​Mae Cleifion Llawfeddygaeth Fasgwlaidd sydd â Chymhareb Niwtroffil-i-lymffosyt Uwch â Mynegiant RNA Ategol Neutrophil wedi'i Is-reoleiddio

Mae cymhareb neutrophil-i-lymffosyt uwch (NLR) mewn cleifion sy'n cael llawdriniaeth fasgwlaidd ddewisol (EVS) wedi cynyddu marwolaethau yn annibynnol ar ganlyniadau llawfeddygol amlawdriniaethol. Er mwyn deall pam mae NLR uchel yn gysylltiedig â marwolaethau uwch, fe wnaethom ymchwilio i fynegiant trawsgrifiad neutrophil a lymffosyt mewn cleifion sy'n cael EVS. Casglwyd samplau gwaed gan gleifion a oedd yn cael EVS a rhoddwyr iach ar gyfer cyfrifiad NLR. Cafodd samplau RNA eu hynysu oddi wrth neutrophils a lymffocytau cleifion a'u rhannu'n NLR_Isel (<3) and NLR_High (≥3) groups (n = 6 each). Paired samples with the highest RNA integrity number (mean = 9.8 ± 0.4) were sequenced and analyzed for differential expression. Normalized data were inputted for downstream analysis using iPathwayGuide (AdvaitaBio) and gene set enrichment analysis using GenePattern and MSigDB (Broad Institute). There was no clinical difference between the patient groups about clinical diagnosis, age, sex, history of hypertension, lipid abnormalities, diabetes mellitus, smoking, or statin use. The mean NLR was 4.37 ± 0.27 SEM in the NLR_High and 1.88 ± 0.16 for the NLR_Low groups. Significantly differentially expressed gene sets identified in the RNA sequence data were enriched highly (P = 1E-24) in the humoral immunity and complement systems. Neutrophils from NLR_High patients downregulated complement genes (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, CR2, C3AR1, C3, C8G, and C9 and complement regulatory genes CD59, SERPING1, C4BPA, CFH, and CFI). Downregulation of gene expressions of humoral immunity and complement within the neutrophils are associated with elevated NLR. It remains to be determined whether and how these changes contribute to increased late mortality previously observed in patients undergoing EVS.

manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd

Rhagymadrodd

Clefyd cardiofasgwlaidd (CVD) yw un o brif achosion marwolaethau ledled y byd. Yn bennaf oherwydd atherogenesis ac atherosglerosis sy'n cael ei gyfryngu, yn ogystal â geneteg a diet unigol, gan fecanweithiau ymfflamychol ac imiwn.1-3 Yn ddiweddar, mae'r cyfrif leukocyte gwahaniaethol (neutrophils a lymffosytau) wedi dod i sylw. i ragfynegi canlyniadau cardiofasgwlaidd (CV). Mae cymhareb y cyfrif absoliwt niwtroffili-i-lymffosyt (NLR) wedi'i chydnabod fel rhagfynegydd o gyfanswm marwolaethau mewn astudiaethau bach lluosog o ymyriadau coronaidd acíwt, gorbwysedd,7,8, a methiant y galon.9

Tabl 1. Nodweddion clinigol cleifion llawdriniaeth fasgwlaidd ddewisol a archwiliwyd gan RNA-seq

Mae ymchwiliadau blaenorol hefyd wedi dangos bod NLR yn rhagfynegydd canlyniadau hirdymor mewn cleifion â chlefyd fasgwlaidd ymylol.10-13 Mae ein hastudiaethau ôl-weithredol o boblogaethau cleifion llawdriniaeth fasgwlaidd yn cefnogi'r casgliad hwn. Mewn 1 astudiaeth o 108 o gleifion ag aniwrysm aortig abdomenol endofasgwlaidd dewisol, nid oedd unrhyw wahaniaeth yn y 30-marwolaethau diwrnod ar ôl llawdriniaeth rhwng NLR o<4 and an NLR of >4 (P = .507). However, the 1-year, 3-year, and 5-year mortality between the groups were 4.2% vs 28.1%, 15.1% vs 64.9%, and 24% vs 90%, respectively.14 In a second study of 290 asymptomatic patients undergoing prophylactic carotid endarterectomy, the risk for stroke was noted to be significantly higher (P < .0001) in patients with an NLR of >3 (n=116 o gleifion, 42.6% risg strôc) na'r rhai ag NLR o<3 (n = 174 patients, 9.3% stroke risk).15 In a third study with 488 patients who underwent percutaneous interventions of femoropopliteal arteries, the 30-day mortality rates increased significantly (P = .005) with increasing NLR (1.4%, 4.3%, and 7.0% for low [<3], mid [3-4], and high [>4] grwpiau NLR, yn y drefn honno).16 Cyflawnodd cleifion ag NLR cyn llawdriniaeth is o lawer yn goroesi heb orfod torri i ffwrdd yn ystod 4-blwyddyn dilynol (NLR isel 65.5%, NLR canol, 37.5%, a NLR uchel, 17.6). %[P < .0001]).16

Yn yr astudiaeth hon, gwnaethom gyflawni dilyniant RNA (RNA-seq) o neutrophils a lymffocytau gan gleifion a oedd yn gymwys i gael llawdriniaeth fasgwlaidd ddewisol (EVS) i bennu mecanweithiau posibl ar gyfer NLR uchel. Archwiliodd yr astudiaethau a oes sail foleciwlaidd ar gyfer NLR uchel. Mae ein hymchwiliadau yn datgelu bod cleifion â NLR uchel a gafodd atgyweiriad EVS yn cael eu gwahaniaethu gan is-reoleiddio sylweddol iawn o imiwnoglobwlin ac yn ategu genynnau mewn neutrophils.

budd-daliadau cistanche-cryfhau system imiwnedd

Dulliau

Cleifion

Blood samples were collected from candidate patients for EVS procedures and healthy volunteers for NLR calculation and RNA sequence studies of neutrophils and lymphocytes. In screening patients for participation, any individual with an active local or systemic infection or obvious inflammatory disease was excluded from participation. Peripheral blood collection was approved by the institutional review board of University Hospitals Cleveland Medical Center (#01-06-02). Informed consent was obtained from each patient and healthy volunteer. All patients for EVS seen in the outpatient department were eligible. Patients in the study were characterized for the type of vascular surgery, age, sex, hypertension (blood pressure >130/80 mm Hg), diabetes mellitus (fasting blood glucose >100 mg/dL), statws ysmygu, triniaeth statin, hanes meddygol o glefyd rhwystrol cronig yr ysgyfaint, canser, clefyd arennol cronig, clefyd rhydwelïau coronaidd (CAD), clefyd rhydwelïol ymylol, clefyd serebro-fasgwlaidd, a methiant cronig y galon. Roedd gan bob claf gyfrif gwaed cyflawn gyda chyfrif celloedd gwaed gwyn gwahaniaethol. Rhannwyd cleifion yn NLR isel (NLR_Isel [<3]) and high NLR (NLR_High [≥3]) groups (n = 6 each) and healthy volunteers aged 18 to 71 years (n = 6). Eleven of 12 patients' blood was drawn before surgery. One patient had blood drawn 4 months after surgery. 

Gwahaniad gwaed

Casglwyd gwaed cyfan (20 mL fesul claf) mewn tiwbiau gwactod 10 ml wedi'u gwrthgeulo ag EDTA, a gwahanwyd y gwaed o fewn awr i'w gasglu. Cafodd poblogaethau celloedd niwtrophil a lymffosyt eu hynysu o 8 ml o waed gan ddefnyddio citiau ynysu celloedd dynol uniongyrchol EasySep (STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada) a magnet Big Easy EasySep (STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada) yn unol â phrotocolau'r gwneuthurwr. Roedd y magnet yn cael ei oeri ar rew o'r blaen, a chymysgwyd y celloedd gwaed a'r adweithyddion yn ysgafn trwy wrthdroi'r tiwb yn hytrach na phibellu. Addaswyd y cymarebau adweithyddion hefyd yn y modd canlynol i wella'r adferiad gorau posibl: ychwanegwyd 400 mL o gymysgedd gwrthgyrff, 400 mL o gleiniau magnetig, a 4 mL o halwynog wedi'i glustogi â ffosffad at y gwaed cyn y gwahaniad cyntaf, ac yna 200 mL o wrthgorff. cymysgedd a 400 ml o gleiniau cyn yr ail wahaniad a 200 ml o gleiniau cyn y trydydd gwahaniad a'r olaf. Cymerwyd aliquot bach o 200 mL o'r cyfrolau adfer terfynol ar gyfer cyfrif celloedd a pharatoi sleidiau. Cafodd gweddill y cyfaint adfer ei allgyrchu ar 1000 o chwyldroadau y funud am 7 munud i belenni'r celloedd.

Ffigur 1. Trawsgrifiad cyfan o RNA o niwtroffiliau a lymffocytau a gasglwyd gan gleifion â NLR, uchel (NLR_Uchel), isel (NLR_Isel), neu reolaeth (NLR_Rheoli) . Mae'r cod llythyren "N" neu "L" yn enw'r sampl yn golygu mai naill ai neutrophils neu lymffocytau oedd ffynhonnell yr RNA. Roedd 6 chlaf ym mhob categori. Glas=lefel mynegiant gostyngol; coch=lefel uchel o fynegiant.

Cyfrif celloedd a pharatoi sleidiau

Cafodd celloedd a gafodd eu hailddarparu mewn halwynog byffer ffosffad eu cadw ymhellach, eu cymysgu â glas trypan, a'u cyfrif â llaw gan ddefnyddio hemocytomedr. Yn nodweddiadol, ynysu 9 × 106 i 15 × 106 neutrophils a lymffocytau 3 × 106 i 10 × 106 fesul sampl. Paratowyd sleidiau o'r celloedd ynysig gan ddefnyddio cytocentrifuge, wedi'i nyddu ar 600 chwyldro y funud am 3 munud, ac yna eu staenio â staen Wright-Giemsa. Pennwyd purdeb poblogaeth pob cell trwy gyfrif â llaw, lle gwahaniaethwyd o leiaf 1000 o gelloedd fesul sleid. Roedd purdeb cyfartalog y gwahaniadau neutrophil a lymffocyte yn ôl cyfrif celloedd yn 98.3% a 96.2%, yn y drefn honno. Perfformiwyd cytometreg llif ar 1 pâr sampl o neutrophils a lymffocytau a nododd 90.6% a 92.2% purdeb, yn y drefn honno. Cafodd y celloedd eraill yn y paratoad neutrophil eu torri i lawr yn lymffocytau (4%), monocytes (2%), eosinoffiliau (2.3%), a basoffilau (0.3%). Yn y paratoad lymffocytau, y celloedd eraill oedd neutrophils (1.2%), monocytes (1.4%), eosinoffiliau (1.2%), a basoffilau (1.8%). Defnyddiwyd data swmp RNA-seq o'r holl samplau unigol hefyd i bennu graddau halogiad monocyte yn y paratoadau celloedd trwy benderfynu a oedd niwtroffiliaid neu lymffocytau o NLR_Uchel neu NLR{38}}Samplau isel wedi cynyddu CD14 yn sylweddol , CD68, CD83, neu CD163. Yn annibynnol, cofnodwyd y data RNA-seq i amcangyfrif cyfran y celloedd imiwn a chanser (EPIC), rhaglen a gynlluniwyd i amcangyfrif cyfran y celloedd imiwnedd a chanser mewn data mynegiant genynnau swmp.17 Darparwyd y proffil cyfeirio a ddefnyddiwyd gan EPIC ar gyfer celloedd imiwnedd sy'n cylchredeg gwaed ac mae'n cynnwys y proffil ar gyfer celloedd B, celloedd CD4 a CD8 T, monocytes, neutrophils, a chelloedd lladd naturiol. Rhoddir yr allbwn a adroddir fel ffracsiynau cell fesul sampl.

Ffigur 2. Genynnau wedi'u mynegi'n sylweddol wahaniaethol o neutrophils a lymffosytau. (A) Nifer y genynnau a fynegwyd yn sylweddol wahaniaethol mewn neutrophils (glas) a lymffocytau (oren). (B) Plot dadansoddi prif gydrannau genynnau a fynegir yn wahaniaethol iawn mewn neutrophils (gwyrdd a phorffor) a lymffocytau (coch a glas) yn NLR _Uchel (cylchoedd) a NLR_Isel (sgwariau). (C) Map gwres o enynnau wedi'u mynegi'n sylweddol wahaniaethol o NLR_High vs NLR_RNA niwtroffil isel. (D) Map gwres o enynnau wedi'u mynegi'n sylweddol wahaniaethol o NLR_High vs NLR{6}}RNA lymffosyt isel.

RNA-seq a dadansoddiad ystadegol

Cyflwynir dulliau manwl ar gyfer echdynnu a dilyniannu RNA yn y Dulliau atodol. Aseswyd darlleniadau dilyniannu o ran ansawdd, a chafodd yr addasydd ei docio gan ddefnyddio TrimGalore! (Sefydliad Babraham), sgript lapio ar gyfer FastQC a CutAdapt. Roedd darlleniadau a oedd yn pasio rheolaeth ansawdd wedi'u halinio â'r genom cyfeirio dynol GRCh38 gan ddefnyddio meddalwedd aliniwr STAR. Proseswyd y darlleniadau wedi'u halinio gan ddefnyddio fersiwn Cufflinks 2.2.1 ar gyfer dadansoddiad mynegiant gwahaniaethol gan ddefnyddio'r anodiad genyn GENCODE ar gyfer GRCh38 ac adroddwyd data mynegiant lefel genynnau mewn darnau fesul trawsgrifiad cilobase fesul miliwn o ddarlleniadau a fapiwyd.18 Nodwyd genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol iawn gan ddefnyddio ffug cyfradd darganfod toriad P gwerth o<.05, after the Benjamini-Hochberg correction for multiple testing. Normalized fold-change and P values for all expressed genes were then used as input for downstream analysis using iPathwayGuide (AdvaitaBio) and gene set enrichment analysis (GSEA) using GenePattern and MSigDB (Broad Institute). Additional figures including heat maps and scatterplots were generated in R and ClustVis.

Canlyniadau

Nodweddion cleifion

Dewiswyd chwe phâr o samplau cleifion allan o 7 NLR_Uchel a 9 NLR_Isel yn seiliedig ar ansawdd uchaf yr RNA yn y pâr fel yr aseswyd gan y rhif cyfanrwydd RNA (RIN) (Tabl 1) ). Archwiliwyd chwe rheolaeth gan 8 rhoddwr iach hefyd. Yn y cleifion a gynhwyswyd yn yr astudiaeth, y gwyriad safonol cymedrig NLR ar gyfer NLR_Uchel oedd 4.37 ± 0.66 vs ar gyfer NLR_Isel, 1.87 ± 0. 39 (P < .0001). Gwyriad oedran cymedrig ± safonol y cleifion oedd 61.0 ± 17.0 oed ar gyfer NLR_Uchel a 64.5 ± 7.5 oed ar gyfer NLR_Isel (P= .68). Roedd gan bob un ond un claf glefyd aniwrysmol aortig, roedd 9 yn thorasig/thoracoabdom, a 2 yn abdomenol. Roedd y ddau glaf ag aniwrysm aortig abdomenol yn y NLR_grŵp isel. Roedd gan un ar ddeg o'r 12 claf hanes o orbwysedd. Roedd gan bedwar o bob 6 claf yn y grwpiau NLR_Uchel neu NLR_Isel hanes meddygol o annormaleddau lipid. Roedd pedwar claf yn yr NLR_Uchel a 3 chlaf yn yr NLR_grwpiau isel yn gyn-ysmygwyr. Roedd un claf yn y NLR_grŵp isel yn ysmygwr actif. Roedd pum claf yn yr NLR_Uchel a 4 yn yr NLR_grwpiau isel ar statinau. Dim ond tri chlaf yn y ddau grŵp oedd â diabetes. Roedd gan un claf ym mhob grŵp hanes o CAD, ac roedd gan 2 glaf yn yr NLR_grŵp isel glefyd rhydwelïau ymylol.

Ffigur 3. Defnyddiwyd y data RNA-seq yn yr ymchwiliad hwn fel ffordd annibynnol o ganfod halogiad celloedd eraill yn y paratoadau niwtroffil a lymffosyt. Dim ond data o'r neutrophils a ddangosir. Perfformiwyd dadansoddiad EPIC i amcangyfrif cyfran y celloedd imiwn a chanser mewn data mynegiant genynnau swmp. Cynhyrchodd y dadansoddiad hwn ganran y neutrophils, monocytes, celloedd B, celloedd T CD4, celloedd CD8 T, celloedd lladd naturiol (NK), a chelloedd eraill yn y paratoad niwtroffil.

Trawsgrifiad cyfan

Gwelsom wahaniaethau byd-eang yn y trawsgrifiad cyfan wrth gymharu proffiliau mynegiant genynnau rhwng neutrophils a lymffocytau (Ffigur 1). Nid oedd y canfyddiad hwn yn syndod gan fod mynegiant genynnau math-benodol o gelloedd wedi'i nodweddu'n flaenorol fel un gwahanol.19 Yn yr adran neutrophil, ar draws y cleifion yn yr NLR_Uchel, NLR_Isel, a NLR{{). 4}}Grwpiau rheoli, roedd llawer o enynnau wedi'u huwchreoleiddio nad oeddent yn amlwg wedi'u huwchreoleiddio yn yr adran lymffosyt ac i'r gwrthwyneb. Ar y lefel trawsgrifiad gyfan, roedd y gwahaniaethau cell-benodol rhwng neutrophils a lymffocytau yn wahanol ac yn dominyddu waeth beth oedd yr NLR neu a oedd yn glaf neu'n rheolydd. Fodd bynnag, o edrych yn fanylach, dechreuodd gwahaniaethau ymddangos. Dangosodd plot dadansoddi prif gydrannau fod NLR_Rheolaeth ar gyfer naill ai neutrophils neu lymffocytau yn gorgyffwrdd â NLR_Uchel ac NLR{8}}Isel yn y ddwy gell (Ffigur Atodol 1). Ceisiodd ymchwiliadau ddod o hyd i wahaniaethau ychwanegol rhwng NLR_Uchel a NLR_Grwpiau isel yn y genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol iawn. Gwelwyd bod 900 (74.5%) o enynnau a fynegwyd yn sylweddol wahaniaethol wedi'u harsylwi mewn neutrophils yn NLR_Uchel yn erbyn NLR{16}}Grwpiau isel (Ffigur 2A). Mewn cymhariaeth, dim ond 190 (15.7%) o enynnau a fynegwyd yn sylweddol wahaniaethol oedd gan lymffocytau. Datgelodd plot dadansoddi prif gydrannau NLR_Genynnau uchel yn erbyn NLR_Genynnau isel mewn neutrophils a lymffocytau fod y grŵp o NLR_Uchel yn erbyn NLR_Genynnau isel yn y neutrophils wedi'u gwahanu'n 2 ardal benodol, tra bod genynnau NLR Uchel a NLR{27}Isel lymffocytau yn gorgyffwrdd (Ffigur 2B). Unwaith eto, fel gyda'r data trawsgrifio cyfan, roedd NLR{29}}rheolaeth yn gorgyffwrdd â NRL_Uchel ac NLR_Genynnau isel a fynegwyd yn wahaniaethol iawn mewn niwtroffiliau a lymffocytau (Ffigur Atodol 2). Cafodd y rhan fwyaf o'r genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol iawn yn NLR_Uchel o niwtroffiliau eu hisreoleiddio o NLR_Isel (Ffigur 2C). Roedd nifer tebyg ond llawer is o enynnau wedi'u hisreoleiddio yn NLR_Uchel o lymffocytau na rhai neutrophils (Ffigur 2D). Roedd y data hyn yn awgrymu bod lefelau NLR yn gysylltiedig yn bennaf â newid mynegiant genynnau mewn neutrophils. Ymhellach, roedd angen ei gymharu â chleifion o'i grŵp clefyd NLR_Isel, nid NLR-Control, oherwydd bod y grŵp blaenorol yn amlwg wedi gwahanu oddi wrth NLR_Uchel ond nid NLR_Rheoli ( Ffigur 2B; Ffigur 2 atodol).

cistanche tubulosa-gwella system imiwnedd

Cyn ymchwilio i fynegiant gwahaniaethol genynnau a chyfoethogi set genynnau, roedd astudiaethau ychwanegol yn nodweddu graddau halogiad monocyte yn y paratoad niwtroffil. Gan ddefnyddio'r data RNA-seq, gwelsom nad oedd mynegiant y marcwyr monocyte CD14, CD68, CD83, a CD163 yn NLR_High vs NLR{6}}neutrophils isel neu baratoadau lymffocyte yn sylweddol wahanol. Dangosodd dadansoddiad EPIC o'r data neutrophil RNA-seq mai celloedd di-imiwn ("celloedd eraill") a chelloedd CD4 T oedd y prif halogion yn y paratoadau neutrophil (Ffigur 3). Ac eithrio NLR{{10}}Celloedd T CD4 isel a chelloedd B, nid oedd yr un o'r celloedd llygrol eraill yn sylweddol wahanol yn yr NLR_Niwtroffiliau Isel yn erbyn yr NLR_Niwtroffiliau uchel . Yn y paratoad niwtroffil, dim ond 0.17% ± 0 oedd halogiad monocyte trwy ddadansoddiad EPIC.05% ar gyfer yr NLR_Isel o gymharu â 0.1% ± 0.033% ar gyfer y NLR_Paratoadau uchel (P=.12). Mae'r gwerth hwn yn dangos bod halogiad monocyte yn drefn maint yn is pan gafodd ei bennu gan ddadansoddiad data RNA-seq yn erbyn cytometreg llif.

Ffigur 4. Plot swigen gwasgariad o gategorïau set genynnau GO a fynegwyd yn sylweddol ar gyfer prosesau biolegol rhwng NLR_Uchel a NLR_Isel. Cymhareb k:K ar yr abscissa yw nifer y genynnau sy'n cael eu mynegi'n sylweddol wahaniaethol (k) o gymharu â chyfanswm y genynnau yn y categori (K). Y gyfesuryn yw arwyddocâd y cyfoethogiad a fynegir fel y log (gwerth P). (A) Setiau genynnau GO yn deillio o neutrophil RNA-seq yn cymharu NLR_Uchel i NLR{5}}Isel. (B) Setiau genyn GO sy'n deillio o lymffocyt RNA-seq. Setiau genynnau yng nghornel chwith isaf y ddau blot yw'r lleiaf arwyddocaol. Setiau genynnau yng nghornel dde uchaf y ddau lain yw'r rhai mwyaf arwyddocaol.

Ffigur 4 (parhad)

I archwilio natur y genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol, fe wnaethom berfformio categorïau GSEA gyda Gene Ontology (GO) ar gyfer prosesau biolegol gan ddefnyddio'r setiau genynnau a fynegwyd yn sylweddol wahaniaethol rhwng NLR _Uchel a NLR _Isel. Dangosir y canlyniadau yn y lleiniau swigen gwasgariad (Ffigur 4). Mae gwahanu setiau genynnau i ochr dde uchaf pob un o'r plotiau yn dangos (1) canran uchel o'r genynnau yn y setiau genynnau sy'n cael eu newid yn sylweddol a (2) lefel uchel o arwyddocâd ar gyfer cyfoethogi'r set genynnau. Yn ein sampl, roedd y plotiau swigod gwasgariad yn dangos cyfoethogi categorïau cyflenwad cyflenwad ac ymateb humoral GO yn annibynnol ar gyfer niwtroffiliau a'r lymffocytau. Mewn neutrophils, y setiau genynnau ar gyfer y llwybr clasurol o actifadu cyflenwad, rheoleiddio rhaeadru actifadu protein, ac ymateb imiwnedd humoral a gyfryngwyd gan imiwnoglobwlin cylchredeg oedd y rhai mwyaf arwyddocaol gyda'r ganran uchaf o aelodau set genynnau wedi newid yn sylweddol (Ffigur 4A). Yn annibynnol, sylwyd bod gan y setiau genynnau union yr un fath mewn lymffocytau hefyd gymhareb uchel o enynnau sydd wedi newid yn sylweddol a rhywfaint o arwyddocâd fel yn yr astudiaethau niwtroffil (Ffigur 4B).

Tabl 2. Setiau genynnau imiwnoleg mewn neutrophils a lymffosytau

Mae Tabl 2 yn rhestru'r setiau genynnau imiwnoleg sydd wedi newid fwyaf mewn neutrophils (Tabl 2, Panel A) a lymffocytau (Tabl 2, Panel B). Roedd yr astudiaeth hon yn cymharu mynegiant genynnau mewn neutrophils neu lymffocytau rhwng NLR_Samplau uchel ac NLR_Samplau isel. NLR iach{5}}Ni chymharwyd samplau rheoli gan fod eu lefelau mynegiant yn gorgyffwrdd â NLR_Uchel ac NLR{7}}Samplau cleifion isel yn y trawsgrifiad cyfan a setiau genynnau a fynegwyd yn wahaniaethol iawn. Yn ogystal, nid oedd y samplau rheoli NLR iach yn cyfateb o ran oedran, afiechyd, a chyflwr llawfeddygol (Ffigurau 1 a 2 atodol). Mewn niwtroffiliau (Tabl 2) a lymffocytau (Tabl 2), roedd y data yn dangos bod mynegiant setiau genynnau sy'n gysylltiedig â'r system imiwnedd yn dra gwahanol pan gymharwyd NLR_High ag NLR_Isel . Ar RNA seq, mae gan bob math o gell yr un canfyddiadau â'r math arall o gell. Yn y ddau banel, mae lefelau arwyddocâd y prif setiau genynnau wedi'u huchafu yn P < 1E-24. Roedd y data hyn yn arwyddocaol iawn p'un a archwiliwyd y neutrophil neu'r lymffocyte. Er mwyn canolbwyntio ar faes cynnwys hynod arwyddocaol yr ymchwiliad RNA-seq hwn, archwiliwyd mynegiant genynnau imiwnoglobwlin a fynegwyd yn sylweddol wahanol. Yn gyntaf, dangosodd plot dadansoddi prif gydrannau o'r genynnau neutrophil, ar gyfer NLR_Uchel yn erbyn NLR_Isel, bod y genynnau imiwnoglobwlin a fynegwyd yn sylweddol wahaniaethol wedi'u gwahanu'n 2 grŵp (Ffigur 3A atodol). Fel arall, mae genynnau lymffocytau NLR_Uchel yn erbyn NLR_Isel gorgyffwrdd (Ffigur 3A atodol). Nesaf, cymharwyd map gwres cyfun o fynegiant genynnau cysylltiedig ag imiwnedd rhwng NLR_Uchel ag NLR_Isel mewn niwtroffiliau a lymffocytau (Ffigur 5). Ar y cyfan, pan archwilir y map gwres cyfan, mae is-reoleiddio amlwg o'r teulu genynnau cyfan o enynnau imiwnoglobwlin yn y grŵp uchel neutrophil NLR o'i gymharu â NLR_Isel. Roedd y rhan fwyaf o enynnau (69/156, 44%) yn gysylltiedig ag imiwnoglobwlin. Dim ond 12 o 156 (7.7%) o enynnau oedd yn gysylltiedig â chyflenwadau: C1QA, C1QB, Serping1, C2, C2R, C4BPA, C3AR1, CR1, CR1L, CFH, CFD, a CD59. Yn y grŵp lymffocytau, roedd hefyd is-reoleiddio genynnau imiwnoglobwlin yn bennaf yn y categori NLR_Uchel.

Manylir ar setiau genynnau cyflenwol mewn niwtroffiliau a lymffocytau yn Nhabl 3. Mewn niwtroffiliau (Tabl 3) a lymffocytau (Tabl 3), roedd mynegiant genynnau mewn 3 set genynnau sy'n gysylltiedig â'r system ategu yn dra gwahanol (P <1E{{). 5}}) pan NLR_Cafodd samplau uchel eu cymharu â NLR{7}}Samplau isel. Roedd yr arsylwad hwn yr un fath p'un a oedd y gymhariaeth rhwng RNA o neutrophils neu lymffosytau. Mae'r 3 set genynnau yn cynnwys actifadu cyflenwad, llwybr clasurol actifadu ategol, a rheoleiddio actifadu cyflenwad. Dangosodd plot dadansoddi prif gydrannau o'r genynnau niwtrophil eto, ar gyfer NLR_Uchel yn erbyn NLR_Isel, bod y genynnau cyflenwad a fynegwyd yn wahaniaethol iawn wedi'u gwahanu'n 2 grŵp (Ffigur 3B atodol). Fel arall, mae genynnau lymffosyt NLR_Uchel yn erbyn NLR_Gorgyffwrdd isel (Ffigur 3B atodol).

Ffigur 5. Map gwres o enynnau wedi'u mynegi'n sylweddol wahaniaethol yn y genyn imiwnoglobwlin a osodwyd mewn neutrophils (chwith) a lymffocytau (dde). Y genynnau a restrir ar ochr dde pob map gwres yw aelodau'r imiwnoglobwlin

Dangosir map gwres o niwtroffiliau a mynegiant lymffocytau o set genynnau sy'n gysylltiedig â chyflenwadau sy'n cymharu NLR_Uchel â NLR_Isel yn Ffigur 6. Yn y niwtroffiliau, cafodd nifer enfawr o enynnau eu isreoleiddio yn y NLR_Poblogaeth uchel. Yn y set genynnau hon, yn debyg i'r setiau genynnau imiwnoglobwlin, roedd y rhan fwyaf o'r genynnau (69/ 86, 80%) yn gysylltiedig ag imiwnoglobwlin. Dim ond 12 o 86 (14%) oedd yn genynnau cydran a rheoliadol (C1QA, C1QB, SERPING1, C2, CR2, C4BPA, C3AR1, CR1, CR1L, CD59, CFH, a CFD). Yn y grŵp lymffocyte yn gyffredinol, roedd llai o fynegiadau o enynnau cyflenwad, ac roedd genynnau imiwnoglobwlin ychydig yn fwy is-reoleiddiedig yn y grŵp NLR_Nuchel. Oherwydd bod mwy o ddealltwriaeth o enynnau'r system ategu o'i gymharu â genynnau'r systemau imiwnoglobwlin, rhoddwyd sylw i'r system ategu fel ymgeisydd posibl ar gyfer genynnau targed sy'n gysylltiedig â NLR uchel ac isel. Paratowyd map gwres cyfansawdd yn cymharu NLR_Uchel ag NLR_Isel yn dangos mynegiant system ategu a genynnau cysylltiedig mewn samplau niwtroffiliaid a lymffocytau (Ffigur 7). Ar y cyfan, nid yw'r lymffocyt yn system celloedd cronfa ddŵr ar gyfer y system ategu. Nid yw'r rhan fwyaf o enynnau cyflenwad yn cael eu huwchreoleiddio mewn lymffocytau. Dim ond C1S, CR2, C5, C8G, C5, a CFB oedd yn bresennol gyda gwahaniaeth mynegiant rhwng NLR_Uchel a NLR_Lymffocytau isel (Ffigur 7). Tetraspanin cell B yw CD81 mewn lymffocytau. Ymddengys bod mynegiadau C1S a C8G yn sylweddol uwch mewn NLR lymffocyte_Uchel na rhai NLR lymffocyte_Isel, yn debyg i KLKB1, y genyn ar gyfer prekallikrein plasma.

Mewn cyferbyniad, mewn neutrophils, roedd NLR{0}}High yn dangos is-reoleiddio genynnau cydran ategu C1QA, C1QB, C1QC, SERPING1, C1R, C4BPA, C3, a C3AR1, a'u genynnau rheoleiddio (ataliol) ategol CD59, CFB, a CFI . Dim ond genynnau C2 a CFD a gafodd eu huwchreoleiddio mewn cleifion NLR_Uchel_N. Mae CD59 a C9 wedi'u huwchreoleiddio'n gymharol mewn NLR neutrophil_Isel_N o gymharu â rhai NLR_Uchel_N. Mae FGFR4 yn dderbynnydd ffactor twf. Roedd CFH yn bresennol ond roedd yn ymddangos nad oedd yn cael ei ddylanwadu gan neutrophil NLR_Uchel neu NLR_Isel. Fe'i mynegir yn uwch mewn lymffocytau.

manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd

Cliciwch yma i weld cynhyrchion Gwella Imiwnedd Cistanche

【Gofyn am fwy】 E-bost:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Trafodaeth

Mae'r NLR ar y cyfrif leukocyte gwahaniaethol wedi dod yn farciwr syml a ddefnyddir yn eang i adnabod canlyniadau niweidiol posibl mewn ystod eang o anhwylderau, gan gynnwys CVD, tiwmorau solet, ac anhwylderau llidiol fel lupus erythematosus systemig a sglerosis systemig. Yn ein hymchwiliadau ôl-weithredol ein hunain ar gleifion â CVD atherosglerotig, gwelsom fod gan gleifion â NLR uchel gyfradd marwolaethau hwyr uwch ar ôl atgyweirio ymlediad aortig dewisol, cyfradd uwch o strôc hwyr/marwolaeth ar ôl endarterectomi carotid proffylactig, a llai o gyfraddau goroesi heb dorri trychiad ar ôl. ailfasgwlareiddio ffemoraidd-popliteal dewisol os yw eu NLR yn uwch.14-16 Dechreuwyd yr ymchwiliadau presennol i ddod o hyd i sail fecanistig ar gyfer NLR uchel. lymffoma, tiwmorau solet lluosog, ac anhwylderau llidiol fel lupus erythematosus systemig a sglerosis systemig. Yn ein hymchwiliadau ôl-weithredol ein hunain ar gleifion â CVD atherosglerotig, gwelsom fod gan gleifion â NLR uchel gyfradd marwolaethau hwyr uwch ar ôl atgyweirio ymlediad aortig dewisol, cyfradd uwch o strôc hwyr/marwolaeth ar ôl endarterectomi carotid proffylactig, a llai o gyfraddau goroesi heb dorri trychiad ar ôl. ailfasgwlareiddio ffemoraidd-popliteal dewisol os yw eu NLR yn uwch.14-16 Dechreuwyd yr ymchwiliadau presennol i ddod o hyd i sail fecanistig ar gyfer NLR uchel.

Tabl 3. Setiau genyn ategol mewn neutrophils a lymffosytau

Er mwyn datblygu dull diduedd o ran mecanwaith(iau) effeithiau gwahaniaethol NLR ar ddeilliannau CV, gwnaethom berfformio RNA-seq ar niwtroffiliau a lymffocytau gan yr un cleifion. Ar gyfer yr astudiaeth hon, casglwyd yr holl gleifion â chlefyd aortig yn rhagolygol a'u grwpio i gategorïau NLR yn ôl eu canlyniadau. Dewiswyd y 6 sampl olaf ym mhob un o'r 2 fath o gelloedd yn ôl y lefel uchaf o'u RIN yn RNA a baratowyd o'r samplau pâr neutrophil a lymffocyt heb ystyried rhyw, oedran, neu gyflyrau meddygol blaenorol. Fel y gwelir yn Nhabl 1, roedd y cleifion yn y grwpiau NLR{4}}Uchel a NLR_Isel yn eithaf tebyg a dim ond yn cael eu gwahaniaethu gan eu NLR.

Dangosir ansawdd yr RNA a ddefnyddir yn yr astudiaeth hon gan yr RIN a gwahaniad cyflawn y patrwm mynegiant genynnau rhwng neutrophils a lymffocytau ym mhob grŵp cleifion a gasglwyd (NLR uchel, NLR isel, a rheolaethau) (Ffigur 1). Mae plot dadansoddi prif gydrannau'n dangos bod data rheoli NLR_yn amherthnasol yn yr ymchwiliad hwn oherwydd bod NLR y cleifion yn gorgyffwrdd â'r NLR _Uchel ac NLR {3}}Isel mewn poblogaethau neutrophil a lymffocyte cleifion . Darparodd dadansoddiad GSEA fewnwelediad gwych i ba setiau genynnau a gyfoethogwyd yn y setiau genynnau GO o brosesau biolegol, ac roedd y plot swigen gwasgariad yn dangos hyn yn glir trwy blotio arwyddocâd y log yn erbyn cymhareb nifer y genynnau a newidiwyd dros gyfanswm nifer y genynnau yn y setiau genynnau. O'u hadolygu, y setiau genynnau sy'n gwahanu eu hunain oddi wrth y rhestr gyfan oedd y rhai mewn imiwnedd humoral (imiwnoglobwlin) a system ategu (Tablau 2 a 3) yn seiliedig ar gymhareb ac arwyddocâd ystadegol mewn dull darganfod diduedd.

Mae'n anodd gweithio gyda'r nifer fawr o enynnau imiwnoglobwlin imiwnedd humoral dan sylw oherwydd nid yw gwahaniaethau pwysig rhwng y genynnau hyn yn hysbys iawn. Fel arall, mae llawer mwy yn hysbys am y system ategu, ac mae'r ffocws ar y system cyflenwad clasurol sy'n cael ei actifadu gan imiwnoglobwlin yn darged adnabyddadwy ar gyfer llid a chlefydau sy'n gysylltiedig ag imiwnoglobwlinau. Mae ein data yn awgrymu bod genynnau cydran cyflenwad clasurol C1QA, C1QB, C1R, CR1, C1S, SERPING1, C2, C4BPA, C3 C3AR1, C8G, C9, a sawl genyn rheoleiddiol (CD59, CFB CFI, a CFH) yn cael eu isreoleiddio mewn niwtroffiliau cleifion gyda NLR uchel (Ffigur 7). Mae'r canfyddiadau hyn yn drawiadol am 3 rheswm. Yn gyntaf, y genynnau dan sylw yw'r rhai yn bennaf o'r llwybr cyflenwad clasurol. Yn ail, mewn cleifion NLR uchel, mae'r genynnau cyflenwad hyn, ar y cyfan, wedi'u hisreoleiddio o gymharu â rhai cleifion NLR isel. Yn olaf, mae mwy o F12 yn cael ei fynegi mewn neutrophils o NLR_Uchel na'r rhai o NLR{18}}Samplau isel. Mae ffurfiau ensymatig o gynnyrch protein F12 (ffactor XII [FXII]) yn actifadu'r llwybr clasurol o gyflenwad a neutrophils.20 Mewn cyferbyniad, mae PLG, y genyn ar gyfer plasminogen ac actifadu FXII, wedi'i isreoleiddio mewn lymffocytau a neutrophils gan gleifion o fewn NLR{ {21}}Yn uchel, gan awgrymu y gallai actifadu FXII ei hun fod yn rheolydd actifadu cyflenwad.

Yn ogystal, dangoswyd bod y system gyflenwi glasurol yn ymwneud â CVD carlam. Cydran ategu 1q (C1q) yw ffactor cychwynnol y llwybr cyflenwad, sydd â rôl bwysig yn y system imiwnedd gynhenid ​​a chaffaeledig.21 Dangoswyd bod gan C1q rolau deuol, effeithiau cadarnhaol a negyddol ar atherosglerosis.22 Yn y clasurol llwybr ategol, mae gan C1q rôl amddiffynnol mewn atherosglerosis cyfnod cynnar trwy reoleiddio signal moleciwlaidd macrophage trwy lwybr ategol-annibynnol, modiwleiddio'r nifer sy'n derbyn lipoprotein atherogenig, cyfryngu celloedd apoptotig, a dileu malurion celloedd.23,24 Astudiaeth ddiweddar gan Jia mae et al23 yn nodi bod serwm gostyngol C1q yn gysylltiedig â CAD. Mae astudiaeth arall gan Guo et al24 yn nodi bod mwy o weithgarwch C1q yn gysylltiedig â CAD. Yn olaf, mae astudiaethau diweddar yn dangos bod cleifion â diabetes â llai o C1q wedi lleihau goroesiad.25 Mae'r data hyn yn dangos y gallai archwilio'r system ategu fod yn bwysig i ddeall pathogenesis CVD wedi'i gyfryngu â llid.

Ffigur 6. Map gwres o enynnau sydd wedi'u mynegi'n sylweddol wahaniaethol yn y set genyn ategu mewn neutrophils (chwith) a lymffocytau (dde). Y genynnau a restrir ar ochr dde pob map gwres yw aelodau'r set genynnau ategol. Daw'r RNA o niwtroffiliau neu lymffocytau a gasglwyd oddi wrth gleifion ag NLR uchel (NLR_Uchel) neu isel (NLR_Isel). Mae chwe sampl unigol o NLR_Uchel yn cael eu cymharu â 6 sampl unigol o NLR_Isel o neutrophils a lymffosytau.

Ffigur 7. Map gwres cyfansawdd o gyflenwad a genynnau cysylltiedig o NLR neutrophil neu lymffosyt_Uchel neu NLR_Isel. Ym mhob categori, paratowyd y map gwres cyfansawdd o 6 sampl RNA-seq unigol o bob math o gell.

Recently, a retrospective investigation of the data from the CANTOS, JUPITER, SPIRE-1, SPIRE-2, and CIRT trials on 60 087 patients was conducted to determine whether NLR predicts major adverse CV events and is modified by anti-inflammatory therapy.26 NLR modestly correlated (ie, r 2 ≤ 0.26) with interleukin 6, C-reactive protein, and fibrinogen levels but minimally with lipids.25 In all 5 trials, NLR predicted incident CV events and death in patients with NLR >3.08.26 Er na chafodd gostwng lipidau unrhyw effaith ar NLR, roedd therapi gwrthlidiol gyda canakinumab, atalydd interleukin 1 yn gostwng NLR (P < .0001).26 Mae'r data hyn yn awgrymu y gallai NLR fod yn farciwr ar gyfer CVD yn annibynnol ar lipidau a'r dylanwad statinau. Mae'r dadansoddiad ad hoc hwn o hap-dreialon lluosog arfaethedig yn awgrymu y gallai NLR fod yn ffactor risg annibynnol ar gyfer marwolaethau mewn CVD.

Mae rhai cyfyngiadau yn yr astudiaeth hon. Roedd gan ein paratoadau niwtrophil 4% o lymffocyt a 2% o halogiad monocyte gan sytometreg llif. Gan nad yw'n hysbys bod y neutrophils yn syntheseiddio imiwnoglobwlin, gallai'r newidiadau genyn imiwnoglobin neutrophil ddeillio o halogi celloedd B. Ar y dadansoddiad EPIC, bu cynnydd sylweddol yn halogiad celloedd B yn y samplau NLR-Low. Mae'r arsylwad hwn yn awgrymu y gallai cynnydd yn lefel y genynnau imiwnoglobwlin yn yr NLR_Samplau niwtroffiliaid isel ddeillio o halogiad celloedd B. Felly, gall llai o enynnau imiwnoglobwlin mewn NLR_Samplau uchel fod oherwydd cynnydd mewn celloedd B yn yr NLR{7}}Samplau isel ac nid o reidrwydd lefelau genynnau imiwnoglobwlin is yn yr NLR{8}}Samplau uchel. Yn yr un modd, nid yw'n hysbys bod neutrophils yn gelloedd sy'n cynhyrchu cyflenwadau ategol. Gallai halogiad dau y cant â monocytau fod yn ffynhonnell y genynnau cyflenwad. Fodd bynnag, gan ddefnyddio'r data RNA seq, gwelsom nad oes unrhyw wahaniaeth arwyddocaol mewn halogiad monocyte o'r paratoadau niwtroffil rhwng NLR_Isel ac NLR_Uchel. Ymhellach, mae perfformio dadansoddiad EPIC o'r data RNA-seq yn dangos bod halogiad monocyte<0.1% (<1:1000) of the neutrophil preparations, indicating that the RNA-seq was unlikely influenced by contaminating monocytes (Figure 3). The contaminating B cells in the NLR_Low samples do not influence the complement data observed. Finally, even now, it is not known that the changes we observed in complement and immunoglobulin genes are specific to vascular surgery patients with high NLR or older patients in general. NLR and genetic studies need to be performed on healthy age- and sex-matched patients without CVD.

manteision cistanche ar gyfer dynion-cryfhau system imiwnedd

Yn gryno, y canfyddiad cardinal yn yr ymchwiliad hwn yw, mewn gwladwriaethau NLR uchel, bod llawer o enynnau cydrannol yn ategu ac mae rhai o'u rheolyddion yn cael eu hisreoleiddio mewn neutrophils. Nid yw'n glir beth yw ystyr a chyflwr actifadu cyffredinol y genynnau cyflenwad is-reoleiddiedig a nodwyd. Oherwydd bod y setiau genynnau ategol wedi gostwng yn drawiadol, rydym yn dyfalu bod unigolion â chyfraddau goroesi ar ôl llawdriniaeth uchel a byrrach yn colli'r prif fecanweithiau amddiffyn CV a ddarperir gan y systemau cyflenwi. Mae angen archwilio'r asesiad hwn yn rhagolygol mewn ymchwiliadau clinigol ar gyfer y mecanwaith(iau) sylfaenol ar gyfer y canlyniad hwn.

Cyfeiriadau

1. Ross R. Atherosglerosis - afiechyd llidiol. N Engl J Med. 1999; 340(2):115-126.

2. Getz GS. Cyfres adolygiadau thematig: y system imiwnedd ac atherogenesis. Gweithrediad imiwnedd mewn atherogenesis. J Lipid Res. 2005; 46(1):1-10.

3. Hansson GK, Hermansson A. Y system imiwnedd mewn atherosglerosis. Nat Immunol. 2011; 12(3):204-212.

4. Duffy BK, Gurm HS, Rajagopal V, Gupta R, Ellis SG, Bhatt DL. Defnyddioldeb cymhareb uwch neutrophil i lymffocyte wrth ragfynegi marwolaethau hirdymor ar ôl ymyriad coronaidd trwy'r croen. Am J Cardiol. 2006; 97(7):993-996.

5. Tamhane UU, Aneja S, Montgomery D, Rogers EK, Eagle KA, Gurm HS. Y cysylltiad rhwng y gymhareb derbyniad neutrophil i lymffocyte a chanlyniadau mewn cleifion â syndrom coronaidd acíwt. Am J Cardiol. 2008; 102(6):653-657.

6. Gibson PH, Croal BL, Cuthbertson BH, et al. Cymhareb neutrophil-lymffosyt cyn llawdriniaeth a chanlyniad impio dargyfeiriol y rhydwelïau coronaidd. Am Galon J. 2007; 154(5):995-1002.

7. Fici F, Celik T, Balta S, et al. Effeithiau cymharol nebivolol a metoprolol ar led dosraniad celloedd coch a chymhareb neutrophil/lymffosyt mewn cleifion sydd newydd gael diagnosis o orbwysedd hanfodol. J Cardiovasc Pharmacol. 2013; 62(4):388-393.

8. Karaman M, Balta S, Ay SA, et al. Effeithiau cymharol valsartan ac amlodipine ar Lefelau vWf a chymhareb N/L mewn cleifion sydd newydd gael diagnosis o orbwysedd. Clin Exp Hypertens. 2013; 35(7):516-522.

9. Uthamalingam S, Patvardhan EA, Subramanian S, et al. Cyfleustodau'r gymhareb neutrophil i lymffosyt wrth ragfynegi canlyniadau hirdymor mewn methiant y galon digolledu acíwt. Am J Cardiol. 2011; 107(3):433-438.

10. Bhat TM, Afari ME, Garcia LA. Cymhareb lymffocyt neutrophil mewn clefyd fasgwlaidd ymylol: adolygiad. Arbenigwr Parch Cardiovasc Ther. 2016; 14(7):871-875.

11. Bhutta H, Agha R, Wong J, Tang TY, Wilson YG, Walsh SR. Mae cymhareb neutrophil-lymffosyt yn rhagweld goroesiad tymor canolig yn dilyn llawdriniaeth fasgwlaidd fawr ddewisol: astudiaeth drawsdoriadol. Vasc Endovasc Surg. 2011; 45(3):227-231.

12. Appleton ND, Bailey DM, Morris-Stiff G, Lewis MH. Mae cymhareb neutrophil i lymffosyt yn rhagweld marwolaethau amlawdriniaethol yn dilyn atgyweirio dewisol agored o ymlediadau aortig abdomenol. Vasc Endovasc Surg. 2014; 48(4):311-316.

13. Bath J, Smith JB, Kruse RL, Vogel TR. Mae cymhareb neutrophil-lymffosyt yn rhagweld difrifoldeb a chanlyniad afiechyd ar ôl gweithdrefnau eithaf is. J Vasc Surg. 2020; 72(2):622-631.

14. Brenin AH, Schmaier AH, Harth KC, et al. Mae cymhareb uwch neutrophil-lymffosyt yn rhagweld marwolaethau yn dilyn atgyweirio ymlediad endofasgwlaidd dewisol. J Vasc Surg. 2020; 72(1):129-137.

15. Brenin AH, Kim AH, Kwan S, et al. Mae cymhareb neutrophil-i-lymffosyt uwch yn gysylltiedig â chanlyniadau gwaeth ar ôl endarterectomi carotid mewn cleifion asymptomatig. J Strôc Cerebrovasc Dis. 2021; 30(12): 106120.

16. Brenin AH, Kwan S, Schmaier AH, et al. Mae cymhareb uwch neutrophil-i-lymffosyt yn gysylltiedig â chyfraddau goroesi llai heb drychiad ar ôl adfasgwlareiddio trwy'r croen femoropopliteal. Int Angiol. 2021; 40(5):442-449.

17. Racle J, de Jonge K, Baumgaertner P, Speiser DE, Gfeller D. Cyfrifo canser ar yr un pryd a mathau o gelloedd imiwnedd o ddata mynegiant genynnau tiwmor swmp. Elife. 2017;6:e26476.

18. Trapnell C, Roberts A, Goff L, et al. Dadansoddiad genyn gwahaniaethol a mynegiant trawsgrifiad o arbrofion RNA-seq gyda TopHat a Cufflinks. Nat Protoc. 2012; 7(3):562-578.

19. Palmer C, Diehn M, Alizadeh AA, Brown PO. Proffiliau mynegiant genynnau tebyg i gelloedd o leukocytes mewn gwaed ymylol dynol. Genomeg BMC. 2006; 7: 115.

20. Stavrou EX, Fang C, Bane KL, et al. Mae ffactor XII ac uPAR yn dadreoleiddio swyddogaethau niwtroffil i ddylanwadu ar wella clwyfau. J Clin Buddsoddi. 2018; 128(3): 944-959.

21. Dunkelberger JR, Song WC. Ategiad a'i rôl mewn ymatebion imiwnedd cynhenid ​​​​ac addasol. Cell Res. 2010; 20(1):34-50.

22. Speidl WS, Kastl SP, Huber K, Wojta J. Ategiad mewn atherosglerosis: ffrind neu elyn? J Thromb Haemost. 2011; 9(3):428-440.

23. Jia Y, Wen W, Yang Y, et al. Rôl glinigol serwm cyfun C1q a hsCRP wrth ragfynegi clefyd rhydwelïau coronaidd. Clin Biochem. 2021; 93:50-58.

24. Guo S, Mao X, Li X, Ouyang H, Gao Y, Ming L. Serwm ategu gweithgaredd C1q yn gysylltiedig â rhwystrol clefyd rhydwelïau coronaidd. Blaen Cardiovasc Med. 2021; 8: 618173.

25. Cavusoglu E, Kassotis JT, Anwar A, et al. Pa mor ddefnyddiol yw cyflenwad C1q i ragfynegi 10-blwyddyn o farwolaethau mewn dynion â diabetes mellitus a gyfeiriwyd ar gyfer angiograffi coronaidd. Am J Cardiol. 2018; 122(1):33-38.

26. Adamstein NH, MacFadyen JG, Rose LM, et al. Y gymhareb neutrophil-lymffosyt a digwyddiad digwyddiadau atherosglerotig: dadansoddiadau o bum treial cyfoes ar hap. Eur Heart J. 2021; 42(9):896-903.