth

We first set out to determine the pattern and extent of STEAP1 expression relative to PSMA in advanced metastatic prostate cancer. We performed immunohistochemical (IHC) staining on a duplicate set of tissue microarrays consisting of 121 metastatic tumors (each with up to three cores represented) collected from 44 men with lethal mCRPC patients collected by rapid autopsy between the years 2010 and 2017 through the University of Washington Tumor Acquisition Necropsy Program32 (Fig. 1a). Plasma membrane staining for STEAP1 and PSMA in each tissue was scored by a research pathologist and semiquantitative H-scores were determined based on the staining intensity (Supple mentary Fig. 1a) multiplied by the percentage of cancer cells staining at each intensity (Supplementary Fig. 1b). By implementing a minimal staining threshold with an H-score cut-off of 30, we found that 87.7% of evaluable matched mCRPC tissues (100 of 114) demonstrated staining for STEAP1 compared to only 60.5% (69 of 114) for PSMA (Fig. 1b). In addition, 28.1% of mCRPC tissues (32 of 114) showed STEAP1 but not PSMA staining (Fig. 1b, c) whereas only 0.9% (one of 114) exhibited PSMA but not STEAP1 staining. Based on these results, we used a linear mixed statistical model to determine that the odds of non-zero (H-score >Roedd staenio {{0}}) 22-plyg (95% CI 6-173) yn uwch ar gyfer STEAP1 nag ar gyfer PSMA ac roedd y tebygolrwydd o gael sgôr H Yn fwy na neu'n hafal i 3{{} Mae 27}} 84-plyg (95% CI 30-317) yn uwch ar gyfer STEAP1 nag ar gyfer PSMA. Roedd sgôr cymedrig H STEAP1 mewn asgwrn (193; 95% CI 171 i 215) yn sylweddol uwch nag mewn metastasis nodau lymff (gwahaniaeth −48; 95% CI −21 i −76; p < 0.001) ac yn sylweddol uwch nag mewn metastasis visceral (gwahaniaeth −59; 95% CI −42 i −77; p < 0.001). Nid oedd unrhyw wahaniaeth arwyddocaol rhwng sgôr H cymedrig STEAP1 mewn metastasis nodau lymff o'i gymharu â metastasis visceral (gwahaniaeth 11; 95% CI −16 i 39; p=0.4) (Ffig Atodol 1c). Gwelsom hefyd nifer o achosion gyda mynegiant heterogenaidd o PSMA o fewn creiddiau (Ffig. 1d) sy'n gyson ag adroddiad diweddar o heterogenedd PSMA intratumoral mewn biopsïau mCRPC14. Datgelodd dadansoddiad lefel claf gan ddefnyddio trothwy sgôr H cymedrig o Fwy na neu'n hafal i 30 a phrawf McNemar fod gan 95% o gleifion gwerthfawradwy (42 o 44) diwmorau gyda mynegiant STEAP1 tra bod 68% (30 o 44) yn bositif ar gyfer PSMA (Ffig Atodol 1d). I astudio patrymau heterogenedd rhyng-gleifion a mewnol sy'n gysylltiedig â mynegiant STEAP1 a PSMA, defnyddiwyd sgorau H STEAP1 a PSMA i werthuso'r sgorau amrywiaeth hypergeometrig, Simpson, a Shannon. Gwelsom ddau batrwm o fynegiant STEAP1 (Ffig. 1e) gyda 68% (30/44) o gleifion yn dangos mynegiant STEAP1 ar draws yr holl safleoedd metastatig (STEAP1 uchel) a 32% (14/44) o gleifion yn dangos safleoedd metastatig gyda mynegiant STEAP1 a hebddo. (STEAP1 heterogenaidd). Ni nodwyd unrhyw gleifion lle'r oedd diffyg mynegiant STEAP1 ym mhob meinwe metastatig. Datgelodd dadansoddiad tebyg ar gyfer mynegiant PSMA yn yr un garfan 45% (20/44) o gleifion â mynegiant PSMA uchel, 32% (14/44) â mynegiant PSMA heterogenaidd, a 23% (10/44) heb unrhyw fynegiant PSMA. Yn seiliedig ar is-ddosbarthiad moleciwlaidd meinweoedd mCRPC gan ddefnyddio AR a mynegiant synaptoffiseg marciwr niwroendocrin (SYP) a aseswyd gan IHC, roedd gan y rhan fwyaf o gleifion â mynegiant STEAP1 a PSMA uchel neu heterogenaidd ganser AR-positif y prostad (AR +/SYP- neu AR+/SYP+) tra bod y rheini heb unrhyw fynegiant PSMA roedd ganddo ganser y brostad AR-null (AR-/SYP+ neu AR-/SYP-). Fe wnaethom nodi cydberthynas gadarnhaol rhwng mynegiant STEAP1 ac AR (p < 0.001) gan fodel cymysg llinol wedi'i osod gydag effaith ar hap mewn achosion a gynrychiolir ar y micro-arae meinwe (Ffig Atodol 2a, b) a ddisgwyliwyd o ystyried bod STEAP1 yn androgen -genyn rheoledig33,34. Mewn cyferbyniad, roedd tuedd negyddol yn cael ei werthfawrogi rhwng mynegiant STEAP1 a SYP (Ffig Atodol 2c). Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu, fel PSMA35, y gallai mynegiant STEAP1 gael ei golli gyda thrawswahaniaethu niwroendocrin o ganser y prostad.

Fig. 1 | Comparative analysis of STEAP1 and PSMA in lethal, metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). a Characteristics of the mCRPC tissues represented on University of Washington Tissue Acquisition Necropsy Tissue Microarray 92 (UW TAN TMA92). b Contingency table showing the frequency of mCRPC tissues with STEAP1 or PSMA IHC staining above or below an H-score threshold of 30. Micrographs of select mCRPC tissues after STEAP1 and PSMA IHC staining to highlight the (c) absence of PSMA but the presence of STEAP1 expression and (d) intratumoral heterogeneity of PSMA expression but not STEAP1. Scale bars = 50 µm. For panels (c, d) n = 332 mCRPC cores were immunostained for STEAP1 and PSMA. e Dot and box plot showing the distribution of STEAP1 (top) and PSMA (bottom) H-scores in 44 patients from the UW TAN TMA92 cohort. Each dot represents a tumor specimen/core (n = 319 cores for PSMA and 333 cores for STEAP1) and the color indicates the molecular subtype: AR+/SYP+ (red), AR+/SYP− (green), AR−/SYP+ (yellow) and AR−/SYP− (purple). Gray rectangles show interquartile ranges spanning the 25th to the 75th percentiles of PSMA H-scores from each patient. Bar plots (on the right) summarize the frequencies of patients classified based on STEAP1 and PSMA expression as no expression (all cores with H-score ≤30, light grey), heterogeneous expression (at least one core with H-score ≤30 and H-score >30, mid grey) and high expression (all cores with H-scores >30, llwyd tywyll). Darperir data ffynhonnell yn y ffeil Data Ffynhonnell.

Datblygwchcynnig car STEAP1 cryf, antigen-benodol

O ystyried y mynegiant eang o STEAP1 mewn mCRPC cam hwyr a’i rôl swyddogaethol adroddedig mewn dilyniant canser27,36,37, fe wnaethom ddechrau wedyn i lunio CAR ail genhedlaeth benodol STEAP lentifeirws. Fe wnaethom ddefnyddio asgwrn cefn pCCL-c-MNDU 3-X lentiviral asgwrn cefn38 sydd wedi cael ei ddefnyddio'n helaeth ar gyfer therapi genynnau bôn-gelloedd hematopoietig39 a dangoswyd bod mynegiant CAR mewn celloedd T a yrrir gan yr hyrwyddwr MNDU3 mewnol yn uwch na'r hyn a gyflawnwyd gydag a Hyrwyddwr EFS40. Cafodd parth cydsymbylol 4-1BB ei ffafrio oherwydd ei gysylltiad â ffurfiant cof celloedd T a dyfalbarhad hirfaith41 a chyflwynwyd parth trawsbilen CD28 gan y dangoswyd bod hyn yn lleihau'r trothwy antigen ar gyfer ail genhedlaeth 4-1BB Gweithrediad cell CAR T42. Ymgorfforwyd y scFv cwbl ddynol a ddeilliodd o vandor tuzumab vedotin, ADC a oedd yn targedu STEAP1 y daeth ei ddatblygiad i ben ar ôl treial clinigol cam I28. Mae'r scFv hwn yn amrywiad dynoledig o'r gwrthgorff monoclonaidd murine (mAb 120.545) a ddatblygwyd yn wreiddiol gan Agensys, Inc. sy'n dangos affinedd 1 nM mewn profion rhwymo ar sail celloedd43. Er mwyn tiwnio gweithgarwch CAR o bosibl, gwnaethom weithredu tri hyd colfach/gwahanydd gwahanol gan gynnwys byr (colfach IgG4), canolig (colfach IgG4-CH3), a hir (IgG4 colfach-CH2- CH3). Cafodd y gwahanydd hir ei beiriannu gyda threigladau 4/2- NQ44 a ddisgrifiwyd yn flaenorol44 ym mharth CH2 i atal rhwymo derbynnydd Fc-gamma a marwolaeth celloedd a achosir gan actifadu sy'n digwydd gyda throsglwyddo mabwysiadol o gelloedd CAR T bylchwr hir i lygod imiwnoddiffygiol. Cafodd y tri CAR ymgeisydd eu clonio i mewn i'r fector lentiviral (Ffig. 2a) sydd hefyd yn cyd-fynegi derbynnydd ffactor twf epidermaidd cwtogi (EGFRt) fel marciwr trawsgludo. Cynhyrchwyd lentifeirws a'u defnyddio i drawsddwytho celloedd dynol CD4 a CD8 T wedi'u cyfoethogi o gelloedd mononiwclear gwaed ymylol rhoddwyr dynol (PBMCs) a gasglwyd o pheresis. Ehangwyd CD4 a CD8 CAR celloedd T yn immunophenotyped (Atodol Ffig. 3a) a'u hailgyfansoddi i mewn i gynhyrchion cell o gyfansoddiad diffiniedig gyda chymhareb CD4/CD8 arferol i werthuso eu gweithgareddau swyddogaethol. Er mwyn rheoli ar gyfer mynegiant STEAP1 mewn modd isogenig, fe wnaethom ganolbwyntio ar linell gell canser y prostad dynol 22Rv1 sy'n dangos mynegiant brodorol STEAP1 a pherfformio knockout STEAP1 (ko) gan olygu genom CRISPR/Cas9. Yna fe wnaethom gynhyrchu llinell achub STEAP1 o'r 22Rv1 STEAP1 ko trwy drawsgludiad gyda STEAP1 yn mynegi lentivirus (Ffig. 2b). Yna defnyddiwyd y llinellau hyn i sgrinio'r tair cell STEAP1 CAR T bylchwr byr, canolig a hir mewn profion cyd-ddiwylliant gyda darlleniad o ryddhad interfferon-gamma (IFN-) fel dangosydd o actifadu celloedd T. Dim ond y celloedd gwahanu hir STEAP1 CAR T (a elwir o hyn allan yn gelloedd STEAP1-BBζ CAR T) ddangosodd y patrwm antigen-benodol a ragwelwyd o ryddhau IFN, ac ni ddangosodd celloedd CAR T STEAP1 bylchwr byr a chanolig (Ffig. 2c). , Atodol Ffig. 3b, c). Ymhellach, dangosodd celloedd STEAP T BBζ cytolysis dos-ddibynnol sylweddol o gelloedd 22Rv1 o'i gymharu â chelloedd T untransduced (Ffig. 2d) a dangosodd gynnil cymharol o gelloedd ko 22Rv1 STEAP1 (Ffig. 2e). Yna perfformiwyd astudiaethau tebyg yn llinell gell canser y prostad dynol DU145 sydd â diffyg mynegiant STEAP1 brodorol ond fe'i peiriannwyd i fynegi STEAP1 (DU145 STEAP1) trwy drawsgludiad lentifeirws (Ffig Atodol 4a). Yn y gosodiad hwn, dim ond mewn cyd-ddiwylliannau â chelloedd DU145 STEAP1 y gwelwyd actifadu celloedd STEAP1-BBζ CAR T ac nid yn y celloedd DU145 rhieni (Ffig Atodol 4b). Dim ond gyda chelloedd STEAP{94}}BBζ CAR T roedd gweithgaredd sytolytig yn cael ei werthfawrogi ac nid celloedd T heb eu trawsgludo mewn cyd-ddiwylliannau â chelloedd DU145 STEAP1 (Ffig Atodol 4c). Yn dilyn hynny, dadansoddwyd panel mwy o linellau celloedd canser y brostad dynol i nodweddu eu mynegiant STEAP1 brodorol trwy ddadansoddiad immunoblot. Dangosodd y llinellau cell gyda mynegiant / gweithgaredd AR hysbys (LNCaP, 22Rv1, VCaP, a LNCaP95) lefelau amrywiol o fynegiant STEAP1 tra nad oedd yn ymddangos bod y llinellau cell AR-null (PC3, DU145, MSKCC EF1, a NCI-H660) yn mynegi lefelau canfyddadwy o STEAP1 (Ffig. 2f). Aethom ymlaen i berfformio cyd-ddiwylliannau o STEAP1-BBζ CAR T gyda'r llinellau hyn i ddilysu ymhellach eu gweithrediad antigen-benodol yn seiliedig ar ryddhau IFN (Ffig. 2g). Fodd bynnag, gwelsom ganfyddiad anghydnaws yn yr ystyr bod y llinell PC3, nad oedd yn dangos unrhyw fynegiant protein STEAP1 amlwg (Ffig. 2f), wedi achosi gweithrediad sylweddol o gelloedd STEAP CAR T. Roedd llenyddiaeth flaenorol yn awgrymu bod STEAP1 yn cael ei fynegi yn llinell gell PC3 ar lefelau isel45. Yn wir, datgelodd amlygiad hirfaith imiwnoblot fand yn awgrymu presenoldeb mynegiant isel iawn o STEAP1 (Ffig. 2h). I gadarnhau a oedd actifadu cell STEAP BBζ CAR T oherwydd y mynegiad STEAP1 bychan hwn mewn celloedd PC3, fe wnaethom gynhyrchu tri is-linell PC3 STEAP1 ko (Ffig. 2h) ac eto perfformio cyd-ddiwylliannau gyda STEAP{{133} } Celloedd CAR T BBζ. Arweiniodd STEAP1 ko yn y llinell PC3 at ddiddymu gweithrediad celloedd STEAP CAR T (Ffig. 2i), gan ddilysu penodoldeb ymhellach a darparu tystiolaeth o sensitifrwydd celloedd STEAP1-BBζ CAR T i isel. amodau dwysedd antigen.

Diffyg traws-adweithedd STEAP1-BBζ CAR gyda llygoden Steap1 a dynol STEAP1B

budd-daliadau atodiad cistanche-cynyddu imiwnedd

Yn gyson â phenodoldeb gwrth-ddynol vandor tuzumab vedotin, ni ddangosodd celloedd STEAP1-BBζ CAR T groes-adweithedd gyda llygoden Steap1 (Ffig Atodol 4a, d, e). Fodd bynnag, defnyddiwyd hwn fel cyfle i ailgyfansoddi'r tri pharth allgellog STEAP1 dynol (ECDs) yn unigol ar lygoden Steap1 (Ffig Atodol 4f) i benderfynu pa ECDs sy'n hanfodol ar gyfer adnabod epitope gan gelloedd CAR T STEAP{8}}BBζ. Perfformiwyd arbrofion cyd-ddiwylliant gyda chelloedd STEAP1-BBζ CAR T a chelloedd DU145 wedi'u peiriannu i fynegi llygoden Step1 gan ddisodli ECDs llygoden yn unigol ag ECDs dynol. Canfuom fod dynol STEAP1 ECD2 ond nid ECD1 neu ECD3 yn gysylltiedig ag actifadu cell STEAP BBζ CAR T (Ffig Atodol 4g). Yn ddiddorol, dangosodd y STEAP1 dynol a'r llygoden Steap1 ECD2 93.9% (31/33 asidau amino) homoleg (Ffig. 4h Atodol), sy'n nodi bod Q198 a/neu I209 dynol STEAP1 yn hanfodol i gydnabyddiaeth gynhyrchiol gan STEAP1-BBζ Celloedd CAR T. Dangoswyd bod Q198 yn rhyngweithio â'r Fab o 120.545 fel rhan o fan cychwyn rhyngweithio yn seiliedig ar strwythur diweddar a ddatryswyd gan ficroscropi electron cryogenig22. O'r teulu STEAP dynol o broteinau, STEAP1B sydd â'r homoleg fwyaf i STEAP145. Mae tri thrawsgrifiad STEAP1B wedi'u nodi, ac mae pob un ohonynt yn dangos cadwraeth gyflawn o ddilyniant asid amino dynol STEAP1 ECD2 (Ffig Atodol 5a). Roedd yr algorithm rhagfynegi topoleg pilen consensws TOPCONS46 yn rhagweld dilyniannau parth ECD2 fel rhai allgellog yn y tri isoform protein STEAP1B (Ffig Atodol 5b) er bod ganddynt sgoriau dibynadwyedd isel ar gyfer STEAP1B o gymharu â hSTEAP1 oherwydd diffyg consensws rhwng y pum model rhagfynegi topoleg (OCTOPUS, Philius, PolyPhobius, SCAMPI, a SPOCTOPUS) a ddefnyddir gan TOPCONS (Ffig Atodol 5c). Roedd dadansoddiad blaenorol gan ddefnyddio offeryn rhagfynegi topoleg model seiliedig ar fodel Markov arall mewn silico TMHMM47 hefyd wedi awgrymu y gallai'r dilyniant hwn fod yn fewngellog yn hytrach nag allgellog yn isoformau protein STEAP1B 1 a 245. Fodd bynnag, nid yw strwythur grisial STEAP1B wedi'i bennu eto i gadarnhau'n uniongyrchol y rhagfynegiadau hyn. Er mwyn gwerthuso'n swyddogaethol a allai celloedd STEAP1- BBζ CAR T fod yn adweithiol yn erbyn STEAP1B hefyd, fe wnaethom berfformio cyd-ddiwylliannau gan ddefnyddio llinellau DU145 a luniwyd i fynegi pob un o'r tri isoform o STEAP1B. Ni welsom dystiolaeth o actifadu cell STEAP BBζ CAR T (Ffig. Atodol 5d), sy'n awgrymu efallai na fydd yr epitope STEAP1 a gydnabyddir gan gelloedd STEAP1-BBζ CAR T yn cael ei gyflwyno fel rhan o ectodomain gan STEAP1B er gwaethaf homoleg dilyniant ymddangosiadol.

Ffig. 2|Sgrinio 4-1derbynyddion antigen chimerig BB (CARs) ail genhedlaeth i nodi arweinydd ar gyfer therapi celloedd CAR T STEAP1. Sgematig o luniad CAR STEAP1 lentifeirws ac amrywiad yn seiliedig ar fylchwyr byr, canolig a hir. Ailadrodd terfynell hir LTR, MNDU3 Moloney murine firws lewcemia rhanbarth U3, scFv darn newidyn un gadwyn, VL cadwyn golau amrywiol, VH cadwyn drom amrywiol, trawsbilen tm, EGFRt cwtogi derbynnydd ffactor twf epidermaidd, 4/2 NQ {{1{{28) }}}} treigladau parth CH2 i atal rhwymo i dderbynyddion Fc-gamma. b Imiwnoblotiau o STEAP1 mewn celloedd rhieni 22Rv1, celloedd cnocio STEAP1 (ko), a chelloedd ko STEAP1 gan achub STEAP1. c Mae IFN- assay immunosorbent-cysylltiedig ag ensymau (ELISA) yn deillio o gyd-ddiwylliannau o naill ai celloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP1-BBζ CAR T gyda phob un o'r is-linellau 22Rv1 ar gymhareb 1:1 ar 24 h (p < 0.001). Hyfywedd celloedd cymharol (d) 22Rv1 a (e) 22Rv1 STEAP1 ko chelloedd targed dros amser wedi'i fesur gan ddelweddu celloedd byw fflworoleuedd ar gyd-ddiwylliant gyda (chwith) STEAP1-BBζ CAR T celloedd (p < 0.001) neu ( dde) celloedd T heb eu trawsgludo ar gymarebau celloedd effaith-i-darged (E:T) amrywiol. f Immunoblots yn dangos mynegiant o STEAP1 mewn llinellau celloedd canser y prostad dynol cadarnhaol derbynnydd androgen (AR) ond nid llinellau celloedd canser y prostad AR-negyddol. g IFN- meintioli gan ELISA o gyd-ddiwylliannau o naill ai celloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP1- BBζ CAR T gyda phob un o linellau celloedd canser y prostad dynol yn (f) ar gymhareb 1:1 ar 24 h. h Immunoblots ar gyfer STEAP1 yn is-linellau 22Rv1, PC3, a PC3 STEAP1. I IFN- meintioli gan ELISA o gyd-ddiwylliannau o naill ai celloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP1- BBζ CAR T gyda phob llinell gell yn (h) ar gymhareb 1:1 ar 24 h (p < 0.001). Ar gyfer paneli (c–e, g, ac i) n=4 defnyddiwyd atgynyrchiadau biolegol fesul cyflwr ac mae barrau gwall yn cynrychioli'r cymedr gyda SEM. Mae panel (b, f, h) yn dangos canlyniadau sy'n cynrychioli n=3 atgynhyrchiadau biolegol. Defnyddiwyd GAPDH fel rheolydd llwytho protein. Ar gyfer paneli (c) ac (i), defnyddiwyd ANOVA dwy ffordd gyda phrofion cymharu lluosog Sidak. Ar gyfer paneli (d) ac (e), defnyddiwyd ANOVA dwy ffordd gyda phrawf cymariaethau lluosog Tukey. Darperir data ffynhonnell yn y ffeil Data Ffynhonnell.

Nodweddu cynhyrchion cell STEAP1-BBζ CAR T ar draws cyfres o roddwyr

Nesaf, fe wnaethom broffilio ehangiad, effeithlonrwydd trawsgludo, ac imiwnoffoteip cynhyrchion cell STEAP1- BBζ CAR T gan ddefnyddio tair set annibynnol o gelloedd mononiwclear gwaed ymylol (PBMCs) a gasglwyd gan roddwyr iach. Yn gyffredinol, gwelsom ehangu 20- i 40-blygu celloedd STEAP1-BBζ CAR T o fewn 11 diwrnod i feithrin (Ffig Atodol 6a). Roedd canran y celloedd EGFRt+ CD8 T yn amrywio o 24.3 i 54.2% tra bod canran y celloedd EGFRt + CD4 T yn uwch ac yn amrywio o 60.1 i 74.9% yn ein cynhyrchion cell STEAP BBζ CAR T (Ffig Atodol 6b). Archwiliwyd mynegiant y marcwyr blinder cell T PD-1 a LAG-3 yn yr is-setiau celloedd CAR T heb eu trawsgludo a STEAP1- BBζ CAR T ac ni welwyd unrhyw gynnydd sylweddol mewn mynegiant (Ffig Atodol 6c). ). Roedd y canfyddiad hwn yn awgrymu signalau tonig isel neu absennol gan y STEAP BBζ CAR a oedd yn galonogol gan y gall signalau CAR cyfansoddol gael effaith negyddol ar swyddogaeth effeithydd cell CAR T48. Mae ffenoteipiau cof bôn-gelloedd T (Tscm) a chof canolog celloedd T (TCM) wedi'u cysylltu ag effeithiolrwydd therapiwtig therapi celloedd CAR T gan eu bod yn hyrwyddo amlhau a dyfalbarhad parhaus mewn vivo49-51. Roedd imiwnoffenoteipio o is-setiau celloedd CAR T heb eu trawsgludo a STEAP1-BBζ CAR T yn dangos amleddau uwch o gelloedd Tscm o gymharu â'r is-setiau celloedd T mewn PBMCs rhoddwyr y deilliodd y cynhyrchion celloedd ohonynt (Ffig Atodol 6d). Mae'r effaith hon yn debygol o ganlyniad i ychwanegu IL-7 a/neu IL-15 i'r cyfrwng ehangu celloedd T gan y dangoswyd bod y cytocinau hyn yn cadw ac yn gwella gwahaniaethu Tscm51,52. Datgelodd ein dadansoddiad hefyd gyfoethogiad mewn poblogaethau Tcm yn enwedig yng nghelloedd CD8 STEAP1-BBζ CAR T (Ffig Atodol 6e).

STEAP{0}}Mae celloedd BBζ CAR T yn dangos effeithiau gwrth-tiwmor sylweddol mewn modelau canser y prostad wedi'u lledaenu gyda mynegiant STEAP1 brodorol wedi'i sefydlu mewn llygod imiwnoddiffygiol

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Fel sgrin gychwynnol ar gyfer gweithgaredd antitumor in vivo, fe wnaethom sefydlu tiwmorau xenograft isgroenol 22Rv1 mewn llygod gama scid NOD gwrywaidd (NSG). Pan dyfodd tiwmorau i tua 100 mm3, cafodd llygod eu trin ag un pigiad mewntiwmoraidd o naill ai 5 × 106 o gelloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP1-BBζ CAR T. Roedd triniaeth intratumoral gyda chelloedd STEAP1- BBζ CAR T yn gysylltiedig ag ataliad twf tiwmor sylweddol a oedd yn ystadegol arwyddocaol erbyn diwrnod 18 y driniaeth (Ffig. 3a). Aberthwyd llygod ar ddiwrnod 25 a dangosodd tiwmorau gweddilliol o lygod a gafodd eu trin â STEAP1-celloedd BBζ CAR T ardaloedd mawr o falurion necrotig a chafodd rhanbarthau o diwmor hyfyw eu treiddio â CD3+ STEAP1-BBζ Celloedd CAR T (Ffig Atodol 7a). Cadwyd mynegiant STEAP1 yn y tiwmorau ar draws grwpiau triniaeth (Ffig Atodol 7b). Trosglwyddwyd celloedd 22Rv1 gyda lentivirus i orfodi mynegiant firefly luciferase (Luc) a 106 22Rv1-chwistrellwyd celloedd fLuc i wythiennau cynffon llygod NSG gwrywaidd. Delweddwyd cytrefiad metastatig gan ddelweddu bioymoleuedd byw (BLI) ar ôl pythefnos, ac ar yr adeg honno cafodd llygod eu trin ag un pigiad mewnwythiennol o naill ai 5 × 106 o gelloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP (FFig. 3b) . Datgelodd cyfresol BLI ddilyniant afiechyd cyflym mewn llygod a gafodd eu trin â chelloedd T heb eu trawsgludo tra bod y rhai a oedd yn derbyn celloedd STEAP BBζ CAR T yn dangos oedi sylweddol mewn dilyniant tiwmor (Ffig. 3c, d) ac ymestyn goroesiad (97 diwrnod yn erbyn 31 diwrnod). , p=0.0018 gan log-rank test, Ffig. 3e). Nid oedd gwahaniaeth arwyddocaol ym mhwysau'r llygoden rhwng breichiau trin (Ffig Atodol 7c). Dangosodd staenio IHC o diwmorau ar ddiwedd yr astudiaeth ostyngiad sylweddol mewn mynegiant STEAP1 (Ffig Atodol 7d), gan nodi bod dianc antigen yn fecanwaith ymwrthedd. Fodd bynnag, roedd hyn yn annhebygol o ganlyniad i drawswahaniaethu i gyflwr canser y prostad amrywiol gan nad oeddem yn gwerthfawrogi newidiadau morffolegol, colli mynegiant AR a PSMA53, nac ennill mynegiant SYP (Ffig Atodol 7d). Er mwyn ymchwilio i effaith fyd-eang colled STEAP1 mewn canser y prostad, gwnaethom broffilio trawsgrifiad o'r math gwyllt isogenig 22Rv1 (wt), 22Rv1 STEAP1 ko, a 22Rv1 STEAP1 ko + llinellau celloedd achub yr oeddem wedi'u paratoi o'r blaen (Ffig. 2b). Nododd dadansoddiad mynegiant genynnau gwahaniaethol yn cymharu celloedd ko 22Rv1 STEAP1 â chelloedd 22Rv1 wt ~1700 o enynnau wedi'u dadreoleiddio'n sylweddol (FDR Llai na neu'n hafal i 0.05, newid plyg<2) with STEAP1 knockout. Rescue of STEAP1 expression in the 22Rv1 STEAP1 ko cells revealed that ~600 genes were significantly upregulated (FDR ≤ 0.05, fold-change>2) trwy ychwanegu STEAP1 yn ôl (Ffig Atodol 8a). Enwebodd Dadansoddiad Cyfoethogi Set Genynnau (GSEA) nifer o lwybrau biolegol y gellir eu dadreoleiddio trwy fodiwleiddio mynegiant STEAP1. Yn amlwg ymhlith y rhain roedd dilyniant cylchred gell a phrosesau metabolaidd lluosog gan gynnwys y cylch Kreb a glycolysis a gyfoethogwyd yn negyddol gan guro STEAP1 a'u hachub ar ôl ychwanegu STEAP1 yn ôl (Ffig Atodol 8b). Cymhwyswyd y 31-llofnod dilyniant cylchred genynnol (CCP)54 wedi'i ddilysu i'n data a ddangosodd is-reoleiddio sylweddol o'r llofnod CCP sy'n gysylltiedig â chnawd STEAP1 gyda sgôr o −0.8 a gynyddodd yn sylweddol i {{ 14}}.5 gydag achub mynegiant STEAP1 (Ffig Atodol 8c). Mae'r data hyn yn gyson â chyhoeddiad blaenorol sy'n nodi bod dymchwel STEAP1 yn llinell gell canser y brostad LNCaP yn amharu ar hyfywedd celloedd ac amlhau tra'n ysgogi apoptosis37. Fe wnaethom nodi hefyd fod prosesu a chyflwyniad antigen yn un o'r llwybrau KEGG a oedd wedi'i ddad-gyfoethogi fwyaf gyda sgil taro STEAP1 (Ffig Atodol 8b). Gwelsom ddirywiad sylweddol o enynnau gan gynnwys PSME1 (is-uned actifadu proteasome 1) sy'n aelod o'r cyfadeilad imiwnoproteasome, TAP1 (cludwr 1, aelod o is-deulu casét rhwymo ATP) sy'n hanfodol i'r prif gymhleth histocompatibility (MHC) peptid dosbarth I. cymhleth llwytho, a nifer o enynnau MHC dosbarth I a II megis MR1 ​​(cymhleth histocompatibility mawr, dosbarth I-gysylltiedig), HLA-DQ-B1, a HLA-DQB2 (Atodol Ffig. 8d). Ymchwiliwyd ymhellach i'r tiwmorau a gasglwyd o'r modelau 22Rv1 wedi'u lledaenu a gafodd eu trin â therapi celloedd STEAP BBζ CAR T a ddangosodd golled antigen (Ffig. 3c, Ffig Atodol 7d) trwy ddadansoddiad trawsgrifiad. Dangosodd dadansoddiad mynegiant genynnau gwahaniaethol a GSEA dilynol yn cymharu tiwmorau metastatig 22Rv1 o lygod a gafodd eu trin â therapi celloedd STEAP BBζ i'r rhai a gafodd eu trin â chelloedd T heb eu trosglwyddo gyfoethogi negyddol yn y llwybrau sy'n ymwneud â MHC, lymffocytau sytotocsig, ac actifadu celloedd T ( Atodol Ffig. 9a, b). Fe wnaethom hefyd werthuso mynegiant genynnau dosbarth I a II MHC yn benodol ac arsylwi ar eu dirywiad amlwg mewn tiwmorau 22Rv1 a gafodd eu trin â therapi celloedd STEAP T BBζ (Ffig Atodol 9c). Cadarnhawyd y canlyniad hwn ymhellach gan leihad sylweddol mewn staenio HLA-A, B, C gan IHC yn y tiwmorau hyn (Ffig Atodol 9d). Goblygiad posibl y data hyn yw y gallai triniaeth â therapi celloedd STEAP CAR T a cholli mynegiant antigen tiwmor STEAP1 o ganlyniad mewn canser y prostad arwain at ymwrthedd imiwnotherapi pellach trwy brosesu a chyflwyniad antigen â nam. Fe wnaethom hefyd frechu llygod NSG gwrywaidd â chelloedd C{4-2B-fLuc trwy chwistrelliad gwythiennau cynffon. Mae C4-2B yn is-linell o LNCaP55 sy'n gwrthsefyll sbaddu gyda cineteg twf yn debycach i ganser y prostad nodweddiadol. Pedair wythnos ar ôl y pigiad, cadarnhawyd cytrefiad metastatig gan BLI, a chafodd llygod eu trin ag un pigiad mewnwythiennol o naill ai 5 × 106 o gelloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP T (Ffig. 3b). Dangosodd Cyfresol BLI ymateb cyflawn yn yr holl lygod a dderbyniodd gelloedd CAR T STEAP o fewn pum wythnos i'r driniaeth (Ffig. 3f, g). Fe wnaethom nodi tuedd o golli pwysau cynyddol yn y grŵp trin celloedd T heb eu trawsgludo (Ffig Atodol 10a) ond nid oedd hyn yn ystadegol arwyddocaol. Ni ddangosodd necropsi llygod a gafodd eu trin â chelloedd STEAP T unrhyw glefyd macrosgopig ac ni ddatgelodd BLI ex vivo o organau unrhyw arwydd (Ffig Atodol 10b), sy'n awgrymu bod y llygod hyn yn debygol o gael eu gwella. Fe wnaethom nodi dyfalbarhad ymylol celloedd STEAP1-BBζ CAR T ar ddiwedd yr arbrawf yn seiliedig ar bresenoldeb splenocytes CD3+ EGFRt+ canfyddadwy (Ffig. 3h).

Ffig. 3|Gweithgarwch antitumor in vivo o therapi celloedd STEAP BBζ CAR T mewn modelau canser y prostad gyda mynegiant STEAP1 brodorol. a Cyfeintiau o diwmorau isgroenol 22Rv1 mewn llygod NSG (n=4 ar gyfer grŵp celloedd T heb eu trawsgludo ac n=5 ar gyfer grŵp celloedd STEAP{7}}BBζ CAR T) dros amser ar ôl un pigiad mewntumoral o 5 × 106 chell T heb eu trawsgludo neu STEAP{{10}}BBζ CAR T ar gymarebau CD4/CD8 arferol. p < 0.0001 ar ddiwrnodau 20 a 25. Mae barrau'n cynrychioli'r cymedr gyda SEM. b Sgematig o arbrofion her tiwmor ar gyfer modelau 22Rv1 (top) a C4-2B (gwaelod). Luc firefly luciferase, delweddu bioluminescence BLI. c Delweddu biooleuedd byw cyfresol (BLI) o lygod NSG wedi'u himpio â metastasisau 22Rv1-fLuc a'u trin ag un pigiad mewnwythiennol o 5 × 106 o gelloedd T heb eu trawsgludo neu STEAP1-BBζ CAR T ar CD4/ arferol Cymarebau CD8 ar ddiwrnod 0. Mae Coch X yn dynodi llygod sydd wedi marw. Dangosir graddfa pelydriad. ch Plot yn dangos meintioliad y fflwcs cyfanswm dros amser o BLI byw pob llygoden yn (c). d Cromliniau goroesi llygod Kaplan-Meier yn (c) gydag arwyddocâd ystadegol wedi'i bennu gan brawf gradd log (Mantel-Cox). Ar gyfer paneli (c–e) defnyddiwyd=5 llygod fesul cyflwr. f BLI byw cyfresol o lygod NSG wedi'u himpio â metastasis C4-2B a'u trin ag un chwistrelliad mewnwythiennol o 5 × 106 o gelloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP1-BBζ CAR T ar gymarebau CD4/CD8 arferol ar y dydd 0. Mae Coch X yn dynodi llygod ymadawedig. Dangosir graddfa pelydriad. g Plot yn dangos y meintioliad o gyfanswm fflwcs dros amser o BLI byw pob llygoden yn (f). Ar gyfer paneli (f, g) n=4 defnyddiwyd llygod yn y grŵp celloedd T heb eu trawsgludo ac n=5 llygod yn y grŵp celloedd CAR T STEAP{40}}BBζ. h Meintioli celloedd CD3+ EGFRt+ STEAP1-BBζ CAR T yn ôl cytometreg llif o splenocytes llygod wedi'u trin â chelloedd STEAP1-BBζ CAR T (n=4) ar y diwedd o'r arbrawf ar ddiwrnod 49. Mae barrau'n cynrychioli'r cymedr. Ar gyfer panel (a), defnyddiwyd ANOVA dwy ffordd gyda phrawf cymharu lluosog Sidak. Darperir data ffynhonnell yn y ffeil Data Ffynhonnell.

Llygoden-yn-llygoden STEAP1 Mae astudiaethau celloedd CAR T yn dangos effeithiolrwydd therapiwtig antitumor

Arsylwyd actifadu a gweithgaredd cytolytig celloedd STEAP1-BBζ CAR T yng nghyd-destun dwysedd antigen isel iawn STEAP1 (~1500 moleciwlau/ cell) llinell gell PC3 (Ffig. 2g–i, Ffig. Atodol 11a, b). ) a thystiolaeth o weithgaredd antitumor in vivo mewn model tiwmor fLuc PC a ledaenir (Ffig Atodol 11c–e) yn cyflwyno pryderon am y potensial ar gyfer gwenwyndra oddi ar y tiwmor ar y targed. Er mwyn gwerthuso ar gyfer gwenwyndra posibl mewn organeb model hydrin, fe wnaethom gynhyrchu llygoden STEAP1 cnocio i mewn (hSTEAP1-KI) lle cafodd y genyn STEAP1 dynol ei daro i mewn i locws genyn Steap1 y llygoden ar y cefndir C57Bl/6 ( Ffig. 4a). Sefydlwyd cytref llygoden gyda genoteipio yn cael ei berfformio gan adwaith cadwynol polymeras (PCR) o DNA cynffon (Ffig. 4b). Nid oedd llygod hSTEAP homosygaidd a heterosygaidd1-KI yn arddangos unrhyw annormaleddau ffenoteipaidd neu atgenhedlol ymddangosiadol o gymharu â sbwriel math gwyllt. Cynhaliwyd arolwg meinwe ar gyfer mynegiant dynol STEAP1 yn seiliedig ar drawsgrifiad meintiol gwrthdro PCR (qRT-PCR) ar lygod heterosygaidd heterosygaidd gwrywaidd a benywaidd1-KI (hSTEAP1-KI/ + )) a datgelodd y mynegiant cymharol mwyaf yn y prostad, ac yna'r groth a'r chwarren adrenal (Ffig. 4c). Datgelodd dadansoddiad pellach yn y fan a'r lle gan STEAP1 IHC o hSTEAP gwrywaidd1-KI/ + y prostad a chwarennau adrenal fynegiant STEAP1 dynol wedi'i gyfyngu i gelloedd epithelial luminal y prostad (Ffig. 4d) a mynegiant yn y cortecs adrenal (Ffig. 4e) . Fersiwn murinized o STEAP1 CAR, o'r enw STEAP1-mBBζ CAR, lle cadwyd y scFv ac IgG4 hinge-CH2-spacer CH3 ond parth trawsbilen CD28, 4-1parth symbylol BB , a CD3ζ parth activation eu disodli gyda eu orthologs llygoden ei glonio i mewn i lluniad gammaretroviral (Ffig. 4f). Yn ogystal, disodlwyd y marciwr trawsgludo EGFRt dynol â llygoden wedi'i chwtogi CD19 (mCD19t) i leihau imiwnogenedd posibl. Gwnaethom gadarnhau trawsgludiad ôl-feirysol effeithlon o gelloedd T wedi'u cyfoethogi o splenocytes llygoden (Ffig. 4g) a dangoswyd cynhwysedd celloedd STEAP CAR T llygoden i gymell cytolysis llinell gell canser y brostad llygoden RM956 a luniwyd i fynegi STEAP1 dynol (RM9- hSTEAP1) drwy drawsgludiad lentifeirws (Ffig. 4h). Dilyswyd effeithiolrwydd in vivo celloedd llygoden STEAP1-mBBζ CAR T mewn model tiwmor RM9-STEAP1-fLuc wedi'i ledaenu mewn llygod NSG (Ffig Atodol 12a). Wythnos ar ôl pigiad gwythiennau cynffon o gelloedd fLuc RM9-STEAP1-fLuc, cafodd llygod eu trin â naill ai 5 × 106 o gelloedd T llygoden heb eu trosglwyddo neu gelloedd llygoden STEAP T gan chwistrelliad gwythiennau cynffon . Roedd llygod a gafodd gelloedd T llygoden heb eu trawsgludo yn dangos dilyniant afiechyd heb ei wirio, tra bod y rhai a gafodd eu trin â chelloedd STEAP1-mBBζ CAR T yn arddangos atchweliad afiechyd cyflym yn unffurf a ddilynwyd gan atchwymp dilynol ddeg diwrnod yn ddiweddarach (Ffig Atodol 12b, c). Roedd therapi celloedd CAR T STEAP yn gysylltiedig â budd goroesi ystadegol arwyddocaol (22 diwrnod yn erbyn 12 diwrnod, p=0.0039 trwy brawf rheng log, Ffig. Atodol 12d). Roedd colli pwysau yn amlwg yn y ddau grŵp triniaeth wrth i faich tiwmor gynyddu cyn marwolaeth (Ffig Atodol 12e, f). Dangosodd dadansoddiad o splenocytes llygoden a gasglwyd mewn necropsi dyfalbarhad ymylol o gelloedd STEAP1-mBBζ CAR T gyda chanfod celloedd mCD3+ mCD19t+ hyd at 24 diwrnod ar ôl trosglwyddo mabwysiadol (Ffig Atodol 12g). Cynaeafwyd ysgyfaint o lygod yn y ddau grŵp triniaeth a dangosodd STEAP1 IHC golli mynegiant STEAP1 mewn metastasis ysgyfeiniol o lygod a gafodd eu trin â chelloedd CAR T STEAP (Ffig Atodol 12h). Wedi hynny, ehangwyd llinellau fLuc clonal RM STEAP i benderfynu a allai'r dihangfa antigen tiwmor a arsylwyd fod o ganlyniad i heterogeneity a oedd yn bodoli eisoes mewn mynegiant STEAP1. Ailadroddwyd yr arbrawf gyda model tiwmor fLuc clonal wedi'i ledaenu RM9-STEAP1- mewn llygod NSG (Ffig Atodol 13a). Yn y cyd-destun hwn, dangosodd llygod a gafodd eu trin â chelloedd STEAP1-mBBζ CAR T ymateb cyflawn prydlon a gwydn (Ffig Atodol 13b–d). Mae'r canfyddiadau hyn yn amlygu gallu celloedd STEAP1-mBBζ CAR T i ddileu canser y brostad STEAP1+ ac yn awgrymu ymhellach y gallai fod angen strategaethau therapiwtig atodol i oresgyn ymwrthedd mewn is-grwpiau o gleifion canser datblygedig y prostad lle mae heterogeneity o STEAP1 mynegiant yn bresennol (Ffig. 1e).

manteision cistanche i ddynion-cryfhau system imiwnedd

Cliciwch yma i weld cynhyrchion Gwella Imiwnedd Cistanche

【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Mae therapi celloedd STEAP1 CAR T yn ddiogel mewn model llygoden STEAP1 wedi'i ddyneiddio

Er mwyn ymchwilio i ddiogelwch rhag-glinigol ac effeithiolrwydd therapi celloedd CAR T STEAP1-mBBζ CAR T, fe wnaethom frechu llygod heterosygaidd gwrywaidd hSTEAP1-KI gyda RM syngeneig, anclonaidd9-STEAP{4} }FLuc celloedd trwy chwistrelliad gwythiennau cynffon (Ffig. 5a). Ar ôl cadarnhad o gytrefu metastatig gan BLI tua wythnos yn ddiweddarach, derbyniodd llygod cyclophosphamide 100 mg/kg rhag-gyflyru trwy chwistrelliad mewnperitoneol57. Ddiwrnod yn ddiweddarach, cafodd llygod eu rhoi ar hap i driniaeth gyda naill ai 5 × 106 o gelloedd T llygoden heb eu trawsgludo neu gelloedd llygoden STEAP STEAP1-mBBζ CAR T drwy chwistrelliad gwythiennau cynffon. Roedd yr holl lygod a dderbyniodd celloedd llygoden STEAP STEAP1-mBBζ CAR T yn dangos gostyngiad yn y baich tiwmor o fewn wythnos gyntaf dechrau triniaeth yn seiliedig ar BLI (Ffig. 5b, c). Byrhoedlog oedd yr ymateb a arsylwyd ond arweiniodd at estyniad bychan mewn goroesiad (21 diwrnod yn erbyn 12 diwrnod, t=0.0138 trwy brawf rheng log, Ffig. 5d)—yn debyg i ganfyddiadau o'r RM nad yw'n glonaidd 9-STEAP1-arbrofion fLuc mewn llygod NSG (Ffigur Atodol 12d). Nid oedd unrhyw wenwyndra difrifol na marwolaethau cynamserol yn gysylltiedig yn benodol â therapi celloedd CAR T llygoden STEAP ar y lefel dos hon lle gwelwyd tystiolaeth glir o effeithiolrwydd gwrth-tiwmor. Roedd colli pwysau yn gysylltiedig â mwy o faich tiwmor ond yn gyffredin i'r ddwy fraich driniaeth (Ffig. 5e, f). Er mwyn asesu ymhellach wenwyndra posibl therapi cell STEAP1-mBBζ CAR T, cynhaliwyd arbrawf tebyg ochr yn ochr â hSTEAP heterosygaidd KI llygod â RM{29}}tiwmorau hSTEAP1 a dim tiwmorau. Ni ddangosodd llygod nad ydynt yn dwyn tiwmor a gafodd eu trin â chelloedd T heb eu trawsgludo neu gelloedd STEAP1- MBζ CAR T unrhyw wahaniaethau mewn goroesiad (Ffig Atodol 14a) na gwenwyndra gros gan gynnwys colli pwysau corff (Ffig Atodol 14b). Oherwydd bod y STEAP{36}}BBζ CAR yn cynnwys peiriant gwahanu IgG4 wedi'i addasu a allai fod o bosibl yn imiwnogenig, fe wnaethom werthuso ar gyfer ymateb gwrthgyrff gwrth-ddynol llygoden (MAHA) trwy gasglu gwaedu retroorbital o lygod yn yr arbrawf hwn. Ni chanfuwyd unrhyw wrthgyrff gwrth-ddynol IgG ac IgM yn sera llygod ar ddiwrnod 8 ar ôl triniaeth â chelloedd STEAP BBζ CAR T (Ffig Atodol 14c).

Yn bwysig, ni ddangosodd llygod heterosygaidd hSTEAP1-KI a gafodd eu trin â chelloedd STEAP1-mBBζ CAR T unrhyw amhariad amlwg ar feinwe neu ymdreiddiad cynyddol o gelloedd CD3+ T yn y brostad (Ffig Atodol 15a, b ) neu chwarren adrenal (Ffig Atodol 15c, d) o'i gymharu â'u cymheiriaid wedi'u trin â chelloedd T heb eu trawsgludo, sy'n awgrymu absenoldeb gwenwyndra tiwmor oddi ar y targed. Dangosodd yr ysgyfaint a gasglwyd ar ddiwedd yr arbrawf fynegiant STEAP1 dynol mewn metastasisau ysgyfeiniol RM9-hSTEAP1 gyda heterogenedd rhanbarthol mewn llygod a gafodd eu trin â chelloedd T llygoden heb eu trawsgludo (Ffig. 5g). Ar y llaw arall, dangosodd tiwmorau o lygod a gafodd eu trin â chelloedd CAR T llygoden STEAP unwaith eto absenoldeb mynegiant STEAP1 dynol (Ffig. 5h). Er mwyn gwerthuso a allai therapi celloedd CAR T STEAP MBζ a cholled antigen dynol STEAP1 hefyd effeithio ar gyflwyniad antigen yn y tiwmorau RM9-hSTEAP1, fe wnaethom berfformio IHC ar gyfer beta murine-2-microglobulin (B2m). ) sy'n elfen allweddol o foleciwlau dosbarth I MHC. Gwelsom is-reoleiddio sylweddol o fynegiant B2m mewn tiwmorau cynyddol ar ôl triniaeth â chelloedd CAR T STEAP1- mBBζ llygoden o gymharu â chelloedd T heb eu trosglwyddo (Ffig Atodol 15e, f), yn gyson â'n canfyddiadau yn y model 22Rv1.

Ffig. 4|Sefydlu system llygoden-yn-llygoden gyda model llygoden STEAP1 cnocio i mewn (hSTEAP1-KI) dynol a CAR STEAP1 murinized. Sgematig yn dangos y strategaeth ailgyfuno homologaidd gan ddefnyddio fector targedu i guro i mewn dynol STEAP1 exons 2–5 i mewn i'r llygoden Steap1 locws ar y cefndir C57Bl/6. Targed adnabod FRT Flippass. b Delweddu cynhyrchion PCR o genoteipio blaen cynffon llygod deip gwyllt (+/+), heterosygaidd (KI/+), neu homosygaidd (KI/KI) gan ddefnyddio parau preimio gyda'r bwriad o ymhelaethu ar ddognau o alelau math gwyllt neu hSTEAP1-KI . Rheoli templed NTC null. Delwedd gel gynrychioliadol o n=3 arbrofion biolegol annibynnol. c qPCR ar gyfer mynegiant dynol STEAP1 wedi'i normaleiddio i fynegiad 18 S mewn arolwg o feinweoedd o hSTEAP1-KI/+ llygod. n=3 ar gyfer organau rhyw-benodol ac n=6 ar gyfer organau cyffredin. Mae bariau'n cynrychioli'r cymedr gyda SEM. Ffotograffau o staen IHC STEAP1 o (d) meinweoedd y brostad o (chwith) +/+ a (dde) KI/+ llygod a (e) chwarren adrenal o lygoden KI/+. Barrau graddfa=50 µm. Ar gyfer panel (ch, e) STEAP1 perfformiwyd immunostaining ar n=3 sbesimenau biolegol annibynnol. f Sgematig o adeiladwaith CAR STEAP1 murineiddiedig ôl-feirysol. Firws lewcemia murine MuLV, llygoden mCD19t cwtogi CD19. g Meintioli effeithlonrwydd trawslifiad ôl-feirysol celloedd T llygoden actif o dri arbrawf annibynnol yn seiliedig ar amlder celloedd CD3+ CD19t+ llygoden yn ôl cytometreg llif (p {{40}}.0003). h Hyfywedd cell cymharol celloedd targed RM9 neu RM9-hSTEAP1 dros amser wedi'i fesur gan ddelweddu celloedd byw fflworoleuedd ar gyd-ddiwylliant ar gymhareb 1:1 gyda chelloedd CAR T llygoden STEAP{48}}mBBζ neu gelloedd T heb eu trawsgludo (p < 0.0001). n=4 atgynhyrchiadau biolegol fesul cyflwr. Mae bariau gwall yn cynrychioli'r cymedr gyda SEM. Ar gyfer panel (g), defnyddiwyd prawf-t Myfyriwr dwy gynffon di-bâr gyda chywiriad Welch. Ym mhanel (h), defnyddiwyd ANOVA dwy ffordd gyda phrawf cymharu lluosog Sidak. Darperir data ffynhonnell yn y ffeil Data Ffynhonnell.

Ffig. 5|Pennu effeithiolrwydd a diogelwch celloedd llygoden STEAP STEAP1-mBBζ CAR T mewn hSTEAP1-KI llygod sy'n dwyn syngeneig, canser y prostad wedi'i ledaenu.

Mae cytocin ymasiad parth rhwymo colagen-IL-12 yn ennyn ymatebion gwrth-tiwmor trwy well signalau derbynnydd cell T a chyflwyniad antigen

Mae IL{{0}} yn cytocin heterodimerig sy'n cynnwys is-uned p40 a p35 sy'n rheoleiddio ymatebion celloedd T ac yn arwain at gynhyrchu IFN- . Mae ymatebion gwrth-tiwmor trawiadol sy'n gysylltiedig â gweinyddu IL{-12 systemig wedi'u dangos mewn sawl model rhag-glinigol58,59 ond daeth y broses o gyfieithu'r dull therapiwtig hwn i'r clinig i ben oherwydd gwenwyndra sy'n cyfyngu ar ddosau ac aneffeithiolrwydd60-63. Mae strategaethau amgen i osgoi'r problemau hyn wedi'u hanelu at leoleiddio IL{{1{{{{{0}}} i diwmorau, naill ai drwy gyflenwi mewntumoral neu drwy beirianneg IL-12 proteinau ymasiad i drosoli priodweddau unigryw micro-amgylchedd tiwmor. Un dull a ddisgrifiwyd yn ddiweddar yw ymasiad i barth ffactor A3 von Willebrand sy'n gwasanaethu fel parth rhwymo colagen (CBD, Ffig. 6a) ac sy'n galluogi rhwymo proteinau ymasiad i golagen agored mewn fasgwleiddiad tiwmor anhrefnus64. Dangoswyd bod therapi systemig CBD-IL-12 yn ailfodelu micro-amgylcheddau tiwmor modelau canser murine y fron a melanoma “oer” imiwnolegol trwy well signalau IFN ac i gydweithredu â gwrth-PD{{2{0}} ataliad pwynt gwirio imiwnedd i ysgogi dileu tiwmor65. Gofynnwyd a allai CBD-IL-12 fod yn effeithiol wrth drosi canser y prostad o "oer" i "boeth" ac ysgogi ymatebion gwrth-tiwmor. Sefydlwyd tiwmorau isgroenol, syngeneig RM9, a Myc-CaP mewn llygod gwrywaidd C57Bl/6 a FVB, yn y drefn honno, a chafodd llygod eu rhoi ar hap i driniaeth â cherbyd, gwrth-PD-1, neu CBD-IL-12 . Arweiniodd gweinyddiaeth systemig CBD-IL-12 at ataliad twf tiwmor sylweddol mewn modelau tiwmor syngeneig RM9 a Myc-CaP a oedd fel arall yn ymatebol yn wael i therapi gwrth-PD-1 (Ffig. 6b, Ffig. Atodol 16a) . Er mwyn cael mewnwelediad pellach i fecanweithiau gweithredu CBD-IL-12, gwnaethom ddadansoddiad RNA-seq (scRNA-seq) un-gell o diwmorau RM9 o lygod a gafodd eu trin â cherbyd neu CBDIL-12. Datgelodd plotiau Brasamcanu a Thafluniad Manifold Unffurf ostyngiad sylweddol mewn adrannau celloedd epithelial, ffibroblast, ac endothelaidd tiwmor (Ffig Atodol 16b) yn gyson â gweithgaredd antitumor. Nododd proffilio ar sail marciwr o is-setiau celloedd imiwnedd cynhenid ​​ac addasol (Ffig. 6c,d) yn y data scRNA-seq gynnydd sylweddol mewn celloedd T CD8+ (7.55 yn erbyn 0.76%) , celloedd croes-gyflwyno antigen gan gynnwys XCR1+ IRF8+ cell dendritig math 1 confensiynol (cDC1, 1.33 yn erbyn 0%), CD86+ INOS2+ macroffagau polariaidd M1 ( 2.26 vs 0%), a CD64+ F4/ {80+ monocytes/macrophages (29.2 o'i gymharu â 4.43%) mewn tiwmorau o'r grŵp trin CBDIL-12 o gymharu â'r grŵp rheoli cerbydau. Roedd gostyngiad mewn macroffagau polariaidd CD{78}} CD206+ M2 (0 vs. 0.25%) a niwtroffiliau Ly6G+ (0.52 o'i gymharu â 1.08%) hefyd yn gysylltiedig â therapi CBD-IL{-12. Cadarnhaodd dadansoddiad IHC fod tiwmorau RM9 a gafodd eu trin â cherbyd yn gyffredinol yn brin o gelloedd T CD, tra bod y rhai a gafodd eu trin â CBD-IL-12 yn dangos ymdreiddiad sylweddol amlwg o gelloedd T CD8+ (Ffigur Atodol 16c) . Dangosodd celloedd tiwmor fynegiant cyfoethog o'r is-unedau proteasome ac imiwnoproteasome Psmb8 a Psmb9 a genynnau dosbarth I cymhleth histogydnawsedd mawr (MHC I) H2-K1, H{{{2-D1, a B2m), yn gyson ag uwchreoleiddio prosesu antigen a pheiriannau cyflwyno (Ffig. 6e, Ffigur Atodol 16d). Ochr yn ochr, roedd celloedd T yn arddangos mynegiant genynnau gwell sy'n gysylltiedig â signalau derbynnydd cell T a rhyngweithiadau imiwnoreoleiddiol rhwng lymffoid a chell nad yw'n lymffoid (Ffig. 6f, Ffig Atodol. 16e). Roedd celloedd y system ffagosyt mononuclear (MPS) yn dangos mynegiant genynnau cyfoethog yn ymwneud â phrosesu antigen a thraws-gyflwyno yn ogystal â signalau cytocin (Ffig Atodol 16f, g). Sefydlodd yr astudiaethau hyn weithgaredd gwrth-tiwmor CBD-IL- 12 mewn modelau o ganser y prostad trwy ailraglennu micro-amgylchedd tiwmor ac ymgysylltu â'r systemau imiwnedd cynhenid ​​​​ac addasol.

Gwell rheolaeth tiwmor gyda therapi cell STEAP1-mBBζ CAR T a therapi CBD-IL-12 cydredol

Fe wnaethom ddamcaniaethu nesaf y gallai ehangu'r ymateb imiwn antitumor gyda therapi CBD-IL-12 wella effeithiolrwydd therapiwtig therapi celloedd CAR T STEAP1- mBBζ CAR T mewn canser y prostad trwy frwydro yn erbyn heterogenedd antigen tiwmor ac achub prosesu antigen a cyflwyniad. Felly, fe wnaethom sefydlu metastases fLuc syngeneig, di-clonaidd RM9-STEAP1-fLuc mewn llygod heterosygaidd gwrywaidd1-KI a rhoi triniaeth ar hap gyda naill ai 5 × 1{{{1-6 celloedd T llygoden heb eu trosglwyddo neu gelloedd STEAP llygoden1-mBBζ CAR T drwy chwistrelliad gwythiennau cynffon gyda neu heb therapi CBD-IL-12 wythnosol drwy chwistrelliad sinws retroorbital. Ni dderbyniodd grwpiau a dderbyniodd therapi CBD-IL{-12 yn unig neu mewn cyfuniad â therapi STEAP{1-mBBζ CAR T cyclophosphamide sy’n disbyddu lymffos (Ffig. 7a). Datgelodd Cyfresol BLI ddilyniant afiechyd cyflym mewn llygod a gafodd eu trin â chelloedd T heb eu trawsgludo a CBD-IL-12 tra bod y rhai sy'n derbyn celloedd STEAP1-BBζ CAR T mewn cyfuniad â therapi CBD-IL-12 wedi dangos cryn dipyn. oedi o ran dilyniant tiwmor (Ffig. 7b, c). Yn bwysig, roedd triniaeth gyfunol â chelloedd llygoden STEAP1- mBBζ CAR T a CBD-IL wythnosol-12 yn gysylltiedig ag estyniad ystadegol arwyddocaol mewn goroesiad cyffredinol o gymharu â phob grŵp triniaeth arall (Ffig. 7d). Dangosodd dadansoddiad cytocin plasma ar waedu retroorbital a gasglwyd ar ddiwrnod 0 a diwrnod 8 o'r driniaeth gynnydd sylweddol mewn lefelau cytocinau proinflammatory IFN- , TNF- , IL-6, ac IL-4 (Ffig. 7e, Ffig Atodol 17) mewn llygod a gafodd eu trin â chelloedd STEAP1-mBBζ CAR T a CBD-IL-12. Casglwyd tiwmorau gweddilliol yn necropsi a dangosodd STEAP1 IHC golled antigen mewn tiwmorau o lygod a gafodd eu trin â chelloedd STEAP1- MBζ CAR T yn unig ac mewn cyfuniad â CBD-IL-12 (Ffig. 8a). Yn ogystal, gwelsom gynnydd mewn mynegiant tiwmor B2m (Ffig. 8a) sy'n gysylltiedig â therapi CBD-IL{{-12). Cynyddwyd celloedd T CD3+ hefyd (Ffig. 8b) mewn cyflyrau tiwmor a oedd yn destun therapi IL{-12 ond, er bod tuedd yn cael ei werthfawrogi, ni welsom gynnydd ystadegol arwyddocaol mewn celloedd T intratumoral rhwng y STEAP1-mBBζ CAR T cell a STEAP cyfunol{50}}mBBζ CAR T cell a CBD-IL-12 grwpiau triniaeth. Roedd tiwmorau gweddilliol gan gynnwys y rheini o lygod a gafodd eu trin â chell CAR T STEAP a CBD-IL1-mBBζ cyfun a gasglwyd ar yr ymateb triniaeth mwyaf posibl (nadir) ar ddiwrnod 10 ac ar ddiweddbwyntiau tosturiol ar gyfer dilyniant tiwmor (ailwaelu). datgysylltiad â chelloedd sengl ac is-setiau celloedd imiwnedd wedi'u nodweddu gan sytometreg llif amlbarametrig (Ffigur Atodol 18). Yn unol â'n canlyniadau scRNA-seq, arweiniodd triniaeth CBD-IL{-12 naill ai ar ei ben ei hun neu ar y cyd â chelloedd STEAP1-mBBζ CAR T at gynnydd sylweddol mewn CD11b+ Ly6C-/+F4/{{68} }} macroffagau MHC-II+ (Ffig. 8c, d, ffig. Atodol 19a). CD11b+ Ly6CF4/80+ Mae celloedd MHC-II+ yn cynrychioli macroffagau aeddfed sy'n cyflwyno antigen66 a chyfoethogwyd y boblogaeth hon yn ffafriol a dangoswyd mwy o fynegiant nitrig ocsid synthase (iNOS) ysgogedig fel marciwr polareiddio M1 proinflammatory gyda CBD-IL{{84} } therapi. Gwelsom hefyd ehangiad yn y boblogaeth cDC1 a gostyngiad yn y boblogaeth confensiynol math 2 celloedd dendritig (cDC2) (Ffig. 8e, Ffig Atodol 19b). Mae cDC1 wedi'i gysylltu ag actifadu celloedd T CD{8+ gwrth-tiwmor sytotocsig a mecanweithiau posibl ymwrthedd therapiwtig. Ni welsom unrhyw arwydd o ymfudiad celloedd i'r tiwmor tra bod cDC2 yn bwysig ar gyfer actifadu gwahaniaeth sylweddol yn y cymarebau KLRG1+ a KLRG1- lladdwr naturiol celloedd CD{4+ T gan gynnwys Tregs67 . Yn gyson â chanfyddiadau cDC2, celloedd ar draws grwpiau triniaeth (Ffig Atodol 19d). Datgelodd proffilio amlder CD4+ FOXP3+ Tregs leihad yng nghymdeithas Tregs o F40/80+ cynyddwyd eosinoffiliau SiglecF+ tra bod Ly6G+ yn newcieiddio gyda therapi CBD-IL{-12 (Atodol Ffigwr 19c). O ddiddordeb, gostyngwyd troffiliau wrth ychwanegu CBD-IL-12 at STEAP1- gwelsom mewn tiwmorau atglafychol ar ôl therapi cell CAR T STEAP1-mBBζ mBBζ cyfunol (Ffig. 8f, g). Yn nodedig, bu gostyngiad yn amlder y therapi celloedd CAR T a CBD-IL{-12 hyn mewn cDC1 a chynyddwyd niwtroffiliau sy'n gysylltiedig â thiwmor gyda thriniaeth gyda chynnydd mewn Tregs, gan awgrymu bod llai o breimio cytotocsig CD8 STEAP{{120 }}mBBζ celloedd CAR T o gymharu â chelloedd T heb eu trawsgludo (54 vs. celloedd T a chyfoethogi signalau Treg gwrthimiwnedd fel 34%), wedi lleihau mewn amodau gyda therapi CBD-IL-12, ond wedi cynyddu ar atglafychiad tiwmor ar ôl cyfuno STEAP 1-mBBζ CAR T cell a CBD-IL-12 therapi (19 i 42%). Mae'r canfyddiadau hyn yn awgrymu y gallai priodweddau gwrthimiwnedd niwtroffiliau sy'n gysylltiedig â thiwmor chwarae rhan amlwg wrth gyfryngu ymwrthedd i driniaeth a dilyniant tiwmor. Ar y cyfan, mae'r dadansoddiadau hyn yn dangos bod triniaeth CBD-IL-12 yn dychwelyd y milieu tiwmor gwrthimiwnedd gelyniaethus i gyflwr llidiol ac yn ehangu gweithgaredd gwrth-tiwmor ar y cyd â therapi celloedd CAR T STEAP a drosglwyddir yn fabwysiadol. Fe wnaethom berfformio dadansoddiad repertoire TCR ymhellach gan ddefnyddio dilyniant cadwyn beta TCR amlblecs68 seiliedig ar PCR ar diwmorau sy'n cario'r ysgyfaint a gasglwyd o bob grŵp triniaeth mewn necropsi. Gwelsom ostyngiad sylweddol yn clonality Simpson mewn samplau o lygod a gafodd eu trin â CBD-IL-12 yn unig ac ar y cyd â therapi celloedd CAR T STEAP1-mBBζ a oedd yn arwydd o gynnydd mewn amrywiaeth celloedd T mewntumoral (Ffig. 8h). Mae'r canfyddiadau hyn yn sefydlu y gallai ychwanegu CBD-IL-12 fel atodiad i therapi celloedd CAR T STEAP1 fod yn fuddiol trwy ailfodelu micro-amgylchedd tiwmor canser y prostad, gwella prosesu a chyflwyniad antigen, a chynnwys imiwnedd gwesteiwr i hyrwyddo lledaeniad epitope.

Ffig. 6|Mae therapi ymasiad cytocin parth systemig sy'n rhwymo colagen IL-12 (CBD-IL-12) yn atal tyfiant tiwmor canser y prostad ac yn ailraglennu micro-amgylchedd imiwn tiwmor. Sgematig o CBD-IL-12, sy'n cynnwys yr is-unedau p35 a p40 wedi'u hasio i'r CBD o barth ffactor von Willebrand A3. b Cyfeintiau o diwmorau isgroenol RM9 mewn llygod C57Bl/6 syngeneig dros amser gyda thriniaeth â cherbyd, gwrth-PD-1 (clôn 29 F.1A12) 200 Μg drwy chwistrelliad mewnperitoneol bob 5 diwrnod, neu CBD-IL-12 25 Μg drwy chwistrelliad mewnwythiennol bob 5 diwrnod yn dechrau ar ddiwrnod 0. n=7 llygod mewn cerbydau a CBD-IL-12 grwpiau wedi'u trin ac n=8 llygod yn y gwrth -PD1 grŵp wedi'i drin. p < 0.0001 ar ddiwrnodau 9 a 12. Mae bariau'n cynrychioli'r cymedr gyda SEM. Mae gwerthoedd P yn deillio o ANOVA dwy ffordd gyda phrawf cymariaethau lluosog Dunnett, ns ddim yn arwyddocaol. c Lleiniau Brasamcanu a Thafluniad Manifold Unffurf (UMAP) o wahanol is-setiau celloedd imiwnedd (uchaf) o ddadansoddiad RNA-seq (scRNA-seq) un gell o bum tiwmor RM9, pob un wedi'i agregu o lygod wedi'u trin â cherbyd neu CBD-IL{{41} }. Plotiau UMAP wedi'u lliwio â mynegiant genynnau o farcwyr is-set celloedd imiwnedd penodol ar gyfer pan-monocytes/macrophages, macroffagau polariaidd M1 a M2, celloedd dendritig math 1 confensiynol (cDC1), celloedd lladd naturiol (NK), a chynorthwyydd T math 1 (Th1) celloedd. d Plotiau yn dangos amlder poblogaethau celloedd imiwn penodol (mewn perthynas â chelloedd imiwnedd CD45 +) a nodwyd gan ddadansoddiad scRNA-seq gan gynnwys celloedd T CD4+ a CD8+, Th1 (Infg+ Tbx{ {56}} ) a Th2 (cMAF+ Gata3+ ) celloedd, Ly6C+/− monocytes/macrophages (Ly6C+/− Adgre1+ ), M1 macroffagau (CD80+ CD{{67}) } INOS2+ ), macrophages M2 (CD163+ Mrc1+ cMAF+ ), cDC1 (XCR1+ IRF8+ ), celloedd dendritig math 2 confensiynol (cDC2 , CD{78}} IRF4+ ), CD mudol103+ celloedd dendritig (Itgae+ ), eosinoffiliau (SiglecF+ ), neutrophils (Ly6G+), a chelloedd NK (Klrb1c+ Ncr1+ ) mewn tiwmorau sy'n cael eu trin â cherbyd neu CBDIL-12. Lleiniau llosgfynydd yn dangos mynegiant genynnau gwahaniaethol mewn (e) celloedd tiwmor ac (f) celloedd T o diwmorau RM9 o lygod wedi'u trin CBD-IL-12 o gymharu â'r rhai sy'n cael eu trin â cherbyd. Newid plyg FC, cyfradd darganfod ffug FDR. Darperir data ffynhonnell yn y ffeil Data Ffynhonnell.

Trafodaeth

Mae effeithiolrwydd therapi celloedd CAR T a therapiwteg arall wedi'i dargedu sy'n seiliedig ar imiwnedd yn dibynnu'n fawr ar fynegiant antigen cyson ar bob un neu'r rhan fwyaf o gelloedd sy'n cynnwys y boblogaeth tiwmor o fewn claf unigol. Fodd bynnag, mae heterogenedd antigen yn amlwg mewn tiwmorau solet gan gynnwys canser y prostad, lle mae dilyniant i mCRPC ac ymwrthedd i driniaeth yn gysylltiedig ag ymddangosiad isdeipiau clefyd dargyfeiriol wedi'u nodi gan raglenni trawsgrifio penodol-71 a mynegiant antigen arwyneb celloedd. Er bod PSMA yn cael ei ystyried yn un o’r biofarcwyr mwyaf blaenllaw mewn canser y prostad gyda gorfynegiant sylweddol i’w gael ar draws sbectrwm dilyniant clefydau, mae ein gwaith yn cadarnhau canfyddiadau o gyhoeddiad diweddar14 sy’n nodi bod mynegiant PSMA yn heterogenaidd mewn mCRPC angheuol. Rydym yn dangos bod STEAP1 wedi’i fynegi’n ehangach na PSMA yn y lleoliad hwn ond nid yw’n cael ei fynegi’n unffurf o bell ffordd ar lefelau uchel ym mhob meinwe mCRPC. Efallai na fydd unrhyw therapi unigol wedi'i dargedu gan antigen, gan gynnwys therapi celloedd CAR T, yn gallu goresgyn heterogenedd antigen tiwmor sy'n bodoli eisoes mewn mCRPC. Felly, mae'n hollbwysig bod targedau therapiwtig ychwanegol yn drylwyr fel STEAP1 yn mCRPC a allai alluogi therapïau cyfun sy'n rhoi pwysau therapiwtig anorchfygol. Mae'r rhain yn cynnwys therapïau cell CAR T deuol wedi'u targedu ag antigen (ee, PSMA a STEAP1) neu strategaethau amlfodd sy'n cyfuno therapïau celloedd CAR T ag ADCs, T-BsAbs, neu driniaethau eraill sy'n hyrwyddo lladd tiwmor sy'n annibynnol ar antigen ac yn ddibynnol ar antigen. Fe wnaethon ni beiriannu therapi celloedd CAR T wedi'i dargedu STEAP sy'n hynod o antigen-benodol ac wedi'i leoleiddio'n swyddogaethol yr epitope a gydnabyddir gan y CAR i ail ECD STEAP1. Mae ein celloedd CAR T STEAP1-BBζ CAR T yn dangos gweithgarwch gwrth-tiwmor sylweddol yn erbyn modelau canser y prostad wedi'u lledaenu'n lluosog mewn astudiaethau dynol-yn-llygoden a llygoden-yn-llygoden. Yn bwysig, mae ein CAR STEAP1-BBζ CAR yn gallu ysgogi actifadu celloedd T a chytolysis celloedd targed hyd yn oed mewn cyflyrau dwysedd antigen isel, fel y dangosir gan adweithedd yn erbyn model canser y prostad PC3. Fodd bynnag, gall y sensitifrwydd hwn o gelloedd STEAP1-BBζ CAR T i lefelau isel o fynegiant STEAP1 fod yn fanteisiol o safbwynt gwella effeithiolrwydd gwrth-tiwmor ond gallai hefyd ddwysáu rhwymedigaethau o wenwyndra y tu allan i'r tiwmor ar y targed. Adroddwyd yn flaenorol bod mynegiant systemig o STEAP1 bron yn absennol mewn meinweoedd dynol arferol18,72 ac eithrio'r chwarren brostad lle disgrifiwyd mynegiant pilenog yng nghelloedd epithelial y prostad27. Er mwyn ymchwilio i ddiogelwch therapi celloedd STEAP1-BBζCAR T yn y lleoliad rhag-glinigol, gwnaethom gynhyrchu model llygoden STEAP1 wedi'i ddyneiddio. Roedd model llygoden hSTEAP1-KI yn ailadrodd mynegiant STEAP1 dynol yn y chwarren brostad ac yn dangos mynegiant yn y cortecs adrenal. Yn galonogol, ni wnaeth therapi cell STEAP1-BBζ CAR T ar ddogn digonol i gymell gweithgarwch gwrth-tiwmor arwain at wenwyndra systemig amlwg mewn llygod hSTEAP{35}}KI gan gynnwys gwenwyneddau tu allan i'r targed ar safleoedd dynol STEAP1 mynegiant. Mecanwaith cylchol o ailwaelu a dilyniant canser y prostad ar ôl therapi celloedd STEAP T BBζ yn ein hastudiaethau oedd dihangfa antigen tiwmor. Ar un llaw, mae'r canfyddiad hwn yn tanlinellu nerth cyffredinol therapi celloedd STEAP CAR T. Fodd bynnag, nid yw'n glir a yw colli mynegiant tiwmor STEAP1 yn ganlyniad i heterogenedd antigen cynhenid ​​​​tiwmor yn unig neu a oes dirywiad ymaddasol mynegiant STEAP1 hefyd. Dangosodd cyhoeddiad diweddar fod methylation hyrwyddwr STEAP1 yn modylu mynegiant STEAP1 a dadreoleiddio epigenetig gan DNA methyltransferase ac ataliad deacetylase histone yn ddigon i ddadreoleiddio mynegiant STEAP1 yn sylweddol73. Gallai triniaeth ag atalyddion epigenetig ar y cyd â therapi celloedd STEAP1 CAR T wella mynegiant tiwmor STEAP1 ar yr un pryd ac ailraglennu celloedd CAR T i wladwriaethau gwahaniaethu ffafriol sy'n gwrthsefyll blinder74,75, a thrwy hynny liniaru colled antigen tiwmor a gwella effeithiolrwydd gwrth-tiwmor mewn canser y prostad. Mae ein hastudiaeth hefyd yn awgrymu bod STEAP1 yn chwarae rhan swyddogaethol wrth reoleiddio dilyniant cylchred celloedd a metaboledd cellog mewn canser y prostad. Mae STEAP1 yn unigryw i aelodau eraill o'r teulu STEAP (STEAP2, 3, a 4) gan nad oes ganddo barth oxidoreductase mewngellol22 sy'n angenrheidiol ar gyfer gweithgaredd metallo reductase. O ganlyniad, nid oes gan homotrimers STEAP1, ond nid heterotrimwyr â phroteinau STEAP eraill, y swyddogaeth ensymatig i leihau Fe3+ i Fe{2+ a Cu2+ i Cu1+. Ni phenderfynwyd eto a yw cynnwys STEAP1 mewn ïonau metel a metaboledd cellog yn hybu dilyniant canser, a sut, ac mae'n werth ymchwilio ymhellach iddo. Mae micro-amgylchedd tiwmor 'oer' imiwnolegol canser y prostad yn rhwystr mawr i effeithiolrwydd imiwnotherapïau canser. Er enghraifft, dangosodd astudiaethau archwiliadol sy'n gysylltiedig â threial clinigol cam I o therapi celloedd PSMA CAR T wedi'i arfogi i fynegi derbynnydd ffactor twf trawsnewidiol trechol-negyddol (TGF R-DN) yn mCRPC fod mynegiant moleciwlau signalau gwrthimiwnedd yn y micro-amgylchedd tiwmor yn cynyddu. ar ôl trwyth CAR T13. Yn ein hastudiaethau, canfyddiad hollbwysig oedd y cysylltiad rhwng colli mynegiant STEAP1 a dadreoleiddio prosesu a chyflwyniad antigen, mewn celloedd taro STEAP1 a thiwmorau colled antigen STEAP1 ar ôl therapi cell STEAP BBζ CAR T. Felly, mae colled antigen STEAP1 mewn canser y prostad nid yn unig yn hybu ymwrthedd uniongyrchol i therapi celloedd STEAP1-BBζ CAR T ond gall hefyd gyfyngu ar imiwnedd gwrth-tiwmor ymaddasol lletyol. Gwelwyd colli mynegiant antigen targed tiwmor a throsi i gyflwr mwy gwrthimiwnedd gyda mwy o ymdreiddiad Tregs a mynegiant uwch o foleciwlau gwrthimiwnedd hefyd mewn astudiaeth cam I o gelloedd CAR T EGFR-vIII mewn cyfranogwyr â glioblastoma rheolaidd76. Bydd angen gwneud gwaith ychwanegol i ddeall y mecanweithiau swyddogaethol sy'n sail i golled antigen STEAP1 ac yn fwy cyffredinol sut y gall effeithiau deinamig therapi celloedd CAR T mabwysiadol gyfrannu at golli antigen ac imiwneddoli trwy fodiwleiddio rhyngweithiadau tiwmor-imiwn-stromal mewn tiwmorau solet.

Ffig. 7|Mae cyfuno CBD-IL-12 â STEAP1-mBBζ therapi celloedd CAR T yn gwella lefelau goroesi cyffredinol a chytocin ymfflamychol. Sgematig o arbrawf her tiwmor ar gyfer y model a ledaenir gan RM9-hSTEAP1 mewn llygod hSTEAP1-KI/+ yn ymchwilio i gyfuniad CBD-IL-12 â STEAP{{1{{18} }}}mBBζ therapi celloedd CAR T. Cy cyclophosphamide (ar gyfer rhag-gyflyru). Crëwyd gyda BioRender.com. b BLI byw cyfresol o hSTEAP1-KI/ + llygod wedi'u himpio â RM9-hSTEAP1- fLuc metastases a'u trin ag un pigiad mewnwythiennol o 5 × 1{06 llygoden heb ei thrawsnewid Celloedd T neu gelloedd STEAP1-mBBζ CAR T ar ddiwrnod 0 gyda neu heb driniaeth CBD-IL- 12 wythnosol. Mae Coch X yn dynodi llygod sydd wedi marw. Dangosir y raddfa pelydriad. (c) Plot yn dangos y meintioliad o gyfanswm fflwcs dros amser o BLI byw pob llygoden yn (b). d Cromliniau goroesi llygod Kaplan-Meier yn (b) ag arwyddocâd ystadegol wedi'i bennu gan brawf gradd log (Mantel-Cox) (p=0.002). e Plotiau yn dangos lefelau serwm cytocine o IFN- (chwith, p=0.002) a TNF- (dde, p < 0.0001) yn seiliedig ar brofion imiwno ProcartaPlex o waedu retroorbital o lygod hSTEAP1-KI/+ ( n=4 llygod fesul grŵp) sy'n dwyn RM9-hSTEAP1-fLuc metastases cyn (diwrnod 0) ac ar ôl triniaeth (diwrnod 8) gyda chelloedd llygoden T heb eu trawsgludo neu STEAP llygoden{{38} }mBBζ celloedd CAR T gyda neu heb therapi CBD-IL{-12. Mae bar gwall yn cynrychioli cymedr gyda SEM. Ar gyfer panel (e), roedd gwerthoedd-p yn deillio o ANOVA dwy ffordd gyda phrawf cymariaethau lluosog Sidak. Darperir data ffynhonnell yn y ffeil Data Ffynhonnell.

Ffig. 8|Mae cyfuno CBD-IL-12 â STEAP1-mBBζ therapi celloedd CAR T yn ailraglennu micro-amgylchedd imiwnedd tiwmor ac yn hyrwyddo cyflwyniad antigen a lledaeniad epitope. a Ffotomicrograffeg o staenio IHC STEAP1 (top), B2m (canol), a CD3 (gwaelod) o diwmorau ysgyfaint RM9-hSTEAP1 ar ôl triniaeth â chelloedd T heb eu trawsgludo gan y llygoden neu gelloedd STEAP1-mBBζ CAR T gyda neu heb driniaeth CBD-IL-12. Barrau graddfa=50 µm. b Plot bar yn dangos meintioliad IHC o gelloedd positif CD3 yn ymdreiddio i diwmorau metastatig yr ysgyfaint (n=4 tiwmor fesul grŵp). ANOVA unffordd p=0.{{80}}021. Mae bar gwall yn cynrychioli cymedr gyda SD. Plotiau yn dangos amleddau (c) Ly6C− F4/{{20}} MHC-II+ (chwith, unffordd ANOVA p=0.00{ {98}}5) a Ly6C − F4/80+ iNOS2+ (dde, ANOVA unffordd p=0.0017) macrophages, (d) Ly6C+ F4/ {{36} } MHC-II+ (chwith, unffordd ANOVA p=0.0038) a Ly6C+ F4/80+ iNOS2+ (dde, unffordd ANOVA p=ns) macroffagau, (e) CD11b+ XCR1+ cDC1 (ANOVA unffordd p=0.0003), (f) F4/{56}} eosinoffilau SiglecF+ (ANOVA unffordd p=0. 0008), a (g) niwtroffiliau Ly6G+ (unffordd ANOVA p=0.0035) wedi'u normaleiddio i gyfanswm celloedd CD45+ fel y'u pennir gan sytometreg llif amlbarametrig ar ôl triniaeth â chelloedd T heb eu trawsgludo, STEAP{{67 }}mBBζ celloedd CAR T, celloedd T heb eu trawsgludo a CBD-IL-12, a chelloedd STEAP 1- MBζ CAR T a CBD-IL-12 ar yr ymateb triniaeth mwyaf posibl (nadir) ac atglafychiad tiwmor (ailwaelu). h Plotiau bar yn cynrychioli cloniaeth Simpson fel mesur o 'wastadedd' y repertoire TCR a ddadansoddwyd trwy ddilyniant TCRB ar gelloedd tiwmor-ymdreiddio a gasglwyd o lygod yn (a). n=4 tiwmor fesul grŵp. Gwerthoedd P ar gyfer celloedd T heb eu trawsgludo + CBD-IL-12 o gymharu â chelloedd T heb eu trawsgludo a chelloedd STEAP1-mBBζ CAR T yw 0.008 a 0.02, yn y drefn honno; a chelloedd STEAP1-mBBζ CAR T + CBD-IL-12 o gymharu â chelloedd CAR T heb eu trawsgludo a STEAP1-mBBζ CAR T yw 0.004 a 0.01, yn y drefn honno. Mae bar gwall yn cynrychioli cymedr gyda SD. Ar gyfer paneli (c-g) n=3 tiwmor fesul grŵp, *p < 0.05; **p < 0.01, ***p < 0.001, mae gwerthoedd-p mewn paneli (b–h) yn dod o ANOVA unffordd â phrawf cymariaethau lluosog Dunn. Darperir data ffynhonnell yn y ffeil Data Ffynhonnell.

Er mwyn ehangu'r ymateb gwrth-tiwmor, fe wnaethom ymchwilio i weinyddiaeth systemig CBD-IL-12 ar y cyd â therapi celloedd STEAP BBζ CAR T mewn model tiwmor RM syngeneig wedi'i ledaenu, hSTEAP1 yn hSTEAP 1-KI llygod i frasamcanu natur gwrthimiwnedd mCRPC yn seiliedig ar nodweddu blaenorol RM9 fel model imiwnogenig gwael57,77. Arweiniodd cyd-driniaeth â CBD-IL12 at welliannau mewn goroesiad cyffredinol, cynhyrchu cytocin, cyflwyniad antigen tiwmor, ac amrywiaeth celloedd T intratumoral yn gyson â lledaeniad epitope. Datgelodd ymchwiliad agos i'r micro-amgylchedd imiwn tiwmor fod ychwanegu CBD-IL-12 at therapi celloedd STEAP1-BBζ CAR T yn achosi gwrthdroad stromal tiwmor ac yn gwella macroffagau actifedig a cDC1 tra'n lleihau niwtroffiliau sy'n gysylltiedig â thiwmor. Fodd bynnag, ni chyflawnwyd y gwellhad yn ein hastudiaethau, ac rydym yn tynnu sylw at fecanweithiau cydadferol, addasol posibl o ymwrthedd a dilyniant tiwmor gan gynnwys amlder cynyddol niwtroffiliau gwrthimiwnedd a cDC2 a allai hyrwyddo anwythiad Treg. Mae'n bwysig nodi y gallai fod angen optimeiddio'r dos a'r amserlen weinyddol o CBD-IL-12 ymhellach er mwyn cael yr ymatebion gwrth-tiwmor mwyaf posibl. Fodd bynnag, mae'r canlyniadau hyn yn cefnogi ymchwilio i ddulliau imiwnotherapiwtig cyfunol megis arfogi celloedd CAR T i fynegi cytocinau ailgyfunol78 (ee, IL-2, IL-12, IL-15, neu IL{{24) }}), triniaeth gydamserol ag imiwnofodylyddion (ee, gwrth-PD-1/PD-L1 neu gwrth-CTLA4), neu radiotherapi wedi'i gyfeirio at tiwmor i ailfodelu micro-amgylchedd tiwmor canser y prostad a gwella swyddogaeth effeithydd celloedd CAR T. Tra roedd y llawysgrif hon yn cael ei pharatoi, adroddodd astudiaeth gan grŵp yn Norwy ddatblygiad rhag-glinigol therapi celloedd CAR T STEAP1 gyda gweithgaredd gwrth-tiwmor mewn model 22Rv1 isgroenol mewn llygod â imiwnedd gwan79. Mae'r CAR STEAP1 yr adroddwyd amdano yn wahanol i STEAP1-BBζ CAR gan ei fod yn ymgorffori scFv synthetig o'r enw Oslo1 a pharth colfach a thrawsbilen CD8. Nodwedd wahaniaethol arall yw bod celloedd STEAP1-BBζ CAR T yn cael eu paratoi fel cynnyrch diffiniedig gyda chymhareb arferol o gelloedd CD4/CD8 T tra nad yw celloedd CAR T Oslo1 STEAP1. Ni adroddwyd am fecanweithiau ymwrthedd i ac astudiaethau diogelwch yn ymwneud â therapi celloedd CAR T Oslo1 STEAP1. Fodd bynnag, bydd o ddiddordeb i weld sut y gall y gwahaniaethau hyn mewn peirianneg CAR a chyfansoddiad cynnyrch celloedd effeithio ar effeithiolrwydd gwrth-tiwmor, dyfalbarhad a diogelwch fel therapi cell CAR T Oslo1 STEAP1 a'n therapi celloedd STEAP BBζ. rhaglenni'n cael eu cyfieithu i'r clinig. Mae canfyddiadau ein hastudiaethau wedi arwain at bartneriaeth â Rhaglen Therapiwteg Arbrofol (NExT) y Sefydliad Canser Cenedlaethol (NCI) i drosi therapi celloedd STEAP BBζ CAR T yn dreial cyntaf mewn dynol ar gyfer dynion â mCRPC. Bydd arwyddion diogelwch ac effeithiolrwydd o'r treial clinigol cyfnod cynnar hwn yn helpu i benderfynu a allai fod yn werth ymchwilio i'r dull therapiwtig hwn ar gyfer mathau eraill o ganser sy'n mynegi STEAP1 yn uchel.

Cyfeiriadau

1. Siegel, RL, Miller, KD, Fuchs, AU & Jemal, A. Ystadegau canser, 2022. CA: Canser J. Clinigwyr 72, 7-33 (2022).

2. Armstrong, AJ et al. Rhagfynegiad goroesi pum mlynedd a chanlyniadau diogelwch gydag enzalutamide mewn dynion â chanser y prostad metastatig sy'n gwrthsefyll ysbaddiad naïf cemotherapi o'r Treial PREVAIL. Eur. Urol. 78, 347–357 (2020).

3. Fizazi, K. et al. Abiraterone a prednisone mewn canser metastatig, sy'n sensitif i ysbaddiad y prostad. N. Saesneg. J. Med. 377, 352–360 (2017).

4. Scher, HI et al. Mwy o gyfraddau goroesi ag enzalutamide mewn canser y prostad ar ôl cemotherapi. N. Saesneg. J. Med. 367, 1187–1197 (2012).

5. Parker, C. et al. Radiwm allyrrydd alffa-223 a goroesiad mewn canser metastatig y prostad. N. Saesneg. J. Med. 369, 213–223 (2013).

6. Sartor, O. et al. Lutetium-177–PSMA-617 ar gyfer canser y prostad sy'n gallu gwrthsefyll ysbaddiad metastatig. N. Saesneg. J. Med. 385, 1091–1103 (2021).

7. Kantoff, PW et al. Imiwnotherapi Sipuleucel-T ar gyfer canser y prostad sy'n gwrthsefyll sbaddu. N. Saesneg. J. Med. 363, 411–422 (2010).

8. Jackson, HJ, Rafiq, S. & Brentjens, RJ Gyrru celloedd T CAR ymlaen. Nat. Parch Clin. Oncol. 13, 370–383 (2016).

9. Weiner, GJ Adeiladu therapiwteg gwrthgyrff monoclonaidd gwell. Nat. Canser y Parch 15, 361–370 (2015).

10. Chavez, JC, Bachmeier, C. & Kharfan-Dabaja, MA therapi celloedd T CAR ar gyfer lymffoma celloedd B: canlyniadau treialon clinigol y cynhyrchion sydd ar gael. Therapiwtig Adv. Hematol. 10, 2040620719841581 (2019).

11. Sterner, RC & Sterner, therapi celloedd RM CAR-T: cyfyngiadau cyfredol a strategaethau posibl. Cancr y gwaed J. 11, 69 (2021).

12. Slovin, SF et al. Astudiaeth Cam 1 o gelloedd P-PSMA-101 CAR-T mewn cleifion â chanser y brostad metastatig sy'n gwrthsefyll ysbaddiad (mCRPC). J. Clin. Oncol. 40, 98–98 (2022).

13. Narayan, V. et al. Celloedd CAR T arfog ansensitif TGF sy'n targedu PSMA mewn canser y brostad metastatig sy'n gwrthsefyll ysbaddiad: treial cam 1. Nat. Med. 28, 724–734 (2022).

14. Paschalis, A. et al. Heterogeneity antigen pilen benodol i'r prostad a diffygion atgyweirio DNA mewn canser y prostad. Ewro. Urol. 76, 469–478 (2019).

15. Chen, N., Li, X., Chintala, NK, Tano, ZE & Adusumilli, PS Gyrru CARs ar y ffordd anwastad o heterogeneity antigen mewn tiwmorau solet. Curr. Barn. Imiwnol. 51, 103–110 (2018).

16. Morgan, RA et al. Adroddiad achos o ddigwyddiad anffafriol difrifol yn dilyn rhoi celloedd T wedi'u trawsddwytho â derbynnydd antigen chimerig sy'n adnabod ERBB2. Mol. Ther. J. Am. Soc. Gene Ther. 18, 843–851 (2010).

17. Lee, JK et al. Mae proffilio arwynebol systemig yn nodi antigenau targed ar gyfer therapi sy'n seiliedig ar imiwn mewn isdeipiau o ganser datblygedig y prostad. Proc. Natl. Acad. Sci. UDA 115, E4473–e4482 (2018).

18. Hubert, RS et al. STEAP: antigen arwyneb celloedd sy'n benodol i'r brostad wedi'i fynegi'n uchel mewn tiwmorau prostad dynol. Proc. Natl Acad. Sci. UDA 96, 14523–14528 (1999).

19. Nolan-Stevaux, O. Abstract DDT02-03: AMG 509: Nofel, wedi'i dyneiddio, wedi'i ymestyn am hanner oes, dwy-benodol STEAP1 × CD3 T cell recriwtio XmAb® 2+1 gwrthgorff. Canser Res. 80, DDT02-03-DDT02-03 (2020).

20. Grunewald, TG et al. Mae mynegiant STEAP1 uchel yn gysylltiedig â chanlyniadau gwell mewn cleifion sarcoma Ewing. Ann. Oncol. I ffwrdd. J. Eur. Soc. Med. Oncol. 23, 2185–2190 (2012).

21. Moreaux, J., Kassambara, A., Hose, D. & Klein, B. Mae STEAP1 wedi'i or- fynegi mewn canserau: targed therapiwtig addawol. Biocemeg. Bioffys. Res. Cymmun. 429, 148–155 (2012).

22. Oosterheert, W. & Gros, P. Strwythur microsgopeg cryo-electron a swyddogaeth enzymatig bosibl antigen epithelial chwe thrawsbilen dynol y prostad 1 (STEAP1). J. Biol. Cemeg. 295, 9502–9512 (2020).

23. Jiao, Z. et al. Mae antigen epithelial chwe thrawsbilen mynegiant y prostad 1 yn hyrwyddo metastasis canser yr ofari trwy gynorthwyo dilyniant pontio epithelial-i-mesenchymal. Histochem. Cell Biol. 154, 215–230 (2020).

24. Mae Gomes, IM, Arinto, P., Lopes, C., Santos, CR & Maia, CJ STEAP1 yn cael ei or-ddweud mewn canser y prostad a briwiau neoplasia intraepithelial prostatig, ac mae'n gysylltiedig yn gadarnhaol â sgôr Gleason. Mewn oncoleg Wrolegol: seminarau ac ymchwiliadau gwreiddiol. cyf. 32, 53.e23–53.e29 (Elevier, 2014).

25. Huo, S.-f. et al. Mae STEAP1 yn hwyluso metastasis a thrawsnewid epithelial-mesenchymal o adenocarcinoma yr ysgyfaint trwy lwybr signalau JAK2 / STAT3. Biosci. Sylw 40, BSR20193169 (2020).

26. Gomes, IM et al. Mae Knockdown o STEAP1 yn atal twf celloedd ac yn cymell apoptosis mewn celloedd canser y brostad LNCaP gan wrthweithio effaith androgenau. Med. Oncol. 35, 1–10 (2018).

27. Proteinau Gomes, IM, Maia, CJ a Santos, CR STEAP: o strwythur i gymwysiadau mewn therapi canser. Mol. Canser Res. MCR 10, 573–587 (2012).

28. Danila, DC et al. Astudiaeth Cam I o DSTP3086S, cyfuniad gwrthgorff-cyffur sy'n targedu antigen epithelial chwe thrawsbilen o'r prostad 1, mewn canser metastatig y prostad sy'n gwrthsefyll ysbaddiad. J. Clin. Oncol. I ffwrdd. J. Am. Soc. Clin. Oncol. 37, 3518–3527 (2019).

29. Kelly, WK et al. Astudiaeth Cam I o AMG 509, cell STEAP1 x CD3 T sy'n recriwtio therapi imiwnedd XmAb 2+1, mewn cleifion â chanser y prostad metastatig sy'n gwrthsefyll ysbaddiad (mCRPC). J. Clin. Oncol. 38, TPS5589–TPS5589 (2020).

30. Lin, T.-Y., Parc, JA, Hir, A., Guo, H.-F. & Cheung, N.-KV gwrthgorff cryf gwrth-STEAP1 bispecific i ailgyfeirio celloedd T ar gyfer imiwnotherapi canser. J. Immunother. Canser 9, e003114 (2021).

31. Schober, SJ et al. MHC Dosbarth I-Cyfyngedig TCR-Transgenig CD4(+) Celloedd T Yn Erbyn STEAP1 Cyfryngu Rheoli Tiwmor Lleol ar Sarcoma Ewing In Vivo. Celloedd 9, 1581 (2020).

32. Roudier, AS et al. Heterogeneity ffenoteipig o garsinoma'r prostad cam olaf yn fetastatig i asgwrn. Hum. Pathol. 34, 646–653 (2003).

33. Gomes, IM, Santos, CR, Socorro, S. & Maia, CJ Mae chwe antigen epithelial traws-bilen y prostad 1 yn cael ei is-reoleiddio gan hormonau rhyw yng nghelloedd y prostad. Prostad 73, 605–613 (2013).

34. Sharp, A. et al. Amrywiad sbleis derbynnydd androgen-7 yn dod i'r amlwg gydag ymwrthedd i ysbaddu mewn canser y prostad. J. Clin. Buddsoddi. 129, 192–208 (2019).

35. Bakht, MK et al. Mae gwahaniaethu niwroendocrin o ganser y prostad yn arwain at ataliad PSMA. Endocr.-Relat. Canser 26, 131–146 (2018).

36. Ihlaseh-Catalano, SM et al. Mae gorfynegiant protein STEAP1 yn farciwr annibynnol ar gyfer ail-ddigwyddiad biocemegol mewn carsinoma'r prostad. Histopatholeg 63, 678–685 (2013).

37. Gomes, IM et al. Mae Knockdown o STEAP1 yn atal twf celloedd ac yn cymell apoptosis mewn celloedd canser y brostad LNCaP gan wrthweithio effaith androgenau. Med. Oncol. 35, 40 (2018).

38. Logan, AC et al. Ffactorau sy'n dylanwadu ar y titer a heintiad fectorau lentifeirws. Hum. Gene Ther. 15, 976–988 (2004).

39. Morgan, RA, Gray, D., Lomova, A. & Kohn, DB Therapi genynnau bôn-gelloedd hematopoietig: cynnydd a gwersi a ddysgwyd. Cell Bôn-gell 21, 574–590 (2017).

40. Larson, SM et al. Datblygiad cyn-glinigol o addasu genynnau bôn-gelloedd hematopoietig gyda derbynyddion antigen chimerig ar gyfer imiwnotherapi canser. Hum. Imiwnydd Brechlyn. 13, 1094–1104 (2017).

41. Salter, AI et al. Mae dadansoddiad ffosffoproteomig o signalau derbynnydd antigen chimerig yn datgelu gwahaniaethau cinetig a meintiol sy'n effeithio ar swyddogaeth celloedd. Sci. Arwydd. 11, eaat6753 (2018).

42. Majzner, RG et al. Tiwnio'r gofyniad dwysedd antigen ar gyfer gweithgaredd celloedd T CAR. Canser Discov. 10, 702–723 (2020).

43. Challita-Eid, PM et al. Gwrthgyrff monoclonaidd i chwe antigen epithelial trawsbilen o'r brostad-1 Atal Cyfathrebu Rhynggellol In vitro a thwf senografftiau tiwmor dynol In vivo. Canser Res. 67, 5798–5805 (2007).

44. Hudecek, M. et al. Mae parth gwahanu allgellog nad yw'n signalau ar gyfer derbynyddion antigen chimerig yn bendant ar gyfer gweithgaredd antitumor in vivo. Imiwnol Canser. Res. 3, 125–135 (2015).

45. Gomes, IM, Santos, CR & Maia, CJ Mynegiad o STEAP1 a STEAP1B yn llinellau celloedd y brostad, a rheoliad tybiedig STEAP1 trwy fecanweithiau ôl-adysgrifio ac ôl-gyfieithu. Canser Genynnau 5, 142–151 (2014).

46. ​​Bernsel, A., Viklund, H., Hennerdal, A. & Elofsson, A. TOPCONS: rhagfynegiad consensws o dopoleg protein pilen. Asidau Niwcleig Res. 37, W465–W468 (2009).

47. Krogh, A., Larsson, B., Von Heijne, G. & Sonnhammer, EL Rhagfynegi topoleg protein trawsbilen gyda model Markov cudd: cais i gwblhau genomau. J. Mol. Biol. 305, 567–580 (2001).

48. Hir, AH et al. 4-1Mae costimeiddiad BB yn lleddfu blinder celloedd T a achosir gan signalau tonig o dderbynyddion antigen chimerig. Nat. Med. 21, 581–590 (2015).

49. Berger, C. et al. Mae trosglwyddiad mabwysiadol o effeithyddion CD8+ celloedd T sy'n deillio o gelloedd cof canolog yn sefydlu cof celloedd T parhaus mewn primatiaid. J. Clin. Ymchwilio. 118, 294–305 (2008).

50. Gattinoni, L. et al. Is-set cell T cof dynol gyda phriodweddau bôn-gelloedd. Nat. Med. 17, 1290–1297 (2011).

51. Xu, Y. et al. Mae bôn-gelloedd cof T perthynol yn cyfateb yn agos i ehangiad in vivo CAR.CD19-Cadw celloedd T gan IL-7 ac IL-15. Gwaed 123, 3750–3759 (2014).

52. Cieri, N. et al. Mae IL-7 ac IL-15 yn cyfarwyddo cynhyrchu bôn-gelloedd T cof dynol o ragflaenwyr naïf. Gwaed 121, 573–584 (2013).

53. Hansel, DE et al. Treiglad genyn TP53 a rennir mewn carcinoma niwroendocrin celloedd bach cynradd cydamserol ac adenocarsinoma y prostad sy'n wahanol i'w morffolegol ac yn ffenoteipaidd. Prostad 69, 603–609 (2009).

54. Cuzick, J. et al. Gwerth prognostig llofnod mynegiant RNA sy'n deillio o genynnau amlhau cylchred celloedd mewn cleifion â chanser y prostad: astudiaeth ôl-weithredol. Lancet Oncol. 12, 245–255 (2011).

55. Chen, ME, Lin, SH, Chung, LW & Sikes, RA Ynysu a nodweddu PAGE-1 a GAGE-7. Genynnau newydd a fynegir ym model dilyniant canser y brostad LNCaP sy'n rhannu homoleg ag antigenau sy'n gysylltiedig â melanoma. J. Biol. Cemeg. 273, 17618–17625 (1998).

56. Baley, PA, Yoshida, K., Qian, W., Sehgal, I. & Thompson, TC Dilyniant i ansensitifrwydd androgen mewn model llygoden in vitro nofel ar gyfer canser y prostad. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 52, 403–413 (1995).

57. Murad, JP et al. Mae rhag-gyflyru yn addasu'r TME i wella effeithiolrwydd celloedd CAR T tiwmor solet ac imiwnedd amddiffynnol mewndarddol. Mol. Ther. J. Am. Soc. Gene Ther. 29, 2335–2349 (2021).

58. Brunda, MJ et al. Antitumor a gweithgaredd antimetastatic o interleukin 12 yn erbyn tiwmorau murine. J. Exp. Med. 178, 1223–1230 (1993).